对白斑病综合症具有增强免疫或预防作用的组合物及其应用
【专利说明】
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种对白斑病综合症具有增强免疫或预防作用的组合物及其应用。【【背景技术】】
[0002]目前为止感染于WSSV的对虾类，根据感染程度，3?5天以内死亡80?100%，20天以内全部死亡。白斑病综合症是节肢动物的致命疾病，养虾业中最大的难题(Lightner, 1996)。为了避免这样的危害，1994年以后，开始对白斑病综合症的研宄，确定了原因病毒(WSSV)的DNA排列，进行PCR的检查法，组织学病变现象，感染过程等方面的石开宄(Lo et al., 1997 ；Nunam and Lightner, 1997 ；Supamattaya, et al., 1998 ；Hossainet al., 2001 ；Soto et al., 2001)。
[0003]为了开发对弧菌和WSSV的免疫增强剂，进行很多方面的研宄。比如，酵母细胞壁(yeast cell wall)中提取的葡聚糖(glucan)，嗜热双歧杆菌(Bifidobacteriumthermophilum)中提取的肽聚糖(peptidoglycan)，小麦中提取的脂多糖(Iipopolysaccaride)，还有褐藻类中提取物的褐藻糖胶(fucoidan)等增强免疫有效果的研宄报告(Chang et al., 1999, 2000 ；Henning et al., 1998 ；Itami et al., 1998 ；Liaoet al., 1996 ；Song et al., 1997 ；Su et al., 1995 ；Sung et al., 1994 ；Takahashi etal.，1998，2000)。维生素C是不尽改善摄食率，而且促进免疫活性的报告，吸引了很多研宄者的重视(Lee and Shiau, 2002)。
[0004]但这些物质的效果是限于试验室中的试验结果，还没有使用于对虾养殖场时，减少WSSV危害的研宄报告。最近，利用遗传工学方法对WSSV的诊断法，感染途径等方面进行了大量的研宄(Lo et al., 1996 ；Nunan and Lightner 1997 ；Chang et al., 1998 ；Nunanet al., 2004 ；Tang et al.，2004)，但还没有开发对这些疾病的预防和治疗有效的制品，各国对WSSV的疾病无可奈何。
[0005]为防止这些疾病，利用多种方法切断感染途径，但栖息在养殖场周边的大部分水生脊椎动物都是带病毒者，还没有开发有效的防止方法。现在使用抗生素或滋补剂等，但对病毒疾病无可奈何。。
[0006]最近，乱用抗生素或药剂，不仅养殖场附近的水系受到严重污染，而且耐药性菌的出现和在水生动物体内积累等问题，影响消费者的身体健康。为了解决这些问题，研宄和探索利用天然材料中寻找具有抗病力和增强免疫机能的物质。
[0007]菌类的白参菌(Schizophyllumcommune)和菌核菌(Sclerotium glucanicum)中提取的多聚糖即裂裙多糖(schizophyllan)菌核菌多醣(scleroglucan)酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中提取的酵母葡聚糖(yeast glucan)等，普遍使用于几种鱼类和白对虫下养殖中，增强其非特异性免疫力(Yano et al., 1991, Sakai 1999, Song andHuang 1999, Chang et al., 2000, Park et al.，2001)。
[0008]海藻类中褐藻类的几种有抗癌效果的报告之后(Noda et al.，1989)，开始重视褐藻类。裙带菜(Undaria pinnatifida)和马尾秋水(Sargassum autumnale)的热汤提取物对鲤鱼(Cyprinus carp1)和五条蛳(Ser1la quinqueradiata)具有增强免疫效果的报告(Fujiki et al., 1992),重缘叶马尾藻(Sargassum dupIicatum)的热汤提取物对南美白对虫下(Litopenaeus vannamei)具有增强免疫效果的报告(Yeh et al., 2006) ο
[0009]小麦中提取分离的脂多糖(Iipopolysaccaride)，增强日本对ife下(Penaeusjaponicus)的免疫力，人工感染时，显示高存活率的报告(Takahashi et al.，2000)。这些物质的免疫增强效果是在试验室中调查的结果，还没有养殖场中试验的结果。
【
【发明内容】
】
[0010]本发明要解决的技术问题之一，在于提供一种对白斑病综合症具有增强免疫或预防作用的组合物，具有促进哺乳类、家禽类、鱼类以及节肢动物等多数动物的生长，增强耐性等优点，尤其是预防甲壳类的白斑病综合症具有特效。
[0011]本发明是这样实现上述技术问题之一的:
[0012]一种对白斑病综合症具有增强免疫或预防作用的组合物，所述组合物包括玉米、大麦、薏苡、小米、荞麦以及小麦6种谷物提取物。
[0013]进一步地，所述组合物还包括神曲、麦芽、大黄、藿香、甘草、苏叶、白术、川芎、黄苳、三白草、山楂、当归、红参、枸紀子、黄连、黄苗、五味子、石决明、青蒿、茯苳、川朴、山茱萸、木香、木通和连翘25种中草药提取物。
[0014]进一步地，所述组合物还包括海带、马尾藻、刺松藻和海苔4种海藻提取物。
[0015]进一步地，所述组合物还包括天花蕈菌丝体、香菇菌丝体和冬虫夏草菌丝体3种蘑菇菌丝体。
[0016]进一步地，所述组合物中6种谷物提取物的重量份含量如下:玉米5?10重量份、大麦20?30重量份、薏苡20?30重量份、小米20?30重量份、荞麦10重量份小麦、10?15重量份。
[0017]进一步地，所述组合物25种中草药提取物的重量份含量如下:神曲3重量份、麦芽5重量份、大黄3重量份、藿香3重量份、甘草6重量份、苏叶10重量份、白术5重量份、川芎2重量份、黄苳2重量份、三白草2重量份、山楂3重量份、当归3重量份、红参8重量份、枸f己子2重量份、黄连2重量份、黄苗10重量份、五味子5重量份、石决明5重量份、青蒿3重量份、茯苳2重量份、川朴3重量份、山茱萸3重量份、木香3重量份、木通5重量份和连翘I重量份；所述6种谷物提取物与25种中草药提取物的重量份比例为3?4:6?7。
[0018]进一步地，所述4种海藻类提取物的重量份含量如下:海带3重量份、马尾藻I重量份、刺松藻4重量份以及海苔2重量份；所述6种谷物提取物、25种中草药提取物以及4中海藻提取物的重量份比例为I?2:5:3?4。
[0019]进一步地，所述3种蘑菇菌丝体的重量份含量如下:天花蕈菌丝体3重量份、香菇菌丝体2重量份、冬虫夏草菌丝体5重量份；所述6种谷物提取物、25种中草药提取物、4种海藻提取物以及3种蘑菇菌丝体的重量份比例为1:4:1?2:3?4。
[0020]本发明要解决的技术问题之二，在于提供一种对白斑病综合症具有增强免疫或预防作用的组合物作为饲料添加剂的应用，该组合物具有促进哺乳类、家禽类、鱼类以及节肢动物等多数动物的生长，增强耐性等优点，尤其是预防甲壳类的白斑病综合症具有特效。
[0021]本发明是这样实现上述技术问题之二的:
[0022]一种对白斑病综合症具有增强免疫或预防作用的组合物作为饲料添加剂的应用，所述组合物为液态、粉末或颗粒状态。
[0023]进一步地，所述作为饲料添加剂的组合物中还包括天然抗氧化剂，所述抗氧化剂为柠檬酸、迷迭香提取物、维生素C、绿茶提取物、壳聚糖、丹宁酸、植酸中的至少一种。
[0024]本发明具有如下优点:
[0025]该组合物具有促进哺乳类、家禽类、鱼类以及节肢动物等多数动物的摄食率、生长率，提高存活率、增强耐性、增强免疫力以及预防白斑病综合症等优点。
【【附图说明】】
[0026]下面参照附图结合实施例对本发明作进一步的说明。
[0027]图1表示实施例1饲料中添加谷物提取物投喂给对虾时，红血球中氧(O2O含量。
[0028]图2表示实施例1饲料中添加分成7个组的中草药提取物投喂给对虾时，红血球中氧(O2I含量。
[0029]图3表示实施例1饲料中添加海藻提取物投喂给对虾时，红血球中氧(O2O含量。
[0030]图4表示实施例3中Ikg饲料中添加DF 0.2g, 0.4g, 0.8g后，投喂给对虾时，每日饲料摄食量的变化。
[0031]图5表示实施例3中Ikg饲料中添加DF 0.5g, 1.0g, 2.0g, 4.0g后，投喂给对虾时，每日饲料摄食量的变化。
[0032]图6表示实施例4中Ikg饲料中添加不同组合的DF时，前肠的胰蛋白酶活性度1nmoVmgHmirT1WT的对虫下频度数。
[0033]图7表示实施例4中Ikg饲料中添加不同组合的DF时，前肠和中肠与体重的比率。
[0034]图8表示实施例4中Ikg饲料中添加不同组合的DF时，对虾的前肠，中肠，肝胰的胰蛋白酶活性度的变化。
[0035]图9表示实施例5中Ikg饲料中添加不同组合的DF时，7月I起饲养20天后，对虾的体长和体重的变化。
[0036]图10表示实施例6中投喂给体重的1%，3%，5%，8%，10%饲料时，对虾的前肠，中肠和排泄物中蛋白质含量的变化。
[0037]图11表示实施例7中对投喂给添加DF饲料的对虾，进行人工感染WSSV后，各实验区存活率的变化。
[0038]图12表示实施例7中WSSV感染前个体(A)和感染后存活个体⑶的PCR电泳图。
[0039]图13表示实施例7中投喂给添加DF 0.4g/kg饲料时，WSSV感染后，各试验组的存活率变化。
[0040]图14表示实施例8中5月4日起8月2日为止，养殖期间的平均体重变化。
[0041]图15表示实施例8中养殖期间，每公顷每日饲料投喂量的变化。