检测lambda轻链含量的试剂盒、方法及用图
【技术领域】
[0001 ]本发明属于检测LAMBDA轻链含量的技术领域，具体涉及一种检测LAMBDA轻链含量 的试剂盒、方法及用途。
【背景技术】
[0002] 轻链(Light chain，L)大约由214个氨基酸残基组成，通常不含碳水化合物，分子 量约为24kD。每条轻链含有两个由链内二硫键所组成的环肽。L链共有两种类型:ΚΑΡΡΑ( κ) 与LAMBDA轻链(λ)，同一个天然免疫球蛋白分子上L链的类型总是相同的。正常人血清中的 κ:λ 约为2:1。
[0003] 细胞克隆的异常增生将导致单克隆球蛋白或游离免疫球蛋白片段(游离的轻链） 的增加，这将造成κ与λ链的比例失衡，κ与λ的比值失常预示了单克隆Υ球蛋白血症。在生成 增加的情况下，游离轻链的滤过也增加，当超出肾小管的重吸收能力时，该测试可以定量检 测结合及游离免疫球蛋白中的轻链。
[0004] 定量检测不同种类的轻链含量有助于诊断巨球蛋白血症（巨型球蛋白生成增多） 及结缔组织病(如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮)等疾病。
[0005] 此外，感染、急慢性肝炎、肝硬化等血中轻链也可增多，但一般均表现为κ、λ同时增 多；肾病、糖尿病等患者尿也可出现κ、λ同时增多。
[0006] 现有的LAMBDA检测技术存在诸多不足:如需要特殊的设备，样本需要预处理，不能 上全自动生化分析仪进行批量检测分析等。酶联免疫法应用比较普遍，其原理是将特异性 抗体与固相载体连接，形成固相抗体;洗涤除去未结合的抗体及杂质；加待测样品，使之与 固相抗体反应一段时间，让样品中抗原与固相载体上的抗体结合;洗涤除去未结合的物质； 加酶标抗体，使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合;洗涤除去未结合的酶标抗体;此 时固相载体上的酶量与样品中的待测物质的量正相关;加入底物反应显色。根据颜色反应 的程度对测定物质进行定性或定量测定。该方法为非均相免疫检测系统，测定过程较为繁 琐，耗时长，缺少单位测试运行时间；自动化程度不高，批间差和重复性相对较大;需要配备 多种专门设备，一定程度上增加了成本。
[0007] 随着样本检验数量的不断增加，临床上迫切需要一种更为简便、快捷的方法来进 行规模化批量操作。免疫比浊法检测LAMBDA可直接在全自动生化分析仪上完成批量样本分 析，操作简单、可实现快速、高通量样本的检测。
【发明内容】
[0008] 本发明实施例的目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种检测LAMBDA轻链含 量的试剂盒，可以简洁快速地检测样本中LAMBDA轻链的含量，具有较高的准确度和很好的 特异性。
[0009] 本发明实施例的另一目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种上述的检测 LAMBDA轻链含量的试剂盒在检测LAMBDA轻链含量中的用途，可用于简洁快速地检测样本中 LAMBDA轻链的含量，具有较高的准确度和很好的特异性。
[0010] 本发明实施例的再一目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种采用上述的检 测LAMBDA轻链含量的试剂盒检测LAMBDA轻链含量的方法，可以简洁快速地检测样本中 LAMBDA轻链的含量，具有较高的准确度和很好的特异性。
[0011] 为了实现上述发明目的，本发明实施例的技术方案如下：
[0012] -种检测LAMBDA轻链含量的试剂盒，包括:试剂R1、试剂R2和LAMBDA轻链校准品； 所述试剂R1包括:第一缓冲液5~600mmol/L、第一电解质5~60g/L、表面活性剂1~200g/L、 第一稳定剂2~50g/L、高分子加速剂1~100g/L和第一防腐剂0.5~15g/L;所述试剂R2包 括:第二缓冲液5~600mmol/L、抗人LAMBDA轻链抗体5~60%w/v、第二电解质5~60g/L和第 二防腐剂〇. 5~15g/L;所述LAMBDA轻链校准品包括:第三缓冲液10~600mmo 1/L、第三稳定 剂2~50g/L、第三防腐剂0 · 5~15g/L、抗氧化剂0 · 01~10g/L和LAMBDA轻链抗原。
[0013]进一步:所述第一缓冲液、所述第二缓冲液和所述第三缓冲液均选自磷酸盐PBS缓 冲液、三羟甲基氨基甲烷TRIS缓冲液、硼酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸CAPS0缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES缓冲液中的一种或几种；和/或，所述第一 防腐剂、所述第二防腐剂和所述第三防腐剂均选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯 甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸钠中的一种或几种;和/或，所述第一电解质和所述第二电解质 均选自氯化钠、硫酸镁、氯化镁和氯化钾中的一种或几种;和/或，所述第一稳定剂和所述第 三稳定剂均选自乙二胺四乙酸二钠、甘露糖醇、葡萄糖、海藻糖和牛血清蛋白中的一种或几 种;和/或，所述表面活性剂选自Triton系列表面活性剂、Tween系列表面活性剂、月桂醚系 列表面活性剂、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚和聚氧乙烯辛基苯醚中的一种 或几种;和/或，所述高分子加速剂选自聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000和聚乙 二醇8000中的一种或几种;和/或，所述抗人LAMBDA轻链抗体选自鼠抗人、兔抗人、羊抗人、 鸡抗人和鸭抗人LAMBDA轻链抗体中的一种或几种;所述抗氧化剂选自丁基羟基茴香醚、二 丁基羟基甲苯、苯多酚、甘草抗氧化物和硫代二丙酸二月桂酯中的一种或几种。
[0014] 进一步:所述抗人LAMBDA轻链抗体为单克隆抗体和/或多克隆抗体。
[0015] 进一步:所述第一缓冲液、所述第二缓冲液和所述第三缓冲液均为磷酸盐缓冲液； 和/或，所述第一防腐剂、所述第二防腐剂和所述第三防腐剂均为叠氮钠;和/或，所述第一 电解质和所述第二电解质均为氯化钠;和/或，所述第一稳定剂和所述第三稳定剂均为乙二 胺四乙酸二钠;和/或，所述表面活性剂为聚氧乙烯月桂醚;和/或，所述高分子加速剂为聚 乙二醇6000;和/或，所述抗人LAMBDA轻链抗体为羊抗人LAMBDA轻链单克隆抗体;和/或，所 述抗氧化剂为丁基羟基茴香醚。
[0016] 进一步，所述试剂R1包括:第一缓冲液20~400mmol/L、第一电解质6~45g/L、表面 活性剂2~80g/L、第一稳定剂2~40g/L、高分子加速剂3~80 g//L和第一防腐剂1.5~9g/L; 所述试剂R2包括:第二缓冲液20~450mmol/L、抗人LAMBDA轻链抗体15~30%w/v、第二电解 质6~48g/L和第二防腐剂1.5~9g/L;所述LAMBDA轻链校准品包括：第三缓冲液15~ 100mmol/L、第三稳定剂2~45g/L、第三防腐剂4~8.5g/L、抗氧化剂0.4~9g/L和LAMBDA轻 链抗原。
[0017] 进一步，所述试剂R1包括:第一缓冲液10~100mm〇l/L、第一电解质5~15g/L、表面 活性剂1~50g/L、第一稳定剂5~15g/L、高分子加速剂50~100g/L和第一防腐剂1~5g/L; 和/或，所述试剂R2包括:第二缓冲液10~100mmol/L、抗人LAMBDA轻链抗体5~60%w/v、第 二电解质5~15g/L和第二防腐剂1~5g/L;和/或，所述LAMBDA轻链校准品包括:第三缓冲液 10~100mmol/L、第三稳定剂5~15g/L、第三防腐剂1~5g/L、抗氧化剂0 · 01~0 · 8g/L和 LAMBDA轻链抗原。
[0018] 进一步，所述LAMBDA轻链校准品包括:第三缓冲液5~600mmol/L、第三稳定剂2~ 50g/L、第三防腐剂0 · 5~15g/L、抗氧化剂0 · 01~10g/L和LAMBDA轻链抗原0~1000mg/dL。
[0019] 进一步:所述LAMBDA轻链校准品中，所述LAMBDA轻链抗原的浓度为0~800mg/dL〇
[0020] -种如上所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒在检测LAMBDA轻链含量中的用途。 [0021 ]以及，一种采用如上所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒检测LAMBDA轻链含量的 方法，包括：向待测样品中加入所述试剂R1，所述待测样品的体积为5yL，所述试剂R1的体积 为250yL，得到第一混合液，并得到所述第一混合液的吸光度0D1;向所述第一混合液中加入 所述试剂R2，所述试剂R2的体积为50yL，得到第二混合液，并得到所述第二混合液的吸光度 0D2;使用所述LAMBDA轻链校准品得到标准曲线，根据所述吸光度0D1和所述吸光度0D2在所 述标准曲线上得到所述待测样品中LAMBDA轻链的含量。
[0022]本发明实施例的有益效果如下：
[0023] 1、本发明实施例的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒，操作简单，使用简便快速，可简 洁快速地检测样本中LAMBDA轻链的含量。
[0024] 2、本发明实施例的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒，能够满足临床快速高通量检测 样本的要求，检测效率明显提高，在临床应用上具有广阔的前景。
[0025] 3、本发明实施例的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒，还具有特异性强、灵敏度高、重 复性好、批间差异小、试剂稳定等优点。
[0026] 4、本发明实施例的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒使其具有检测LAMBDA轻链含量 的用途。
[0027] 5、本发明实施例的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒检测LAMBDA轻链含量的方法，简 洁快速地检测样本中LAMBDA轻链的含量，检测效率较高，在临床应用上具有广阔的前景。
【附图说明】
[0028] 图1是本发明的检测LAMBDA轻链含量的方法的流程图；
[0029] 图2是本发明的实施例3的LAMBDA轻链含量的检测方法的流程示意图；
[0030] 图3是本发明的实施例3的检测LAMBDA轻链含量的标准曲线；
[0031] 图4是本发明的实施例4的检测LAMBDA轻链含量试剂盒与国外对比试剂盒的比较 结果示意图。