沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌复合增菌培养基及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌复合增菌培养基及其制备方法，该培养基的质量组分包括：胰蛋白胨5-15份，酵母提取物2.5-7.5份，氯化钠5-15份，葡萄糖1-3份，磷酸氢二钠1.5-3份，甘露醇1-3份，丙酮酸钠1-3份，甘氨酸1-3份，蒸馏水1000份，pH值为7.2-7.5。将各组分加至蒸馏水中，搅拌溶解，高压灭菌。沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌是我国食品卫生标准中需检测的主要致病菌。使用本发明中的复合增菌培养基，能够实现上述三种菌的等速、快速增殖。增菌16小时，即可直接用于多重PCR、基因芯片、微流控芯片等高通量检测，实现上述三种病原菌的筛查。
【专利说明】沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌复合增菌培养基及 其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于致病菌的前增菌培养基，特别是涉及到一种同时对沙门氏菌、志贺氏 菌和金黄色葡萄球菌复合增菌的培养基及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 细菌性微生物是我国食源性疾病发生的主要病因，严重危及人们的健康，造成重 大经济损失，成为目前较为突出的公共卫生问题之一。沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球 菌是食源性疾病的主要致病菌，也是目前我国食品安全风险监测的重要指标。中国食源性 疾病统计报告显示，超过30%的相关案例都与这3种细菌有关，沙门氏菌更是高居首位。食 品安全问题日益被人们所重视的今天，这3种致病菌同时检测方法的建立迫在眉睫。
[0003] 目前国际上检测食源性致病菌的方法主要是依赖于基因的检测方法。PCR技术发 展迅速，荧光定量PCR已经成熟，同时检测多种细菌的多重荧光定量PCR得到广泛应用。环 介导等温扩增（LAMP)是一种新型的核酸扩增方法，LAMP技术和PCR扩增技术相比，其多 个引物的设计能带来更高的特异性，即使高背景的微生物材料仍可准确检测，且其反应快， 实验操作简单，可实现现场高通量的快速检测。然而食品基质复杂，目标菌体浓度低，达到 目前技术检测的需求，实现较高的灵敏度仍需要一个前增菌步骤。当前前增菌培养基有很 多种，但大多成分复杂，配制繁琐，所以研制出一种成分简单，配制方便的培养基成为当前 必要。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种可同时培养沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌复 合增菌的培养基，适用于多重PCR、基因芯片、微流控芯片等高通量检测，用于沙门氏菌、志 贺氏菌和金黄色葡萄球菌三种病原菌的筛查。
[0005] 本发明的目的通过如下技术方案实现： 一种沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌复合增菌培养基，以质量份数计，其配方组 成为：胰蛋白胨5-15份，酵母提取物2. 5-7. 5份，氯化钠5-15份，葡萄糖1-3份，磷酸氢二 钠1. 5-3. 5份，甘露醇1-3份，丙酮酸钠1-3份，甘氨酸1-3份，蒸馈水1000份。pH值为 7. 2-7. 5。
[0006] 本发明的优选配方为，以质量份数计：胰蛋白胨10份，酵母提取物5份，氯化钠 10 份，葡萄糖2份，磷酸氢二钠 2. 5份，甘露醇2份，丙酮酸钠 2份，甘氨酸2份，蒸馏水1000 份。pH值为7. 4。
[0007] 本发明的又一个目的是提供了沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌复合增菌培 养基的制备方法，它是有以下步骤制成： (1)按照比例将胰蛋白胨，酵母提取物，氯化钠，葡萄糖，磷酸氢二钠，甘露醇，丙酮酸 钠，甘氨酸加至蒸馏水中，搅拌溶解； (2) 用10 mol/L的NaOH进行酸度矫正pH值至7· 2-7. 5 ; (3) 121°C高压灭菌 15-20min，4°C保存。
[0008] 本发明通过选择合适的组分，进行合理混配，经搅拌溶解、高压灭菌等步骤而获得 一种沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌复合增菌的培养基。本发明培养基中胰蛋白胨， 酵母提取物，氯化钠作为基础组分，为细菌提供生长必需的碳源、氮源、无机盐和生长因子。 磷酸氢二钠是缓冲剂。葡萄糖、甘氨酸促进细菌生长。甘露醇促进金黄色葡萄球菌的生长。 丙酮酸钠用于修复损伤的细菌。
[0009] 相对于现有技术，本发明具有以下优点： 本发明的沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌复合增菌培养基成分简单，配制方便， 各组分无需分步添加。
[0010] 本发明按照配方组分及制备方法制备的复合增菌培养基能够使沙门氏菌、志贺氏 菌和金黄色葡萄球菌三种细菌在复合培养过程中实现等速、快速的增殖。
[0011] 本发明增菌16小时，即可满足直接用于多重PCR、基因芯片、微流控芯片等高通量 检测的需求，用于沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌三种病原菌的筛查。
【具体实施方式】
[0012] 实施例1 称取胰蛋白胨5g，酵母提取物7. 5g，氯化钠 15g，葡萄糖3g，磷酸氢二钠 1. 5g，甘露醇 3g，丙酮酸钠 lg，甘氨酸lg，蒸馈水1000ml,搅拌溶解后，用10 mol/L的NaOH进行酸度矫 正pH值至7.2，121°C高压灭菌15min，4°C保存。
[0013] 将菌体浓度均为1〇9 CFU/mL的沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌培养液分别 稀释1〇7倍，然后分别取100 μ?，接入10 mL制备好的用于沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡 萄球菌复合增菌的培养基中，使培养基中各菌体浓度为1 CFU/mL，37°C培养16h，取增菌培 养后的增菌液100 ML,适当稀释后涂布到XLD琼脂和Baird-parker平板，进行分离培养。 根据沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌在平板上的特征菌落进行计数。结果见表1. 表1复合增菌培养基增菌效果
【权利要求】
1. 用于沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌复合增菌的培养基，其特征在于，以质量 份数计，其配方组成为：胰蛋白胨5-15份，酵母提取物2. 5-7. 5份，氯化钠5-15份，葡萄糖 1-3份，磷酸氢二钠1. 5-3份，甘露醇1-3份，丙酮酸钠1-3份，甘氨酸1-3份，蒸馏水1000 份；pH 值为 7. 2-7. 5。
2. 根据权利要求1所述用于沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌复合增菌的培养 基，其特征在于：以质量份数计，其配方为胰蛋白胨10份，酵母提取物5份，氯化钠10份，葡 萄糖2份，磷酸氢二钠2. 5份，甘露醇2份，丙酮酸钠2份，甘氨酸2份，蒸馏水1000份；pH 值为7.4。
3. 根据权利要求1、2所述用于沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌复合增菌的培养 基的制备方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 按照比例将胰蛋白胨，酵母提取物，氯化钠，葡萄糖，磷酸氢二钠，甘露醇，丙酮酸 钠，甘氨酸加至蒸馏水中，搅拌溶解； (2) 用10 mol/L的NaOH进行酸度矫正pH值至7. 2-7. 5 ; (3) 121°C高压灭菌 15-20min，4°C保存。
【文档编号】C12R1/01GK104195081SQ201410426477
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年8月27日 优先权日:2014年8月27日
【发明者】张岩, 刘铭, 李云, 葛少林, 邢婉丽 申请人:博奥生物集团有限公司, 清华大学, 广东粤检生物科技有限公司