一种真菌毒素的辐照降解处理法
【专利摘要】本发明涉及一种真菌毒素的辐照降解处理法；包括下列步骤：（1）对真菌毒素的标准品配制标准溶液，对标准溶液经辐照范围是0-200kGy的辐照处理，通过液相色谱—串联质谱法对真菌毒素的含量进行测定；（2）对带毒样品经辐照范围是0-9kGy的辐照后进行预处理，通过液相色谱—串联质谱法对真菌毒素的降解效果进行测定；（3）选取浓度最高的真菌毒素标准溶液作为样品，经辐照范围是0-200kGy的辐照处理后通过液相色谱—串联质谱法进行检测分析降解产物；解决了对缺乏辐照降解真菌毒素降解产物的研究及环保应用；降解效果好且实现对霉变农产品废物环保脱毒处理。
【专利说明】一种真菌毒素的辐照降解处理法
【技术领域】
[0001]本发明属于分析化学领域，具体涉及一种真菌毒素的辐照降解处理法。
【背景技术】
[0002]真菌毒素是由产毒真菌在适宜的环境条件下产生的有毒代谢产物，目前的研究主要集中在对人类危害特别大且污染频率高的黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、伏马毒素和单端孢霉烯毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇、T-2毒素等。真菌毒素是天然产生的毒素，普遍存在于玉米、小麦、大麦、稻谷、燕麦、高粱、调味品、坚果、乳品和饲料等农产品中，严重影响农作物的产量，降低农产品的品质，造成巨大经济损失。据联合国粮农组织(FAO)报告，全球每年约有25%的农作物遭受真菌及毒素的污染，约有2%的农作物因污染严重而失去营养和经济价值，造成的直接和间接经济损失达数百亿美元。国内外对粮谷、食品和饲料中的黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉稀酮、展靑霉素等真菌毒素制定了严格的限量标准。
[0003]目前已有真菌毒素脱毒的方法包括:(I)化学法，许多化学物质如过氧化氢、次氯酸钠可以将真菌毒素降解，但同时会产生一些有毒的副产品，因此欧洲和许多国家不允许用化学法对真菌毒素进行处理。(2)生物方法，生物学去毒法是筛选某些微生物，利用其生物转化作用，使霉菌毒素破坏或转变为低毒物质的方法。目前生物方法是研究的热门，但对于不同的毒素适用的去毒微生物的种类不同，如果产品受多种毒素污染可能需要适用多种微生物才能达到较好的效果。(3)物理脱毒法，主要有水洗法、剔除法、脱胚去毒法、加热去毒法、溶剂萃取法、辐射法等。大部分物理方法不能完全清除真菌毒素。溶剂萃取法是采用有机溶剂将真菌毒素萃取分离，该方法处理费用高，有机溶剂有残留污染，无实际应用价值。
[0004]在中国专利201110000805.2 “免疫亲和柱净化高效液相色谱检测中药酒剂中赭曲霉毒素A的方法”中，公开了通过高效液相色谱-质谱联用法来对阳性结果进行确证；在中国专利201010209190.X “一种检测中药中雪腐镰刀菌烯醇和脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素的方法”中，公开了通过高效液相色谱-质谱联用法在全扫描模式下确证毒素；在中国专利201110370420.5 “小麦中几种真菌毒素含量的检测方法”中，公开了通过高效液相色谱-质谱联用法检测，通过毒素浓度对于峰面积的回归方程计算DON、T-2毒素的含量；在中国专利201210054250.4 “液相色谱-串联质谱法测定五加科植物中真菌毒素含量的方法”中，公开了可准确，灵敏地测定五加科植物中真菌毒素的多成分残留量；在中国专利201210361145.5 “用电子束辐照降解水中藻毒素的方法”中，公开了当辐射剂量是5kGy时，能抑制藻毒素的产生；在中国专利2009100787702.0 “降解伏马菌素的方法”中公开了辐照可使伏马菌素BI降解率达63.47% ;在中国专利200910078703.5 “一种降解伏马菌素的方法”中公开了辐照可使伏马菌素BI降解率达59.03% ;在中国专利200910078708.8“降解黄曲霉毒素的方法”中公开了辐照去毒无工业污染；在中国专利200910078707.3 “一种降解黄曲霉毒素的方法”中公开了辐照可使黄曲霉毒素BI降解率达71.51%。[0005]现有的相关技术有:张喜春等报道3kGy~5kGy的辐照剂量对霉菌和霉菌毒素的降解有较明显的作用；杨静等研究表明质量浓度为0.lmg/L的黄曲霉毒素BI溶液在4kGy时降解率可以达到80%以上，6kGy时降解率达到96%，0.lmg/L的伏马菌素BI溶液在IOkGy时降解率达到90%以上；尹青岗的研究结果表明当辐照剂量为ISkGy时，粉末态玉米中玉米赤霉烯酮降解率可达74.9%,当福照剂量为IOkGy,整粒玉米中玉米赤霉烯酮降解率可达94.1%,福照剂量为5kGy时,30.0mg/kg玉米赤霉烯酮水溶液的降解率达到了 90% ;迟蕾等人发表了 Y射线对赭曲霉毒素A的辐照降解的论文，文中提到降解产物结构解析的方法、降解的可能机理，但没有报道降解的产物。
【发明内容】
[0006]本发明的目的是提供一种降解效果好、实现对农产品废物环保脱毒处理的真菌毒素的辐照降解处理法。
[0007]实现本发明目的的技术方案是一种真菌毒素的辐照降解处理法；(I)对真菌毒素的标准品配制标准溶液，对标准溶液经辐照范围是0_200kGy的辐照处理，通过液相色谱一串联质谱法对真菌毒素的含量进行测定；(2)对带毒样品经辐照范围是0-9kGy的辐照后进行预处理，通过液相色谱一串联质谱法对真菌毒素的降解效果进行测定；(3)选取浓度最高的真菌毒素标准溶液作为样品，经辐照范围是0-200kGy的辐照处理后通过液相色谱一串联质谱法进行检测分析降解产物。
[0008]优选的所述真菌毒素是烟曲霉毒素FB1、赭曲霉毒素OTA、T_2毒素和脱氧雪腐镰刀菌烯醇DON ;所述辐照源是Y射线，所述液相色谱一串联质谱法的色谱条件:采用ThermoFinnigan液相色谱系统,其液相条件包括色谱柱是Sepax BR-C18柱100X2.当检测FB1，0TA和T-2时，流动相是A:甲醇，B:醋酸铵-甲酸水溶液，在流速250 μ L/min和进样量25 μ L条件下，进行梯度洗脱；具体洗脱梯度是:
[0009]
【权利要求】
1.一种真菌毒素的辐照降解处理法；其特征在于:包括下列步骤:(I)对真菌毒素的标准品配制标准溶液，对标准溶液经辐照范围是0-200kGy的辐照处理，通过液相色谱一串联质谱法对真菌毒素的含量进行测定；(2)对带毒样品经辐照范围是0-9kGy的辐照后进行预处理，通过液相色谱一串联质谱法对真菌毒素的降解效果进行测定；(3)选取浓度最高的真菌毒素标准溶液作为样品，经辐照范围是0-200kGy的辐照处理后通过液相色谱一串联质谱法进行检测分析降解产物。
2.根据权利要求1所述的真菌毒素的辐照降解处理法，其特征在于:所述真菌毒素是烟曲霉毒素FB1、赭曲霉毒素0TA、T-2毒素和脱氧雪腐镰刀菌烯醇DON;所述辐照源是、射线，所述液相色谱一串联质谱法的色谱条件:采用Thermo Finnigan液相色谱系统,其液相条件包括色谱柱是S印ax BR-C18柱100X2.lmm，5ym;当检测FBI，OTA和T-2时，流动相是A:甲醇，B:醋酸铵-甲酸水溶液，在流速250 μ L/min和进样量25 μ L条件下，进行梯度洗脱；具体洗脱梯度是:
3.根据权利要求2所述的真菌毒素的辐照降解处理法，其特征在于:所述步骤(1)中的标准样品是
4.根据权利要求2所述的真菌毒素的辐照降解处理法，其特征在于:所述步骤(2)中带毒样品有6个，分别是霉变玉米种子样品2个(编号为A、B)、大米样品2个(编号为C、D)、小麦(编号为E)和黄豆样品各I个(编号为F);预处理方法是准确称取样品5.00g(±0.05g)于50mL的离心管中，加入10mL86%乙腈水溶液，润旋30s,超声30min, 4000r/min离心5min,转移上清液至试管中，再次用10mL86%乙腈水溶液提取，合并两次提取液，用氮气在45°C下吹干，再用乙腈+水(体积比50:50)定容至lmL，涡旋30s，用0.22 μ m微孔滤膜过滤，以备进样；辐照剂量为0、3、5、7及9kGy。
5.根据权利要求2所述的真菌毒素的辐照降解处理法，其特征在于:所述步骤(3)中对FBl 浓度是 0.8mg/mL, OTA 浓度是 0.7mg/mL, T-2 浓度是 0.9mg/mL,D0N 浓度是 0.8mg/mL 的标准溶液，分别经辐照剂量是0-200kGy的辐照处理后，用全扫描模式进行检测，观察有无特征峰的形成。
6.根据权利要求2所述的真菌毒素的辐照降解处理法，其特征在于:当辐照剂量是3-9kGy时，可对具有商用价值农产品进行脱毒处理，当辐照剂量是20-200kGy时，可对无商用价值的霉变农产品和\或其它霉变物质进行集中脱毒处理。
7.根据权利要求6所述 的真菌毒素的辐照降解处理法，其特征在于:当辐照剂量是7-9kGy时，可对具有商用价值农产品进行脱毒处理，当辐照剂量是100-200kGy时，可对无商用价值的霉变农产品和\或其它霉变物质进行集中脱毒处理。
【文档编号】A23L1/015GK103652517SQ201310716459
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年12月23日 优先权日:2013年12月23日
【发明者】冯敏, 王玲, 李澧, 朱佳廷, 杨萍, 王德宁, 顾贵强, 刘春泉, 哈益明 申请人:江苏省农业科学院