专利名称：冬虫夏草球状菌体的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种利用微生物培养而制备新的生物体，具体是利用冬虫夏草菌株经平板培养、若干级的液体培养而制成球状菌体，该产品可直接或干燥后用于药品、饮品、食品及化妆品等领域。
近年来，冬虫夏草制成各种混合制剂作为保健方面的应用已较为广泛。现行冬虫夏草深层发酵工艺存在着一个难点，即虫草菌丝体与培养基分离的问题。由于冬虫夏草的菌丝体和孢子十分细微，培养基颗粒大多比菌丝体大，通过物理方法压滤，若孔径过大，则菌体流失；孔径小，则杂质无法去除。采用离心分离方法也同样无效。因杂质中高含蛋白质、氨基酸等与菌体相近的成分，采用化学方法不但不能将杂质去除，反而增加了污染。由于菌丝体中混有大量培养基(花生粉、酵母粉等)，严重制约了菌丝体的纯度。本发明者利用冬虫夏草菌株，制成纯的冬虫夏草球状菌体，可广泛地应用于药品、保健品、食品及化妆品等领域。
本发明的目的在于提供一种利用冬虫夏草菌种，经平板培养、若干级液体培养后，制成纯的冬虫夏草球状菌体。该球状菌体可直接应用于药品、饮品、食品及化妆品等领域，也可干燥后用于上述领域。
冬虫夏草菌[Cordyceps sinensis(Berk．)Sacc．]，别名虫草、冬虫草、夏草冬虫(参见《中国药用真菌》第15页)。本发明使用的冬虫夏草菌种，从上海农科院食用菌研究所菌种厂购买(参见《食用菌》1995年第5期封4广告)。
冬虫夏草菌种的形态特征在琼脂培养基上25-28℃培养，得到的菌丝体形状，或孢子呈现的形状菌落圆形、边缘整齐、平坦、紧密，白色、茸状，生长迟缓，菌落直径15mm，菌落不湿，有绳状结构，无扇状突变角，反面淡橙色，无扩散于培养基的色素。
菌丝透明，有隔，分枝，直径1．5-2μm，菌丝细胞的内容物均质，稍后呈空胞状，无厚垣孢子。菌丝在条件合适时可结聚成绳状，但多数情况下为单独菌丝，不形成绳束结构。分生孢子梗透明，直或稍弯，单生或2～3个聚生，但不呈轮状，末端或基端无明显膨大，15-40×1．5-2μm。分生孢子头呈假头状，直径20×35μm，由大约20个分生孢子粘聚而成，分生孢子透明，单细胞，椭圆形，短杆形，披针形，直，壁薄，两端钝圆，2．5-6×1．5-1．8μm。
冬虫夏草菌种的培养，对培养基中的营养源无特殊的规定，可使培养基中含有常用于微生物培养的碳源、氮源及其它营养源。其中氮源为蛋白胨、尿素等，碳源能较好利用葡萄糖、蔗糖、木糖等。
对于培养温度、时间等培养条件，以适于使用菌的生长为准，培养基的pH值范围为4．5-6．5，培养温度宜在25-28℃。
本发明所述的冬虫夏草球状菌体，可采用下述方法制得①将冬草夏草菌种在琼脂培养基上平板培养，培养温度25-28℃，待长满菌丝后，用无菌水洗脱，然后搅拌，制成悬浮液；②将上述菌液加入盛有液体培养基的摇瓶中，恒温旋转式培养3-4天，形成细小球状菌体，培养条件是温度25-28℃，转速50-250转／分；③将上述小球状菌体经分级筛分级，弃去不定形物，然后在较大的可旋转培养的容器中加入新的液体培养基进行二级液体培养，恒温旋转式培养1-3天，培养条件是温度25-27℃，转速50-250转／分，待小球状菌体直径增大到2-20倍时，再转入更大的盛有新的液体培养基的可旋转培养的容器中，按上述温度、转速继续培养，直到球状菌体直径达到要求；④将球状菌体由分级筛分筛，得到一定规格的球状菌体，再用无菌水洗脱培养基。
本发明所述的液体培养基重量配方为花生、黄豆、玉米等天然原料2-8％、N素0．1-0．4％、糖1．5-4％、磷酸二氢钾0．25-0．75％、硫酸镁0．05-0．25％，其余为水。
本发明所述的花生、玉米、黄豆等天然原料不粉碎，经清洗后直接煎煮到营养物质浸出但颗粒不散形，然后过滤。
本发明与现有技术相比具有实质性特点和显著的进步
本发明得到的冬虫夏草球状菌体的特征为球体中空，球体表面有突起或毛状物，其形态像珍珠一样大小的球状菌体；采用旋转式液体振荡分级培养，培养基采用不含植物颗粒的全水溶性物质，经分级培养的冬虫夏草球状菌体直径不小于2mm，比用深层发酵工艺所生产的菌丝体直径大1000倍以上；经无菌水洗脱培养基，菌体纯净、无任何杂质，解决了长期以来困扰企业的虫草菌粉去杂质问题；本发明产品纯的虫草球状菌体可广泛应用于制药、化妆品、食品等工业领域。
下面通过具体实施例对本发明作进一步说明实施例1 制造冬虫夏草球状菌体以马铃薯、葡萄糖、琼脂、水按200∶20∶20∶1000的比例制成平板琼脂培养基，pH值为6．5，经灭菌后备用。
以花生6％、玉米2％、蛋白胨0．1％、糖1．5％、磷酸二氢钾0．25％、硝酸镁0．05％的比例加水制成液体培养基，pH值为5．5，分别分装于若干250ml三角瓶、1000ml可旋转的容器和5000ml可旋转的容器中，经灭菌后备用。
将冬草夏草菌种接种于该琼脂培养基中进行培养，培养温度28℃，待菌丝长满后，用无菌水洗脱，用磁力搅拌器搅拌，使菌均匀悬浮于液体中；将上述菌液加入250ml三角瓶中进行恒温旋转式液体一级培养3天，培养温度28℃，转速100转／分，250ml三角瓶内的菌液形成细小球状菌体；将细小的球状菌体通过一定孔径的分级筛进行分级，弃去无定形菌体；将上述分级后的小球状菌体加入1000ml容器中进行液体二级培养，恒温旋转式培养3天，温度27℃，转速150转／分，小球状菌体直径增大至20倍；用一定孔径的分级筛进行分级；将上述分级合格的球状菌体，加入5000ml的容器中，按上述温度、转速继续培养；直到球状菌体直径达到要求。然后用无菌水洗脱球状菌体周围的培养基，即得到纯的冬虫夏草球状菌体，其特征为球体中空，球体表面有突起或毛状物。
每一级培养结束后，将含有球状菌体的培养液体通过一定孔径的分级筛，将大、中、小球状菌体分开，分置培养，直至达到所需直径规格。
产品球状菌体直径的要求，决定分置和换培养基培养的次数。
本实施例得到直径200mm规格的球状菌体，经三级液体培养，培养时间11天，可得到球状菌体干重10g。
实施例2 将球状菌体应用于食品将上述经平板培养、液体培养后制得的球状菌体，直接制作悬浮高档保健饮料。按2．5％～5．0％的比例加入饮料中，调整糖的浓度(4．0～8．0％)使饮料的比重正好使球状菌体悬浮于液体之中。经巴氏灭菌。
实施例3将球状菌体应用于化妆品利用球状菌体中空的特点，按1～1．5％的比例加入养颜液中。使菌体美容的有效成份渗入养颜液中。使用时直接用养颜液或球体涂抹脸部即可。
实施例4将球状菌体应用于药品由于球状菌体极其纯净，其有效成分虫草腺甙的含量为常规发酵菌粉的4倍，因此冬虫夏草菌粉胶囊体积由0．5g／粒降为0．25g／粒，同时服用量由2粒／次减少到1粒／次。
权利要求
1．一种冬虫夏草球状菌体，可用下述方法得到①将冬草夏草菌种在琼脂培养基上平板培养，培养温度25-28℃，长满菌丝后用无菌水洗脱，搅拌制成悬浮液；②将上述菌液加入盛有液体培养基的摇瓶中，恒温旋转式培养3-4天，形成细小球状菌体，温度25-28℃，转速50-250转／分；③将上述小球状菌体通过分级筛进行分筛，分筛后的小球状菌体在新的液体培养基中进行二级培养，恒温旋转式培养1-3天，温度25-27℃，转速50-250转／分；待小球状菌体直径增大到2-20倍时，转入更大的盛有新的液体培养基的容器中，按上述温度、转速继续培养；④将球状菌体由分级筛分筛，得到一定规格的球状菌体，用无菌水洗脱培养基。
2.根据权利要求1所述的冬虫夏草球状菌体，其特征是液体培养基重量配方花生、黄豆、玉米等天然原料2-8％、N素0．1-0．4％、糖1．5-4％、磷酸二氢钾0．25-0．75％、硫酸镁0．05-0．25％，其余为水。
3.根据权利要求2所述的冬虫夏草球状菌体，其特征是花生、玉米、黄豆等天然原料不粉碎，经清洗后直接煎煮到营养物质浸出但颗粒不散形，然后过滤。
全文摘要
本发明提供一种纯的冬虫夏草球状菌体,可采用冬虫夏草菌种经平板培养、无菌水洗脱、搅拌制成菌液、将菌液进行若干级的液体培养后制得,每级液体培养后都经过分级筛进行分筛。所述的冬虫夏草球状菌体的特征为球体中空,球体表面有突起或毛状物,可直接应用于药品、饮品、食品和化妆品等领域。
文档编号C12N1/14GK1293244SQ9911789
公开日2001年5月2日 申请日期1999年10月15日 优先权日1999年10月15日
发明者赵波, 包晓莺, 张文寂, 陈国珍, 叶顺妹 申请人:赵波, 包晓莺