本发明属于动物免疫
技术领域：
，涉及一种动物免疫增强剂，具体涉及一种增强鸡免疫力的中草药添加剂。
背景技术：
：随着养殖产业的集约化、规模化发展，动物疫情直接关系到养殖的成败，控制动物疫情，发展健康养殖成为养殖业的重要课题。养鸡业中每年都会由于疫病造成巨大的经济损失，据测算，2013年禽流感造成肉鸡鸡苗直接损失超过37亿元，活鸡及鸡肉产品销售损失超过130亿元，生产中常常用疫苗来预防鸡的各种传染病，但近些年中更是普遍存在着免疫接种后传染病仍然暴发流行，加大用药量也达不到理想的治疗效果，仍然会被病毒感染而致病，其主要原因之一是免疫功能下降。因此，探索如何提高动物机体自身抵抗力，有效预防疾病，是当前一项紧迫的技术任务。中草药属于天然、绿色药物，对动物及人类安全性高，符合国际兽医学发展趋势。作为免疫增强剂在提高畜禽机体免疫力、防治疾病等方面，具有独特作用，受到了大量学者的重视。然而目前的提高鸡免疫力的中草药一般是将多种中草药组分简单混合后煎制或打粉，一方面不能充分发挥其疗效，更未充分发挥组分之间的配伍协调增效，导致疗效不理想，实际使用效果不尽人意，即使是味数很多、配方复杂的中草药，除成本较高、制备复杂等，效果不理想的同时还增加了效果中的不确定性因素。因此，深入研究中医理论，并结合实际试验，科学选择组分、优化比例配合精致效果优良的中草药组合物类添加剂，是提高鸡免疫力的有效途径，对养殖产业防控动物疫病具有重大意义。技术实现要素：本发明为解决现有鸡免疫增强剂成分复杂、效果差的技术问题，提供一种增强鸡免疫力的中草药添加剂，以扶正固本，补中益气，提高机体免疫力为组方原则，以紫锥菊和黄芪作为主要成分，辅以当归、石菖蒲和炙甘草，调和诸药，实现扶正祛邪、清除细菌、病毒和增强机体抵抗力，防止感染疫病的目的。本发明采用的技术方案是：一种增强鸡免疫力的中草药添加剂，所述添加剂原料中包括以下质量份数的组分：紫锥菊5～6份、黄芪3～4份、当归2～3份、石菖蒲1～2份、炙甘草1～2份。优选的，所述添加剂原料中包括以下质量份数的组分：紫锥菊5份、黄芪3份、当归3份、石菖蒲2份、炙甘草1份。优选的，所述中草药添加剂为散剂或颗粒剂。优选的，所述中草药添加剂制备方法包括以下步骤：(1)备料：将紫锥菊、黄芪、当归、石菖蒲、甘草分别除杂、清洗并干燥，备用；(2)制备炙甘草：将炼蜜和水以质量比1:1-1.5混匀成蜜汁，加热至蜜汁沸腾，加入干燥的甘草，静置30-60min，再以文火翻炒3-10min，55-70℃干燥至不粘手，制得炙甘草；(3)按质量份称取紫锥菊5～6份、黄芪3～4份、当归2～3份、石菖蒲1～2份和炙甘草1～2份加入至中药超微粉碎机，粉碎30s-1min，得中草药添加剂。本发明还提供一种增强鸡免疫力的饲料，所述饲料中含有0.5~1.5wt.%上述任一所述的中草药添加剂。上述技术方案中，紫锥菊是原产于美洲的一类菊科野生花卉，具有增强细胞免疫和体液免疫、抗菌、抗病毒的作用，主要活性成分是多糖、糖蛋白、咖啡酸衍生物和烷基酰胺类，菊苣酸作为咖啡酸衍生物的主要成分，具有增强免疫和抗炎功效，并能抑制透明质酸酶；紫锥菊的根和地上部分所含的多元不饱和异丁基酰胺，具有免疫调节功能，可阻止病原体引起的炎症，有较强的抗炎活性，还具有抗生素样作用，可用于细菌感染，研究表面紫锥菊可刺激机体免疫系统从而增强机体对细菌和病毒感染的抵抗力。黄芪具有补气固表、托毒生肌、利水的功效，“可治一切气衰血虚之证”。现代药理研究表明黄芪具有免疫刺激、抗病毒、抗氧化和抗肿瘤的作用，对正常机体的抗体生成功能有明显促进作用。黄芪主要含皂苷类、黄酮类、多糖类及氨基酸类等，黄芪多糖具有免疫调节效果而且无副作用的产生，黄芪皂昔能明显促进b细胞增殖分化和浆细胞抗体合成。动物试验表明，黄芪能够促进t淋巴细胞增殖，增强单核-巨噬细胞的吞噬功能，诱生干扰素，促进nk细胞活性，提高淋巴细胞补体受体活性，还有显著的抗病毒感染作用。当归有滋补壮阳、扶正固本补、血和血及活血化淤和润燥滑肠等功效，对骨髓造血祖细胞具有明显的增殖作用，可显著增加血红蛋白含量和红细胞数，而红细胞是重要的天然免疫细胞，当归能够增强红细胞免疫能力，从而增强机体免疫力发挥其抗肿瘤作用。研究证明当归可以改善造血微环境，增强造血细胞表面黏附分子的表达，促进造血调控因子的表达，促进细胞因子的生成，激活补体系统，促进抗体的产生，从而对免疫系统发挥多方面调节作用。石菖蒲是天南星科植物，其主要成分为含有细辛醚和β-细辛醚的挥发油、氨基酸和糖类，具有宣窍豁痰，化湿开胃作用，内服可以促进消化液分泌，制止胃肠异常发酵。石菖蒲具有抗惊厥作用，能够安神镇静，同时具有降温、抗肿瘤作用；且石菖蒲还具有一定的免疫调节作用，可避邪气，防疫病感染，可提高免疫抑制小鼠的胸腺指数和脾脏指数，从而提高机体的免疫力。甘草以调和诸药、解百毒而享有盛名，含甘草甜素、甘草次酸、甘草醇、异甘草醇、香豆素、生物碱等多种有效成分。临床应用分“生用”与“蜜炙”之别，生用与炙用疗效确有不同。甘草生用性平，以泻火解毒，祛痰止咳为主；炙甘草味甘性温，以补中益气，缓急止痛为主。研究发现炙甘草具有抗炎及抗变态反应的作用，可调节机体的免疫功能，甘草素增强同种异体t细胞的增殖，提高干扰素-γ和il-10的表达，降低il-4的表达，促进1型辅助性t细胞免疫反应；甘草酸和甘草次酸具有抗炎症、抗氧化、抗肿瘤、抗微生物、抗病毒及免疫调节等作用。在机体正常情况下，甘草次酸可以增强免疫反应；在炎症状态下，甘草次酸可以抑制过激的炎症反应；甘草黄素能够增强cd4+t细胞免疫反应，提高ifn-γ和il-2的表达；甘草多糖能够增强卵清蛋白诱导产生的抗体水平以及ifn-γ的表达，增强了机体的免疫反应。本发明以扶正固本，补中益气，提高机体免疫力为组方原则，以紫锥菊和黄芪作为主要药物组成，以黄芪补中益气，扶正祛邪，调节机体免疫功能，增强紫锥菊的抗菌、抗病毒功效，综合增强免疫力；以当归激活补体系统，促进抗体的产生，配伍黄芪，具有增强免疫和促进造血的双重功效，黄芪、当归配伍合用后协同增效，共同提高药物的生物活性，如黄芪中的活性成分黄芪甲苷以及毛蕊异黄酮在胃肠运转时，受到跨膜能力和外排蛋白的限制，而当归中的挥发油成分具有增强吸收的功能，从而保证了黄芪甲苷的有效量。实验研究发现，il-2、il-6、il-10仅在当归黄芪共煎的条件下，显现出特殊的活性，且两药共用时，机体的白细胞介素-2（il-2）分泌量增加3倍，白细胞介素-6（il-6）和白细胞介素-10（il-10）增加20倍，这些作用能显著提高t-淋巴细胞的增殖率，最终黄芪当归配伍既能补气促进造血又能增强免疫。进一步巧妙科学选择石菖蒲，能促进肉鸡的采食量，改善动物食欲不振、饮食甚少和胃脘呆滞的症状，从而提高生产性能，同时安神镇静，润五脏，裨六腑，石菖蒲性辛、温，配以黄芪、当归、甘草等温性补益药，相得益彰，在本身具有免疫调节的功能基础之上大大提高了各药的吸收效率，增强各药效的充分发挥，从而使机体免疫力快速恢复及提高，综合效果大大提高；炙甘草调和诸药，在抗炎症、抗氧化、抗病毒及调节免疫同时增强各药物疗效，诸药合用，扶正祛邪，从而达到清除细菌、病毒，增强机体抵抗力，防止感染疫病的目的。本发明的有益效果是：（1）本发明提供的中草药复方制剂配伍科学，协同作用，能显著提高鸡的自身免疫功能，大大增强了机体综合体质，保护鸡禽免受病毒、疫病等的感染；（2）本中草药复方制剂不添加抗生素和其他化学合成抗菌药等化学药品，禽产品中无药物残留，大大提高了人类食品安全，对食品安全具有重要意义，绿色、环保；（3）进一步改进的技术方案中，超微粉散剂大大提高中草药利用率，减少使用量，降低副作用，降低浪费；（4）本中草药复方制剂配料及生产工艺简单、成本较低，经济效益好，适用于工业化生产和大范围推广，应用前景广阔。具体实施方式本发明利用我国丰富的中草药资源，依据现代中医药理论，科学组方配伍，研制出复方的增强鸡免疫力的中草药添加剂，以下通过具体实施例及试验说明本中草药添加剂的组成及其不同剂量添加饲喂雏鸡后对雏鸡免疫器官及抗体水平的影响，以试验该中草药添加剂应用于增强鸡免疫力的效果，以更好的理解本发明，其中所涉及的原料，如无特别说明，均可从商业途径获得，所涉及的实验方法、操作方法，如无特别说明均为常规手段。用于增强鸡免疫力的中草药添加剂的组成配伍示例参见表1所示。表1增强鸡免疫力的中草药添加剂组成配伍示例（重量份数比）组分配伍1配伍2配伍3配伍4紫锥菊5566黄芪3434当归2233石菖蒲1222炙甘草1221上述用于增强鸡免疫力的中草药添加剂，制备方法如下：(1)备料：将紫锥菊、黄芪、当归、石菖蒲、甘草分别清捡去除杂碎等不合格个体，然后清洗1-2次，自然晾干或40-60℃烘干，备用；(2)制备炙甘草：将炼蜜和水以质量比1:1-1.5混匀成蜜汁，加热至蜜汁沸腾，加入干燥的甘草，其中甘草与炼蜜质量比为1:0.8-1.2，静置30-60min以使蜜汁充分浸泡甘草，再以文火翻炒3-10min，至所有甘草均匀挂蜜汁，55-70℃干燥至不粘手，制得炙甘草；(3)按质量份称取紫锥菊、黄芪、当归、石菖蒲和炙甘草，一并加入至中药超微粉碎机，粉碎30s-1min，得中草药添加剂。制成散剂为超微粉散剂，粒径优选小于100μm、40μm、10μm，甚至达到1μm以下，超微粉散剂比表面积增大，可提高中药材的利用率，增强药物疗效；进一步的，超微粉散剂中的中药材多为破壁药物，更进一步提高了中药材的利用率，增强药物疗效。试验1本发明中草药添加剂对法氏囊疫苗免疫效果的影响1日龄白羽肉雏鸡正常饲养至6日龄，选体重、发育及健康状况接近的300只，随机等分为a、b、c、d、e和f共6个大组，每组50只，a、b、c、d、e为用药组，f为对照组。6日龄肉雏鸡开始饲喂添加本发明中草药添加剂的饲料，各组饲喂用药情况如下表2所示，连续饲喂7天，期间自由饮水，不认为惊扰鸡群，常规饲养管理。13日龄对各组鸡进行法氏囊弱毒苗接种免疫，两倍剂量滴鼻点眼。于不同日龄测定免疫相关指标，见1.1、1.2及1.3部分。表2试验分组及各组饲喂用药情况1.1免疫器官指数的测定在21，28，35，42日龄，试验各组随机选取10只鸡，称体重，进一步剖取法氏囊、脾脏，并以电子天平称重，计算脾脏指数、法氏囊指数，结果见表3、表4。计算公式：脾脏指数=脾脏重（mg）/体重（g），法氏囊指数=法氏囊重（mg）/体重（g）表3不同日龄各组脾脏指数比较不同日龄，各用药组脾脏指数均显著高于对照组，说明本发明中草药添加剂能促进脾脏的成长发育。表1中各用药组分别和对照组差异比较，在21日龄、28日龄、42日龄极显著高于对照组（p<0.01），在35日龄时差异不显著（p>0.05），比较a、b与c组可见，在基础饲料中分别添加1wt.%、1.5wt.%配伍2所示添加剂的a、b组，在21及42日龄测试中，其脾脏指数大大高于c组，在28、35日龄测试的脾脏指数，a、b及c组差异不显著，综合比较可见相比较对照组，b组对脾脏指数的提高最为显著，在21日龄、28日龄、42日龄时分别高于对照组16.7%、20.4%和38.1%。表4不同日龄各组法氏囊指数比较表4表明，各用药组的法氏囊指数均显著高于对照组，说明本发明中草药添加剂能促进法氏囊的成长发育。在21日龄、28日龄、35日龄、42日龄，各用药组法氏囊指数均极显著高于对照组（p<0.01）。在基础饲料中添加配伍2所示添加剂的a、b和c组中，b组相对于对照组提高效果最为明显，分别提高40.8%、32.2%、40.7%和27.4%。1.2elisa测定外周血中ibdv抗体在20、27、34日龄，各组随机取10只肉鸡，翅静脉采血，3000r/m离心15min，吸取血清检测ibdv抗体。按照试剂盒说明书操作，试剂盒反应终止后，在酶标仪450nm波长处测定吸光度（opticaldensity,od)值，利用已知浓度的标准样品od值绘制标准曲线，据此标准曲线计算各细胞因子含量。表5不同日龄各组ibdv抗体滴度（log10）比较由表5可以看出，由于13日龄免疫鸡传染性法氏囊弱毒苗，在肉鸡体内存在的仍然是母源抗体，所以同对照组相比，不同剂量组、添加不同配伍添加剂实验组之间的抗体水平没有差异。20日龄、27日龄和34日龄时饲喂药物的五个实验组产生的抗体均明显高于对照组（p<0.01）。在基础饲料中添加配伍2所示添加剂的a、b和c组中，中、高剂量的b、c组抗体显著高于低剂量的a组（p<0.01）。中、高剂量的b、c组间没有差异，中剂量b组在34日龄时相对于对照组提高达21.9%。1.3流式细胞仪检测外周血中cd4+/cd8+t淋巴细胞的含量20日龄、27日龄、34日龄检测外周血中cd4、cd8含量。表6不同日龄各组cd4+，cd8+含量比较20日龄时，在免疫ibdv疫苗一周后，用药组均可升高外周血中的cd4+t淋巴细胞亚群的含量，其中b组、c组和e组显著高于对照组（p＜0.01），含量约是对照组的3倍之多，低剂量的a组和d组cd4+t淋巴细胞亚群的含量是对照组的2倍之多；同时各个剂量组对cd8+t淋巴细胞亚群也有促进作用。a组、b组和对照组比较只有轻微的提高，c组则明显高于对照组，高于对照组50%，差异极显著（p＜0.01）。可见，食用本申请的中草药添加剂对鸡免疫系统免疫细胞数量上提高十分明显。27日龄时各组的cd4+、cd8+的含量比20日龄综合比较是有所下降。但是各用药组仍高于对照组，b、c组与对照组差异显著（p＜0.05）。34日龄时各用药组cd4+、cd8+的含量均有下降，可能是由于药物作用的消退，其中c组cd4+含量同对照组比较差异显著（p＜0.05），b组cd8+含量同对照组比较差异显著（p＜0.05）。试验2验证本发明中草药添加剂对新城疫疫苗的免疫增强效果将经预备饲养至7日龄的白羽肉雏鸡120只，随机分成a、b、c、d共4个组，每组30只，饲喂配伍2所示的中草药添加剂。a组为低剂量组（基础饲料中含1wt.%添加剂1%），b组为中剂量组（基础饲料中含1.5wt.%添加剂），c组为高剂量组（基础饲料中含3.0%添加剂），d组为对照组（基础饲料）。用药组从7日龄开始给药，连续给药15d，对照组不添加任何药物，各组采取相同的常规饲养管理条件，试验用雏鸡于7、21日龄用新城疫lasoat疫苗常规免疫，并分别于14、21、28、35日龄各机选取15只采血，剩余15只分别于42、49、56、63日龄采血，分离血清，按常规方法用96孔“v”形血凝板进行血凝抑制试验（hi），ndv血清抗体的血凝抑制效价以log2表示。表7不同日龄不同剂量各组鸡hi抗体效价（log2）组别14日龄21日龄28日龄35日龄42日龄49日龄56日龄63日龄a6.0±1.184.7±1.175.8±0.567.6±0.847.5±1.217.7±0.777.6±0.447.5±0.67b5.7±0.325.4±1.496.7±0.788.0±0.578.6±0.439.0±0.348.5±0.588.2±1.78c5.2±0.454.3±0.486.3±1.727.2±0.997.6±0.387.4±1.068.0±0.417.6±0.23d5.3±1.164.2±0.556.1±0.477.0±0.347.3±1.097.1±0.947.3±1.237.2±0.87从上述两表可以看出，饲喂本发明中草药添加剂的a、b、c组对nd抗体水平有一定提高作用，其中以b组1.5wt.%添加量效果最佳。从21日龄开始抗体水平与对照组比较差异显著（p＜0.05），49日龄抗体水平达到最高9.0log2，比对照组高出1.9个滴度，对免疫增强效果提高约27%，对鸡免疫力的增强效果十分显著。而且用药组抗体维持的时间更长，至63日龄试验结束时，b组的抗体水平仍维持在8.2log2，比对照组高出1.0个滴度，对免疫增强效果提高约14%。试验3本发明中草药添加剂对肉鸡生产性能的影响将饲养至7日龄的白羽肉雏鸡120只，随机分成a、b、c、d共4个组，每组30只，饲喂配伍2所示的中草药添加剂。a组为低剂量组（基础饲料中含1wt.%添加剂1%），b组为中剂量组（基础饲料中含1.5wt.%添加剂），c组为高剂量组（基础饲料中含3.0%添加剂），d组为对照组（基础饲料）。用药组从7日龄开始给药，连续给药至实验结束，对照组饲喂不添加任何药物的基础饲料，各组采取相同的常规饲养管理条件，记录每天各组的饲喂量，每周每剂量组进行称重，计算增重率、料肉比，料肉比=饲料重/体重。在实验中，分别于13、20、27、34、41日龄进行了5次称重，体重增重率及料肉比测定结果分别见表8及表9。表8不同日龄不同剂量各组鸡增重比较（g）组别13日龄20日龄27日龄34日龄41日龄a288.1±22.4590.4±16.6993.1±30.31307.9±18.51753.1±44.8b340.7±21.9641.1±29.81046.6±22.71348.5±10.11911.8±33.9c321.5±32.6620.3±28.31009.5±33.31307.2±44.01835.3±29.8d270.3±12.9577.4±19.7979.6±20.51207.2±28.11500.3±50.2表9不同日龄不同剂量各组鸡料肉比比较组别13日龄20日龄27日龄34日龄41日龄a1.39±0.891.40±0.561.63±1.231.79±1.172.40±1.33b1.37±0.891.44±0.561.61±1.231.83±1.172.34±1.33c1.38±0.891.58±0.561.76±1.231.86±1.172.48±1.33d1.53±0.891.74±0.561.83±1.232.15±1.172.52±1.33表9数据可见，各用药组鸡增重均高于对照组，b组中剂量组明显高于其它两个用药组，与对照组及a、c组差异极显著（p＜0.01），说明本发明中草药添加剂能够促进肉鸡的增重，但不随剂量呈梯度递增，可能是由于剂量太大影响了鸡的采食量。表10数据可见各日龄不同剂量用药组的料肉比均显著低于对照组（p＜0.05），说明本发明中草药添加剂能提高肉鸡饲料转化率，a组、b组之间差异不显著（p>0.05）。综合上述试验发现，添加1wt.%-1.5wt.%本发明的中草药添加剂，对体现鸡免疫力的各项相关指标均有显著提高，对鸡的生产性能明显增高，还大大提高了饲料转化率，且本发明中草药添加剂组分简单、配伍更优化科学、制备方法简单、成本低，能大大提高养殖户的经济效益，同时保证了产品质量，对人类健康意义重大。当前第1页12