本发明涉及水产动物饲料增强剂领域，尤其是涉及一种泥鳅用小肽-微量元素螯合免疫增强剂及其制备方法。
技术背景
泥鳅(学名：misgurnusanguillicaudatus)，属鳅科。形体小，细长，只有三、四寸。它体形圆，身短，皮下有小鳞片，颜色青黑，浑身沾满了自身的粘液，因而滑腻无法握住，前段略呈圆筒形，后部侧扁，腹部圆，头小、口小、下位，马蹄形。眼小，无眼下刺。须5对，鳞极其细小，圆形，埋于皮下，体背部及两侧灰黑色，全体有许多小的黑斑点，头部和各鳍上亦有许多黑色斑点，背鳍和尾鳍膜上的斑点排列成行，尾柄基部有一明显的黑斑，其他各鳍灰白色。泥鳅广泛分布于亚洲沿岸的中国、日本、朝鲜、俄罗斯及印度等地。在中国分布各地，南方分布较多，北方不常见。全年都可采收，夏季最多，泥鳅捕捉后，可鲜用或烘干用，可食用、入药。泥鳅被称为“水中之参”，是营养价值很高的一种鱼，它和其它的鱼不相同，无论外表，体形，生活习性都不同，是一种特殊的鳅类。
人们对于营养的要求日益提高，所以市场上泥鳅的行情也越来越好，也提高了人们饲养泥鳅的积极性。随着人们加大饲养，养殖的面积在逐步的增大，养殖过于密集造成水体污染严重，造成了有害病菌的滋生，使养殖的泥鳅易感染疾病，营养免疫是继化学药物治疗法和疫苗预防法之后的一种新的防治鱼病的方法。随着人工喂养的普及，都是以配合饲料为主要喂养方法。
关于泥鳅用免疫增强剂的技术有很多方法，现有技术如授权公众号为cn104222680b的中国发明专利，公开了一种泥鳅专用复合免疫增强剂及其制备方法，该发明方法的复合免疫增强剂由不同重量份的大蒜、大黄提取物、连翘提取物、山核桃果皮粗提物、月莲叶、苦楝叶、杨树叶、浮萍提取物、山楂、食盐混合而成，具有制备方法简单、无任何毒物作用的优点，但是该复合免疫增强剂仅仅是以数种中药材与植物提取物混合而成，仅仅返回了植物的部分药用功效，无法为泥鳅的生长提供蛋白质、氨基酸、维生素、矿物质等必须的营养物质，而且其组成全部为植物物质必然会影响增强剂的适口性，因此推广意义有限。
技术实现要素：
本方法的目的在于提供种泥鳅用小肽-微量元素螯合免疫增强剂及其制备方法，本发明的免疫增强剂可作为饲料添加剂来弥补泥鳅在应激状态所表现的不足，提高泥鳅抗应激的能力，提高饲料利用率，减少应激所带来的伤害，增强泥鳅机体免疫力。
一种泥鳅用小肽-微量元素螯合免疫增强剂，其组成及其重量份为：螯合钙2.0-3.0份、螯合亚铁3.0-3.5份、螯合锌1.2-1.5份、酵母硒0.001-0.0012份、茯苓多糖2.0-3.0份、香菇多醣1.0-2.0份、中草药制剂4.0-6.0份、多维2.0-3.0份、多矿1.2-2.0份、诱食剂2.0-3.0份，免疫增强剂具有调节免疫细胞、抗炎和抗氧化等功能，为泥鳅提供机体必需的钙、铁、锌等微量元素，螯合剂中的小肽在泥鳅体内易于吸收利用，补充氨基酸，提高泥鳅抗菌、抗病的能力，提高饲料利用率、降低饲料系数，减少应激所带来的伤害，增强泥鳅机体免疫力、提高成活率。
作为优选，一种泥鳅用小肽-微量元素螯合免疫增强剂的制备方法，包括：中药制剂的配制、酶解、小肽螯合钙的制备、小肽螯合亚铁的制备、小肽螯合锌的制备、复配增强剂，具体包括以下步骤：
中药制剂的配制：将何首乌3-5份、山楂4-6份、麦芽4-8份、神曲1-2份、白术2-3份、黄芪3-5份、桅子4-6份用粉碎机粉碎，过80-100目筛，制成中药复方制剂，称取15-20份中药复方制剂，用脱脂棉纱包好，加入200-300份水，浸泡3-5小时后烧开，文火煎煮45-60分钟，用纱布进行过滤，滤渣再进行煎煮，将滤液混合，低温浓缩至含水20-25％，3-4℃保存备用；中药制剂可以增强泥鳅的抗病抗菌能力，提高机体免疫力、应激能力，增强体质，促进生长发育；
酶解：取低值鱼鱼溶浆配制成底物浓度为200-220g/l的浆液，将浆液在漩涡振荡器中混匀后置于恒温水浴锅中于64-65℃保温10-15分钟，调节ph为8.5-8.8，加入2500-3000u/g碱性蛋白酶，再加入酶重量3-10％的2，3-二甲基-2-丁醇、酶重量2-5％的赤藓糖，以双频率超声辅助酶解，超声频率分别为25-30khz与45-50khz，超声声强为0.30-0.35w/cm2，保温酶解1.0-3.5小时，酶解结束后立即在沸水浴中加热10-20分钟灭酶，3-4℃温度下以7500-8ooor/min转速离心10-15分钟，上清液冷冻干燥得小肽；2，3-二甲基-2-丁醇与赤藓糖的混合物能够降低酶促反应的基态与活性状态之间的能量屏障，进而增加基质与酶的亲和力，大大提高酶促反应速率，使酶解反应更加彻底，降低时间成本与人工成本，并且在随后的水解液煮沸时蒸腾除去；再加上双频率超声波的辅助作用，酶解制备的生物活性小肽比大蛋白更易被机体吸收，并且具有抗高血压、抗氧化等作用，防止泥鳅体内多余自由基和氧化应激作用下的组织、细胞、dna受到损伤，将其作为泥鳅饲料中的免疫增强剂使用，可以避免使用化学合成抗氧化剂产生的危害；
小肽螯合钙的制备：称取重量比为4-6:1的小肽与氯化钙，溶解于10-15倍干物重量的蒸馏水中，调节温度为40-42℃、ph6.0-6.3，螯合40-60分钟，螯合后进行旋转蒸发浓缩，然后在浓缩液中加入9-12倍体积的无水乙醇进行沉淀，沉淀时间为3-5小时，沉淀结束后进行抽滤，所得沉淀再次用无水乙醇进行洗涤，分别用铬黑t和茚三酮指示剂对洗涤液中游离ca2+和小肽进行鉴定，洗涤至洗涤液无颜色变化为止，所得沉淀即为小肽螯合钙；钙离子与氨基端和羧基端螯合，小肽螯合钙不但能够为泥鳅补充钙剂，还具有清除多余的羟基自由基的作用；
小肽螯合亚铁的制备：精确称量重量比为8-10:1的小肽与fecl2，溶解于10-12倍干物重量的蒸馏水中，调节混合溶液的ph为6.8-7.0，按照小肽质量的0.1-0.3％加入抗坏血酸，放入恒温水浴震荡锅中，将温度调节到30-35℃，震荡反应30-45分钟后真空浓缩，冷冻干燥得粉状小肽亚铁螯合物；小肽亚铁螯合物易于吸收，能够显著增强泥鳅体重，能够显著升高泥鳅机体rbc、mcv、hgb、mch、fe，其提升作用与硫酸亚铁、含铁饲料的作用相近甚至更加显著，且不会对肠道细菌及菌量产生影响，具有相当的安全性；
小肽螯合锌的制备：取适量小肽溶解于蒸馏水中，于38-40℃保温溶解10-12分钟，调节ph值至7.0-7.2，以七水合硫酸锌作为锌制剂，按小肽与锌制剂的重量比为6-9:1添加可溶性锌制剂，于55-60℃螯合反应80-100分钟，然后以7500-8000r/min转速离心15-30分钟，沉淀物用无水乙醇洗涤3-5次，经55-60℃热风干燥，制得小肽螯合锌；泥鳅锌的缺乏会引起生长缓慢，食欲降低，死亡率增高，皮肤溃烂，以及影响肠、肝、胰脏中铁和铜的浓度的上升，通过小肽螯合锌，可以为泥鳅补充锌，锌元素也是免疫器官胸腺发育的营养素，只有锌量充足才能有效保证胸腺发育，正常分化t淋巴细胞，促进细胞免疫功能，可以促进粘液分泌，促进创口愈合，提高多维代谢，提高视觉系统，促进泥鳅生长发育，提高产量与质量；
复配增强剂：称取螯合钙2.0-3.0份、螯合亚铁3.0-3.5份、螯合锌1.2-1.5份、酵母硒0.001-0.0012份、茯苓多糖2.0-3.0份、香菇多醣1.0-2.0份、中草药制剂4.0-6.0份、多维2.0-3.0份、多矿1.2-2.0份、诱食剂2.0-3.0份，加适量水后混合均匀，粉碎后注入造粒机造粒，粒径为1-3mm，即得泥鳅用小肽-微量元素螯合免疫增强剂；免疫增强剂中的小肽-微量元素螯合剂具有调节免疫细胞、抗炎和抗氧化等功能，为泥鳅提供机体必需的钙、铁、锌等微量元素，螯合剂中的小肽在泥鳅体内易于吸收利用，补充氨基酸；泥鳅饲料添加剂，提高泥鳅抗菌的能力，提高饲料利用率、降低饲料系数，减少应激所带来的伤害，增强泥鳅机体免疫力、提高成活率。
作为优选，所用的赤藓糖为重量比为9-11:1的d-(-)-赤藓糖与d-(+)-赤藓糖的混合物；特定比例的d-(-)-赤藓糖与d-(+)-赤藓糖的混合物能够与2，3-二甲基-2-丁醇产生协同作用，降低酶解体系的基态与激发态之间的能量屏障，进而增加底物与酶的亲和力，大大提高酶促反应速率。
作为优选，所用的多维为va或vb1或vb2或vb6或vb12或vc或vd或ve或vk或泛酸钙或烟酸或叶酸或生物素或肌醇或微晶纤维素的至少七种的混合物；多维可以提高机体的抗菌抗病能力，提高免疫能力、应激能力。
作为优选，所用的多矿为mgso4·7h2o与cuso4·5h2o与mnso4·h2o与kio3与cocl2·h2o与na2seo3的混合物；多矿为机体补充生长发育所必需的中微量元素。
作为优选，所用的诱食剂为甜菜碱或二甲基丙酸噻亭或甘氨酸或酵母粉或丙氨酸或5-磷酸肌苷或陈皮或啤酒糟或蚕蛹粉；诱食剂能够增强饲料的适口性，从而促进泥鳅进食。
与现有技术相比，本发明的优点在于：1)利用低值鱼制备具有抗菌功能的小肽，将小肽与微量元素螯合后配制免疫增强剂，不仅包含了环境，而且实现了物料的全效利用，变废为宝，实现了增值；2)2，3-二甲基-2-丁醇与赤藓糖能够降低酶促反应的基态与活性状态之间的能量屏障，进而增加基质与酶的亲和力，大大提高酶促反应速率，使酶解反应更加彻底，降低时间成本与人工成本，并且在随后的水解液煮沸时蒸腾除去，再加上双频率超声波的辅助作用，酶解制备的生物活性小肽比大蛋白更易被机体吸收，并且具有抗高血压、抗氧化等作用，防止泥鳅体内多余自由基和氧化应激作用下的组织、细胞、dna受到损伤；3)复配制备的泥鳅用小肽-微量元素螯合免疫增强剂不仅能提高泥鳅抗菌的能力，减少应激所带来的伤害，增强泥鳅机体免疫力，提高成活率，还能提高饲料利用率、降低饲料系数，提高成活率与生长速度，是一种高效、安全的泥鳅用免疫增强剂。
附图说明
图1是本发明中小肽的分子量分布图。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：
实施例1：
一种泥鳅用小肽-微量元素螯合免疫增强剂的其制备方法，包括以下步骤：
1)将何首乌3份、山楂4份、麦芽4份、神曲1份、白术2份、黄芪3份、桅子4份用粉碎机粉碎，过80目筛，制成中药复方制剂，称取15份中药复方制剂，用脱脂棉纱包好，加入200份水，浸泡3小时后烧开，文火煎煮45分钟，用纱布进行过滤，滤渣再进行煎煮，将滤液混合，低温浓缩至含水20％，3℃保存备用；中药制剂可以增强泥鳅的抗病抗菌能力，提高机体免疫力、应激能力，增强体质，促进生长发育；
2)取低值鱼鱼溶浆置于恒温水浴锅中64℃保温10分钟，调节ph为8.5，加入2500u/g碱性蛋白酶，保温酶解3小时，酶解结束后立即在沸水浴中加热10分钟灭酶，3℃温度下以7500r/min转速离心10分钟，上清液冷冻干燥得小肽；酶解制备的生物活性小肽比大蛋白更易被机体吸收，并且具有抗高血压、抗氧化等作用；
3)称取重量比为4:1的小肽与氯化钙，溶解于10倍干物重量的蒸馏水中，调节温度为40℃、ph为6.0，螯合40分钟，螯合后进行旋转蒸发浓缩，然后在浓缩液中加入9倍体积的无水乙醇进行沉淀，沉淀时间为3-5小时，沉淀结束后进行抽滤，所得沉淀再次用无水乙醇进行洗涤，分别用铬黑t和茚三酮指示剂对洗涤液中游离ca2+和小肽进行鉴定，洗涤至洗涤液无颜色变化为止，所得沉淀即为小肽螯合钙；小肽螯合钙不但能够为泥鳅补充钙剂，还具有清除多余的羟基自由基的作用；
4)精确称量重量比为8:1的小肽与fecl2，溶解于10倍干物重量的蒸馏水中，调节混合溶液的ph为6.8，按照小肽质量的0.1％加入抗坏血酸，放入恒温水浴震荡锅中，将温度调节到30℃，震荡反应30分钟后真空浓缩，冷冻干燥得粉状小肽亚铁螯合物；小肽亚铁螯合物易于吸收，能够显著增强泥鳅体重，且不会对肠道细菌及菌量产生影响，具有相当的安全性；
5)取适量小肽溶解于蒸馏水中，于38℃保温溶解10分钟，调节ph值至7.0，以七水合硫酸锌作为锌制剂，按小肽与锌制剂的重量比为6:1添加可溶锌制剂，于55℃反应80分钟，然后以7500r/min离心15分钟，沉淀物用无水乙醇洗涤3次，经55℃热风干燥，制得小肽螯合锌；小肽螯合锌可以为泥鳅补充锌，锌元素是免疫器官胸腺发育的营养素，只有锌量充足才能有效保证胸腺发育，正常分化t淋巴细胞，促进细胞免疫功能，可以促进粘液分泌，促进创口愈合，提高多维代谢，提高视觉系统，促进泥鳅生长发育，提高产量与质量；
6)复配增强剂：称取螯合钙2.0份、螯合亚铁3.0份、螯合锌1.2份、酵母硒0.001份、茯苓多糖2.0份、香菇多醣1.0份、中草药制剂4.0份、多维2.0份、多矿1.2份、甜菜碱2份，加适量水后混合均匀，粉碎后注入造粒机造粒，粒径1mm即得泥鳅用小肽-微量元素螯合免疫增强剂。
实施例2：
一种泥鳅用小肽-微量元素螯合免疫增强剂的其制备方法，包括以下步骤：
1)酶解：取低值鱼浆液在漩涡振荡器中混匀后置于恒温水浴锅中65℃保温15分钟，调节ph为8.8，加入3000u/g碱性蛋白酶进行，再加入酶重量10％的2，3-二甲基-2-丁醇与酶重量3％的d-(-)-赤藓糖，以双频率超声辅助酶解，超声频率分别为30khz与50khz，超声声强为0.35w/cm2，保温酶解3.5小时，酶解结束后立即在沸水浴中加热120分钟灭酶，4℃温度下以8ooor/min转速离心15分钟，上清液冷冻干燥得小肽；在双频率超声波的辅助作用下，酶解制备的生物活性小肽比大蛋白更易被机体吸收；
2)小肽螯合钙的制备：称取重量比为6:1的小肽与氯化钙，溶解于15倍干物重量的蒸馏水中，调节温度为42℃、ph6.3，螯合60分钟，螯合后进行旋转蒸发浓缩，然后在浓缩液中加入12倍体积的无水乙醇进行沉淀，沉淀时间为5小时，沉淀结束后进行抽滤，所得沉淀再次用无水乙醇进行洗涤，分别用铬黑t和茚三酮指示剂对洗涤液中游离ca2+和小肽进行鉴定，洗涤至洗涤液无颜色变化为止，所得沉淀即为小肽螯合钙；钙离子与氨基端和羧基端螯合，小肽螯合钙不但能够为泥鳅补充钙剂，还具有清除多余的羟基自由基的作用；
3)小肽螯合亚铁的制备：精确称量重量比为10:1的小肽与fecl2，溶解于12倍干物重量的蒸馏水中，调节混合溶液的ph为7.0，按照小肽质量的0.3％加入抗坏血酸，放入恒温水浴震荡锅中，将温度调节到35℃，震荡反应45分钟后真空浓缩，冷冻干燥得粉状小肽亚铁螯合物；小肽亚铁螯合物易于吸收，能够显著增强泥鳅体重，能够显著升高rbc、mcv、hgb、mch、fe，其提升作用与硫酸亚铁、含铁饲料的作用相近甚至更加显著，且不会对肠道细菌及菌量产生影响，具有相当的安全性；
4)小肽螯合锌的制备：取适量小肽溶解于蒸馏水中，于40℃保温溶解12分钟，调节ph值至7.2，以七水合硫酸锌作为锌制剂，按小肽与锌制剂的重量比为9:1添加可溶锌制剂，于60℃反应100分钟，然后以8000r/min离心30分钟，沉淀物用无水乙醇洗涤5次，经60℃热风干燥，制得小肽螯合锌；
5)复配增强剂：称取螯合钙3.0份、螯合亚铁3.5份、螯合锌1.5份、酵母硒0.0012份、茯苓多糖3.0份、香菇多醣2.0份、中草药制剂6.0份、多维3.0份、多矿2.0份、啤酒糟1份、蚕蛹粉2份，加适量水后混合均匀，粉碎后注入造粒机造粒，粒径3mm即得泥鳅用小肽-微量元素螯合免疫增强剂；免疫增强剂中的小肽-微量元素螯合剂具有调节免疫细胞、抗炎和抗氧化等功能，为泥鳅提供机体必需的钙、铁、锌等微量元素，螯合剂中的小肽在泥鳅体内易于吸收利用，补充氨基酸；泥鳅饲料添加剂，提高泥鳅抗菌的能力，提高饲料利用率、降低饲料系数，减少应激所带来的伤害，增强泥鳅机体免疫力、提高成活率。
实施例3：
一种泥鳅用小肽-微量元素螯合免疫增强剂，其组成及其重量份为：螯合钙3.0份、螯合亚铁3.0份、螯合锌1.5份、酵母硒0.0012份、茯苓多糖2.5份、香菇多醣1.5份、中草药制剂5份、多维2份、多矿1.8份、酵母粉0.5份、丙氨酸0.5份、5-磷酸肌苷0.5份，其制备方法包括：中药制剂的配制、酶解、小肽螯合钙的制备、小肽螯合亚铁的制备、小肽螯合锌的制备、复配增强剂，具体包括以下步骤：
中药制剂的配制：将何首乌4份、山楂5份、麦芽6份、神曲2份、白术3份、黄芪4份、桅子5份用粉碎机粉碎，过90目筛，制成中药复方制剂，称取18份中药复方制剂，用脱脂棉纱包好，加入240份水，浸泡4小时后烧开，文火煎煮50分钟，用纱布进行过滤，滤渣再进行煎煮，将滤液混合，低温浓缩至含水20％，4℃保存备用；中药制剂可以增强泥鳅的抗病抗菌能力，提高机体免疫力、应激能力，增强体质，促进生长发育；
酶解：取低值鱼鱼溶浆配制成底物浓度为200g/l的浆液，将浆液在漩涡振荡器中混匀后置于恒温水浴锅中64℃保温10分钟，调节ph为8.6，加入2600u/g碱性蛋白酶进行，再加入酶重量5％的2，3-二甲基-2-丁醇与酶重量5％的赤藓糖，赤藓糖中d-(-)-赤藓糖与d-(+)-赤藓糖的质量比为9:1；以双频率超声辅助酶解，超声频率分别为28khz与48khz，超声声强为0.32w/cm2，保温酶解1.0小时，酶解结束后立即在沸水浴中加热15分钟灭酶，4℃温度下以7600r/min转速离心14分钟，上清液冷冻干燥得小肽；2，3-二甲基-2-丁醇与赤藓糖能够降低酶促反应的基态与活性状态之间的能量屏障，进而增加基质与酶的亲和力，大大提高酶促反应速率，使酶解反应更加彻底，降低时间成本与人工成本，并且在随后的水解液煮沸时蒸腾除去，再加上双频率超声波的辅助作用，酶解制备的生物活性小肽比大蛋白更易被机体吸收，并且具有抗高血压、抗氧化等作用，防止泥鳅体内多余自由基和氧化应激作用下的组织、细胞、dna受到损伤，将其作为泥鳅饲料中的免疫增强剂使用，可以避免使用化学合成抗氧化剂产生的危害；
小肽螯合钙的制备：称取重量比为5:1的小肽与氯化钙，溶解于14倍干物重量的蒸馏水中，调节温度为40℃、ph6.2，螯合45分钟，螯合后进行旋转蒸发浓缩，然后在浓缩液中加入10倍体积的无水乙醇进行沉淀，沉淀时间为4小时，沉淀结束后进行抽滤，所得沉淀再次用无水乙醇进行洗涤，分别用铬黑t和茚三酮指示剂对洗涤液中游离ca2+和小肽进行鉴定，洗涤至洗涤液无颜色变化为止，所得沉淀即为小肽螯合钙；钙离子与氨基端和羧基端螯合，小肽螯合钙不但能够为泥鳅补充钙剂，还具有清除多余的羟基自由基的作用；
小肽螯合亚铁的制备：精确称量重量比为9:1的小肽与fecl2，溶解于10倍干物重量的蒸馏水中，调节混合溶液的ph为6.8，按照小肽质量的0.2％加入抗坏血酸，放入恒温水浴震荡锅中，将温度调节到32℃，震荡反应40分钟后真空浓缩，冷冻干燥得粉状小肽亚铁螯合物；小肽亚铁螯合物易于吸收，能够显著增强泥鳅体重，能够显著升高rbc、mcv、hgb、mch、fe，其提升作用与硫酸亚铁、含铁饲料的作用相近甚至更加显著，且不会对肠道细菌及菌量产生影响，具有相当的安全性；
小肽螯合锌的制备：取适量小肽溶解于蒸馏水中，于38℃保温溶解12分钟，调节ph值至7.0，以七水合硫酸锌作为锌制剂，按小肽与锌制剂的重量比为8:1添加可溶锌制剂，于58℃反应80分钟，然后以7600r/min离心20分钟，沉淀物用无水乙醇洗涤4次，经55℃热风干燥，制得小肽螯合锌；主要结合位点为羧基、氨基、羟基；泥鳅锌的缺乏引起生长缓慢，食欲降低，死亡率增高，皮肤溃烂，以及影响肠和肝、胰脏中铁和铜的浓度的上升，通过小肽螯合锌，可以为泥鳅补充锌，锌元素是免疫器官胸腺发育的营养素，只有锌量充足才能有效保证胸腺发育，正常分化t淋巴细胞，促进细胞免疫功能，可以促进粘液分泌，促进创口愈合，提高多维代谢，提高视觉系统，促进泥鳅生长发育，提高产量与质量；
复配增强剂：称取螯合钙3.0份、螯合亚铁3.0份、螯合锌1.5份、酵母硒0.0012份、茯苓多糖2.5份、香菇多醣1.5份、中草药制剂5份、多维2份、多矿1.8份、酵母粉0.5份、丙氨酸0.5份、5-磷酸肌苷0.5份，加适量水后混合均匀，粉碎后注入造粒机造粒，粒径2mm即得泥鳅用小肽-微量元素螯合免疫增强剂；免疫增强剂中的小肽-微量元素螯合剂具有调节免疫细胞、抗炎和抗氧化等功能，为泥鳅提供机体必需的钙、铁、锌等微量元素，螯合剂中的小肽在泥鳅体内易于吸收利用，补充氨基酸；泥鳅饲料添加剂，提高泥鳅抗菌的能力，提高饲料利用率、降低饲料系数，减少应激所带来的伤害，增强泥鳅机体免疫力、提高成活率。
取等量份的实施例1-3中制备的小肽，依据高效凝胶过滤色谱法(张宜涛，于伟，江国永，等.高效凝胶过滤色谱法测定肽的相对分子量分布[j].饲料畜牧，2012(8):42-44)测定三个实施例中的小肽的相对分子量分布，然后依据回归方程及出峰面积得出各个分子量区间的分布占比，将数据整理如图1所示。
由图1可以看出，碱性蛋白酶可以将低值鱼鱼溶浆水解为平均分子量低于3000d的小肽，易于泥鳅的吸收利用，并且可以通过螯合微量元素来增强泥鳅的自身免疫能力与应激能力。由图1还可以看出，相比较于实施例1，在实施例2、实施例3的酶解步骤中添加了微量的2，3-二甲基-2-丁醇与赤藓糖，并且配置了双频率超声波辅助酶解，可以将鱼蛋白彻底的酶解为小肽，在实施例2、实施例3中分子量介于180d-3000d的小肽占比均超过了80％，远远高于实施例1中的54％，实施例1中分子量超过3000d的多肽占比超过了40％，而在实施例2、实施例3中的该数据均低于5％，说明2，3-二甲基-2-丁醇与赤藓糖联合双频率超声波确实有助于提高酶解反应的反应速率，将蛋白质更加的彻底酶解为多肽与小肽，可能是由于2，3-二甲基-2-丁醇与赤藓糖降低了酶促反应的基态与活性状态之间的能量屏障，进而增加基质与酶的亲和力，双频率超声波能够将蛋白质与酶解彻底的分散在液相体系中，从而让两种蛋白质分子的碰撞与反应更为激烈，从而联合2，3-二甲基-2-丁醇酶与赤藓糖起到提高酶促反应速率、使酶促反应更加彻底的作用。
采用购买自佛山市顺德区旺海饲料实业有限公司的泥鳅饲料作为对照组，以实施例1-3中的泥鳅用小肽-微量元素螯合免疫增强剂配合对照组中的泥鳅饲料，免疫增强剂的添加量为饲料的0.5％，然后分别投喂给泥鳅，考察一段时间内泥鳅的死亡率与增重量，数据如表1所示：
表1.泥鳅的生长状况统计
由表1可以看出，在饲料中添加了泥鳅用小肽-螯合微量元素免疫增强剂之后，实施例1-3中的泥鳅在存活与增重方面都明显优于未添加免疫增强剂的对照组，说明小肽-螯合微量元素免疫增强剂具有调节免疫细胞、抗炎和抗氧化等功能，提高泥鳅抗菌的能力，提高饲料利用率、降低饲料系数，减少应激所带来的伤害，增强泥鳅机体免疫力、提高成活率、加快泥鳅的生长，是一种高效、安全、环保的泥鳅用小肽-微量元素螯合免疫增强剂。
本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。