本发明涉及保健品技术领域，尤其是涉及一种肠道益生菌的保存方法。
背景技术：
益生菌能通过提供酶来促进食物的消化，还可以生产一些保证身体健康的化合物；益生菌可以赶走和杀灭肠内的有害细菌，并能改善肠道内的ph值，从而调整身体内有害细菌产生的过度免疫反应，消除炎症，改善肠道功能。益生菌通常包含在乳制品中，最常见的含有有益于肠道微生物的乳制品要数酸奶居首，酸奶是常以牛奶、羊奶等经过巴氏灭菌后，经过接种乳酸菌发酵而制成。酸奶不仅口味香醇独特，还具有对人体较好的功能，能增强人体的免疫力等，因此，酸奶深受大众的喜爱，具有一定的市场经济价值。但酸奶的保存有一定的条件，其保质期短，一般在4℃保存益生菌的菌落数量含量变化很大，不够稳定，因此这就给在市场上流通带来了一定的难度，所以该如何延长酸奶的保存时间，且有效保持其保存过程中益生菌的活性成为关键问题。
现有技术公开的方法主要是将酸奶直接冷冻，这样能使其中的益生菌处于休眠状态，以至于能长期的保存酸奶，然而，经过冷冻的酸奶，由于温差的急剧变化，使其中大多的益生菌的胞体收到损伤，甚至死亡，从而导致益生菌的活率下降，也将使酸奶原本对人体有益的功能大打折扣。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种肠道益生菌的保存方法，本发明提供的肠道益生菌的保存方法保存时间长，活菌数高，
本发明提供了一种肠道益生菌的保存方法，包括如下步骤：
将酸奶与保护剂混合，得到混合物；所述保护剂选自葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖、铁皮石斛素和维生素c中的一种或几种；
将混合物梯度降温，冷冻保存；所述梯度降温的温度具体为：2℃～4℃保持3～12h，0℃保持3～12h，-2℃～-4℃保持3～12h，-6℃～-8℃保持3～12h，-10℃～-12℃保持3～12h。
优选的，所述梯度降温2℃～3℃保持3～10h，0℃保持3～10h，-2℃～-3℃保持3～10h，-6℃～-7℃保持3～10h，-10℃～-11℃保持3～10h。
优选的，所述冷冻保存的温度为-18℃～-20℃。
优选的，所述保护剂选自葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖、铁皮石斛素和维生素c中的两种或两种以上。
优选的，所述葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖和铁皮石斛素、维生素c的质量比为(50～100)：(5～10)：(5～25)：(5～15)：(200～600)。
优选的，所述葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖和铁皮石斛素、维生素c的质量比为(60～90)：(6～8)：(8～23)：(7～13)：(300～550)。
优选的，所述葡萄籽多糖在酸奶中的添加量为50～100μg/ml，所述枸杞多糖在酸奶中的添加量为5～10μg/ml。
优选的，所述香菇多糖在酸奶中的添加量为5～25μg/ml，所述铁皮石斛素在酸奶中的添加量为5～15μg/ml；所述维生素c在酸奶中的添加量为200～600μg/ml。
优选的，还包括将冷冻保存的酸奶梯度解冻；所述梯度解冻具体为：-2～0℃保持8～12h，而后置于2～8℃保存。
优选的，所述还包括将保护剂无菌过滤处理。
与现有技术相比，本发明提供了一种肠道益生菌的保存方法，包括如下步骤：将酸奶与保护剂混合，得到混合物；所述保护剂选自葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖、铁皮石斛素和维生素c中的一种或几种；将混合物梯度降温，冷冻保存；所述梯度降温的温度具体为：2℃～4℃保持3～12h，0℃保持3～12h，-2℃～-4℃保持3～12h，-6℃～-8℃保持3～12h，-10℃～-12℃保持3～12h。本发明提供的上述保护剂可以很好的保持益生菌的活性，使得本发明的益生菌保存时间长；同时本发明采用特定温度的梯度降温的具体方式，避免益生菌的胞体受到损伤，提高活菌率和保存时间。
附图说明
图1为本发明实施例和比较例酸度测定结果。
具体实施方式
本发明提供了一种肠道益生菌的保存方法，包括如下步骤：
将酸奶与保护剂混合，得到混合物；所述保护剂选自葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖、铁皮石斛素和维生素c中的一种或几种；
将混合物梯度降温，冷冻保存；所述梯度降温的温度具体为：2℃～4℃保持3～12h，0℃保持3～12h，-2℃～-4℃保持3～12h，-6℃～-8℃保持3～12h，-10℃～-12℃保持3～12h。
本发明提供的肠道益生菌的保存方法首先将酸奶与保护剂混合，得到混合物。
本发明对于酸奶的具体种类不进行限定，本领域技术人员熟知的酸奶即可。对于上述任何种类酸奶，本发明的保护剂以及保存方式均适用。
在本发明中，所述保护剂选自葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖、铁皮石斛素和维生素c中的一种或几种；优选选自葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖、铁皮石斛素和维生素c中的两种或两种以上；更优选为葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖、铁皮石斛素和维生素c。
在本发明中，本发明对于所述葡萄籽多糖的来源不进行限定，可以用本领域技术人员熟知的方法提取，也可以市售。
多糖是生物体内一类重要的大分子，其种类繁多、结构复杂、功能多样,是一切生命有机体必不可少的重要组成成分，与维持生命所必须的生物机能密切相关。多糖有多种多样的生物活性,越来越多的研究证明:多糖是非特异性的免疫调节剂(生物效应调节剂brm),它主要影响网状内皮系统(res)、巨噬细胞(mφ)、淋巴细胞、白细胞以及rna、dna、蛋白质的合成,camp(环化腺苷-磷酸)与cgmp(环化鸟苷-磷酸)的含量，抗体的生成、补体的形成以及干扰素(ifn)的诱生,并具有抗肿瘤、抗炎、抗衰老、抗凝血、抗病毒、抗放射、降血糖、降血脂等活性,而且多糖对机体几乎无毒副作用，随着研究的深入,多糖在医疗上的价值越来越重要，新的用途不断被发现。此外多糖在日用化妆品方面,在食品工业、发酵工业及石油工业等行业上也有着广泛的应用。
葡萄籽是葡萄酒厂的下脚料，经晒干后分离葡萄皮、葡萄梗后所得产物。葡萄籽含有丰富各种氨基酸、维生素及矿物质等。葡萄籽油因其具有保健、美容之功效，所以价格非常昂贵。本发明采用葡萄籽多糖，与其余组分配合作用，可以良好的保存益生菌，提高益生菌的活性。
枸杞多糖是从枸杞中提取而得的一种水溶性多糖。该多糖系蛋白多糖，由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、鼠李糖6种单糖成分组成。经研究表明，枸杞多糖是枸杞子调节免疫、延缓衰老的主要活性成分，可改善老年人易疲劳、食欲不振和视力模糊等症状，并具有降血脂、抗脂肪肝、抗衰老等作用。本发明采用枸杞多糖，与其余组分配合作用，可以良好的保存益生菌，提高益生菌的活性。
香菇多糖是从优质香菇子实体中提取的有效活性成分，香菇多糖中的活性成分是具有分支的β-(1-3)-d-葡聚糖，主链由β-(1-3)-连接的葡萄糖基组成，沿主链随机分布着由β-(1-6)连接的葡萄糖基，呈梳状结构。临床与药理研究表明，香菇多糖具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等作用。本发明采用香菇多糖，与其余组分配合作用，可以良好的保存益生菌，提高益生菌的活性。
铁皮石斛为兰科石斛兰属多年生草本植物，喜在温暖、潮湿、半阴半阳的环境中生长。分布于福建、浙江、广西、云南等地。《中国药典2005年版》石斛功能:益胃生津，滋阴清热。本发明采用铁皮石斛素，与其余组分配合作用，可以良好的保存益生菌，提高益生菌的活性。
维生素c(vitaminc，ascorbicacid)又叫l-抗坏血酸，是一种水溶性维生素。食物中的维生素c被人体小肠上段吸收。一旦吸收，就分布到体内所有的水溶性结构中，正常成人体内的维生素c代谢活性池中约有1500mg维生素c，最高储存峰值为3000mg维生素c。正常情况下，维生素c绝大部分在体内经代谢分解成草酸或与硫酸结合生成抗坏血酸-2-硫酸由尿排出；另一部分可直接由尿排出体外。
本发明对于所述枸杞多糖、香菇多糖和铁皮石斛素、维生素c的来源不进行限定，本领域技术人员熟知的方法制备提取或者市售均可。优选为市售。
在本发明的一部分实施例中，葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖和铁皮石斛素、维生素c的质量比为(50～100)：(5～10)：(5～25)：(5～15)：(200～600)。
在本发明的一部分实施例中，葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖和铁皮石斛素、维生素c的质量比为(60～90)：(6～8)：(8～23)：(7～13)：(300～550)。
在本发明的一部分实施例中，葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖和铁皮石斛素、维生素c的质量比为(65～85)：(6～7)：(9～20)：(8～11)：(350～500)。
在本发明的一部分实施例中，葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖和铁皮石斛素、维生素c的质量比为(70～80)：(6～7)：(10～18)：(9～11)：(400～500)。
在本发明的一部分实施例中，葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖和铁皮石斛素、维生素c的质量比为(70～75)：(6～7)：(10～15)：(9～10)：(400～450)。
在本发明中，本发明对于葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖和铁皮石斛素、维生素c在酸奶中的添加量不进行限定，本领域技术人员可以根据具体实际生产状况、产品要求以及质量要求进行选择和调整。
优选具体为：
所述葡萄籽多糖在酸奶中的添加量优选为50～100μg/ml，更优选为60～90μg/ml，最优选为65～85μg/ml，最最优选为70～80μg/ml。
所述枸杞多糖在酸奶中的添加量优选为5～10μg/ml，更优选为6～8μg/ml；最优选为6～7μg/ml。
所述香菇多糖在酸奶中的添加量优选为5～25μg/ml，更优选为8～23μg/ml，最优选为9～20μg/ml，最最优选为10～18μg/ml。
所述铁皮石斛素在酸奶中的添加量优选为5～15μg/ml；更优选为7～13μg/ml，最优选为8～11μg/ml，最最优选为9～11μg/ml。
所述维生素c在酸奶中的添加量优选为200～600μg/ml，更优选为300～550μg/ml，最优选为350～500μg/ml，最最优选为400～500μg/ml。
上述葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖和铁皮石斛素、维生素c在酸奶中的添加之前优选经过无菌过滤处理。
本发明对于所述无菌过滤的具体方式不进行限定，本领域技术人员熟知的即可。
得到混合物后，将混合物梯度降温，冷冻保存。
在本发明中，所述梯度降温的温度具体为：2℃～4℃保持3～12h，0℃保持3～12h，-2℃～-4℃保持3～12h，-6℃～-8℃保持3～12h，-10℃～-12℃保持3～12h。
所述梯度降温优选具体为：2℃～3℃保持3～10h，0℃保持3～10h，-2℃～-3℃保持3～10h，-6℃～-7℃保持3～10h，-10℃～-11℃保持3～10h。
更优选具体为：2℃～3℃保持4～9h，0℃保持4～9h，-2℃～-3℃保持4～9h，-6℃～-7℃保持4～9h，-10℃～-11℃保持4～9h。
最优选具体为：2℃～3℃保持5～8h，0℃保持5～8h，-2℃～-3℃保持5～8h，-6℃～-7℃保持5～8h，-10℃～-11℃保持5～8h。
最最优选具体为：2℃～3℃保持6～7h，0℃保持6～7h，-2℃～-3℃保持6～7h，-6℃～-7℃保持6～7h，-10℃～-11℃保持6～7h。
梯度降温后，冷冻保存，冷冻保存的温度优选为-18℃～-20℃；更优选为-19℃～-20℃。
通过本发明特定的保护剂与特定的梯度降温，冷冻保存，使得益生菌保存时间长，活菌数高。
在本发明中，在使用时，将冷冻保存的酸奶梯度解冻即可。
所述将冷冻保存的酸奶梯度解冻优选具体为：-2～0℃保持8～12h，而后置于2～8℃保存；更优选具体为：-1～0℃保持8～12h，而后置于3～7℃保存；最优选具体为：-1～0℃保持9～11h，而后置于4～6℃保存。
本发明提供了一种肠道益生菌的保存方法，包括如下步骤：将酸奶与保护剂混合，得到混合物；所述保护剂选自葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖、铁皮石斛素和维生素c中的一种或几种；将混合物梯度降温，冷冻保存；所述梯度降温的温度具体为：2℃～4℃保持3～12h，0℃保持3～12h，-2℃～-4℃保持3～12h，-6℃～-8℃保持3～12h，-10℃～-12℃保持3～12h。本发明提供的上述保护剂可以很好的保持益生菌的活性，使得本发明的益生菌保存时间长；同时本发明采用特定温度的梯度降温的具体方式，避免益生菌的胞体受到损伤，提高活菌率和保存时间。
为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的肠道益生菌的保存方法进行详细描述。
实施例1
将需要冻存的酸奶里加入经过无菌过滤处理的葡萄籽多糖、枸杞多糖、铁皮石斛素及维生素c，在酸奶中的添加浓度为：葡萄籽多糖：50ug/ml，枸杞多糖：5ug/ml，香菇多糖：5ug/ml，铁皮石斛素：5ug/ml，维生素c：0.2mg/ml。
将上述预处理后的酸奶降温，首先将上述预处理过的酸奶依次置于4℃、0℃、-2℃、-6℃、-10℃中各3h，而后置于-18℃中冷冻保存。保存过程中，每天测定活菌数，共测定7天。
测定时，直接将冷冻的酸奶转至0℃放置8h，再将其置于2℃中保存测定。结果如表1和表2所示，表1为本发明实施例和比较例活菌数测定结果。表2为本发明实施例和比较例酸度测定结果。
实施例2
将需要冻存的酸奶里加入经过无菌过滤处理的葡萄籽多糖、枸杞多糖、铁皮石斛素及维生素c，在酸奶中的添加浓度为：葡萄籽多糖：60ug/ml，枸杞多糖：6ug/ml，香菇多糖：8ug/ml，铁皮石斛素：7ug/ml，维生素c：0.3mg/ml。
将上述预处理后的酸奶降温，首先将上述预处理过的酸奶依次置于3℃、0℃、-2℃、-6℃、-10℃中各5h，而后置于-18℃中冷冻保存。保存过程中，每10天测定活菌数，共测定30天。
测定时，直接将冷冻的酸奶转至0℃放置8h，再将其置于2℃中保存测定。结果如表1和表2所示，表1为本发明实施例和比较例活菌数测定结果。表2为本发明实施例和比较例酸度测定结果。
实施例3
将需要冻存的酸奶里加入经过无菌过滤处理的葡萄籽多糖、枸杞多糖、铁皮石斛素及维生素c，在酸奶中的添加浓度为：葡萄籽多糖：75ug/ml，枸杞多糖：7.5ug/ml，香菇多糖：15ug/ml，铁皮石斛素：10ug/ml，维生素c：0.4mg/ml。
将上述预处理后的酸奶降温，首先将上述预处理过的酸奶依次置于3℃、0℃、-3℃、-7℃、-11℃中各7.5h，而后置于-19℃中冷冻保存。
测定时，直接将冷冻的酸奶转至0℃放置10h，再将其置于4℃中保存测定。结果如表1和表2所示，表1为本发明实施例和比较例活菌数测定结果。表2为本发明实施例和比较例酸度测定结果。
实施例4
将需要冻存的酸奶里加入经过无菌过滤处理的葡萄籽多糖、枸杞多糖、铁皮石斛素及维生素c，在酸奶中的添加浓度为：葡萄籽多糖：80ug/ml，枸杞多糖：8ug/ml，香菇多糖：18ug/ml，铁皮石斛素：11ug/ml，维生素c：0.5mg/ml。
将上述预处理后的酸奶降温，首先将上述预处理过的酸奶依次置于3℃、0℃、-3℃、-7℃、-11℃中各8h，而后置于-19℃中冷冻保存。
测定时，直接将冷冻的酸奶转至0℃放置10h，再将其置于4℃中保存测定。结果如表1和表2所示，表1为本发明实施例和比较例活菌数测定结果。表2为本发明实施例和比较例酸度测定结果。
实施例5
将需要冻存的酸奶里加入经过无菌过滤处理的葡萄籽多糖、枸杞多糖、铁皮石斛素及维生素c，在酸奶中的添加浓度为：葡萄籽多糖：100ug/ml，枸杞多糖：10ug/ml，香菇多糖：25ug/ml，铁皮石斛素：15ug/ml，维生素c：0.6mg/ml。
将上述预处理后的酸奶降温，首先将上述预处理过的酸奶依次置于2℃、0℃、-4℃、-8℃、-12℃中各12h，而后置于-20℃中冷冻保存。
测定时，直接将冷冻的酸奶转至0℃放置12h，再将其置于8℃中保存测定。结果如表1和表2所示，表1为本发明实施例和比较例活菌数测定结果。表2为本发明实施例和比较例酸度测定结果。
比较例1
将需要冻存的酸奶置于4℃中冷冻保存测定。结果如表1和表2所示，表1为本发明实施例和比较例活菌数测定结果。表2为本发明实施例和比较例酸度测定结果。
比较例2
将需要冻存的酸奶里加入经过无菌过滤处理的葡萄籽多糖、枸杞多糖、铁皮石斛素及维生素c，在酸奶中的添加浓度为：葡萄籽多糖：75ug/ml，枸杞多糖：7.5ug/ml，香菇多糖：15ug/ml，铁皮石斛素：10ug/ml，维生素c：0.4mg/ml。将其置于4℃的环境中保存测定。结果如表1和表2所示，表1为本发明实施例和比较例活菌数测定结果。表2为本发明实施例和比较例酸度测定结果。
比较例3
将需要冻存的酸奶依次置于3℃、0℃、-3℃、-7℃、-11℃中各7.5h，于-19℃中冷冻保存。需要使用时，直接将冷冻的酸奶转至0℃放置10h，再将其置于4℃中保存测定。结果如表1和表2所示，表1为本发明实施例和比较例活菌数测定结果。图1为本发明实施例和比较例酸度测定结果。
表1本发明实施例和比较例活菌数测定结果
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。