一种基于银杂化硫化铋的电致化学发光免疫传感器的制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种基于银杂化硫化铋的电致化学发光免疫传感器的制备方法，属于电化学发光传感器领域。以二氧化铈为电化学发光信号源，利用金杂化氨基化石墨烯优良的生物兼容性和大的比表面积增加抗体的固载量。用银杂化硫化铋作为二抗标记物，根据对不同浓度的待测物的电化学发光信号强度的不同，实现对前列腺特异性抗原的检测。
【专利说明】
一种基于银杂化硫化铋的电致化学发光免疫传感器的制备方法
技术领域
[0001]本发明涉及一种基于银杂化硫化铋的电致化学发光免疫传感器的制备方法。具体涉及一种金杂化氨基化石墨烯/ 二氧化铈作为基底材料，利用金纳米粒子的生物兼容性和氨基化石墨烯大的比表面积来固载二氧化铈和检测抗体，制备了一种检测前列腺特异性抗原的电致化学发光免疫传感器，属于新型功能材料与生物传感检测技术领域。
【背景技术】
[0002]前列腺特异抗原(Prostate Specific Antigen，PSA)是由前列腺腺泡和导管的上皮细胞分泌的一种单链糖蛋白，在功能上属于类激肽释放酶的一种丝氨酸蛋白酶，参与精液的液化过程，是临床常规用于前列腺良性与恶性疾病诊断与鉴别诊断及前列腺癌患者术后随访的重要指标。
[0003]目前已有的前列腺特异性抗原的临床检测方法很多，如酶联免疫分析、放射免疫分析、化学发光免疫分析等。但是上述方法具有放射性污染，灵敏度低，检测周期长，步骤繁琐等缺点。免疫传感器是将免疫学方法与分析化学方法相结合的一种生物传感器，通过抗原与抗体之间的特性性结合，使得它具有高灵敏性、高选择性、分析快速和操作简便等优点。
[0004]电致化学发光免疫传感器具有灵敏度高、选择性好、结构简单、操作简便、易于小型化、可连续、快速自动化检测分析等优点，因此本发明制备了基于银杂化硫化铋的电致化学发光免疫传感器，实现了对前列腺特异性抗原的检测。
[0005]本发明将氨基化石墨烯与二氧化铈复合，氨基化石墨烯具有较大的比表面积，能固载更多的发光物质，提高了传感器的电致化学发光性能。将金纳米粒子原位还原到氨基化石墨烯/ 二氧化铈表面，提高了传感平台的导电性。并采用银杂化的硫化铋作为二抗标记物，通过能量共振转移的作用实现对二氧化铈电致化学发光信号的淬灭，有效地增强了电致化学发光免疫传感器的灵敏度。该方法具有成本低、灵敏度高、特异性好、检测快速等优点，而且制备过程较为简单，为目前有效检测前列腺特异性抗原提供了新途径。
【发明内容】
[0006]本发明的目的之一是合成具有较大比表面积的金杂化氨基化石墨烯/二氧化铈材料，其可固载大量的发光物质，提高基底材料的导电性，增强传感器的灵敏度。
[0007]本发明的目的之二是通过还原的方法得到银杂化硫化铋，通过硫化铋与二氧化铈的能量共振转移作用，实现电致化学发光信号的淬灭，提高电致化学发光信号的稳定性。
[0008]本发明的目的之三是利用金杂化氨基化石墨烯/二氧化铈作为基底材料，银杂化硫化铋为标记层，构建一种无酶、快速且超灵敏的夹心型电致化学发光免疫传感器。
[0009]本发明的目的之四是将该夹心型电致化学发光免疫传感器应用于前列腺特异性抗原的快速、灵敏检测。
[0010]本发明的技术方案如下:
1.一种基于银杂化硫化铋的电化学发光传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤:
(1)将直径为4mm的玻碳电极依次用1.0 μπι,0.3 μπι,0.05 μπι氧化铝抛光粉依次做抛光处理，用超纯水冲洗干净；
(2)取6yL、l?3 mg/mL金杂化氨基化石墨稀/二氧化铺溶液滴加到电极表面，室温下晾干，用超纯水冲洗电极表面，晾干；
(3)滴加6tiL、5?10 ug/mL的抗体，晾干后用超纯水冲洗电极表面，4 °C冰箱中晾干；
(4)用3yL、质量分数为1%的牛血清白蛋白溶液封闭非特异性活性位点，于4 °C冰箱中孵化3 h，清洗干净；
(5)将6此前列腺特异性抗原滴加在电极上用于捕获抗体，室温下孵化Ih，清洗干净；
(6)将6yL浓度为I?3 mg/mL的银杂化硫化铋标记的抗体溶液滴在电极上与抗原特异性识别，室温下孵化I h，清洗干净，于4 °C冰箱中储存备用。
[0011 ] 2.基底材料金杂化氨基化石墨烯/ 二氧化铈溶液的制备
(1)氨基化石墨烯的制备
将75?125 mg氧化石墨烯加入到40 mL乙二醇溶液中，在室温下超声I h，然后加入
1.0mL氨水，剧烈振荡I min后，将溶液转移至50 mL反应釜中，180 °C下加热6 h，8000 r/min下离心洗涤20 min，35 "€真空干燥，即得到氨基化石墨稀；
(2)金杂化氨基化石墨烯/二氧化铈的制备
将40?60 mg氨基化石墨稀分散到50 mL超纯水中，超声2 h，然后加入1.1 g六水合硝酸铈，搅拌30 min，加入氨水调节pH到11，加入2.5 mL质量分数为1%的氯金酸溶液，溶液在90 °C下搅拌6 h，8000 r/min下离心洗涤20 min,35 "€真空干燥，即得到金杂化氨基化石墨稀/ 二氧化铺。
[0012]3.银杂化硫化铋标记的前列腺特异性抗原的抗体溶液的制备
(I)硫化秘的制备
将1.6?2.0 g五水合硝酸铋溶解到25 mL乙二醇中，用氮气鼓泡15分钟，得到溶液A;同时将1.2?1.5 g硫化钠溶于10 mL乙二醇和20 mL超纯水的混合溶液中，搅拌15 min，得到溶液B；在搅拌下，将溶液B逐滴加入到溶液A中，将1.8?2.0 g脲加入到上述溶液中，再加入20 mL超纯水，搅拌30分钟，将混合溶液转移至反应釜中，180 °C下加热24 h，8000 r/min下离心洗涤20 min，35 "€真空干燥，得到硫化祕；
(2 )银杂化硫化铋标记物的制备
将230?250 mg硫化铋分散到100 mL超纯水中，超声10 h，然后加入110?130 mg硝酸银和10?20 mg表面活性剂(PVP)，搅拌6 h，再加入6 mL 5mmol/L的柠檬酸钠溶液，搅拌24 h，8000 r/min下离心洗涤20 min，真空干燥箱中，35 °C干燥，得到银杂化硫化祕标记物；
(3)银杂化硫化铋标记的抗体溶液的制备
将3 mL浓度为I?3 mg/mL的银杂化硫化铋标记物溶液与300 度为5?15 yg/mL前列腺特异性抗原的抗体溶液混合，振荡24 h，5000 r/min下离心洗涤15 min，得到银杂化硫化铋标记的抗体孵化物，将其分散于3 mL、pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，制得银杂化硫化铋标记的抗体溶液。
[0013]4.前列腺特异性抗原的检测方法
(1)使用电化学工作站的三电极体系进行测试，Ag/AgCl电极作为参比电极，铂丝电极为对电极，所制备的电化学发光传感器为工作电极，将电化学工作站和化学发光检测仪连接在一起将光电倍增管的高压设置为750 V，循环伏安扫描电位为-2.0 V，扫描速率为0.1V/s；
(2)在10mL、pH 5.5?8.0的含100?150 mmol/L过硫酸钾的磷酸盐缓冲溶液中，通过电化学发光系统，检测对不同浓度的待测物抗原产生的电化学发光信号强度，绘制工作曲线；
(3)将待测样品溶液代替前列腺特异性抗原溶液进行检测。
[0014]本发明的有益成果
(I)本发明将氨基化石墨烯与二氧化铈复合，氨基化石墨烯具有较大的比表面积，能固载更多的发光物质，提高了传感器的电致化学发光性能。将金纳米粒子原位还原到氨基化石墨烯/二氧化铈表面，提高了传感平台的导电性。
[0015](2)并采用银杂化的硫化铋作为二抗标记物，通过能量共振转移的作用实现对二氧化铈电致化学发光信号的淬灭，有效地增强了电致化学发光免疫传感器的灵敏度。
[0016](3)本发明将制备的夹心电致化学发光免疫传感器用于前列腺特异性抗原的检测，检测限低，线性范围宽，可以实现简单、快速、灵敏和特异性检测。本发明对前列腺特异性抗原检测线性范围为0.001?10 1^/1]11^，检测限达到0.3 pg/mLo
【具体实施方式】
[0017]实施例1一种基于金杂化氨基化石墨烯/二氧化铈的前列腺特异性抗原电致化学发光传感器的制备方法
(1)将直径为4mm的玻碳电极依次用1.0 μπι,0.3 μπι,0.05 μπι氧化铝抛光粉依次做抛光处理，用超纯水冲洗干净；
(2)将6yL、浓度为I mg/mL的基底材料金杂化氨基化石墨烯/二氧化铈溶液于电极表面，4 °C保存；
(3)滴加6tiL、5 ug/mL的抗体，晾干后用超纯水冲洗电极表面，4 °C冰箱中晾干；
(4)用3yL、质量分数为1%的牛血清白蛋白溶液封闭非特异性活性位点，于4 °C冰箱中孵化3 h，清洗干净；
(5)将6此前列腺特异性抗原滴加在电极上用于捕获抗体，室温下孵化Ih，清洗干净；
(6)将6度为I mg/mL的银杂化硫化祕标记的抗体溶液滴在电极上与抗原特异性识别，室温下孵化I h，清洗干净，于4 °C冰箱中储存备用。
[0018]实施例2—种基于金杂化氨基化石墨烯/ 二氧化铈的前列腺特异性抗原电致化学发光传感器的制备方法
(1)将直径为4mm的玻碳电极依次用1.0 μπι,0.3 μπι,0.05 μπι氧化铝抛光粉依次做抛光处理，用超纯水冲洗干净；
(2)将6yL、浓度为2 mg/mL的基底材料金杂化氨基化石墨烯/二氧化铈溶液于电极表面，4 °C保存； (3)滴加6tiL、8 ug/mL的抗体，晾干后用超纯水冲洗电极表面，4 °C冰箱中晾干；
(4)用3yL、质量分数为1%的牛血清白蛋白溶液封闭非特异性活性位点，于4 °C冰箱中孵化3 h，清洗干净；
(5)将6此前列腺特异性抗原滴加在电极上用于捕获抗体的特异性识，室温下孵化Ih，清洗干净；
将6 yL浓度为2 mg/mL的银杂化硫化祕标记的抗体溶液滴在电极上与抗原特异性识另IJ，室温下孵化I h，清洗干净，于4 °C冰箱中储存备用。
[0019]实施例3—种基于金杂化氨基化石墨烯/ 二氧化铈的前列腺特异性抗原电致化学发光传感器的制备方法
(1)将直径为4mm的玻碳电极依次用1.0 μπι,0.3 μπι,0.05 μπι氧化铝抛光粉依次做抛光处理，用超纯水冲洗干净；
(2)将6yL、浓度为3 mg/mL的基底材料金杂化氨基化石墨烯/二氧化铈溶液于电极表面，4 °C保存；
(3)滴加6uUlO ug/mL的抗体，晾干后用超纯水冲洗电极表面，4 °C冰箱中晾干；
(4)用3yL、质量分数为1%的牛血清白蛋白溶液封闭非特异性活性位点，于4 °C冰箱中孵化3 h，清洗干净；
(5)将6此前列腺特异性抗原滴加在电极上用于捕获抗体，室温下孵化Ih，清洗干净；
(6)将6度为3 mg/mL的银杂化硫化祕标记的抗体溶液滴在电极上与抗原特异性识别，室温下孵化I h，清洗干净，于4 °C冰箱中储存备用。
[0020]实施例4基底材料金杂化氨基化石墨烯/二氧化铈溶液的制备
(1)氨基化石墨烯的制备
将75 mg氧化石墨烯加入到40 mL乙二醇溶液中，在室温下超声I h，然后加入1.0 mL氨水，剧烈振荡I min后，将溶液转移至50 mL反应爸中，180 °C下加热6 h，8000 r/min下离心洗涤20 min，35 "€真空干燥，即得到氨基化石墨稀；
(2)金杂化氨基化石墨烯/二氧化铈的制备
将40 mg氨基化石墨烯分散到50 mL超纯水中，超声2 h，然后加入1.1 g六水合硝酸铈，搅拌30 min，加入氨水调节pH到11，加入2.5 mL质量分数为1%的氯金酸溶液，溶液在90 °C下搅拌6 h，8000 r/min下离心洗涤20 min,35 "€真空干燥，即得到金杂化氨基化石墨稀/
二氧化铈。
[0021 ]实施例5基底材料金杂化氨基化石墨烯/二氧化铈溶液的制备
(1)氨基化石墨烯的制备
将100 mg氧化石墨稀加入到40 mL乙二醇溶液中，在室温下超声I h，然后加入1.0 mL氨水，剧烈振荡I min后，将溶液转移至50 mL反应爸中，180 °C下加热6 h，8000 r/min下离心洗涤20 min，35 "€真空干燥，即得到氨基化石墨稀；
(2)金杂化氨基化石墨烯/二氧化铈的制备
将50 mg氨基化石墨烯分散到50 mL超纯水中，超声2 h，然后加入1.1 g六水合硝酸铈，搅拌30 min，加入氨水调节pH到11，加入2.5 mL质量分数为1%的氯金酸溶液，溶液在90 °C下搅拌6 h，8000 r/min下离心洗涤20 min,35 "€真空干燥，即得到金杂化氨基化石墨稀/
二氧化铈。
[0022]实施例6基底材料金杂化氨基化石墨烯/二氧化铈溶液的制备
(1)氨基化石墨烯的制备
将125 mg氧化石墨稀加入到40 mL乙二醇溶液中，在室温下超声I h，然后加入1.0 mL氨水，剧烈振荡I min后，将溶液转移至50 mL反应爸中，180 °C下加热6 h，8000 r/min下离心洗涤20 min，35 "€真空干燥，即得到氨基化石墨稀；
(2)金杂化氨基化石墨烯/二氧化铈的制备
将60 mg氨基化石墨烯分散到50 mL超纯水中，超声2 h，然后加入1.1 g六水合硝酸铈，搅拌30 min，加入氨水调节pH到11，加入2.5 mL质量分数为1%的氯金酸溶液，溶液在90 °C下搅拌6 h，8000 r/min下离心洗涤20 min,35 "€真空干燥，即得到金杂化氨基化石墨稀/
二氧化铈。
[0023]实施例7银杂化硫化铋标记的前列腺特异性抗原的抗体溶液的制备
(I)硫化秘的制备
将1.6 g五水合硝酸铋溶解到25 mL乙二醇中，用氮气鼓泡15分钟，得到溶液A;同时将1.2 g硫化钠溶于10 mL乙二醇和20 mL超纯水的混合溶液中，搅拌15 min，得到溶液B;在搅拌下，将溶液B逐滴加入到溶液A中，将1.8 g脲加入到上述溶液中，再加入20 mL超纯水，搅拌30分钟，将混合溶液转移至反应釜中，180 °C下加热24 h，8000 r/min下离心洗涤20min，35 "€真空干燥，得到硫化祕；
(2 )银杂化硫化铋标记物的制备
将230 mg硫化铋分散到100 mL超纯水中，超声10 h，然后加入110 mg硝酸银和10 mg表面活性剂(PVP)，搅拌6 h，再加入6 mL 5mmol/L的柠檬酸钠溶液，搅拌24 h，8000 r/min下离心洗涤20 min，真空干燥箱中，35 °C干燥，得到银杂化硫化铋标记物；
(3)银杂化硫化铋标记的抗体溶液的制备
将3 mL浓度为I mg/mL的银杂化硫化铋标记物溶液与300 yL浓度为5 yg/mL前列腺特异性抗原的抗体溶液混合，振荡24 h，5000 r/min下离心洗涤15 min，得到银杂化硫化祕标记的抗体孵化物，将其分散于3 mL、pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，制得银杂化硫化铋标记的抗体溶液。
[0024]实施例8银杂化硫化铋标记的前列腺特异性抗原的抗体溶液的制备
(I)硫化秘的制备
将1.8 g五水合硝酸铋溶解到25 mL乙二醇中，用氮气鼓泡15分钟，得到溶液A;同时将
1.4g硫化钠溶于10 mL乙二醇和20 mL超纯水的混合溶液中，搅拌15 min，得到溶液B;在搅拌下，将溶液B逐滴加入到溶液A中，将1.9 g脲加入到上述溶液中，再加入20 mL超纯水，搅拌30分钟，将混合溶液转移至反应釜中，180 °C下加热24 h，8000 r/min下离心洗涤20min，35 "€真空干燥，得到硫化祕；
(2 )银杂化硫化铋标记物的制备
将240 mg硫化铋分散到100 mL超纯水中，超声10 h，然后加入120 mg硝酸银和15 mg表面活性剂(PVP)，搅拌6 h，再加入6 mL 5mmol/L的柠檬酸钠溶液，搅拌24 h，8000 r/min下离心洗涤20 min，真空干燥箱中，35 °C干燥，得到银杂化硫化铋标记物；
(3)银杂化硫化铋标记的抗体溶液的制备
将3 mL浓度为2 mg/mL的银杂化硫化铋标记物溶液与300 度为10 yg/mL前列腺特异性抗原的抗体溶液混合，振荡24 h，5000 r/min下离心洗涤15 min，得到银杂化硫化祕标记的抗体孵化物，将其分散于3 mL、pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，制得银杂化硫化铋标记的抗体溶液。
[0025]实施例9银杂化硫化铋标记的前列腺特异性抗原的抗体溶液的制备 (I)硫化秘的制备
将2.0 g五水合硝酸铋溶解到25 mL乙二醇中，用氮气鼓泡15分钟，得到溶液A;同时将
1.5g硫化钠溶于10 mL乙二醇和20 mL超纯水的混合溶液中，搅拌15 min，得到溶液B;在搅拌下，将溶液B逐滴加入到溶液A中，将2.0 g脲加入到上述溶液中，再加入20 mL超纯水，搅拌30分钟，将混合溶液转移至反应釜中，180 °C下加热24 h，8000 r/min下离心洗涤20min，35 "€真空干燥，得到硫化祕；
(2 )银杂化硫化铋标记物的制备
将250 mg硫化铋分散到100 mL超纯水中，超声10 h，然后加入130 mg硝酸银和20 mg表面活性剂(PVP)，搅拌6 h，再加入6 mL 5mmol/L的柠檬酸钠溶液，搅拌24 h，8000 r/min下离心洗涤20 min，真空干燥箱中，35 °C干燥，得到银杂化硫化铋标记物；
(3)银杂化硫化铋标记的抗体溶液的制备
将3 mL浓度为3 mg/mL的银杂化硫化铋标记物溶液与300 度为15 yg/mL前列腺特异性抗原的抗体溶液混合，振荡24 h，5000 r/min下离心洗涤15 min，得到银杂化硫化祕标记的抗体孵化物，将其分散于3 mL、pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，制得银杂化硫化铋标记的抗体溶液。
[0026]实施例10前列腺特异性抗原的检测方法
(1)使用电化学工作站的三电极体系进行测试，Ag/AgCl电极作为参比电极，铂丝电极为对电极，所制备的电致化学发光免疫传感器为工作电极，将电化学工作站和化学发光检测仪连接在一起将光电倍增管的高压设置为750 V，循环伏安扫描电位为-2.0 V，扫描速率为0.1 V/s；
(2)在10mL、pH 5.5的含100 mmol/L过硫酸钾的磷酸盐缓冲溶液中，通过电化学发光系统，检测对不同浓度的待测物抗原产生的电化学发光信号强度，绘制工作曲线；
(3)将待测样品溶液代替前列腺特异性抗原溶液进行检测。
[0027]实施例11前列腺特异性抗原的检测方法
(1)使用电化学工作站的三电极体系进行测试，Ag/AgCl电极作为参比电极，铂丝电极为对电极，所制备的电致化学发光免疫传感器为工作电极，将电化学工作站和化学发光检测仪连接在一起将光电倍增管的高压设置为750 V，循环伏安扫描电位为-2.0 V，扫描速率为0.1 V/s；
(2)在10mL、pH 6.5的含125 mmol/L过硫酸钾的磷酸盐缓冲溶液中，通过电化学发光系统，检测对不同浓度的待测物抗原产生的电化学发光信号强度，绘制工作曲线；
(3)将待测样品溶液代替前列腺特异性抗原溶液进行检测。
[0028]实施例12前列腺特异性抗原的检测方法
(I)使用电化学工作站的三电极体系进行测试，Ag/AgCl电极作为参比电极，铂丝电极为对电极，所制备的电致化学发光免疫传感器为工作电极，将电化学工作站和化学发光检测仪连接在一起将光电倍增管的高压设置为750 V，循环伏安扫描电位为-2.0 V，扫描速率为0.1 V/s；
(2)在10mL、pH 8.0的含150 mmol/L过硫酸钾的磷酸盐缓冲溶液中，通过电化学发光系统，检测对不同浓度的待测物抗原产生的电化学发光信号强度，绘制工作曲线；
(3)将待测样品溶液代替前列腺特异性抗原溶液进行检测。
【主权项】
1.一种基于银杂化硫化铋的电致化学发光免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)将直径为4mm的玻碳电极依次用I.0 μπι、0.3 μπι、0.05 μπι氧化铝抛光粉依次做抛光处理，用超纯水冲洗干净； (2)取6yL、l?3 mg/mL金杂化氨基化石墨稀/二氧化铺溶液滴加到电极表面，室温下晾干，用超纯水冲洗电极表面，晾干； (3)滴加6tiL、5?10 ug/mL的抗体，晾干后用超纯水冲洗电极表面，4 °C冰箱中晾干； (4)用3yL、质量分数为1%的牛血清白蛋白溶液封闭非特异性活性位点，于4 °C冰箱中孵化3 h，清洗干净； (5)将6此前列腺特异性抗原滴加在电极上用于捕获抗体，室温下孵化Ih，清洗干净； (6)将6yL浓度为I?3 mg/mL的银杂化硫化铋标记的抗体溶液滴在电极上与抗原特异性识别，室温下孵化I h，清洗干净，于4 °C冰箱中储存备用。2.如权利要求1所述的一种基于银杂化硫化铋的电致化学发光免疫传感器的制备方法，所述的金杂化氨基化石墨烯/ 二氧化铈溶液的制备步骤如下: (I)氨基化石墨烯的制备 将75?125 mg氧化石墨烯加入到40 mL乙二醇溶液中，在室温下超声I h，然后加入1.0mL氨水，剧烈振荡I min后，将溶液转移至50 mL反应釜中，180 °C下加热6 h，8000 r/min下离心洗涤20 min，35 "€真空干燥，即得到氨基化石墨稀； (2 )金杂化氨基化石墨烯/ 二氧化铈的制备 将40?60 mg氨基化石墨稀分散到50 mL超纯水中，超声2 h，然后加入1.1 g六水合硝酸铈，搅拌30 min，加入氨水调节pH到11，加入2.5 mL质量分数为1%的氯金酸溶液，溶液在90 °C下搅拌6 h，8000 r/min下离心洗涤20 min,35 "€真空干燥，即得到金杂化氨基化石墨稀/ 二氧化铺。3.如权利要求1所述的一种基于银杂化硫化铋的电致化学发光免疫传感器的制备方法，所述的银杂化硫化铋标记的抗体溶液的制备步骤如下: (I)硫化秘的制备 将1.6?2.0 g五水合硝酸铋溶解到25 mL乙二醇中，用氮气鼓泡15分钟，得到溶液A;同时将1.2?1.5 g硫化钠溶于10 mL乙二醇和20 mL超纯水的混合溶液中，搅拌15 min，得到溶液B；在搅拌下，将溶液B逐滴加入到溶液A中，将1.8?2.0 g脲加入到上述溶液中，再加入20 mL超纯水，搅拌30分钟，将混合溶液转移至反应釜中，180 °C下加热24 h，8000 r/min下离心洗涤20 min，35 "€真空干燥，得到硫化祕； (2 )银杂化硫化铋标记物的制备 将230?250 mg硫化铋分散到100 mL超纯水中，超声10 h，然后加入110?130 mg硝酸银和10?20 mg表面活性剂(PVP)，搅拌6 h，再加入6 mL 5mmol/L的柠檬酸钠溶液，搅拌24 h，8000 r/min下离心洗涤20 min，真空干燥箱中，35 °C干燥，得到银杂化硫化祕标记物； (3 )银杂化硫化铋标记的抗体溶液的制备 将3 mL浓度为I?3 mg/mL的银杂化硫化铋标记物溶液与300 度为5?15 yg/mL前列腺特异性抗原的抗体溶液混合，振荡24 h，5000 r/min下离心洗涤15 min，得到银杂化硫化铋标记的抗体孵化物，将其分散于3 mL、pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，制得银杂化硫化铋标记的抗体溶液。4.如权利要求1所述的制备方法制备的电致化学发光免疫传感器的检测方法，其特征在于，步骤如下: (1)使用电化学工作站的三电极体系进行测试，Ag/AgCl电极作为参比电极，铂丝电极为对电极，所制备的电致化学发光免疫传感器为工作电极，将电化学工作站和化学发光检测仪连接在一起将光电倍增管的高压设置为750 V，循环伏安扫描电位为-2.0 V，扫描速率为0.1 V/s； (2)在10mL、pH 5.5 - 8.0的含100?150 mmol/L过硫酸钾的磷酸盐缓冲溶液中，通过电化学发光系统，检测对不同浓度的待测物抗原产生的电化学发光信号强度，绘制工作曲线； (3)将待测样品溶液代替前列腺特异性抗原溶液进行检测。
【文档编号】G01N33/543GK105842460SQ201610175925
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2016年3月25日
【发明人】赵永蓓, 魏琴, 杜斌, 马洪敏, 张勇, 吴丹, 孙旭, 范大伟, 庞雪辉, 王欢
【申请人】济南大学