专利名称：：含有非活的双歧杆菌和非消化性寡糖的营养物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及婴儿和/或幼童营养物的领域。特别地，本发明涉及包含非消化性寡糖和非活的(non-viable)双歧杆菌的婴儿和/或幼童营养物。这样的营养组合物有利地用于治疗或预防过敏(优选食物过敏)和/或特应性疾病(包括特应性皮炎和/或哮喘)。
背景技术：
：人乳喂养的人类婴儿在出生后会形成富含产乳酸细菌的肠道微生物群。这是因为在人乳中存在非消化性糖类，而这些糖类可被产乳酸细菌(尤其是双歧杆菌)特异性发酵。富含双歧杆菌的微生物群是有益的，这是因为它具有预防以下病症的作用感染、腹泻、便秘、胃肠炎症、肠道成熟(intestinalmaturation)、过敏特别是食物过敏、特应性疾病包括特应性皮炎以及哮喘，并且它对免疫系统具有有益作用。可使针对幼儿的配方模拟人乳的促双歧杆菌生长效应(bifidogeniceffect)。W2005039319公开了使用活的短双歧杆菌(Bifidobacteriumbreve)和两种不同的非消化性糖类的混合物以改善用配方喂养之婴儿的微生物群。该文献公开了双歧杆菌在属的水平和在种的水平上的相关性。W020070046698公开了使用包含非消化性寡糖的组合物来制备向剖腹产婴儿肠道施用的组合物。共施用活的乳酸细菌以增加剖腹产婴儿肠道中微生物的多样性和/或数量。JP01242532公开了使用活的或非活的短双歧杆菌作为刺激集合淋巴小结(Peyer’spatch)的免疫强化剂，从而预防肠道内感染和过敏。该文献未涉及用于婴儿和/或幼童的营养配方。
发明内容已知活的短双歧杆菌细胞可改善微生物群并从而改善过敏。然而，优选使用非活的短双歧杆菌。这具有如下优点1)包含非活的短双歧杆菌的产品储存更容易并且成本降低，这是因为不需要做特殊的事先准备来维持短双歧杆菌细胞可接受水平的生存力。这在水活度高于0.3的产品中尤为需要。2)没有后酸化(post-acidification)发生，这是因为具有高水活度之储存产品中的短双歧杆菌不存在发酵能力，和/或在用水重溶之后、食用之前期间的婴儿配方中的短双歧杆菌不存在发酵能力。3)生产后，包含非活的短双歧杆菌的最终营养组合物可进行巴氏消毒和/或灭菌，从而减少污染有害微生物(例如坂崎肠杆菌(E.sakazakii))的机会。所以，本发明使得能够制备并在室温储存包含非活的短双歧杆菌的液体、即用型配方。4)需要时，可使用温度高于37°C的水来重溶包含非活的短双歧杆菌的粉末产品。5)每个婴儿和/或幼童所接受的短双歧杆菌细胞剂量可更容易控制，这是因为液体产品中不再发生任何生长，婴儿肠道中也不再发生生长。后者是取决于个体肠道环境的可变因子，并从而导致各婴儿中有益作用程度的不同。本发明人出人意料地发现，可以在包含非消化性寡糖的婴儿和/或幼童营养物中有利地添加非活的短双歧杆菌细胞以对食物过敏和/或其它特应性疾病具有预防和/或治疗作用。组合物中非活的短双歧杆菌的作用与活的短双歧杆菌细胞的作用相当。所观察到的失活短双歧杆菌的抗过敏作用不能用直接的益生菌作用(例如通过改善菌群的作用)来解释，这是因为这些细胞不再是活的并因此不会增加微生物群中短双歧杆菌细胞的数目。迄今，短双歧杆菌的有益作用被认为依赖于存在活细胞。非活的短双歧杆菌细胞的作用与活的短双歧杆菌相当但是略低。本发明人出人意料地发现，非活的短双歧杆菌的作用还可通过非消化性寡糖的存在而进一步改进。这些是预料不到的，因为通常在共生制备物(synbioticpr印aration)中存在的非消化性寡糖刺激存在的益生细菌并从而显示改善的作用。本发明人出乎意料地发现，在包含失活短双歧杆菌的制备物(其不能使用和得益于存在的非消化性寡糖)中，也发现所述组合相比于单一化合物具有改进作用。非消化性寡糖刺激婴儿和/或幼童的肠内微生物群，尤其是双歧杆菌和/或乳酸杆菌的数量。施用非活的短双歧杆菌的同时通过非消化性寡糖改善用配方喂养的婴儿和/或幼童的微生物群，导致对预防和/或治疗以下病症的作用增强，例如对感染、腹泻、便秘、胃肠炎症、肠道成熟、过敏特别是食物过敏、特应性皮炎和/或哮喘的预防作用。具体实施例方式本发明涉及包含非消化性寡糖A和/或B以及一定量非活的短双歧杆菌(相当于每克婴儿和/或幼童营养物干重至少103cfu)并包含一定量的活的短双歧杆菌(每克婴儿和/或幼童营养物干重小于103cfu)的婴儿和/或幼童营养物。本发明的一方面涉及喂食婴儿和/或幼童的方法。本发明的另一方面涉及治疗和/或预防过敏(优选食物过敏)和/或特应性疾病(包括特应性湿疹和/或哮喘)的方法，所述方法包括向对象施用本发明的婴儿和/或幼童营养物。本发明的又一方面涉及治疗和/或预防感染的方法，所述方法包括向对象施用本发明的婴儿和/或幼童营养物。本发明的另一方面涉及治疗和/或预防尿布皮炎(diaperdermatitis)的方法，所述方法包括向对象施用本发明的婴儿和/或幼童营养物。换句话说，本发明涉及婴儿和/或幼童营养物制备用于治疗和/或预防过敏(优选食物过敏)、特应性疾病(包括特应性湿疹和/或哮喘)的组合物或营养物的用途，或者也就是说，本发明涉及用于治疗和/或预防过敏(优选食物过敏)、特应性湿疹和/或哮喘的本发明婴儿和/或幼童营养物。作为替代地，本发明涉及婴儿和/或幼童营养物制备用于治疗和/或预防感染的组合物或营养物的用途，或者也就是说，本发明涉及用于治疗和/或预防感染的本发明婴儿和/或幼童营养物。作为替代地，本发明涉及婴儿和/或幼童营养物制备用于治疗和/或预防尿布皮炎的组合物或营养物的用途，或者也就是说，本发明涉及用于治疗和/或预防尿布皮炎的本发明婴儿和/或幼童营养物。短双歧杆菌短双歧杆菌是革兰氏阳性、厌氧的、分枝杆状细菌。与短双歧杆菌的模式菌株ATCC15700相比，本发明短双歧杆菌的16SrRNA序列优选地具有至少95%的一致性，更优选至少97%的一致性(Stackebrandt&Goebel,1994，Int.J.Syst.Bacteriol.44846-849)。本发明的组合物、方法和用途中涉及的双歧杆菌优选地与短双歧杆菌探针杂交并在5’核酸酶测定法中产生信号，如WO2005039319所述。优选的短双歧杆菌菌株是从用健康人乳喂养的婴儿的粪便中分离的菌株。通常，这些可以从乳酸细菌生产者处购得，但是也可以直接从粪便中分离，鉴定，表征和制备。根据一个优选的实施方案，本发明的组合物包含至少一种选自以下的短双歧杆菌短双歧杆菌Bb-03(Rhodia/Danisco)、短双歧杆菌M-16V(Morinaga)、短双歧杆菌R0070(InstituteRosell,Lallemand)、短双歧杆菌BR03(Probiotical)、短双歧杆菌BR92(CellBiotech)、DSM20091和LMG11613。最优选地，所述非活的短双歧杆菌是非活的短双歧杆菌M-16V(Morinaga)。最优选地，所述非活的短双歧杆菌来自保藏于法国巴黎CNCM的短双歧杆菌菌株1-2219。本发明的组合物包含一定量非活的短双歧杆菌(相当于每克组合物干重至少IO3Cfu)。本发明的组合物优选包含相当于每克本发明组合物干重IO3IO13集落形成单位(cfu)短双歧杆菌的非活的短双歧杆菌，优选IO41012、更优选IO51011、最优选相当于每克本发明组合物干重IO5IOltlCfu短双歧杆菌。优选地，本发明的组合物包含相当于每克总的非消化性寡糖IO41013、优选IO51012、最优选相当于IO65XIO11集落形成单位(cfu)短双歧杆菌。本发明非活的短双歧杆菌的剂量优选地以相当于IO41014、更优选IO51013、更优选IO61012、最优选IO85XIO11集落形成单位(Cfu)的日剂量来施用。当组合物为液体时，该组合物优选地包含相当于每IOOml本发明组合物IO4IO14集落形成单位(cfu)的非活的短双歧杆菌，优选IO51013、更优选IO61012、最优选相当于每IOOml本发明组合物IO6IO11Cfu的短双歧杆菌。一定量的相当于每克干重至少IO3Cfu的非活的短双歧杆菌是指相当于每克干重至少IO3Cfu短双歧杆菌之量的非活的短双歧杆菌。可通过用短双歧杆菌探针和引物对包含非活的短双歧杆菌的产品(即婴儿配方)进行5’核酸酶测定并将其与校准曲线进行比较来测定cfu的相当量(如WO2005039319中所公开地)，所述校准曲线从已添加已知量干的、活的短双歧杆菌cfu的可比产品(例如标准婴儿配方)获得。所述干的、活的双歧杆菌可如上所述购得。认为校准曲线中由活的短双歧杆菌(其与包含失活短双歧杆菌的产品具有同样的5’核酸酶测定应答)得到的cfu值是非活的短双歧杆菌的相当量。或者，每克干重的cfu量可以在失活步骤之前在组合物中测定。存在大量活的双歧杆菌仍会导致液体婴儿配方中发生后酸化作用。因此，本发明的组合物包含每克组合物干重小于IO3Cfu活的双歧杆菌，优选地小于102，更优选地小于lOcfu。当采用液体形式时，本发明的组合物包含每IOOml优选地小于IO4Cfu活的双歧杆菌，优选地小于103cfu，更优选地小于102cfu。活的双歧杆菌的cfu可以如Ingham，S.C.，1999，J.FoodProt.62(1)77-80页所述进行适当测定。优选地，所述组合物根本不包含可测量的活的短双歧杆菌cfu。然而，完全不存在活的短双歧杆菌是难于测定的或者是不可能测定的。适当地，可通过平板培养法测定的低于检测限来表示不存在活的短双歧杆菌。该检测限为每克干重组合物103cfu。本申请中非活的短双歧杆菌涉及死的短双歧杆菌、非可培养(non-culturable)的短双歧杆菌、不生长的短双歧杆菌和/或(代谢)失活的短双歧杆菌。可通过本领域已知的方法使短双歧杆菌细胞成为非活的细胞，包括热处理步骤(包括灭菌、巴氏消毒、UHT处理)、辐射(UV)、用氧处理、用杀菌剂(例如乙醇)处理、超声处理、超高压应用、高压勻浆以及使用细胞破碎仪。优选地，短双歧杆菌被热杀死。非活的短双歧杆菌的存在有利地预防和/或治疗至少一种选自以下的疾病感染、腹泻、便秘、胃肠炎症、由肠道成熟受损引起的疾病、(食物)过敏、特应性皮炎、湿疹和哮喘，同时提供许多产品技术益处，包括延长货架期、降低细菌污染发生率、减少产品的后酸化作用、改善剂量控制以及改善重溶的方便性。非消化件寡糖本发明的组合物包含非消化性寡糖A和/或B。所述非消化性寡糖A和/或B优选地刺激肠内产乳酸细菌(特别是双歧杆菌和/或乳杆菌)的生长，并因此刺激健康肠内微生物群的形成，并优选发酵成有机酸。所形成的有机酸刺激粘液产生并因此进一步改善婴儿中的肠屏障功能和/或成熟。因此，非消化性寡糖A和/或B的存在对感染、过敏和/或特应性疾病具有有利的作用。有利地，所述非消化性寡糖A和/或B是水溶性的(根据L.Prosky等，J.Assoc.Anal.Chem71:1017_1023，1988中公开的方法)并且是聚合度(degreeofpolymerisation,DP)为2200的寡糖。所述非消化性寡糖A和/或B的(平均)DP优选低于200，更优选低于100，更优选低于60，最优选低于40。所述非消化性寡糖A和/或B不在肠中被人类上消化道(小肠和胃)中存在的消化酶所消化。所述非消化性寡糖A和/或B优选被人类肠内微生物群所发酵。例如，认为葡萄糖、果糖、半乳糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖和麦芽糊精是可消化的。寡糖原材料可包含单糖例如葡萄糖、果糖、岩藻糖、半乳糖、鼠李糖、木糖、葡糖醛酸、乙酰氨基半乳糖(GalNac)等，但这些不是本发明中所述寡糖的一部分。本发明的组合物、方法和用途中涉及的非消化性寡糖A和/或B包括非消化性寡糖的混合物。这是常用的实践，因为使用例如一种链长的非消化性寡糖是非常昂贵的。优选地，所述非消化性寡糖选自低聚果糖(包括菊粉)、非消化性糊精、低聚半乳糖(包括反式低聚半乳糖)、低聚木糖、低聚阿拉伯糖、低聚阿拉伯半乳聚糖、低聚葡萄糖(包括低聚龙胆糖和环糊精)、低聚葡甘露聚糖、低聚半乳甘露聚糖、低聚甘露聚糖、低聚壳糖、糖醛酸低聚糖、唾液酸低聚糖(包括3-SL、6-SL、LSTa,b，c、DSLNT、S-LNH、DS-LNH)和低聚岩藻糖(包括(未经)硫酸化的岩藻多糖0S、2-FL、3-FL、LNFPI，II，III，V、LNnFPI、LNDH)及其混合物，更优选低聚果糖(包括菊粉)、低聚半乳糖(包括反式低聚半乳糖，α以及优选地β连接的)、糖醛酸低聚糖和低聚岩藻糖及其混合物，更优选反式低聚半乳糖和/或菊粉，最优选反式低聚半乳糖。当非消化性寡糖A和/或B是混合物时，使用各参数的平均数来限定本发明。本发明优选地提供包含两种不同的非消化性寡糖(即非消化性寡糖A和非消化性寡糖B)的组合物。所述非消化性寡糖A和非消化性寡糖B优选地具有不同类型的糖苷键、不同的聚合度和/或不同的单糖组成。根据本发明的一个优选实施方案，特定单糖在非消化性寡糖A中的百分比比同种单糖在非消化性寡糖B中的百分比至少高出40%(数目)，优选地至少50%，更优选地至少75%，更优选地至少90%。增加单糖的多样性刺激更广泛的有益肠细菌群。单糖在非消化性寡糖中的百分比可简单地如下计算将非消化性寡糖中的各单糖单元(例如葡萄糖)数除以该非消化性寡糖中的单糖单元总数，再乘以100。当非消化性寡糖是非消化性寡糖混合物时，须将非消化性寡糖混合物中每个单独单糖单元的贡献考虑在内。非消化性寡糖混合物中的单糖百分比可简单地如下测定将该混合物完全水解并测定每种单糖数目的百分比。优选地，非消化性寡糖A包含至少40%(数目)半乳糖，更优选地至少67%半乳糖，更优选地至少75%半乳糖。优选地，非消化性寡糖B包含至少30%(数目)果糖，更优选地至少67%果糖，更优选地至少80%果糖。根据本发明的一个优选实施方案，非消化性寡糖A的平均DP比非消化性寡糖B的平均DP至少低5个单糖单元，优选地至少10个，更优选地至少15个。优选地，非消化性寡糖A的平均DP为210，更优选为3-5。优选地，非消化性寡糖B的平均DP低于200，更优选1160，更优选2030。包含聚合度增加的非消化性寡糖降低了渗透负荷，这对婴儿营养物有利和/或增强肠内微生物群在结肠更远处的益生元刺激。具有不同DP的非消化性寡糖A和B可具有相同或不同的单糖组成。优选地，非消化性寡糖A和B具有不同的单糖组成和不同的DP。优选地，非消化性寡糖A和B的累积重量的至少80wt.%、更优选至少95wt.%、最优选至少98wt.%具有低于60、更优选地低于40、最优选地低于20的DP。较低的DP有利地降低粘度以及提高非消化性寡糖的发酵性能。优选地，非消化性寡糖A和B的累积重量的至少50wt.%、优选至少75wt.%是DP为28的非消化性寡糖。通过使用包含高重量百分比的小的非消化性寡糖的混合物，提高了发酵性能以及对乳酸细菌和双歧杆菌的生长的刺激作用。在本发明的另一优选实施方案中，非消化性寡糖A的至少一种糖苷连接相对于非消化性寡糖A总糖苷连接的百分比与寡糖B中同种糖苷连接的百分比相比至少高出40%或低出40%，优选地至少50%，更优选地至少75%。本发明中使用的术语“糖苷连接”是指通过脱水在两个环状单糖的环之间形成的C-O-C连接。糖苷连接的多样性增加刺激了更广泛的有益细菌。糖苷连接的不同在于它们与单糖单元中不同编号位置的碳原子共价结合，和/或它们形成α或β键。非消化性糖类中存在的不同糖苷连接的实例有β(1,3),α(1，4)、β(2，1)、α(1,2)和β(1,4)连接。优选地，在非消化性寡糖A中的糖苷连接包含至少40%(更优选至少75%)的β(1,4)和/或β(1,6)糖苷连接。在非消化性寡糖B中的糖苷连接优选地包含至少40%(更优选至少75%)的β(2,1)糖苷连接。优选地，非消化性寡糖A和B在单糖单元组成和糖苷连接类型上不同。优选地，非消化性寡糖A和B在糖苷连接类型和DP上不同。最优选地，非消化性寡糖A和B在糖苷连接类型、单糖组成和DP上不同，从而最佳地改善生物多样性以及刺激多种肠内生物(尤其是双歧杆菌属的不同菌种)的生长。优选地，非消化性寡糖A和B总单糖单元的至少60%、更优选至少75%、更优选90%、最优选98%是选自半乳糖(gal)、果糖(fru)和葡萄糖(glu)单糖的单糖。非消化性寡糖A优选为选自β_低聚半乳糖、α-低聚半乳糖和半乳聚糖的寡糖。根据一个更优选的实施方案，非消化性寡糖A是低聚半乳糖或反式低聚半乳糖。优选地，非消化性寡糖A包含带有β(1,4)和/或β(1,6)糖苷键的低聚半乳糖以及末端葡萄糖。反式低聚半乳糖例如可以商品名VivinalGOS(BorculoDomoIngredients,Zwolle,Netherlands)、Bi2muno(Clasado)、Cup_oligo(NissinSugar)禾口01igomate55(Yakult)购得。非消化性寡糖B优选为低聚果糖。低聚果糖在其它语境中可以有如下名称fructopolysaccharide>oligofructose、polyfructose>polyfructan>菊粉、果聚||(levan)和果聚糖(fructan)，并且可以指包含0-连接果糖单元(优选地通过0(2,1)和/或0(2,6)糖苷连接进行连接，并且优选DP为2200)的寡糖。优选地，所述低聚果糖包含3(2,1)糖苷连接的末端葡萄糖。优选地，所述低聚果糖包含至少7个连接的果糖单元。在另一优选实施方案中，使用菊粉作为非消化性寡糖B。菊粉是一类低聚果糖，其中至少75%的糖苷连接是0(2,1)连接。通常，菊粉的平均链长为860个单糖单元。用于本发明组合物中的合适的低聚果糖可以商品名Raftiline:HP(orafti)购得。其它合适的来源有raftilose(Orafti)、fibrulose和fibruline(Cosucra)以及Frutafit和frutalose(Sensus)。最优选的是平均DP低于10、优选低于6的反式低聚半乳糖作为非消化性寡糖A以及平均DP高于7、优选高于11、更优选高于20的低聚果糖作为非消化性寡糖B，因为发现这样的组合有利于改善肠内微生物群。如果组合物包含非消化性寡糖A和B，则非消化性寡糖A与非消化性寡糖B的重量比优选地从1/99到99/1，更优选地从1/19到19/1，更优选地从1到19/1。当非消化性寡糖A具有低的DP并且非消化性寡糖B具有相对高的DP时，该重量比特别有利。它确保了渗透压和发酵性能之间的最佳平衡。它还确保了单糖组成多样性、糖苷连接和/或聚合度的最佳作用。优选地，寡糖A是反式低聚半乳糖，寡糖B是低聚果糖。因此，根据一个实施方案，本发明的婴儿营养物包含非消化性寡糖A和B，其中所述非消化性寡糖A和B的不同在于i)寡糖A的至少一种单糖相对于寡糖A总单糖单元的百分比，所述单糖比寡糖B中同种单糖的百分比高出至少40%(数目)；和/或ii)寡糖A的至少一种糖苷连接相对于寡糖A总糖苷连接的百分比，所述糖苷连接比寡糖B中同种糖苷连接的百分比高出至少40%；和/或iii)寡糖A的聚合度，所述寡糖A的聚合度比寡糖B的聚合度低至少5个单糖单兀。在一个优选的实施方案中，本发明的组合物还包含非消化性寡糖C。该非消化性寡糖C包括糖醛酸低聚糖。本发明中使用的术语“糖醛酸低聚糖”是指寡糖中存在的单糖单元中至少50%(数目)为选自以下之单糖单元的寡糖古洛糖醛酸、甘露糖醛酸、半乳糖醛酸、艾杜糖醛酸、核糖醛酸(riburonicacid)和葡萄糖醛酸。在一个优选的实施方案中，糖醛酸低聚糖包含相对于糖醛酸低聚糖中总糖醛酸单元来说至少50%(数目)的半乳糖醛酸。本发明中使用的糖醛酸低聚糖优选地从果胶、果胶酸类、褐藻酸类、软骨素、透明质酸、肝素(h印arine)、类肝素(h印arane)、细菌碳水化合物和/或唾液酸聚糖的降解而制备，更优选地从果胶和/或褐藻酸类的降解而制备，更优选地从果胶的降解而制备，最优选为多聚半乳糖醛酸。优选地，降解果胶通过对果实和/或蔬菜的果胶进行水解和/或3_消除来制备，更优选地使用苹果、柑桔和/或糖用甜菜的果胶，更优选地使用经至少一种裂解酶降解的苹果、柑桔和/或糖用甜菜的果胶。优选地，本发明的组合物包含25IOOwt.%、更优选地50IOOwt.%的糖醛酸低聚糖，其DP相对于组合物中糖醛酸低聚糖总重量来说为2250，更优选地DP为2100，更优选地DP为250，最优选地DP相对于组合物中糖醛酸低聚糖总重量来说为220。在一个优选的实施方案中，糖醛酸低聚糖的至少一个末端己糖醛酸单元具有双键。该双键有效地保护免受病原细菌附着于肠上皮细胞。这对于婴儿来说是有利的。优选地，末端己糖醛酸单元之一包含C4C5双键。位于末端己糖醛酸单元的双键可例如通过用裂解酶对果胶进行酶促水解来获得。可将糖醛酸低聚糖衍生化。可将糖醛酸低聚糖甲氧基化和/或酰胺化。在一个实施方案中，糖醛酸低聚糖的特征在于甲氧基化程度高于20%，优选地高于50%，更优选地高于70%。本文使用的“甲氧基化程度”(也称为“酯化程度(degreeofesterification,DE)")意指糖醛酸低聚糖中所含的自由羧酸基团被酯化(例如被甲基化)的程度。优选地，所述组合物包含非消化性寡糖反式低聚半乳糖、低聚果糖和果胶降解产物。反式低聚半乳糖低聚果糖果胶降解产物的重量比优选为(202)1(13)，更优选地为(127)1(12)。本发明的组合物优选地包含相对于本发明组合物的干重来说0.0520wt.%的非消化性寡糖(A+B+C)，更优选为0.515wt.%，更优选为1IOwt.%，最优选为2.0IOwt.%。IS^;本发明的婴儿和/或幼童营养物优选地经肠施用，更优选地经口施用。本发明的婴儿和/或幼童营养物优选地用作婴儿配方。本发明的婴儿和/或幼童营养物可有利地用作针对婴儿的完全营养物。这样的食物优选地包含脂质、蛋白质和碳水化合物，并优选以液体形式施用。优选地，所述组合物为即用的流质食品，例如以即食的液体形式。与需要重溶的粉末相比，经包装的即食流质食品有利地包括较少的制备步骤，因此降低了污染有害微生物的机会。因此，本发明还涉及婴儿和/或幼童营养物，其优选地包含550en%脂质、550en%蛋白质、1590en%碳水化合物和非活的短双歧杆菌以及非消化性寡糖A和/或B和任选地C。优选地，本发明的婴儿和/或幼童营养物包含3550en%脂质、7.512.5en%蛋白质和3580en%碳水化合物(“en%”是能量百分比的简写，其代表每种组分占制备物总热量值的相对量)。优选地，所述婴儿和/或幼童营养物包含脂质。优选地，所述婴儿和/或幼童营养物包含植物脂质。优选地，所述脂质组分是植物脂质和至少一种选自以下的油的组合鱼油、动物油、海藻油和细菌油。优选地，所述脂质包含超过50mg/100kCal(优选地相对于总脂肪酸来说超过Iwt.%)α-亚麻酸(ALA)。优选地，所述脂质组合物的亚油酸(LA)和ALA重量比为415，更优选地为58。优选地，本发明的婴儿和/或幼童营养物包含长链多不饱和脂肪酸(longchainpolyunsaturatedfattyacid，LC-PUFA)，更优选二十碳五烯酸(EPA)和/或二十二碳六烯酸(DHA)，和/或花生四烯酸(ARA)。优选地，相对于总脂肪酸来说，所述婴儿和/或幼童营养物包含0.030.8wt.%、更优选地0.120.4wt.%DHA。优选地，相对于总脂肪酸来说，所述组合物包含0.010.2wt.%、更优选地0.030.lwt.%EPA。优选地，相对于总脂肪酸来说，所述组合物包含0.031.6wt.%、更优选地0.120.8wt.%ARA.LC-PUFA的存在有利地降低肠通透性或改善免疫系统或者两者兼而有之，从而与本发明中有关抵抗过敏、特应性皮炎、感染等作用的其它组分一起发挥协同作用。优选地，所述婴儿和/或幼童营养物包含蛋白质。所述营养制备物中的蛋白质优选地选自非人动物蛋白质(例如乳蛋白质(包括酪蛋白和乳清蛋白)、肉蛋白质和卵蛋白质)、植物蛋白质(例如大豆蛋白质、小麦蛋白质、水稻蛋白质、马铃薯蛋白质和豌豆蛋白质)、水解产物(部分水解地和/或广泛水解地)、游离氨基酸及其混合物。特别优选的是牛乳衍生氮源，特别是牛乳蛋白质例如酪蛋白和乳清蛋白，因为这些蛋白质的氨基酸组成很均衡。由于本发明的组合物适当地用于降低婴儿和/或幼童中的过敏反应，因此该婴儿营养物的蛋白质优选地选自经水解的乳蛋白质(例如水解酪蛋白和/或水解乳清蛋白)、经水解的植物蛋白质和/或氨基酸。使用这些蛋白质还降低婴儿和/或幼童的过敏反应和/或提高蛋白质吸收。优选地，所述蛋白质来源被广泛地和/或部分地水解。更优选地，所述蛋白质来源为经广泛水解的源自牛乳的乳清蛋白。优选地，所述婴儿和/或幼童营养物包含可消化的碳水化合物。营养制备物中使用的可消化的碳水化合物优选地选自蔗糖、乳糖、麦芽糖、半乳糖、葡萄糖、果糖，玉米糖浆固形物、淀粉和麦芽糖糊精及其混合物，更优选乳糖。本发明的婴儿和/或幼童营养物优选地包含矿物质、微量元素和维生素、胆碱、牛磺酸、肉碱、肌醇和/或其混合物。优选地，本发明的组合物包含牛磺酸，其减轻哮喘症状(Adv.Exp.Med.Biol.2003526403-10)。牛磺酸与本发明的婴儿和/或幼童营养物中的组分协同作用。优选地，本发明的婴儿和/或幼童营养物包含核苷酸。优选地，所述组合物包含胞苷5’-单磷酸、尿苷5’-单磷酸、腺苷5’-单磷酸、鸟苷5’-单磷酸和肌苷5’-单磷酸。优选地，本发明的婴儿和/或幼童营养物包含0.0050.07、更优选地0.010.035wt.%的核苷酸(基于干重来说)。核苷酸的存在有利地影响免疫系统、肠屏障和/或肠内微生物群。因而，预计核苷酸与本发明中有关抵抗过敏、特应性皮炎、感染等作用的其它组分一起发挥协同作用。优选地，本发明的婴儿和/或幼童营养物包含LC-PUFA和核苷酸。优选地，本发明的婴儿和/或幼童营养物是未经发酵的组合物。被微生物发酵导致PH降低，这对新形成的牙齿可有不利影响。优选地，所述组合物的pH高于5.5，更优选地高于6.0，更优选地高于6.5，从而减少对牙齿的损伤。优选地，所述婴儿和/或幼童营养物的pH为68。优选地，本发明的婴儿和/或幼童营养物是经发酵的组合物。优选地，本发明的营养物包含经短双歧杆菌发酵的乳衍生产品，该短双歧杆菌的细胞在发酵后失活。所述经短双歧杆菌发酵的乳衍生产品包含短双歧杆菌外泌的片段或/和产物，例如糖蛋白、糖脂、肽聚糖、脂磷壁酸(LTA)、脂蛋白、荚膜多糖和/或DNA。这些免疫原性分子诱导肠道针对产乳酸细菌定殖的耐受性。此外，在发酵和/或短双歧杆菌与乳衍生产物发生其它相互作用之后，还可形成另外的生物活性化合物，例如生物活性肽和/或寡糖，其也刺激免疫系统和/或刺激肠内微生物群的定殖。所述乳衍生产物优选地选自乳、酪蛋白、酪蛋白蛋白质、酪蛋白蛋白质水解产物、酪蛋白肽、乳清、乳清蛋白、乳清蛋白水解产物、乳清肽和乳糖或其混合物。乳可以是全脂乳、半脱脂乳和/或脱脂乳。乳清可以是甜乳清(sweetwhey)和/或酸11乳清(acidwhey)0优选地，待发酵的水性基质为脱脂乳。大便异常(例如，大便坚硬、大便体积不足(insufficientstoolvolume)、腹泻)是许多婴幼儿的主要问题。已发现可通过在流质食品中施用本发明的非活的短双歧杆菌和非消化性寡糖的组合来解决大便问题，所述流质食物具有50500m0sm/kg的渗透压，更优选地为100400m0sm/kg。鉴于以上所述，同样重要的是所述流质食物组合物不具有过度的热量密度而仍然提供足够的热量来喂食对象。因此，所述流质食物优选地具有0.12.5kcal/ml的热量密度，更优选地为0.41.2kcal/ml的热量密度，最优选地为0.550.75kcal/ml。本发明的婴儿和/或幼童营养物优选地具有160mPa.s的粘度，优选地为120mPa.s，更优选地为1lOmPa.s，最优选地为16mPa.s。低粘度确保液体的适当施用，例如通过奶嘴的孔适当递送。同时，该粘度与人乳的粘度极其近似。此外，低粘度导致正常的胃排空和更好的能量摄取，这对需要能量用于良好生长和发育的婴儿和/或幼童是必要的。本发明的组合物优选地通过将粉末组合物与水混合来制备。通常婴儿配方即以这种方式制备。因此，本发明还涉及经包装的粉末组合物，其中所述包装中提供了将所述粉末与适当量的液体进行混合、从而得到粘度为160mPa.s的液体组合物的说明书。所述液体的粘度通过使用PhysicaRheometerMCR300(PhysicaMesstechnikGmbH,Ostfilden,Germany)于20°C以95s-1的剪切速率来测定。包含非活的短双歧杆菌能延长婴儿和/或幼童营养物的货架期，特别是与包含活的短双歧杆菌的婴儿和/或幼童营养物进行比较时。这对于液体的婴儿和/或幼童营养物特别有利。因此，本发明的婴儿和/或幼童营养物优选地在室温下在至少6个月内、优选地至少12个月内、优选地当所述婴儿和/或幼童营养物为液体、即食形式时是货架稳定的。^M已发现，本发明的婴儿和/或幼童营养物特别地可用作以下婴幼儿的营养物早产婴儿、足月出生的婴儿(阴道分娩婴儿以及剖腹产分娩婴儿)、处于向固体食物过渡时期的婴儿、过敏风险增加或患有过敏的婴儿和/或幼童、和/或感染风险增加的婴儿和/或幼童(例如加入日间托儿中心或患有感染的婴儿和/或幼童)。本发明特别地有利于阴道出生的婴儿。本发明特别地有利于剖腹产分娩的婴儿，因为这些婴儿的大肠中微生物定殖受损。因此，本发明提供了向人类婴儿和/或幼童提供营养物的方法，该方法包括向婴儿和/或幼童施用本发明的组合物。优选地，所述婴儿和/或幼童的年龄为036个月，更优选地为018个月，最优选地为012个月。在一个优选的实施方案中，本发明提供了向年龄为012个月的人类婴儿提供营养物的方法。在一个优选的实施方案中，本发明提供了向年龄为1236个月的人类幼童提供营养物的方法。本发明还提供了用于促进婴儿和/或幼童健康的方法，包括向婴儿和/或幼童施用包含非活的短双歧杆菌和非消化性寡糖A和/或B以及任选地C的组合物。因此，本发明还提供了用于促进婴儿和/或幼童健康的方法，包括步骤a)将i)特别是营养可接受的液体或可药用液体与ii)干的组合物(其中该干的组合物(ii)包含短双歧杆菌和非消化性寡糖A和/或B以及任选地C)混合，以及步骤b)向婴儿和/或幼童施用步骤a)中得到的组合物。施用包含非活的短双歧杆菌和非消化性寡糖的婴儿营养物有利地导致肠内微生物群的改善，其通过增加产乳酸细菌的数目和/或通过减少病原细菌的数目和/或通过激活免疫系统来实现。优选地，将包含非活的短双歧杆菌和非消化性寡糖A和/或B以及任选地C的婴儿和/或幼童营养物用于治疗和/或预防婴儿和/或幼童中的胃肠疾病和/或免疫疾病的方法，该方法包括向婴儿和/或幼童施用所述组合物。本发明的营养物可适当地治疗特别是过敏(更特别是食物过敏)、过敏性鼻炎、食物超敏反应、特应性皮炎(即过敏性或特应性湿疹，特别是由皮炎引起的瘙痒皮肤)、过敏性结膜炎、哮喘(特别是由哮喘引起的气喘)、腹泻、肠道炎症、感染、便秘、肠痉挛和/或绞痛。在一个优选的实施方案中，本发明提供了治疗和/或预防(食物)过敏、过敏性鼻炎、食物超敏反应、湿疹(即特应性皮炎)、哮喘、腹泻、肠炎和/或感染的方法。优选地，本发明提供了治疗和/或预防感染和/或腹泻的方法。在一个优选的实施方案中，本发明提供了治疗和/或预防(食物)过敏、哮喘和/或特应性皮炎的方法。这些疾病发病率的降低是由于改善了微生物群、改善了免疫系统和/或降低了变应原穿过肠道屏障的易位所致。在一个实施方案中，所述组合物用于改善婴儿和/或幼童的皮肤以及减轻婴儿和/或幼童的皮肤瘙痒。在一个实施方案中，所述组合物用于减轻婴儿和/或幼童的气喘。另外，向婴儿和/或幼童施用包含非活的短双歧杆菌和非消化性寡糖的营养物强化了免疫系统。在一个实施方案中，将包含非活的短双歧杆菌和非消化性寡糖A和/或B以及任选地C的婴儿和/或幼童营养物用于治疗或预防婴儿和/或幼童中全身性和/或呼吸道感染和/或炎症的方法，所述方法包括向婴儿和/或幼童施用所述婴儿营养物。优选地，将包含非活的短双歧杆菌和非消化性寡糖A和/或B以及任选地C的婴儿和/或幼童营养物用于治疗或预防婴儿和/或幼童中尿布皮炎(或尿布疹、尿湿疹等)的方法，所述方法包括向婴儿和/或幼童施用所述婴儿营养物。优选地，将包含非活的短双歧杆菌和非消化性寡糖A和/或B以及任选地C的婴儿和/或幼童营养物用于治疗或预防婴儿和/或幼童中绞痛和/或腹部痉挛、腹胀、肠胃气胀、腹痛、便秘、炎性肠病、肠易激综合征的方法，和/或用于改善骨矿化的方法，和/或预防晚年肥胖(特别是向心型肥胖(centralobesity))的方法，所述方法包括向婴儿和/或幼童施用所述婴儿营养物。在本文件中以及在权利要求中，动词“包含(包括)，，及其变化形式使用其非限制性含义，意指包括紧跟其后的项目，但是不排除未具体指出的项目。另外，无数量限定的要素不排除存在多于一个要素的可能性，除非上下文中明确要求存在一个或仅存在一个要素。因此，无数量限定通常是指“至少一个(种)”。实施例^MM1非活的短双歧杆Ifjl有抗过乍用雄性BALB/c小鼠(6_8周龄)从CharlesRiver(Someren,TheNetherlands)获得。使用随意提供的半合成食物(AING93)(基于AmericanlnstituteofNutrition(1993)的生长配方)和水，将小鼠单独饲养在II型笼中。将小鼠分成不同的处理组A-D(N=6)，再将每一组分为两群，每群3只动物。第二群的开始时间滞后一周。在第0天和第7天通过两次腹膜内注射进行主动致敏。用含有2.25mg氢氧化铝和2.25氢氧化镁作为佐剂(Aluminject,Pierce)、体积为100u1的磷酸盐缓冲液(PBS)通过腹膜内注射对阴性对照组(A组)的小鼠进行致敏。用含有2.25mg氢氧化铝和2.25mg氢氧化镁(Aluminject,Pierce)、体积为100μ1的PBS(0.2μm过滤)中的10μg卵清蛋白(OVA)通过腹膜内注射对其它组的小鼠进行致敏。最后一次注射(在第35、38和41天)的4周后，将B、C和D组的小鼠暴露于雾化卵清蛋白(10mg/ml)20分钟(总共3次，每次使用20分钟气雾)。将A组小鼠暴露于雾化盐水。气雾由与小鼠所在的macrolon笼相连的Jet喷雾器(PariIS_2，Pari-WerkGmbH,Starnberg,Germany，粒径23微米)产生。从第28天开始至第42天结束，每天如下经口处理小鼠A组和B组的小鼠接受200μ1NaCl/天。C组的小鼠接受200μ1盐水中IO9CFU短双歧杆菌M16-V；D组的小鼠接受与C组同样量的细菌，不同在于D组所接受的细菌在90°C热灭活10分钟。组合物C包含低于每克干重IO3Cfu的活的短双歧杆菌(即低于检测限)。组合物C包含其量相当于IO9Cfu短双歧杆菌的失活短双歧杆菌。在第41天，使用弹簧式卡尺(Mitutoyo，Veenendaal,TheNetherlands)测定基础耳厚度。随后，在利用异氟烷、O2和N2O麻醉动物后，通过向双耳的耳廓皮内注射20μ10VA(40yg/ml，在PBS中)来激发小鼠。在动物麻醉状态下，在OVA激发前以及激发后1、6和24小时对双耳进行Duplo测量。结果显示于表1中。与阳性对照(设定其为100%)相比，阴性对照显示耳厚度增加约20%。用活的短双歧杆菌处理显示耳厚度仅增加45%。这表明，与阳性和阴性对照相比，过敏反应减少约70%。非活的短双歧杆菌导致耳厚度增加60%。这表明，与阳性和阴性对照相比，过敏反应减少约52%。这些结果表明，非活的短双歧杆菌具有与活的短双歧杆菌细胞相当程度(约75%)的抗过敏和/或免疫改善作用。这是出人意料的，因为由于非活的短双歧杆菌不能通过改善菌群来起作用因而未预计到它具有这些作用。表1:balb/c小鼠中由针对卵清蛋白之过敏反应所致的耳厚度增加百分比。<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>*与阳性对照相比，ρ<0.05。实施例2与单一组分相比，非活的短双歧杆菌和非消化性寡糖的组合具有增强的抗过敏作用。CH3/He0uJ小鼠(3_5周龄)从CharlesRiver获得。使用随意提供的半合成、不含牛乳蛋白质的食物和水，将小鼠单独饲养在II型笼中。将小鼠分成不同的处理组A-E(N=6)2周。所述不同的处理组A-E(N=6)包括阴性对照组(A组)、阳性对照组(B组)、接受每克饮食2X109CFU短双歧杆菌M16-V(在90°C热灭活10分钟)的组(C组)、接受每克饮食20mg非消化性寡糖(T0S(来自VivinalG0S,BorculoDomo)和lcFOS(RaftilinHP,Orafti)，重量比为9/1)的组(D组)以及接受热灭活短双端菌和非消化性寡糖的组(E组)。因此，C组和D组的饮食包含其量相当于每克饮食2X109CFU的失活短双歧杆菌。所述组合物包含每克饮食低于1X103cfu活的短双歧杆菌(其低于检测限)。在第14、21、28、35、42和49天用0.5ml乳清蛋白(DMVInternational,Veghel,每毫升PBS中含40mg乳清蛋白，每毫升PBS中含20ug/ml霍乱毒素作为佐剂)通过胃内强饲进行主动致敏。用含有作为佐剂之霍乱毒素的PBS(磷酸盐缓冲液)对阴性对照组(A组)的小鼠进行致敏。在第54天，用20iU乳清蛋白(每毫升PBS中含有0.5mg蛋白质)经真皮内注射入左耳廓来激发A、B、C、D和E组的小鼠。在作为对照的右耳中注射PBS。在t=0和t=1时，使用数字测微器(Mitutuyo，Veenendaal)测量耳厚度两次。从t=1时左耳测量的厚度中减去t=0时和对照右耳的肿胀。结果显示于表2中。与阳性对照的159.9iim(其被设为100%)相比，阴性对照显示耳厚度增加36.0i!m(设为0%)。用非活的短双歧杆菌处理显示，耳厚度仅增加116.0umo这表明与阳性和阴性对照相比，过敏反应减少约35%。使用非消化性寡糖导致耳厚度增加103.8i!m。这表明与阳性和阴性对照相比，过敏反应减少约45%。非活的短双歧杆菌和非消化性寡糖的组合导致耳厚度仅增加80.4。这表明与阳性和阴性对照相比，过敏反应出人意料地减少64%。表2小鼠中由针对乳清蛋白之过敏反应所致的平均耳厚度增加。<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>*与阳性对照相比，p<0.05。这些结果表明，与单一组分相比，非消化性寡糖和非活的短双歧杆菌的组合具有出人意料的增强作用。这是出人意料的，因为失活短双歧杆菌不能代谢非消化性寡糖。实施例3含有短双歧杆菌的液体儿童乳液体的即食成长乳，其每100ml包含-67千卡_1.9g蛋白质(牛乳蛋白质)-8.lg可消化的碳水化合物(其中有7.8g乳糖)-3.0g脂肪_0.8g非消化性寡糖0.72来自VivivalG0S的低聚半乳糖0.08g来自RaftilinHP的果聚糖-相当于5.109cfu的热灭活短双歧杆菌pH约为6.7。1权利要求婴儿和/或幼童营养物，其包含非消化性寡糖A和/或B和非活的短双歧杆菌，并包含低于每克所述婴儿和/或幼童营养物干重103cfu的一定量活的短双歧杆菌，所述非消化性寡糖的聚合度为2～200，所述非活的短双歧杆菌的量相当于每克所述婴儿和/或幼童营养物干重103～1013cfu短双歧杆菌。2.根据权利要求1的营养物，其采用即食液体形式。3.根据权利要求1或2的营养物，其还包含经广泛水解和/或部分水解的蛋白质来源。4.根据前述权利要求中任一项的营养物，其在室温下至少6个月内为货架稳定的。5.根据前述权利要求中任一项的营养物，其为未经发酵的婴儿和/或幼童营养物。6.根据前述权利要求中任一项的营养物，其中所述营养物的pH为68。7.根据前述权利要求中任一项的营养物，其包含非消化性寡糖A和B，其中所述非消化性寡糖A和B的不同在于i)寡糖A的至少一种单糖相对于寡糖A总单糖单元的百分比，所述单糖比寡糖B中同种单糖的百分比高出至少40%(数目)；和/或ii)寡糖A的至少一种糖苷连接相对于寡糖A总糖苷连接的百分比，所述糖苷连接比寡糖B中同种糖苷连接的百分比高出至少40%；和/或iii)寡糖A的聚合度，所述寡糖A的聚合度比寡糖B的聚合度低至少5个单糖单元。8.根据前述权利要求中任一项的营养物，其中所述非消化性寡糖选自低聚果糖、非消化性糊精、低聚半乳糖、低聚木糖、低聚阿拉伯糖、低聚阿拉伯半乳聚糖、低聚葡萄糖、低聚葡甘露聚糖、低聚半乳甘露聚糖、低聚甘露聚糖、低聚壳糖、糖醛酸低聚糖、唾液酸低聚糖和低聚岩藻糖。9.根据前述权利要求中任一项的营养物，其中寡糖A和/或B的总单糖单元中至少60%(数目)是选自半乳糖、果糖和葡萄糖的单糖。10.根据前述权利要求中任一项的营养物，其包含寡糖A和B，其中寡糖A和B的重量比为19/11/19。11.根据前述权利要求中任一项的营养物，其中寡糖A是反式低聚半乳糖，寡糖B是低聚果糖。12.根据前述权利要求中任一项的营养物，其包含相对于所述婴儿和/或幼童营养物干重来说0.510wt.%的非消化性寡糖。13.根据前述权利要求中任一项的营养物，其还包含二十碳五烯酸(EPA)和/或二十二碳六烯酸(DHA)和/或花生四烯酸(ARA)。14.根据前述权利要求中任一项的营养物，其还包含550en%脂质、550en%蛋白质、1590en%碳水化合物。15.根据前述权利要求中任一项的营养物，其中所述非活的短双歧杆菌选自非活的短双歧杆菌菌株M-16V和短双歧杆菌菌株1-2219。16.根据前述权利要求中任一项的婴儿和/或幼童营养物用于制备向婴儿和/或幼童提供营养之组合物的用途。17.根据权利要求1-15中任一项的婴儿和/或幼童营养物用于制备治疗和/或预防过敏优选食物过敏和/或特应性疾病包括湿疹和/或哮喘之组合物的用途。18.根据权利要求1-15中任一项的婴儿和/或幼童营养物用于制备治疗和/或预防感染之组合物的用途。19.根据权利要求1-15中任一项的婴儿和/或幼童营养物用于制备治疗和/或预防尿布皮炎之组合物的用途。全文摘要公开了包含非活的短双歧杆菌(non-viableBifidobacteriumbreve)和非消化性寡糖的婴儿和/或幼童营养物及其用途。文档编号A23L1/308GK101801220SQ200880025644公开日2010年8月11日申请日期2008年6月13日优先权日2007年6月15日发明者扬·克诺尔,桑德·胡吉,约翰·加尔森,阿德里亚努斯·约翰尼斯·玛丽亚·夫里瑟马申请人:努特里希亚公司