检测免疫球蛋白d含量的试剂盒、方法及用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于检测免疫球蛋白D含量的技术领域，具体涉及一种检测免疫球蛋白D的 试剂盒、方法及用途。
【背景技术】
[0002] 免疫球蛋白0(1臟皿(^1〇13111丨11〇，18〇)分子量为1851(0，半衰期为2.8天，人血清中 的含量很低，主要由扁桃体、脾等处浆细胞产生，免疫球蛋白D(IgD)是重链类型为S(delta) 的免疫球蛋白，含量小于总免疫球蛋白的1%，稳定性差，易被热和血液中的蛋白水解酶所 降解。免疫球蛋白D始终处于B细胞表面，在早期B细胞应答的初始阶段起关键作用。
[0003] IgD升高主要见于慢性骨髓炎、皮肤感染、流行性出血热、胶原性疾病和吸烟者； IgD降低见于原发性无丙种球蛋白血症、硅沉着病、细胞毒药物治疗后。
[0004] 目前检测IgD的方法主要是酶联免疫法(ELISA)、单项免疫扩散法(SIRD)和免疫比 浊法。酶联免疫法该方法为非均相免疫检测系统，测定过程较为繁琐，耗时长，缺少单位测 试运行时间，自动化程度不高，批间差和重复性相对较大，需要配备多种专门设备，一定程 度上增加了成本。单项免疫扩散法灵敏度相对较高，方法较简便，不易受干扰，但精确度以 及特异性较差。
【发明内容】
[0005] 本发明实施例的目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种检测免疫球蛋白D 含量的试剂盒，可以简洁快速地检测样本中免疫球蛋白D的含量，具有较高的准确度和很好 的特异性。
[0006] 本发明实施例的另一目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种上述的检测免 疫球蛋白D含量的试剂盒的在检测免疫球蛋白D含量中的用途，可用于简洁快速地检测样本 中免疫球蛋白D的含量，具有较高的准确度和很好的特异性。
[0007] 本发明实施例的再一目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种采用上述的检 测免疫球蛋白D含量的试剂盒检测免疫球蛋白D含量的方法，可以简洁快速地检测样本中免 疫球蛋白D的含量，具有较高的准确度和很好的特异性。
[0008] 为了实现上述发明目的，本发明实施例的技术方案如下：
[0009] -种检测免疫球蛋白D含量的试剂盒，包括:试剂R1、试剂R2和免疫球蛋白D校准 品；所述试剂R1包括:第一缓冲液10~500mmol/L、第一电解质5~50g/L、表面活性剂0.5~ 50g/L、第一稳定剂0.5~10g/L、高分子促进剂1~100g/L和第一防腐剂1~10g/L;所述试剂 R2包括:第二缓冲液10~500mmol/L、抗人免疫球蛋白D抗体5~50%w/v、第二电解质5~ 50g/L、第二稳定剂0.5~10g/L和第二防腐剂1~10g/L;所述免疫球蛋白D校准品包括:第三 缓冲液10~500mmol/L、第三稳定剂5~50g/L、第三防腐剂1~10g/L、抗氧化剂0.01~10g/L 和抗人免疫球蛋白D抗原。
[0010] 进一步:所述试剂R1的pH为6~9。
[0011] 进一步:所述试剂R2的pH为6~9。
[0012] 进一步:所述第一缓冲液、所述第二缓冲液和所述第三缓冲液均选自醋酸盐缓冲 液、氯化铵缓冲液、磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷TRIS缓冲液、硼砂-氢氧化钠缓冲液、 甘氨酸缓冲液、3-(N-吗啉）丙磺酸MOPS缓冲液、3-(环己胺）-2-羟基-1-丙磺酸CAPS0缓冲 液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES缓冲液中的一种或几种；和/或，所述第一稳定剂、所述第二 稳定剂和所述第三稳定剂均选自亚氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、乙二胺四乙酸 二钠、二乙烯三胺五乙酸钠、1，2_环己二醇缩水甘油、甘露糖、葡萄糖、壳聚糖、山梨醇和牛 血清蛋白中的一种或几种;和/或，所述第一防腐剂、所述第二防腐剂和所述第三防腐剂均 选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸钠中的一种或几 种;和/或，所述第一电解质和所述第二电解质均选自氯化钠、硫酸镁、氯化镁和氯化钾中的 一种或几种；和/或，所述表面活性剂选自Triton系列表面活性剂、Tween系列表面活性剂、 聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚和聚氧乙烯辛基苯醚中的一种或几种；和/或， 所述高分子促进剂选自脂肪醇聚氧乙烯醚、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸钠、乙二醇聚氧乙烯 醚、羟丙基甲基纤维素和羟甲基纤维素钠中的一种或几种;和/或，所述抗人免疫球蛋白D抗 体选自鼠抗人、鸡抗人、兔抗人、羊抗人或牛抗人免疫球蛋白D抗体;和/或，所述抗氧化剂选 自丁基羟基茴香醚、没食子酸丙酯、二丁基羟基甲苯、苯多酚、磷脂、甘草抗氧化物、硫代二 丙酸二月桂酯、特丁基对苯二酚和维生素系列中的一种或几种。
[0013] 进一步:所述第一缓冲液和所述第二缓冲液的成分相同。
[0014]进一步:所述第三缓冲液为甘氨酸缓冲液。
[0015] 进一步，所述试剂R1包括:磷酸盐缓冲液10~500mmol/L、氯化钠5~50g/L、Triton X 1000.5~50g/L、牛血清蛋白0.5~10g/L、乙二醇聚氧乙稀醚1~100g/L和叠氮钠1~10g/ L，所述试剂R1的pH为6~9;所述试剂R2包括:磷酸盐缓冲液10~500mmol/L、抗人免疫球蛋 白D抗体5~50%w/v、氯化钠5~50g/L、牛血清蛋白0 · 5~10g/L和叠氮钠1~10g/L，所述试 剂R2的pH为6~9;所述免疫球蛋白D校准品包括:甘氨酸缓冲液10~500mmol/L、牛血清蛋白 5~50g/L、叠氮钠1~10g/L、二丁基羟基甲苯0.01~10g/L和免疫球蛋白D抗原。
[0016] -种如上所述的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒在检测免疫球蛋白D含量中的用 途。
[0017] 以及，一种采用如上所述的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒检测免疫球蛋白D含量 的方法，包括：向待测样品中加入所述试剂R1，所述待测样品的体积为4yL，所述试剂R1的体 积为250yL，得到第一混合液，并得到所述第一混合液的吸光度0D1;向所述第一混合液中加 入所述试剂R2，所述试剂R2的体积为50yL，得到第二混合液，并得到所述第二混合液的吸光 度0D2;使用所述免疫球蛋白D校准品得到标准曲线，根据所述吸光度0D1和所述吸光度0D2 在所述标准曲线上得到所述待测样品中免疫球蛋白D的含量。
[0018] 本发明实施例的有益效果如下：
[0019] 1、本发明实施例的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒，使用简便快速，可简洁快速地 检测样本中免疫球蛋白D的含量。
[0020] 2、本发明实施例的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒，与进口对比试剂实验表明，本 发明的试剂盒中的试剂具有较高的准确度和很好的特异性，能够满足临床快速高通量检测 样本的要求，检测效率明显提尚。
[0021] 3、本发明实施例的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒，使用了经过筛选后的最优化 的试剂组合，使得试剂的稳定性大大提高，在2~8°C的环境下，可以稳定存放一年以上，因 此在临床应用上具有广阔的前景。
[0022] 4、本发明实施例的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒，还具有灵敏度高，可自动化等 特点。
[0023] 5、本发明实施例的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒使其具有检测免疫球蛋白D的 用途。
[0024] 6、本发明实施例的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒检测免疫球蛋白D含量的方法， 简洁快速地检测样本中免疫球蛋白D的含量，检测效率较高，在临床应用上具有广阔的前 景。
【附图说明】
[0025] 图1是本发明实施例的检测免疫球蛋白D含量的方法的流程图；
[0026] 图2是本发明的实施例1的免疫球蛋白D含量的检测方法的流程示意图；
[0027] 图3是本发明的实施例1的检测免疫球蛋白D含量的标准曲线；
[0028] 图4是本发明的实施例8的检测免疫球蛋白D含量的试剂盒与国外对比试剂的比较 结果示意图。
【具体实施方式】
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