一种降钙素原测定试剂盒及其降钙素原的含量的测定方法
【专利摘要】本发明特别涉及一种降钙素原测定试剂盒及其降钙素原的含量的测定方法。该降钙素原测定试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，其中，试剂R1为多种表面活性剂混合的促进抗体抗原特异性反应的反应液；试剂R2为抗人降钙素原抗体的纳米胶乳微粒缓冲液，组分包括0.1%?2%的标记有抗人降钙素原抗体的纳米胶乳微粒。本发明试剂盒检测灵敏度可以达到0.12ng/ml，高于同类产品的分析灵敏度。是一种灵敏度高，特异性好，准确性高，精密度好的纳米胶乳微粒型的降钙素原测定试剂盒。将不同粒径的胶乳微粒与多克隆抗体交联，形成多种粒径的偶联物，不同粒径的偶联物按不同比例混合，可以加宽降钙素原测定试剂盒的线性范围，提高检测灵敏度。
【专利说明】一种降钙素原测定试剂盒及其降钙素原的含量的测定方法
[0001] ( - )技术领域 本发明属于医学检验领域，是一种体外诊断试剂，用于定量检测人血液或血清中降钙 素原(PCT)的含量，特别涉及一种降钙素原测定试剂盒及其降钙素原的含量的测定方法。
[0002] (二)【背景技术】 目前，检测PCT的实验方法有放射免疫学分析法，利用人工合成的多克隆抗体特异地识 别和连接合成氨基酸降钙素原。该方法能检测的是游离PCT、结合型PCT和降钙素基因相关 的肽前体的混合物，而不能区分上述三种物质。该法检测耗时长（19-22小时），而且有放射 性元素的污染。
[0003] 双抗夹心免疫化学发光法，利用双单克隆抗体，其中一个为降钙素抗体，另一个为 抗钙素抗体，分别结合到PCT分子的降钙素和抗钙素部位。其中一个抗体是光标记的，另一 个未标记的抗体固定在试管的内壁，反应过程中两个抗体与PCT分子结合形成三明治复合 体，发光部位于反应管的表面。该方法耗时2小时。
[0004] 上述两种方法都存在一些缺点，操作时间长，自动化程度低。
[0005] 免疫透射比浊法，样品中抗原与试剂中的抗体发生抗原-抗体反应，在短时间内会 迅速凝集在一起，改变了反应液的透光度，反应液的透光度与所加入抗原的量有较强的相 关性，即胶乳微粒聚集越多，越会阻碍光线的透光性，反应液的吸光度就越大，在一定范围 内与被测抗原浓度呈线性关系。这种方法反应时间短，精密度好，检测范围宽，易于自动化， 是目前使用非常受欢迎的一种检测方法。
[0006] 由于血液是不透明的红色液体，目前市场上用于体外诊断降钙素原(PCT)含量的 试剂都是使用血清为样本进行检测。在定量检测之前，需要对样本进行分离处理，分离方法 为:抽取静脉血，以3000rpm离心5分钟，得到分离的血清。当样本量大的时候，制备样本的时 间要比测试时间还要长，耗费人力和时间。
[0007] (三)
【发明内容】
本发明为了弥补现有技术的不足，提供了一种降钙素原测定试剂盒及其降钙素原的含 量的测定方法，其可以直接使用全血样本进行检测的试剂，提高检测全血或血清中降钙素 原含量的分析灵敏度;特异性好，灵敏度高，精密度好，准确度高。
[0008] 本发明是通过如下技术方案实现的： 一种降钙素原测定试剂盒，其特殊之处在于:包括试剂Rl和试剂R2,其中，试剂Rl为多 种表面活性剂混合的促进抗体抗原特异性反应的反应液， 组分包括： 10-50mmol/L的缓冲液， 0.1%-5%的增乳剂(1八〇， 0.2%-2% 的稳定剂(W/V)， 0.1%的防腐剂(W/V); 试剂R2为抗人降钙素原抗体的纳米胶乳微粒缓冲液， 组分包括： 0.1%-2%的标记有抗人降钙素原抗体的纳米胶乳微粒(W/V)，0.2%-2%的稳定剂(W/V)， 10-50mmol/L的缓冲液， 0.1%的防腐剂(W/V)。
[0009]所述的缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、甘氨酸 缓冲液和羟乙基哌嗪乙硫磺酸缓冲液其中的一种或多种;其pH在6.0-9.0之间。所述缓冲液 也可以为其他相似的缓冲液。
[0010] 所述增乳剂为：聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙二醇10000、吐 温80、CTAB、或IPTG。增乳剂的主要作用是可以增加抗原抗体反应速率，本发明所选用的增 乳剂优选为聚乙二醇6000和CTAB。
[0011] 所述稳定剂为：乙二胺四乙酸二钠、牛血清白蛋白、聚乙二醇4000和聚乙二醇6000 的一种或多种。
[0012] 所述防腐剂为：叠氮钠、硫柳汞、苯酚和procline300中一种或多种。本发明优选 procline300〇
[0013] 所述抗人降钙素原抗体为不同粒径多克隆抗体的聚苯乙烯纳米胶乳微粒偶联物。
[0014] 所述抗人降钙素原抗体纳米胶乳微粒制备方法为:选择不同粒径的聚苯乙烯纳米 胶乳微粒，通过活化剂1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基硫代 琥珀亚酰胺(Sulfo-NHS)活化微粒表面的羟基，生成活性酯，再与多克隆抗体降钙素原抗体 反应，形成共价键，完成偶联，制成不同粒径多克隆抗体的聚苯乙烯纳米胶乳微粒偶联物。 所述不同粒径的聚苯乙烯纳米胶乳微粒20_400nm(市售产品）。其中小颗粒纳米胶乳微粒偶 联的降钙素原抗体可提高检测的线性范围；大颗粒纳米胶乳微粒偶联的降钙素原抗体，可 提尚检测灵敏度。
[0015] 本发明的原理:本发明利用了交联了抗体的纳米胶乳微粒偶联物，与标本中抗原 发生免疫反应后，形成聚集颗粒，在一定波长下，通过测定聚集物形成时所产生的浊度，即 可测出被测物的含量。所述发明中，血清中降钙素原抗原与交联在胶乳微粒上的抗体结合， 产生抗原抗体反应，使胶乳颗粒形成聚集，在650nm波长处测定反应物吸光度，通过对照标 准曲线可计算出标本中降钙素原的含量。
[0016] 本发明与现代技术相比具有如下优点： 本发明试剂盒检测灵敏度可以达到〇.12ng/ml，高于同类产品的分析灵敏度。是一种灵 敏度高，特异性好，准确性高，精密度好的纳米胶乳微粒型的降钙素原测定试剂盒。
[0017]本发明所涉及的纳米胶乳微粒的粒径在20-400nm;将不同粒径的胶乳微粒与多克 隆抗体交联，可以形成多种粒径的偶联物，将不同粒径的偶联物按不同比例混合，可以加宽 降钙素原测定试剂盒的线性范围，提高检测灵敏度。
[0018] (四）【附图说明】 下面结合附图对本发明作进一步的说明。
[0019] 附图1为本发明的标准血清样本线性实验相关性分析图； 附图2为本发明的标准全血样本线性实验相关性分析图； 附图3为分别使用本发明试剂盒和对照试剂盒对50份正常人血清和50份异常人血清进 行相关性实验相关性分析图； 附图4为分别使用本发明试剂盒和对照试剂盒对50份正常人全血和50份异常人全血进 行相关性实验相关性分析图。
[0020] (五)【具体实施方式】 本发明【具体实施方式】，通过以下实例描述： 实例1. 降钙素原测定试剂盒的制备 试剂I (R1)的配制方法：在5Ommo I /L的Tr i S缓冲液（PH=8.0)中加入终浓度0.1 %的 Procl ine300，4%聚乙二醇6000，充分混匀溶解，经0.22um的滤膜过滤后，制成试剂Rl。
[0021] 试剂2(R2)的配制方法:降钙素原抗体委托专业公司按照常规方法制得。该抗体与 降钙素原发生特异性免疫反应，与其他抗原无交叉免疫反应，能够满足本实验需求。
[0022] 在ΡΗ=6·0的MES缓冲液中加入EADC:Sulf〇-NHS):纳米胶乳微粒（300nm或30nm)，其 质量比为1:0.5:0.1，超声2-3秒，混匀，经室温在旋转摇床上活化2小时，17000rpm离心30分 钟，用PH=6.0的MES缓冲液洗涤3次，然后将微球悬于PH=8. OHEPES缓冲液中，制成微粒悬液， 测粒径及CV值。
[0023]在300nm微粒悬液中，加入质量为纳米胶乳微粒1/5重的降|丐素原抗体，在30nm微 粒悬液中加入质量为纳米胶乳微粒1/5重降钙素原抗体，超声2-3秒，立即混匀，使HEPES缓 冲液的最终浓度为20mg/ml，室温旋转摇床孵育4小时。再分别加入0.2%的乙醇胺，0.1%的牛 血清白蛋白，〇. 1%的procline300，0.02%甘氨酸的封闭液，室温旋转摇床孵育1小时。在2-8 °C的条件下17 0 0 Or pm离心3 0分钟，弃上清液，沉淀物分别用终浓度的HETO S缓冲液（PH= 8.0)，0.1%的procline300，0.02%甘氨酸的洗涤液重悬，再离心，如此洗涤3次，制成300nm微 粒交联的降钙素原抗体偶联物和30nm微粒交联的降钙素原抗体偶联物。用含0.2%的乙醇 胺，0.1%的牛血清白蛋白，0.1%的procline300和20mmol/L的HEPES缓冲液(ΡΗ=8·0)分别重 悬偶联物，使其终浓度为〇. 2%(W/V)，再以1:3体积比混合，制成试剂2。
[0024] 实例 2. 降钙素原测定试剂盒的制备 试剂I (Rl)的配制方法:在40mmol/L的磷酸钠缓冲液(等浓度的NaH2PO4和Na 2HPO4配制， PH=8.0)中加入终浓度0.1%的叠氮钠，2%聚乙二醇2000，0.5%EDTA. 2Na，0.5%BSA充分混匀溶 解，经0 · 22um的滤膜过滤后，制成试剂Rl 〇
[0025] 试剂2(R2)的配制方法:降钙素原抗体委托专业公司按照常规方法制得。该抗体与 降钙素原发生特异性免疫反应，与其他抗原无交叉免疫反应，能够满足本实验需求。
[0026] 在ρΗ=6·0的MES缓冲液中加入EADC:Sulf〇-NHS):纳米胶乳微粒(400nm或40nm)，其 质量比为1:0.5:0.1，超声3秒，混匀，经室温在旋转摇床上活化2小时，16000rpm离心30分 钟，用MES缓冲液洗涤3次，然后将微球悬于HEPES缓冲液中，制成微粒悬液，测粒径及CV值。 [00 27]在400nm微粒悬液中，加入质量为纳米胶乳微粒1/5重的降|丐素原抗体，在40nm微 粒悬液中加入质量为纳米胶乳微粒1/5重降钙素原抗体，超声3秒，立即混匀，使HEPES缓冲 液的最终浓度为50mg/ml，室温旋转摇床孵育4小时。再分别加入0.2%的乙醇胺，2%的牛血清 白蛋白，0.1%的叠氮钠，0.08%甘氨酸的封闭液，室温旋转摇床孵育1小时。在2-8 °C的条件下 16000rpm离心30分钟，弃上清液，沉淀物分别用终浓度的HEPES缓冲液(pH=8.0)，0.1%的叠 氮钠，0.08%甘氨酸的洗涤液重悬，再离心，如此洗涤3次，制成400nm微粒交联的降钙素原抗 体偶联物和40nm微粒交联的降钙素原抗体偶联物。用含0.2%的乙醇胺，0.1%的叠氮钠，2%的 牛血清白蛋白和50mmol/L的HEPES缓冲液(pH=8.0)分别重悬偶联物，使其终浓度为2%(W/ V)，再以1:3体积比混合，制成试剂2。
[0028] 实例3 降钙素原测定试剂盒的制备 试剂I (Rl)的配制方法：在30mmol/L的硼酸盐缓冲液（硼酸与Na2B4O7浓度为4:1，PH= 8.0)中加入终浓度0.1%的硫柳汞，5%增乳剂聚乙二醇4000，1%稳定剂聚乙二醇4000，0.2% BSA充分混匀溶解，经0.22um的滤膜过滤后，制成试剂Rl。
[0029] 试剂2(R2)的配制方法:降钙素原抗体委托专业公司按照常规方法制得。该抗体与 降钙素原发生特异性免疫反应，与其他抗原无交叉免疫反应，能够满足本实验需求。
[0030] 在ΡΗ=6·0的MES缓冲液中加入EADC:Sulf〇-NHS):纳米胶乳微粒（200nm或20nm)，其 质量比为1:0.5:0.1，超声2-3秒，混匀，经室温在旋转摇床上活化2小时，17000rpm离心30分 钟，用PH=6.0的MES缓冲液洗涤3次，然后将微球悬于PH=8. OHEPES缓冲液中，制成微粒悬液， 测粒径及CV值。
[0031] 在200nm微粒悬液中，加入质量为纳米胶乳微粒1/5重的降钙素原抗体，在20nm微 粒悬液中加入质量为纳米胶乳微粒1/5重降钙素原抗体，超声2-3秒，立即混匀，使HEPES缓 冲液的最终浓度为30mg/ml，室温旋转摇床孵育4小时。再分别加入0.2%的乙醇胺，1%的聚乙 二醇6000，0.1%的硫柳汞，0.06%甘氨酸的封闭液，室温旋转摇床孵育1小时。在2-8 °C的条件 下17000rpm离心30分钟，弃上清液，沉淀物分别用终浓度的HEPES缓冲液(PH=8.0)，0.1%的 硫柳汞，0.06%甘氨酸的洗涤液重悬，再离心，如此洗涤3次，制成200nm微粒交联的降钙素原 抗体偶联物和20nm微粒交联的降钙素原抗体偶联物。用含0.2%的乙醇胺，1%的聚乙二醇 6000，0.1%的硫柳汞和30mmol/L的HEPES缓冲液(PH=8.0)分别重悬偶联物，使其终浓度为1% (W/V)，再以1:3体积比混合，制成试剂2。
[0032] 实例4 降钙素原测定试剂盒的制备 试剂I (Rl)的配制方法:在20mmol/L的甘氨酸缓冲液(PH=9.0)中加入终浓度0.1%的苯 酚，3%增乳剂聚乙二醇10000，0.6%稳定剂聚乙二醇6000，充分混匀溶解，经0.22um的滤膜过 滤后，制成试剂Rl。
[0033] 试剂2(R2)的配制方法:降钙素原抗体委托专业公司按照常规方法制得。该抗体与 降钙素原发生特异性免疫反应，与其他抗原无交叉免疫反应，能够满足本实验需求。
[0034] 在ΡΗ=6·0的MES缓冲液中加入EADC:Sulf〇-NHS):纳米胶乳微粒（300nm或30nm)，其 质量比为1:0.5:0.1，超声2-3秒，混匀，经室温在旋转摇床上活化2小时，17000rpm离心30分 钟，用PH=6.0的MES缓冲液洗涤3次，然后将微球悬于PH=8. OHEPES缓冲液中，制成微粒悬液， 测粒径及CV值。
[0035]在300nm微粒悬液中，加入质量为纳米胶乳微粒1/5重的降|丐素原抗体，在30nm微 粒悬液中加入质量为纳米胶乳微粒1/5重降钙素原抗体，超声2-3秒，立即混匀，使HEPES缓 冲液的最终浓度为20mg/ml，室温旋转摇床孵育4小时。再分别加入0.2%的乙醇胺，0.1%的牛 血清白蛋白，〇 · 9%的聚乙二醇6000，0 · 05%的苯酚，0 · 05%的procl ine300，0 · 04%甘氨酸的封 闭液，室温旋转摇床孵育1小时。在2-8°C的条件下17000rpm离心30分钟，弃上清液，沉淀物 分别用终浓度的HEPES缓冲液(PH=8.0)，0.05%的苯酚，0.05%的procline300，0.04%甘氨酸 的洗涤液重悬，再离心，如此洗涤3次，制成300nm微粒交联的降钙素原抗体偶联物和30nm微 粒交联的降钙素原抗体偶联物。用含〇. 2%的乙醇胺，0.1%的牛血清白蛋白，0.9%的聚乙二醇 6000，O·05%的苯酚，O·05%的procline300和20mmol/L的HEPES缓冲液(PH=8·0)分别重悬偶 联物，使其终浓度为〇. 8%(W/V)，再以1:3体积比混合，制成试剂2。
[0036] 实例5 降钙素原测定试剂盒的制备 试剂I (Rl)的配制方法:在I Ommo 1/L的Tr i s缓冲液(PH=6.0)中加入终浓度0.05%的硫柳 汞，0.05%的叠氮钠，1%增乳剂吐温80，0.8%稳定剂牛血清白蛋白，充分混匀溶解，经0.22um 的滤膜过滤后，制成试剂Rl。
[0037] 试剂2(R2)的配制方法:降钙素原抗体委托专业公司按照常规方法制得。该抗体与 降钙素原发生特异性免疫反应，与其他抗原无交叉免疫反应，能够满足本实验需求。
[0038] 在ΡΗ=6·0的MES缓冲液中加入EADC:Sulf〇-NHS):纳米胶乳微粒（300nm或30nm)，其 质量比为1:0.5:0.1，超声2-3秒，混匀，经室温在旋转摇床上活化2小时，17000rpm离心30分 钟，用PH=6.0的MES缓冲液洗涤3次，然后将微球悬于PH=8. OHEPES缓冲液中，制成微粒悬液， 测粒径及CV值。
[0039]在300nm微粒悬液中，加入质量为纳米胶乳微粒1/5重的降|丐素原抗体，在30nm微 粒悬液中加入质量为纳米胶乳微粒1/5重降钙素原抗体，超声2-3秒，立即混匀，使HEPES缓 冲液的最终浓度为l〇mg/ml，室温旋转摇床孵育4小时。再分别加入0.2%的乙醇胺，0.1%的牛 血清白蛋白，〇 . 05%的叠氮钠，0.05%的硫柳汞，0.02%甘氨酸的封闭液，室温旋转摇床孵育1 小时。在2-8 °C的条件下17000rpm离心30分钟，弃上清液，沉淀物分别用终浓度的HEPES缓冲 液(PH=8.0)，0.05%的叠氮钠，0.05%的硫柳汞，0.02%甘氨酸的洗涤液重悬，再离心，如此洗 涤3次，制成300nm微粒交联的降钙素原抗体偶联物和30nm微粒交联的降钙素原抗体偶联 物。用含〇. 2%的乙醇胺，0.1%的牛血清白蛋白，0.05%的叠氮钠，0.05%的硫柳汞和lOmmol/L 的HEPES缓冲液(PH=8.0)分别重悬偶联物，使其终浓度为0.1%(W/V)，再以1:3体积比混合， 制成试剂2。
[0040]实例6 制备试剂Rl过程中，增乳剂为IPTG，浓度为4%，其他与实施例1相同。
[0041 ] 实施例7 制备试剂Rl过程中，增乳剂为CTAB，浓度为1%，其他与实施例1相同。
[0042] 实施例8 制备试剂R1过程中，增乳剂为C T A B，浓度为0.1 %，稳定剂为聚乙二醇4 0 0 0、聚乙二醇 6000,聚乙二醇4000、聚乙二醇6000的浓度分别为0.1%、0.1%，其他与实施例5相同。
[0043] 实例9 制备试剂Rl过程中，增乳剂为聚乙二醇6000,浓度为0.8%，稳定剂为聚乙二醇4000,聚 乙二醇4000的浓度为1.5%，其他与实施例5相同。
[0044] 实例10 上述实施例均可通过下述方式进行检测，现以实施例1为例进行阐述。
[0045]降钙素原测定试剂盒的性能 试验分析方法:两点终点法。取试剂Rl: 180ul，加入20ul样本，于37°C孵育5分钟后，加 入试剂R2:60ul，开始读点，反应5分钟后，再次读点，得到吸光度差值Δ A。
[0046] 分析仪器:迪瑞1300型自动分析仪。
[0047][基本参数]: 检测方法： 两点终点法 主波长： 650nm 反应温度： 37 °C 操作步骤： 单位:ul 表1
[结果计算] 计算校准吸光度差值(A2-A1 )，并建立校准液吸光度-浓度工作曲线。
[0048] 1.灵敏度试验 检测20次水，记录吸光度差值（△ A水），计算平均值(X水)和标准偏差(SD水）;检测浓度 为0.62ng/ml的样本20次，记录吸光度差值（ΔΑ样），计算平均值(X样)和标准偏差（SD样）， 用如下公式计算灵敏度。
[0049]灵敏度=0.62 X (X水+3 XSQ*)/X# 表2
本发明试剂灵敏度=O · 62 X (Ο · 0005685+3 X O · 0023374)/0 · 0065=0 · 12ng/ml · 1.标准血清样本线性实验 用降钙素原蛋白溶于类似于人血清基质的溶液，（〇. 9%NaCl、0.1%牛血清白蛋白、0.1% 叠氮钠、20111111〇1/1^1'1^8缓冲液？!1=8.0)，制成浓度为0.0叫/1111，0.62叫/1111，1.56叫/1111， 8.18ng/ml，20.74ng/ml和51. lng/ml的6个标准血清样本，每个浓度的样本用本发明的降钙 素原测定试剂盒测定3次，取其平均值。对测定值进行相关分析，如图1所示，图中X轴表示理 论值(ng/ml)，Y轴表示实测值(ng/ml)，R2=0.99963。
[0050] 2.标准全血样本线性实验 用降1丐素原蛋白溶于类似于人全血基质的溶液，制成浓度为〇 . 〇ng/ml，0.62ng/ml， 1.56ng/ml，8· 18ng/ml，20.74ng/ml和51 · lng/ml的6个标准全血样本，每个浓度的样本用本 发明的降钙素原测定试剂盒测定3次，取其平均值。对测定值进行相关分析，如图2所示，图 中X轴表示理论值(ng/ml)，Y轴表示实测值(ng/ml)，R2=99862。
[0051 ] 3 ·精密度实验 用本发明试剂盒检测降钙素原高、低两个浓度的血清样本各20次，计算批内精密度;用 3个批号的试剂盒检测同一浓度降钙素原血清样本20次，计算批间精密度。实验结果如下表 所示，本发明试剂盒的批内精密度分别为:3.6%，5.5%。批间精密度为:3.9%。说明本发明具 有良好的精密度。
[0052] 表3
用本发明试剂盒检测降钙素原高、低两个浓度的全血样本各20次，计算批内精密度;用 3个批号的试剂盒检测同一浓度降钙素原全血样本20次，计算批间精密度。实验结果如下表 所示，本发明试剂盒的批内精密度分别为:5.6%，9.9%。批间精密度为:4.3%。说明本发明具 有良好的精密度。
[0053]表 4 相大?土头版
分别使用本发明试剂盒和对照试剂盒(市售某公司同类产品）对50份正常人血清和50 份异常人血清进行相关性实验和相关性分析。试验结果如图3所示，图中X轴为对照试剂盒 测定值，Y轴为本发明试剂盒测定值，两试剂盒的相关系数R2=0.99385。结果表明，本发明试 剂盒与对照试剂盒的检测数据图呈直线关系，两试剂盒具有显著的相关性。
[0054]使用本发明的试剂盒对50份正常人全血和50份异常人全血，与对照试剂盒（市售 某公司产品）使用相同的50份正常人血清和50份异常人血清进行相关性实验和相关性分 析。试验结果如图4所示，图中X轴为对照试剂盒测定值，Y轴为本发明试剂盒测定值，两试剂 盒的相关系数R2=0.98538结果表明，本发明试剂盒与对照试剂盒的检测数据图呈直线关 系，两试剂盒具有显著的相关性。
【主权项】
1. 一种降钙素原测定试剂盒，其特征在于:包括试剂R1和试剂R2，其中，试剂R1为多种 表面活性剂混合的促进抗体抗原特异性反应的反应液， 组分包括： 10-50mmol/L的缓冲液， 0.1%-5% 的增乳剂(W/V)， 0.2%-2% 的稳定剂(W/V)， 0.1%的防腐剂(W/V); 试剂R2为抗人降钙素原抗体的纳米胶乳微粒缓冲液， 组分包括： 0.1%-2%的标记有抗人降钙素原抗体的纳米胶乳微粒(W/V)，0.2%-2%的稳定剂(W/V)， 10-50mmol/L的缓冲液， 0.1%的防腐剂(W/V)。2. 根据权利要求1所述的降钙素原测定试剂盒，其特征在于:所述的缓冲液为三羟甲基 氨基甲烷缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液和羟乙基哌嗪乙硫磺酸缓冲 液其中的一种或多种;其pH为6.0-9.0。3. 根据权利要求1或2所述的降钙素原测定试剂盒，其特征在于:所述增乳剂为:聚乙二 醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙二醇10000、吐温80、CTAB、或IPTG。4. 根据权利要求1或2所述的降钙素原测定试剂盒，其特征在于:所述稳定剂为：乙二胺 四乙酸二钠、牛血清白蛋白、聚乙二醇4000和聚乙二醇6000的一种或多种。5. 根据权利要求1或2所述的降钙素原测定试剂盒，其特征在于：所述防腐剂为：叠氮 钠、硫柳萊、苯酸和procl ine300中一种或多种。6. 根据权利要求1或2所述的降钙素原测定试剂盒，其特征在于:所述抗人降钙素原抗 体为不同粒径的多克隆抗体的聚苯乙烯纳米胶乳微粒偶联物。7. 根据权利要求1或2所述的降钙素原测定试剂盒，其特征在于:所述抗人降钙素原抗 体纳米胶乳微粒是通过选择不同粒径的聚苯乙烯纳米胶乳微粒，经碳化二亚胺盐酸盐活 化，聚苯乙烯纳米胶乳微粒与抗体形成稳定偶联物。8. 根据权利要求1或2所述的降钙素原测定试剂盒，其特征在于：聚苯乙烯纳米胶乳微 粒直径为20-400nm。9. 根据权利要求1或2所述的降钙素原测定试剂盒，其特征在于：用于测定人全血或血 清中降钙素原的含量。10. -种降钙素原测定试剂盒用于降钙素原的含量的测定方法，请特征在于:包括以下 步骤： (1) 聚苯乙烯纳米胶乳微粒通过碳化二亚胺盐酸盐将降钙素原多克隆抗体偶联，得到 不同粒径，不同抗体的偶联物； (2) 血清中降钙素原抗原与交联在胶乳微粒上的抗体结合，产生抗原抗体反应，使胶乳 颗粒形成聚集； (3) 在645-655nm波长处测定反应物吸光度，测定标本中降钙素原的含量。
【文档编号】G01N33/68GK105842458SQ201610171755
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2016年3月24日
【发明人】张立民, 王琳, 王元略
【申请人】山东盛百灵医药科技有限公司