一种含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健饮品及其制备方法

一种含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健饮品及其制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健饮品的制备方法，并涉及制备得到的该饮品，属于食品饮料【技术领域】。所述制备方法，包括将以罗汉果提取物、低聚木糖、大豆多糖、大豆蛋白胨、脱脂牛乳、乳酸钙3、复合枸杞浓缩汁等为主要原料的发酵培养液，按照特定条件灭菌后，依次接种植物乳杆菌菌液和长双歧杆菌菌液，在厌氧发酵罐中保持一定罐压发酵得到发酵乳基料，灌装或调配灌装，得到含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健饮品。具有活菌含量高、发酵时间短、活菌存活率高，其中长双歧杆菌的发酵性、耐酸性和耐胃酸性良好，益生效果显著的特点。
CGMCC NO.9405
20140702
【专利说明】一种含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健饮品及其制 备方法

【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健饮品的制备方法，并涉 及制备得到的该饮品，属于食品饮料【技术领域】。

【背景技术】
[0002] 罗汉果形似鸡卵，成熟鲜果外皮呈绿色，经炭火烘干后成褐红色，有光泽，可鲜吃， 但常烘干保存，是一种风味独特的干果。罗汉果营养价值丰富，干果含糖30%左右，蛋白质 10%左右，每100克果实中含有维生素 ClOO毫克。其果仁含油量高达40%，而且其中主要是 油酸和亚油酸，约占70%左右。中医药学认为，罗汉果甘、酸，性凉，有清热凉血、生津止咳、 滑肠排毒、嫩肤益颜、润肺化痰等功效，可用于益寿延年、驻颜悦色及治疗痰热咳嗽、咽喉肿 痛、大便秘结、消渴烦躁诸症，又有防治呼吸道感染和抗癌的功效。现代医药学研宄发现，罗 汉果苷V的甜度为蔗糖的250-350倍，VI的甜度为蔗糖的125倍，可添加于各类食品中，对 糖尿病、高血压、慢性支气管炎等患者是一种极为理想的保健品。传统常沸水冲泡饮用，长 期饮用有祛斑、润燥、明目、排毒、养颜、调节内分泌等功效。
[0003] 双歧杆菌（bifidobacterium Iongum)是健康人群消化道内具有益生作用的优势 菌群，其具有的生理功能包括：调整肠道菌群，增强免疫系统，防止便秘，治疗溃疡性结肠 炎，产生抗生素，提高蛋白质和维生素的代谢，抗衰老，治疗肝损伤，抗肿瘤，降低胆固醇等。 随着年龄的增长，肠道中双歧杆菌的数量逐渐减少，而产气荚膜梭状茵、大肠杆菌等有害腐 败细菌逐渐增加。同时一些负面因素，如服用抗生素、放疗、化疗、情绪压抑、身体衰弱、缺乏 免疫力等，也会导致双歧杆菌大量消亡，有害细菌大量繁殖，造成人体健康状态不佳，对疾 病的抵抗力降低，医学专家建议，要健康长寿，在其他条件得到保证的前提下，设法增加肠 道中双歧杆菌的数量也是促进健康长寿的一种捷径。目前对长双歧杆菌的研宄日益受到人 们的重视，如何提高其在发酵性、耐酸性、耐胃酸性等方面的性能，是本行业人员面临的较 大挑战。
[0004] 申请号：201410257294. 6的中国发明《一种喉癌患者食用的微生态特殊膳食》公 开了以L-谷氨酰胺为主要原料，配伍石斛、胖大海、百合、蒲公英、罗汉果、金银花、胖大海、 牛蒡子、桔梗、夏枯草、鱼腥草、桑叶等药食两用中草药提取物，再添加多种抗炎益生菌、维 生素和矿物质制成的特殊膳食。可以辅助提高机体免疫力，起到抑癌、抗癌作用。
[0005] 申请公布号CN 103462093 A《一种排毒养颜者食用的特殊膳食》公开了一种将罗 汉果、郁李仁、枸杞、红枣、桂圆、火麻仁等多种药食同源食材烘炒、粉碎后，配以膳食纤维、 阿胶、荞麦花粉、共轭亚油酸、水苏糖、螺旋藻、玉米花粉、紫云英花粉、盐藻提取物、抗性糊 精、人参等，再混合并干燥l〇〇°C灭菌4小时，然后与嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、干酪乳杆菌、嗜 热链球菌等多种益生菌混匀制成的特殊膳食。具有食疗、预防、调理三重功效。
[0006] 上述发明成分过于复杂，易引起过敏反应的因素较多，不适用人群较广，且仅是将 各种成分简单地混合在一起制成，益生菌活菌含量低，不能充分发挥各成分的营养保健功 效，不适合作为保健食品长期食用。
[0007] 申请公布号CN 102919956 A的发明《调理人体消化系统的营养液及其制备方法》 公开了种调理人体消化系统的营养液，其制备方法为把米糠、螺旋藻、罗汉果、葛根去杂质， 分别粉碎，过筛后按照一定比例放入发酵罐中，加入按照比例的天然矿泉水，加入红糖搅拌 至完全溶解，按照比例加入益生菌群，搅拌均勾，在35?37°C下全封闭发酵5天，过滤，制得 具有调理净化人体消化道和血液的营养液，主要解决传统治疗消化道的西药或中药服药后 要控制病情的同时对人体细胞和组织及器官造成一定的损伤产生副作用等，并容易出现依 赖现象的问题。
[0008] 上述发明存在营养构成不够合理，不能满足益生菌大量增殖的需求，造成益生菌 活菌含量较低，且发酵周期过长的缺点。


【发明内容】

[0009] 为解决上述问题，本发明提供一种含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健饮品 的制备方法，通过选择合适的菌种，混合发酵，优化培养基及培养条件，制备一种营养构成 合理、活菌含量高、保健效果好的保健饮品。所述制备方法发酵周期短，适于推广应用。同 时提供上述方法制备得到的含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健饮品。
[0010] 一种含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健饮品的制备方法，包括如下步骤：
[0011] (1)按以下配方称取原料：以质量计，罗汉果提取物1-10%，低聚木糖0.5-1%， 大豆多糖0.05-0. 2%，大豆蛋白胨0· 1-0. 2%，脱脂牛乳10-30%，NaclO. 2-0. 5%，乳酸钙 〇. 5-1%，复合枸杞浓缩汁1-2%，其余为软化水；
[0012] 将脱脂牛乳95°C，5分钟单独加热灭菌，备用；同时，将软化水加热至50-60°C，依 次加入剩余原料溶解并混合均匀后，90-100°C灭菌5-20分钟，趁热加入已灭菌的脱脂牛 乳，混匀，入厌氧发酵罐冷却，得到发酵培养液；
[0013] (2)向步骤⑴发酵培养液中接种植物乳杆菌菌液，以发酵培养液质量计：接种量 为1-3% ;培养温度32-37°C，罐压0. 02-0. 03MPa，培养时间2-3小时；
[0014] (3)接种长双歧杆菌菌液，以发酵培养液质量计：接种量为4-6%，并补加复合枸 杞浓缩汁1-2%、罗汉果提取物0. 5-1% ;培养温度35-37°C，罐压0. 04-0. 06MPa，培养时间 6-10小时，得到发酵乳基料，直接灌装或调配后灌装得到含罗汉果提取物和活性长双歧杆 菌的保健饮品；
[0015] 所述调配为：将发酵乳基料与甜味剂、增稠剂、食用香精和水中的一种或多种，按 照保健饮品相关标准要求混合。
[0016] 较佳地，所述调配，是将发酵乳基料与其它原料按以下配方混合均匀，以质量计： 2-3%。的大豆多糖、维生素 CO. 12-0. 24%。、罗汉果提取物0. 5-1%、低聚木糖1-3%、葡萄糖 5-10%、发酵乳基料补足至100%。
[0017] 优选的，所述罗汉果提取物制备方法如下：
[0018] 取干罗汉果在100-120°C，烘烤40-100min，破碎，加入罗汉果重量8-10倍的水混 匀，之后加入罗汉果重量0. 4-0. 6%的混合酶制剂进行酶解，用乳酸调节pH值为5. 5-6. 0， 温度55-60°C，酶解2-4h，将酶解液置于配料缸中，边缓慢搅拌边用探头式超声提取仪在电 流强度0. 6A/25W-1. 5A/275W条件下进行超声提取20-30min，过滤，4-6°C放置10_12h，再过 滤一次，真空浓缩得到罗汉果提取物。
[0019] 所述混合酶制剂为纤维素酶、木聚糖酶、戊聚糖酶、果胶酶按质量比4:3:2:1均匀 混合。
[0020] 优选的，所述植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum)tlj_2014,保藏于中国微生 物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO. 9405 ;
[0021] 所述长双歧杆菌CICC6068购自中国工业微生物菌种保藏管理中心。
[0022] 所述长双歧杆菌在种子培养基中活化培养三次，以种子培养基质量计：第一次，接 种量3%，37°C厌氧培养36h，第二次按4%接种量进行接种，37°C厌氧养24h，第三次按5% 接种量进行接种，37°C厌氧培养12h，得到长双歧杆菌菌液；
[0023] 所述种子培养基组成为：大豆蛋白胨5. 0g，胰蛋白胨5. 0g，脱脂牛乳40mL，葡萄糖 10. 〇g，低聚木糖10. 〇g，罗汉果提取物5. 0g，复合枸杞浓缩汁2. 0g，乳酸妈0· 5g, NaclO. 2g， 软化水补足IOOOmL, ρΗ6· 8。
[0024] 所述植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum) tl j-2014,于 2014 年 7 月 2 日保藏 于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北 辰西路1号院3号.中国科学院微生物研宄所.邮编：100101)，保藏编号为CGMCC NO. 9405， 分类命名为：植物乳杆菌Lactobacillus plantarum。
[0025] 所述植物乳杆菌菌株特点如下：在显微镜下观察，该菌株为短杆状，革兰氏染色呈 阳性，无鞭毛，不产芽孢；在固体培养基上，该菌菌落为白色，表面光滑，致密，形态为圆形， 边缘较整齐。
[0026] 理化特征为：过氧化氢酶（_)，明胶液化（_)，吲哚实验（+)，运动性（_)，发酵产气 (-)，亚硝酸盐还原（-)，发酵产气（-)，产硫化氢气体（-)，pH4. OMRS培养基中生长（+)。
[0027] 所述植物乳杆菌采用下述流程进行选育：
[0028] 原始出发菌种一试管活化一硫酸二乙酯（DES)诱变一亚硝基胍（NTG)诱变一等离 子体诱变一平板初筛一摇瓶复筛一传代稳定性试验。
[0029] 所述出发菌株在MRS葡萄糖培养基中，其乳酸的生产速率为1.5g/L/d，当培养基 pH为3. 5时几乎停止生长，对亚硝酸钠的分解速率为0. 34mg/h/kg白菜。出发菌株为李政 采集于宁夏盐池县育肥羊场的青储饲料，采集时间2013年9月15日。
[0030] 为了提高其乳酸生产速率、耐酸能力和亚硝酸盐的分解速率，依次采用DES和NTG 技术对该菌种进行诱变，诱变后菌株采用MRS碳酸钙平板进行初筛，然后采用500mL摇瓶发 酵，生物传感器分析仪对高产菌进行复筛，选育优良的植物乳杆菌菌株，然后做传代实验， 评价其遗传稳定性。
[0031] 植物乳杆菌tlj-2014遗传稳定性结果表明：经过连续传代十次，各项性能指标都 比较稳定，遗传性较好，性状没有回复，因此把植物乳杆菌tlj-2014作为选育得到的目的 菌株。
[0032] 经验证发现：该诱变菌株的乳酸生产速率可以达到35g/L/d，该菌株经过71小时 发酵后乳酸浓度达到95g/L ;能够在pH为1. 80的条件下存活。降解亚硝酸盐速度快，分解 能力达到9. 8mg/h/kg (自然发酵过程亚硝酸盐积累的速率大约为I. lmg/h/kg)，能够耐1 % 胆盐。
[0033] 所述植物乳杆菌菌液的制备：
[0034] (1) 一级种子培养：将植物乳杆菌CGMCC NO. 9405斜面菌种1-2环接入500毫升 摇瓶中，种子培养基装量100 _升，培养温度37°C，培养时间24小时；
[0035] (2)二级种子培养：将一级种子按照5%的接种量接入500晕升二级种子摇瓶中， 种子培养基装量100晕升，培养温度37°C，培养时间20小时；
[0036] (3)三级种子培养：将二级种子以8%接种量接入5000晕升三级种子摇瓶中，种子 培养基装量1000毫升，培养温度37°C，培养时间18小时；
[0037] (4) 一级种子罐培养：将三级种子以10 %接种量接入总容积为150L的一级种子 罐，发酵培养基装量100L，培养温度37°C，罐压0. 05MPa，培养时间12小时；
[0038] 所述种子培养基组成为：酪蛋白胨1%，牛肉提取物1%，酵母提取物0. 5%，葡 萄糖〇. 5 %，脱脂牛乳20mL，乳酸钙1 %，罗汉果提取物1 %，复合枸杞浓缩汁2 %，余量为 水，ρΗ6· 8 ;
[0039] 所述发酵培养基组成为：大豆蛋白胨5. 0g，胰蛋白胨5. 0g，脱脂牛乳40mL，葡萄 糖10. 〇g，罗汉果提取物5. 0g，复合枸杞浓缩汁2. 0g，乳酸钙0. 5g，NaclO. 2g，软化水补足 IOOOmL, pH6. 8。
[0040] 所述复合枸杞浓缩汁可以由以下方法制备：
[0041] 枸杞冲洗后迅速冷冻至-40-30°C ;升华干燥，真空度400-500Pa，干燥至水分 < 12% ;控制温度在-10-2°C粉碎至粒径在I. 5_以下；将枸杞、黄芪和灵芝子实体粉碎 物混合，添加上述混合物重量3-6倍的柠檬酸水溶液，控制溶液的pH值为4-5,添加混合物 重量0. 5-1 %的复合酶，所述复合酶由酸性果胶酶、中性蛋白酶和纤维素酶组成，三种酶的 重量比为2. 5 : 1 : 1.5,酶解温度为40-48°C，酶解时间为1.5-2hr;之后将pH值调整为 5. 1-5. 6,温度升到50-60°C，同时添加混合物重量0. 2-0. 5 %的果胶酶、0. 2-1 %的葡聚糖 酶，作用时间为2. 5-3hr ;酶解液在5-10°C过滤；滤液冷冻浓缩获得复合枸杞浓缩汁；
[0042] 所述枸杞、黄芪、灵芝子实体的质量份数比为：8 :1 :0. 5。
[0043] 有益效果：
[0044] 长双歧杆菌对培养条件具有严格的选择性，本发明将长双歧杆菌与植物乳杆菌混 合发酵，通过优化培养基，将食品原辅料进行筛选并按照特定比例组合，克服了传统培养基 原料组成复杂，含有非食品成分，不宜用于食品发酵的缺陷，通过控制培养基及培养条件， 使长双歧杆菌与植物乳杆菌产生良好的协同促进作用，提高了长双歧杆菌的活菌含量，缩 短了发酵时间，并提高了长双歧杆菌的发酵性、耐酸性和耐胃酸性。并且在调配混合的过程 中，添加低聚木糖、罗汉果提取物，加强了对活菌的保护作用，试验证明，各实施例保健饮品 在4-10°C保持2小时后，活菌存活率平均达到41. 7%。
[0045] 通过在培养各过程中添加并补充罗汉果提取物和复合枸杞浓缩汁，促进了植物乳 杆菌和长双歧杆菌的生长，菌种的生物活性又能充分发挥药食同源物品的保健作用，在利 用天然添加物增进口感的同时，使益生菌与药食同源物品相辅相成，取得了很好的保健效 果。
[0046] 保健饮料中所含活性益生菌，在人体肠道内的定植能力强、定植时间长，有效抑制 了肠道有害菌尤其是革兰氏阴性菌的生长及繁殖，对肠道菌群的组成进行了有益调整，从 而益生效果显著且适宜人群广泛。
[0047] 通过耐冷试验、模拟胃液及肠液耐受试验表明，该保健饮品能保持较高的活菌存 活率，其活菌存活率可达到41. 7-45. 3%，益生性显著；经小鼠肠道性能试验表明：饲喂保 健饮品小鼠体重平均增长率47. 46%，显著高于自然恢复组32. 14% ;饲喂保健饮品后肠道 大肠杆菌数量显著下降，平均降低74. 8%，显著高于自然恢复组24. 78%，表明本发明保健 饮品中的益生菌在小白鼠肠道内迅速定植，形成优势菌群，并有效抑制大肠杆菌等病原菌 的生长繁殖，并且定植时间长，能持续、有效地改善肠道性能。
[0048] 植物乳杆菌CGMCC NO. 9405乳酸生产速率可以达到35g/L/d，该菌株经过71小时 发酵后乳酸浓度达到95g/L ;能够在pH为1. 80的条件下存活。与长双歧杆菌CICC6068协 同作用，相互促进，使制得的保健饮品益生性能更加优越。
[0049] 感官品评试验也证明了：本发明制备的含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健 饮品从外观、香气、风味和口感各方面均明显优于市售同类保健饮品。

【具体实施方式】
[0050] 实施例1
[0051] 一种含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健饮品的制备方法，包括如下步骤：
[0052] (1)按以下配方称取原料，以质量计，罗汉果提取物5%，低聚木糖1%，大豆多糖 0. 1%，大豆蛋白胨0. 2%，脱脂牛乳30%，NaclO. 2%，乳酸钙0. 5%，复合枸杞浓缩汁2%， 其余为软化水；
[0053] 脱脂牛乳95°C，5分钟单独加热灭菌，备用；
[0054] 软化水加热至55°C，依次加入剩余原料溶解并混合均匀后，95°C，15分钟灭菌，趁 热加入灭菌的脱脂牛乳，混匀，入厌氧发酵罐冷却，作为发酵培养液；
[0055] (2)接种植物乳杆菌菌液，以发酵培养液质量计：接种量为2%;培养温度35°C，罐 压0. 02MPa,培养时间3小时；
[0056] (3)接种长双歧杆菌菌液，以发酵培养液质量计：接种量为6%，并补加复合枸杞 浓缩汁2%、罗汉果提取物1% ;培养温度37°C，罐压0. 06MPa，培养时间8小时，得到发酵 乳基料，其中植物乳杆菌活菌数2X 108CFU/mL，长双歧杆菌活菌数3X 101(lCFU/mL ;
[0057] 以质量计，按如下组分：3%。的大豆多糖、维生素 CO. 24%。、罗汉果提取物0. 5%、低 聚木糖2%、葡萄糖6%、发酵乳基料补足至100%，混合均匀后灌装得到含罗汉果提取物和 活性长双歧杆菌的保健饮品。
[0058] 所述罗汉果提取物制备方法如下：
[0059] 取干罗汉果在110°C，烘烤60min，破碎，加入罗汉果重量10倍的水混匀，之后加入 罗汉果重量0. 5%的混合酶制剂进行酶解，用乳酸调节pH值为5. 8,温度58 °C，酶解3h，将 酶解液置于配料缸中，边缓慢搅拌边用探头式超声提取仪在电流强度I. 0A/275W条件下进 行超声提取25min，过滤，4°C放置12h，再过滤一次，真空浓缩得到罗汉果提取物；
[0060] 所述混合酶制剂为纤维素酶、木聚糖酶、戊聚糖酶、果胶酶按质量比4:3:2:1均匀 混合。
[0061] 所述植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum)tlj_2014,保藏于中国微生物菌种 保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO. 9405 ;
[0062] 所述长双歧杆菌CICC6068购自中国工业微生物菌种保藏管理中心。
[0063] 所述长双歧杆菌在种子培养基中活化培养三次，以培养基质量计：第一次，按3% 接种量进行接种，37°C厌氧培养36h，第二次按4%接种量进行接种，37°C厌氧养24h，第三 次按5%接种量进行接种，37°C厌氧培养12h，得到长双歧杆菌菌液；
[0064] 所述种子培养基组成为：大豆蛋白胨5. 0g，胰蛋白胨5. 0g，脱脂牛乳40mL，葡萄糖 10. 〇g，低聚木糖10. 〇g，罗汉果提取物5. 0g，复合枸杞浓缩汁2. 0g，乳酸妈0· 5g, NaclO. 2g， 软化水补足IOOOmL, ρΗ6· 8。
[0065] 所述植物乳杆菌菌液的制备：
[0066] (1) 一级种子培养：将植物乳杆菌CGMCC NO. 9405斜面菌种1-2环接入500毫升 摇瓶中，种子培养基装量100 _升，培养温度37°C，培养时间24小时；
[0067] (2)二级种子培养：将一级种子按照5%的接种量接入500晕升二级种子摇瓶中， 种子培养基装量100晕升，培养温度37°C，培养时间20小时；
[0068] (3)三级种子培养：将二级种子以8%接种量接入5000晕升三级种子摇瓶中，种子 培养基装量1000毫升，培养温度37°C，培养时间18小时；
[0069] (4) 一级种子罐培养：将三级种子以10 %接种量接入总容积为150L的一级种子 罐，发酵培养基装量100L，培养温度37°C，罐压0. 05MPa，培养时间12小时；
[0070] 所述种子培养基组成为：酪蛋白胨1%，牛肉提取物1%，酵母提取物0. 5%，葡 萄糖〇. 5 %，脱脂牛乳20mL，乳酸钙1 %，罗汉果提取物1 %，复合枸杞浓缩汁2 %，余量为 水，ρΗ6· 8 ;
[0071] 所述发酵培养基组成为：大豆蛋白胨5. 0g，胰蛋白胨5. 0g，脱脂牛乳40mL，葡萄 糖10. 〇g，罗汉果提取物5. 0g，复合枸杞浓缩汁2. 0g，乳酸钙0. 5g，NaclO. 2g，软化水补足 IOOOmL, pH6. 8。
[0072] 所述复合枸杞浓缩汁由以下方法制备：
[0073] 枸杞冲洗后迅速冷冻至_40°C ;升华干燥，真空度450Pa，干燥至水分< 12% ;控制 温度在-KTC粉碎至粒径在I. 5_以下；将枸杞、黄芪和灵芝子实体粉碎物混合，添加上述 混合物重量4倍的柠檬酸水溶液，控制溶液的pH值为4. 5,添加混合物重量1 %的复合酶， 所述复合酶由酸性果胶酶、中性蛋白酶和纤维素酶组成，三种酶的重量比为2.5 : 1 : 1.5， 酶解温度为45°C，酶解时间为2hr ;之后将pH值调整为5. 4,温度升到55°C，同时添加混合 物重量〇. 3%的果胶酶、0. 6%的葡聚糖酶，作用时间为2. 5hr ;酶解液在5°C过滤；滤液冷冻 浓缩获得复合枸杞浓缩汁；
[0074] 所述枸杞、黄芪、灵芝子实体的质量份数比为：8 :1 :0. 5。
[0075] 实施例2
[0076] -种含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健饮品的制备方法，包括如下步骤：
[0077] (1)按以下配方称取原料，以质量计，罗汉果提取物10%，低聚木糖1%，大豆多糖 0. 2%，大豆蛋白胨0. 2%，脱脂牛乳30%，NaclO. 5%，乳酸钙1%，复合枸杞浓缩汁2%，其 余为软化水；
[0078] 脱脂牛乳95°C，5分钟单独加热灭菌，备用；
[0079] 软化水加热至50°C，依次加入剩余原料溶解并混合均匀后，90°C，20分钟灭菌，趁 热加入灭菌的脱脂牛乳，混匀，入厌氧发酵罐冷却，作为发酵培养液；
[0080] (2)接种植物乳杆菌菌液，以发酵培养液质量计：接种量为3%;培养温度35°C，罐 压0. 03MPa,培养时间3小时；
[0081] (3)接种长双歧杆菌菌液，以发酵培养液质量计：接种量为6%，并补加复合枸杞 浓缩汁2%、罗汉果提取物1% ;培养温度35°C，罐压0. 04MPa，培养时间10小时，得到发酵 乳基料，其中植物乳杆菌活菌数I X 108CFU/mL，长双歧杆菌活菌数9. 5 X IO9CFUAiL ;
[0082] 以质量计，按如下组分：蔗糖6%、罗汉果提取物0. 2%、稳定剂0. 2%、软水10%、 发酵乳基料补足至100%，混合均匀后灌装得到含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健 饮品。
[0083] 所述罗汉果提取物为本领域常规产品；
[0084] 所述植物乳杆菌为本领域常用菌种；
[0085] 所述长双歧杆菌CICC6068购自中国工业微生物菌种保藏管理中心。
[0086] 所述长双歧杆菌菌液制备同实施例1 ;
[0087] 所述植物乳杆菌菌液的制备：
[0088] (1) -级种子培养：将植物乳杆菌菌种接入500毫升摇瓶中，种子培养基装量100 晕升，培养温度37°C，培养时间24小时；
[0089] (2)二级种子培养：将一级种子按照5%的接种量接入500毫升二级种子摇瓶中， 种子培养基装量100晕升，培养温度37°C，培养时间20小时；
[0090] (3)三级种子培养：将二级种子以8%接种量接入5000晕升三级种子摇瓶中，种子 培养基装量1000毫升，培养温度37°C，培养时间18小时；
[0091] (4) -级种子罐培养：将三级种子以10 %接种量接入总容积为150L的一级种子 罐，发酵培养基装量100L，培养温度37°C，罐压0. 05MPa，培养时间12小时；
[0092] 所述种子培养基组成为：酪蛋白胨1%，牛肉提取物1%，酵母提取物0. 5%，葡 萄糖〇. 5 %，脱脂牛乳20mL，乳酸钙1 %，罗汉果提取物1 %，复合枸杞浓缩汁2 %，余量为 水，ρΗ6· 8 ;
[0093] 所述发酵培养基组成为：大豆蛋白胨5. 0g，胰蛋白胨5. 0g，脱脂牛乳40mL，葡萄 糖10. 〇g，罗汉果提取物5. 0g，复合枸杞浓缩汁2. 0g，乳酸钙0. 5g，NaclO. 2g，软化水补足 lOOOmL，pH6. 8。
[0094] 所述复合枸杞浓缩汁为本领域常规产品。
[0095] 实施例3
[0096] 一种含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健饮品的制备方法，包括如下步骤：
[0097] (1)按以下配方称取原料，以质量计，罗汉果提取物1%，低聚木糖1%，大豆多糖 0. 2%，大豆蛋白胨0. 2%，脱脂牛乳30%，NaclO. 3%，乳酸钙1%，复合枸杞浓缩汁2%，其 余为软化水；
[0098] 脱脂牛乳95°C，5分钟单独加热灭菌，备用；
[0099] 软化水加热至60°C，依次加入剩余原料溶解并混合均匀后，100°C，5分钟灭菌，趁 热加入灭菌的脱脂牛乳，混匀，入厌氧发酵罐冷却，作为发酵培养液；
[0100] (2)接种植物乳杆菌菌液，以发酵培养液质量计：接种量为1 %;培养温度32°C，罐 压0. 02MPa,培养时间3小时；
[0101] (3)接种长双歧杆菌菌液，以发酵培养液质量计：接种量为6%，并补加复合枸杞 浓缩汁1%、罗汉果提取物1% ;培养温度35°C，罐压0. 04MPa，培养时间10小时，得到发酵 乳基料，其中植物乳杆菌活菌数I X 108CFU/mL，长双歧杆菌活菌数3. 3 X 101(lCFU/mL ;
[0102] 灌装得到含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健饮品。
[0103] 所述罗汉果提取物制备方法如下：
[0104] 取干罗汉果在120°C，烘烤40min，破碎，加入罗汉果重量8倍的水混匀，之后加入 罗汉果重量0. 6%的混合酶制剂进行酶解，用乳酸调节pH值为5. 5,温度55 °C，酶解2h，将 酶解液置于配料缸中，边缓慢搅拌边用探头式超声提取仪在电流强度0.6A/25W条件下进 行超声提取30min，过滤，6°C放置10h，再过滤一次，真空浓缩得到罗汉果提取物；
[0105] 所述混合酶制剂为纤维素酶、木聚糖酶、戊聚糖酶、果胶酶按质量比4:3:2:1均匀 混合。
[0106] 所述植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum)tlj_2014,保藏于中国微生物菌种 保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO. 9405 ;
[0107] 所述长双歧杆菌CICC6068购自中国工业微生物菌种保藏管理中心。
[0108] 所述长双歧杆菌菌液制备同实施例1 ;
[0109] 所述植物乳杆菌菌液制备同实施例1 :
[0110] 所述复合枸杞浓缩汁为本领域常规产品。
[0111] 实施例4
[0112] -种含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健饮品的制备方法，包括如下步骤：
[0113] (1)按配方称取以下原料，以质量计，罗汉果提取物7%，低聚木糖0.8%，大豆 多糖0.2%，大豆蛋白胨0. 1%，脱脂牛乳30%，NaclO. 3%，乳酸钙1%，复合枸杞浓缩汁 1. 5%，其余为软化水；
[0114] 脱脂牛乳95°C，5分钟单独加热灭菌，备用；
[0115] 软化水加热至55°C，依次加入剩余原料溶解并混合均匀后，加热90°C，5分钟灭 菌，趁热加入灭菌的脱脂牛乳，混匀，入厌氧发酵罐冷却，作为发酵培养液；
[0116] (2)接种植物乳杆菌菌液，以发酵培养液质量计：接种量为3%;培养温度37°C，罐 压0. 03MPa,培养时间3小时；
[0117] (3)接种长双歧杆菌菌液，以发酵培养液质量计：接种量为4%，并补加复合枸杞 浓缩汁1%、罗汉果提取物0. 5% ;培养温度37°C，罐压0. 06MPa，培养时间8小时，得到发 酵乳基料，其中植物乳杆菌活菌数3 X 108CFU/mL，长双歧杆菌活菌数2 X 101(lCFU/mL ;
[0118] 以质量计，按如下组分：2. 5%。的大豆多糖、维生素 CO. 12%。、罗汉果提取物0. 5%、 低聚木糖3%、葡萄糖10%、发酵乳基料补足至100%，混合均匀后灌装得到含罗汉果提取 物和活性长双歧杆菌的保健饮品。
[0119] 所述罗汉果提取物制备方法如下：
[0120] 取干罗汉果在100°C，烘烤lOOmin，破碎，加入罗汉果重量9倍的水混匀，之后加入 罗汉果重量0. 4%的混合酶制剂进行酶解，用乳酸调节pH值为6. 0,温度60°C，酶解4h，将 酶解液置于配料缸中，边缓慢搅拌边用探头式超声提取仪在电流强度I. 5A/275W条件下进 行超声提取30min，过滤，5°C放置12h，再过滤一次，真空浓缩得到罗汉果提取物；
[0121] 所述混合酶制剂为纤维素酶、木聚糖酶、戊聚糖酶、果胶酶按质量比4:3:2:1均匀 混合。
[0122] 所述植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum)tlj_2014,保藏于中国微生物菌种 保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO. 9405 ;
[0123] 所述长双歧杆菌CICC6068购自中国工业微生物菌种保藏管理中心。
[0124] 所述长双歧杆菌菌液制备同实施例1 ;
[0125] 所述植物乳杆菌菌液制备同实施例1 :
[0126] 所述复合枸杞浓缩汁由以下方法制备：
[0127] 枸杞冲洗后迅速冷冻至_30°C ;升华干燥，真空度500Pa，干燥至水分< 12% ;控制 温度在-10°c粉碎至粒径在I. 5_以下；将枸杞、黄芪和灵芝子实体粉碎物混合，添加上述 混合物重量3倍的柠檬酸水溶液，控制溶液的pH值为4,添加混合物重量1 %的复合酶，所 述复合酶由酸性果胶酶、中性蛋白酶和纤维素酶组成，三种酶的重量比为2.5 : 1 : 1.5,酶 解温度为40°C，酶解时间为2hr ;之后将pH值调整为5. 1，温度升到50°C，同时添加混合物 重量0. 2%的果胶酶、0. 2%的葡聚糖酶，作用时间为3hr ;酶解液在5°C过滤；滤液冷冻浓缩 获得复合枸杞浓缩汁；
[0128] 所述枸杞、黄芪、灵芝子实体的质量份数比为：8 :1 :0. 5。
[0129] 实施例5
[0130] 一种含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健饮品的制备方法，包括如下步骤：
[0131] (1)按配方称取以下原料，以质量计，罗汉果提取物8%，低聚木糖0. 8%，大豆多 糖0. 1%，大豆蛋白胨0.2%，脱脂牛乳10%，NaclO. 5%，乳酸钙0.5%，复合枸杞浓缩汁 2%，其余为软化水；
[0132] 脱脂牛乳95°C，5分钟单独加热灭菌，备用；
[0133] 软化水加热至60°C，依次加入剩余原料溶解并混合均匀后，KKTC，20分钟灭菌， 趁热加入灭菌的脱脂牛乳，混匀，入厌氧发酵罐冷却，作为发酵培养液；
[0134] (2)接种植物乳杆菌菌液，以发酵培养液质量计：接种量为2%;培养温度35°C，罐 压0. 025MPa,培养时间2. 5小时；
[0135] (3)接种长双歧杆菌菌液，以发酵培养液质量计：接种量为6%，并补加复合枸杞 浓缩汁2%、罗汉果提取物1% ;培养温度37°C，罐压0. 06MPa，培养时间8小时，得到发酵 乳基料，其中植物乳杆菌活菌数2X 108CFU/mL，长双歧杆菌活菌数3. 5X 101(lCFU/mL ;
[0136] 将发酵乳基料与两倍质量的软化水混合均匀后灌装得到含罗汉果提取物和活性 长双歧杆囷的保健饮品。
[0137] 所述罗汉果提取物制备方法如下：
[0138] 取干罗汉果在120°C，烘烤lOOmin，破碎，加入罗汉果重量10倍的水混匀，之后加 入罗汉果重量0. 6 %的混合酶制剂进行酶解，用乳酸调节pH值为5. 5,温度60°C，酶解4h， 将酶解液置于配料缸中，边缓慢搅拌边用探头式超声提取仪在电流强度I. 2A/275W条件下 进行超声提取25min，过滤，4°C放置10h，再过滤一次，真空浓缩得到罗汉果提取物；
[0139] 所述混合酶制剂为纤维素酶、木聚糖酶、戊聚糖酶、果胶酶按质量比4:3:2:1均匀 混合。
[0140] 所述植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum)tlj_2014,保藏于中国微生物菌种 保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO. 9405 ;
[0141] 所述长双歧杆菌Cl C C6068购自中国工业微生物菌种保藏管理中心。
[0142] 所述长双歧杆菌菌液制备同实施例1 ;
[0143] 所述植物乳杆菌菌液制备同实施例1 ;
[0144] 所述复合枸杞浓缩汁由以下方法制备：
[0145] 枸杞冲洗后迅速冷冻至_35°C ;升华干燥，真空度500Pa，干燥至水分< 12% ;控制 温度在-6°C粉碎至粒径在I. 5_以下；将枸杞、黄芪和灵芝子实体粉碎物混合，添加上述混 合物重量6倍的柠檬酸水溶液，控制溶液的pH值为5,添加混合物重量0. 61 %的复合酶，所 述复合酶由酸性果胶酶、中性蛋白酶和纤维素酶组成，三种酶的重量比为2.5 : 1 : 1.5,酶 解温度为46°C，酶解时间为2hr ;之后将pH值调整为5. 3,温度升到56°C，同时添加混合物 重量〇. 5%的果胶酶、0. 5%的葡聚糖酶，作用时间为3hr ;酶解液在5°C过滤；滤液冷冻浓缩 获得复合枸杞浓缩汁；
[0146] 所述枸杞、黄芪、灵芝子实体的质量份数比为：8 :1 :0. 5。
[0147] 试验例1
[0148] 含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健饮品的益生性试验
[0149] 以本发明实施例1、2、6制备的含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健饮品，进 行下述试验：
[0150] 1、将实施例1、2、6的保健饮品，采用十倍逐级稀释至ΚΓ8,取ImL稀释液在灭菌平 板上，将灭菌后冷却至45 °C的MRS琼脂培养基倾注在平板上，迅速摇匀；同时将在4-10 °C保 持2小时的各实施例保健饮品十倍逐级稀释至ΚΓ8,取ImL稀释液在灭菌平板上，将灭菌后 冷却至45°C的MRS琼脂培养基倾注在平板上并迅速摇匀；分别在37°C条件下培养24h后计 数，将各实施例冷藏前后结果分别进行对照。
[0151] 结果表明，活菌存活率分别达到了实施例175%、实施例260%、实施例665%，平 均为66. 7%。2、.模拟胃液及肠液的耐受试验：取100g/L的盐酸16. 4mL加蒸馏水稀释， 使pH值分别为I. 5、2. 5和3. 5,取IOOmL稀盐酸溶液，分别加入Ig胃蛋白酶，使其充分溶 解，得模拟胃液，微孔滤膜除菌（〇. 22 μ m)备用。取磷酸二氢钾6. 8g，加水500mL使溶解， 用0. lm〇L/L氢氧化钠溶液调节pH值至6. 8 ;另取胰蛋白酶10g，加水IOOmL使溶解，将两液 混合后，加水稀释至1000ml，得模拟肠液，微孔滤膜除菌（0. 22 μ m)备用。取ImL各实施例 保健饮品加入到9mL的模拟胃液中，并迅速在振荡器上充分混匀，然后置于30-45?静置培 养2-4h。分别在lh、2h、3h、4h的时候取出培养液并立即计数残存活菌数，分别与原活菌数 进行比较，结果表明，活菌存活率分别为实施例1 55%、实施例2 35%、实施例6 46%，平 均为45. 3%。然后取在人工胃液中消化不同时间的培养液各lmL，分别接种于9mLpH值为 6. 8的人工肠液中，置于30-45°C静置培养2-4h，并分别在0、3、6、24h取样，测定其活菌数， 与原活菌数进行比较，结果表明活菌存活率分别为实施例1 50%、实施例2 33%、实施例6 42%，平均为 41. 7%。
[0152] 试验例2小鼠肠道性能试验
[0153] 以本发明实施例1、2、6制备的含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健饮品，做 以下试验；
[0154] 选取普通昆明小白鼠180只，雌雄各半，18_20g，常规词养。从中随机挑选120只， 每天早晨9:00灌胃盐酸林可霉素0. 2mL (20mg) /只，其它作为对照组，每天同一时间灌胃等 量灭菌生理盐水，连续一周，制备肠道菌群失调的小鼠模型。模型组小鼠饮食下降，未出现 死亡和明显的腹泻现象，排软粪，外形正常含水分较多，垫料潮湿。将120只肠道菌群失调 小鼠，随机分为4组，每组30只，组1、组2、组3作为治疗组，每天分别灌胃实施例1、2、6制 备的保健饮品2ml/只，组4作为自然恢复组，每天同一时间灌胃等量灭菌生理盐水，连续两 周。整个试验期21天，每天观察小白鼠的生长和排便情况，于第8、21天对各组的小鼠进行 称重，计算各组体重平均增长率，结果如表1 ;每5天测各组小鼠粪便大肠杆菌数量，计算平 均数，结果如表2。取小鼠粪便约0. lg，于无菌操作台内加入3粒玻璃珠（以0. Ig粪样加 0. 5mL稀释液），稀释并接种麦康凯琼脂培养基，计算每克湿便中的大肠杆菌数。
[0155] 各组编号对应如下：组1一实施例1、组2-实施例2、组3-实施例6、组4一自然 恢复组
[0156] 表1小鼠增重情况
[0157]

【权利要求】
1. 一种含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健饮品的制备方法，包括如下步骤： (1) 按以下配方称取原料：以质量计，罗汉果提取物1-10%，低聚木糖0.5-1%，大 豆多糖0.05-0. 2%，大豆蛋白胨0. 1-0. 2%，脱脂牛乳10-30%，NaclO. 2-0. 5%，乳酸钙 〇. 5-1 %，复合枸杞浓缩汁1-2 %，其余为软化水；将脱脂牛乳95°C，灭菌5分钟，备用；同 时，将软化水加热至50-60°C，依次加入剩余原料溶解并混合均匀后，90-100°C灭菌5-20分 钟，加入已灭菌的脱脂牛乳，混匀，入厌氧发酵罐冷却，得到发酵培养液； (2) 接种植物乳杆菌菌液，以发酵培养液质量计：接种量为1-3% ;培养温度32-37°C， 罐压0. 02-0. 03MPa,培养时间2-3小时； (3) 再接种长双歧杆菌菌液，以发酵培养液质量计：接种量为4-6%，并补加复合枸杞 浓缩汁1-2%、罗汉果提取物0.5-1%;培养温度35-371：，罐压0.04-0.061〇^，培养6-10小 时，得到发酵乳基料，灌装或调配后灌装。
2. 根据权利要求1所述含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健饮品的制备方法， 其特征在于，所述植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum) tlj-2014,保藏于中国微生物 菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO. 9405 ;所述长双歧杆菌为 CICC6068。
3. 根据权利要求1所述含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健饮品的制备方法，其 特征在于，所述罗汉果提取物制备方法如下： 取干罗汉果在100-120°C，烘烤40-100min，破碎，加入罗汉果重量8-10倍的水混匀， 之后加入罗汉果重量0. 4-0. 6%的混合酶制剂进行酶解，用乳酸调节pH值为5. 5-6. 0,温度 55-60°C，酶解2-4h，将酶解液置于配料缸中，边缓慢搅拌边用探头式超声提取仪在电流强 度0. 6A/25W-1. 5A/275W条件下进行超声提取20-30min，过滤，4-6°C放置10_12h，再过滤一 次，真空浓缩得到罗汉果提取物； 所述混合酶制剂为纤维素酶、木聚糖酶、戊聚糖酶、果胶酶按质量比4:3:2:1均匀混 合。
4. 根据权利要求1所述含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健饮品的制备方法，其 特征在于，所述复合枸杞浓缩汁由以下方法制备： 枸杞冲洗后迅速冷冻至-40-30°C ;升华干燥，真空度400-500Pa，干燥至水分< 12% ; 控制温度在-l〇-2°C粉碎至粒径在1. 5mm以下；将枸杞、黄芪和灵芝子实体粉碎物混合， 添加上述混合物重量3-6倍的柠檬酸水溶液，控制溶液的pH值为4-5,添加混合物重量 0. 5-1 %的复合酶，所述复合酶由酸性果胶酶、中性蛋白酶和纤维素酶组成，三种酶的重 量比为2. 5 : 1 : 1.5,酶解温度为40-48°C，酶解时间为1.5-2hr;之后将pH值调整为 5. 1-5. 6,温度升到50-60°C，同时添加混合物重量0. 2-0. 5 %的果胶酶、0. 2-1 %的葡聚糖 酶，作用时间为2. 5-3hr ;酶解液在5-10°C过滤；滤液冷冻浓缩获得复合枸杞浓缩汁； 所述枸杞、黄芪、灵芝子实体的质量份数比为：8 :1 :0. 5。
5. 根据权利要求1所述含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健饮品的制备方 法，其特征在于，所述调配，按以下配方进行，以质量计：2-3%。的大豆多糖、维生素 C 0. 12-0. 24%。、罗汉果提取物0. 5-1%、低聚木糖1-3%、葡萄糖5-10%、发酵乳基料补足至 100%〇
6. 根据权利要求1所述含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健饮品的制备方法，其 特征在于，所述长双歧杆菌菌液制备方法如下： 长双歧杆菌在种子培养基中活化培养三次，以种子培养基质量计：第一次，接种量 3%，37°C厌氧培养36h，第二次接种量4%，37°C厌氧养24h，第三次接种量5%，37°C厌氧培 养 12h ; 所述种子培养基组成为：大豆蛋白胨5. Og，胰蛋白胨5. Og，脱脂牛乳40mL，葡萄糖
10. 〇g，低聚木糖10. 〇g，罗汉果提取物5. Og，复合枸杞浓缩汁2. Og，乳酸妈0? 5g, NaclO. 2g， 软化水补足lOOOmL, pH6. 8。
7. 根据权利要求1所述含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健饮品的制备方法，其 特征在于，所述植物乳杆菌菌液的制备方法如下： (1) 一级种子培养：将植物乳杆菌CGMCC NO. 9405斜面菌种1-2环，接入500毫升摇瓶 中，种子培养基装量1〇〇晕升，培养温度37°C，培养时间24小时； (2) 二级种子培养：将一级种子按照5%的接种量接入500晕升二级种子摇瓶中，种子 培养基装量100毫升，培养温度37°C，培养时间20小时； (3) 三级种子培养：将二级种子以8%接种量接入5000晕升三级种子摇瓶中，种子培养 基装量1000毫升，培养温度37°C，培养时间18小时； (4) 一级种子罐培养：将三级种子以10%接种量接入总容积为150L的一级种子罐，发 酵培养基装量100L，培养温度37°C，罐压0. 05MPa，培养时间12小时。
8. 根据权利要求7所述含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健饮品的制备方法，其 特征在于，所述种子培养基组成为：酪蛋白胨1%，牛肉提取物1%，酵母提取物0. 5%，葡 萄糖〇. 5 %，脱脂牛乳20mL，乳酸钙1 %，罗汉果提取物1 %，复合枸杞浓缩汁2 %，余量为 水，pH6. 8 ; 所述发酵培养基组成为：大豆蛋白胨5. 0g，胰蛋白胨5. 0g，脱脂牛乳40mL，葡萄糖
10. 〇g，罗汉果提取物5. 0g，复合枸杞浓缩汁2. 0g，乳酸钙0. 5g，NaclO. 2g，软化水补足 1000mL，pH6. 8。
9. 根据权利要求1所述含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健饮品的制备方法，包 括如下步骤： (1) 按以下配方称取原料，以质量计，罗汉果提取物5%，低聚木糖1%，大豆多糖 0. 1%，大豆蛋白胨0. 2%，脱脂牛乳30%，NaclO. 2%，乳酸钙0. 5%，复合枸杞浓缩汁2%， 其余为软化水； 脱脂牛乳95°C，灭菌5分钟，备用； 软化水加热至55°C，依次加入剩余原料溶解并混合均匀后，95°C灭菌15分钟，加入灭 菌的脱脂牛乳，入厌氧发酵罐冷却并混匀，得到发酵培养液； (2) 接种植物乳杆菌菌液，以发酵培养液质量计：接种量为2 % ;培养温度35°C，罐压 0. 02MPa,培养时间3小时； (3) 接种长双歧杆菌菌液，以发酵培养液质量计：接种量为6%，并补加复合枸杞浓缩 汁2%、罗汉果提取物1% ;培养温度37°C，罐压0. 06MPa，培养时间8小时，得到发酵乳基 料，其中植物乳杆菌活菌数2 X 108CFU/mL，长双歧杆菌活菌数3 X 101(lCFU/mL ; 以质量计，按如下组分：3%。的大豆多糖、维生素 C0. 24%。、罗汉果提取物0. 5%、低聚木 糖2%、葡萄糖6%、发酵乳基料补足至100%，混合均匀后灌装得到含罗汉果提取物和活性 长双歧杆囷的保健饮品； 所述罗汉果提取物制备方法如下： 取干罗汉果在110°c，烘烤60min，破碎，加入罗汉果重量10倍的水混匀，之后加入罗汉 果重量0. 5 %的混合酶制剂进行酶解，用乳酸调节pH值为5. 8,温度58°C，酶解3h，将酶解 液置于配料缸中，边缓慢搅拌边用探头式超声提取仪在电流强度1. 0A/275W条件下进行超 声提取25min，过滤，4°C放置12h，再过滤一次，真空浓缩得到罗汉果提取物； 所述混合酶制剂为纤维素酶、木聚糖酶、戊聚糖酶、果胶酶按质量比4:3:2:1均匀混 合； 所述植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum)tlj_2014 保藏编号为 CGMCC NO. 9405; 所述长双歧杆菌CICC6068购自中国工业微生物菌种保藏管理中心； 所述长双歧杆菌在种子培养基中活化培养三次，以培养基质量计：第一次，接种量 3%，37°C厌氧培养36h，第二次接种量4%，37°C厌氧养24h，第三次接种量5%，37°C厌氧培 养12h，得到长双歧杆菌菌液； 所述种子培养基组成为：大豆蛋白胨5. 0g，胰蛋白胨5. 0g，脱脂牛乳40mL，葡萄糖
10. 〇g，低聚木糖10. 〇g，罗汉果提取物5. 0g，复合枸杞浓缩汁2. 0g，乳酸妈0? 5g, NaclO. 2g， 软化水补足lOOOmL, pH6. 8 ; 所述植物乳杆菌菌液的制备： (1) 一级种子培养：将植物乳杆菌CGMCC NO. 9405斜面菌种1-2环接入500毫升摇瓶 中，种子培养基装量1〇〇晕升，培养温度37°C，培养时间24小时； (2) 二级种子培养：将一级种子按照5%的接种量接入500晕升二级种子摇瓶中，种子 培养基装量100毫升，培养温度37°C，培养时间20小时； (3) 三级种子培养：将二级种子以8%接种量接入5000晕升三级种子摇瓶中，种子培养 基装量1000毫升，培养温度37°C，培养时间18小时； (4) 一级种子罐培养：将三级种子以10%接种量接入总容积为150L的一级种子罐，发 酵培养基装量100L，培养温度37°C，罐压0. 05MPa，培养时间12小时； 所述种子培养基组成为：酪蛋白胨1%，牛肉提取物1%，酵母提取物0.5%，葡萄 糖0.5%，脱脂牛乳20mL，乳酸钙1%，罗汉果提取物1%，复合枸杞浓缩汁2%，余量为 水，pH6. 8 ; 所述发酵培养基组成为：大豆蛋白胨5. 0g，胰蛋白胨5. 0g，脱脂牛乳40mL，葡萄糖
10. 〇g，罗汉果提取物5. 0g，复合枸杞浓缩汁2. 0g，乳酸钙0. 5g，NaclO. 2g，软化水补足 lOOOmL, pH6. 8 ； 所述复合枸杞浓缩汁由以下方法制备： 枸杞冲洗后迅速冷冻至-40°C ;升华干燥，真空度450Pa，干燥至水分< 12% ;控制温度 在-10°C粉碎至粒径在1. 5_以下；将枸杞、黄芪和灵芝子实体粉碎物混合，添加上述混合 物重量4倍的柠檬酸水溶液，控制溶液的pH值为4. 5,添加混合物重量1 %的复合酶，所述 复合酶由酸性果胶酶、中性蛋白酶和纤维素酶组成，三种酶的重量比为2.5 : 1 : 1.5,酶解 温度为45°C，酶解时间为2hr ;之后将pH值调整为5. 4,温度升到55°C，同时添加混合物重 量0. 3%的果胶酶、0. 6%的葡聚糖酶，作用时间为2. 5hr ;酶解液在5°C过滤；滤液冷冻浓缩 获得复合枸杞浓缩汁； 所述枸杞、黄芪、灵芝子实体的质量份数比为：8 :1 :0. 5。
10.根据权利要求1-9所述制备方法制备的含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健 饮品。
【文档编号】A23C9/133GK104489092SQ201410715715
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年12月1日 优先权日:2014年12月1日
【发明者】于力欣 申请人:于力欣