等）、鸡蛋和牛奶，或植物衍生来源如大豆、谷类、棉巧、 花生等来提供。所述膳食纤维可由纤维素、半纤维素、果胶、木质素和树胶来提供。并且，本 发明的宠物食品组合物可包含在宠物食品中通常使用的各种成分，如填充剂、调味剂、结合 剂、增稠剂、稳定剂、乳化剂、甜味剂、食品级着色剂、缓冲剂、盐等。特别优选的结合剂和/ 或增稠剂是明胶、纤维素酸、淀粉、淀粉醋、淀粉酸和改性淀粉。 阳106] 所述宠物食品组合物配制成干粗粒食物、湿罐头食品、肉汤或零食。可W每日对伴 侣动物进行喂食，或者W规律的进食时间（例如每日一次直到每日六次）或按需要全天连 续地喂食（例如，通过自动喂食器（automaticfeeder)或简单地通过提供过量食物）。所 述组合物可随意喂食。
[0107] 在某些实施方案中，所述宠物食品组合物是零食。本文所使用的零食是指给予伴 侣动物W诱导动物在非进食时间食用的宠物食品组合物。零食也可具有营养价值，且具有 类似食品的成分，其包括一种或多种如上所述的营养物，但其自身并不是营养全面的食物。 阳10引本发明的膳食组合物还可作为宠物食品补充剂提供，其与另一饲料同期或分开使 用，W改善伴侣动物的营养平衡或表现。除其它饲料外，宠物食品补充剂包括但不限于未经 稀释而喂食的任何组合物，由此提供与单独可用的或被稀释且与动物的常规饲料混合的动 物配给量的其它部分的自由选择，W产生全价饲料。美国饲料控制官员协会（AAFCO)提供 了指导，例如该指导包括关于补充剂的讨论，所述补充剂可WW各种形式，包括粉末剂、液 体剂、糖浆剂、丸剂、胶囊组合物等。并且，所述宠物食品补充剂可W作为具有部分或全部可 消耗组分的用于伴侣动物的玩具的一部分提供。
[0109] 通过将一种或多种上文列举的能够抑制5-HT3a和/或NK-I受体的化合物与一种 或多种上文公开的适用于伴侣动物的化合物混合可容易地形成如上所述的膳食组合物。
[0110] 为了确定有效剂量，可在待治疗的动物中W不同剂量用所述化合物进行多个完整 的交叉研究。基于在显示可感知的特发性呕吐症状的伴侣动物中减轻或消除特发性呕吐的 最大能力，选择最佳剂量。在W宠物食品组合物的形式对伴侣动物给药时，上文所述的化合 物优选地W0.Ippm至5000化pm、优选Ippm至15化pm的剂量范围给药。在W补充剂的形 式给药时，上文所述的植物材料或提取物可优选地W补充剂的0.I重量％至99重量％、优 选0. 5重量％至5重量％的剂量给药。所述组合物优选是膳食组合物，但也可W是任何其 它组合物，其包括但不限于：外用组合物、可注射组合物、鼻用组合物、直肠组合物等。 阳111] 给药的频率和持续时间可根据动物的病症、所治疗的动物物种、其对治疗的个体 反应和所选药物制剂的类型而变化。频率范围可从每月一次至每日六次，优选每周一次至 每日四次，且更优选每日一次至每日=次。持续时间的范围可从五日至动物的整个寿命，例 如25年。优选的是，持续时间的范围是从一周至15年，更优选从两周至一年，且更优选从 一个月至六个月。
[0112] 其它类型的呕吐或反胃可W与特发性呕吐同期发生。本发明的组合物可包括减少 呕吐的其它原因的特征。例如，食品组合物可包括相对于动物个体的口的尺寸较大的食物 颗粒，W阻止可能引起反胃的快速进食；或者可W包括减少毛团出现的成分，如蛋白酶、多 元醇脂肪酸聚醋、缓泻药等；或者可W包括促进胃肠健康的成分，如益生元（prebiotics) 或益生菌（probiotics)。本发明的组合物可包括具有止吐活性的药用药物。 。…]含有膳食紀合物的试剂念
[0114] 本发明还涵盖一种商业产品，其优选是W试剂盒的形式，所述商业产品包括上文 所述的膳食组合物连同提供如何对伴侣动物口服给药或喂食所述膳食组合物的信息的说 明书。具体而言，所述说明书可提供关于W下的信息，例如讲价伴侣动物的特发性呕吐病 症的严重性；喂食频率；喂食持续时间；喂食方式；和监控所述伴侣动物的特发性呕吐病症 W确定何时改变喂食频率和/或喂食持续时间。
[0115] 适用于运输和售卖本文所公开的膳食组合物的任何标准包装均可用于形成所述 试剂盒。所述试剂盒还可包括关于抑制、减轻和消除伴侣动物的特发性呕吐或呕吐的具体 的书面效益声明。所述效益声明还可设及由运种对特发性呕吐或呕吐的预防或治疗所带来 的健康效益，如提高体重和能量水平，改善免疫功能和延长寿命。
[0116] 通过W下实施例说明本发明。然而应理解的是，本发明并不限于运些实施例的具 体细节。 实施例 阳117] 筛洗5-HT3a管体抑制剂的试輪
[0118] 各种已知的高通量筛选试验可用于确定材料对5-HT3a受体的抑制作用。
[0119]例如，5-HT3a受体是位于中枢神经系统和周围神经系统的配体口控的非选择性阳 离子通道。通过诱导巧与钢内流和调动细胞内巧库（calciumstore),W及调整各种神经 递质和神经肤如多己胺、胆囊收缩素、乙酷胆碱、丫-氨基下酸（GABA)、P物质或血清素自身 的释放，活化5-HT3a受体，随后使周围神经元或中枢神经元快速去极化，运导致细胞质的 Ca2+和Na+浓度急剧升高。由于甜T3受体的活化跟随巧与钢内流和随后的细胞内巧与钢的 快速增加，因此可W容易地使用巧指示剂（例如F1U0-4AM)或钢染料利用巧光成像读板仪 (FluorescenceImagePlateReader,化IPR)分析检测内流Ca2+或化 + 信号，W确定5-HT3a 受体的激动剂或括抗剂。 阳120] 5-HT3aFLIPR分析可具体通过W下步骤进行。首先，在具有5%C〇2和90%湿度 的哺乳动物细胞培养箱中，使稳定表达h5HT3A受体的肥K-23 (人胚肾）细胞在于75cm2的 培养瓶内的16-18ml生长培养基中于37°C下生长2-3天。该生长培养基可含有例如补充有 10%FBS(胎牛血清）、100yg/ml抗生素 / 抗真菌剂和 150yg/mlG418 的DMEM/F12 (1: 1， 英杰（Invitrogen) 11039)。然后将细胞培养基转移至50ml试管中，用IOmlPBS洗涂细 胞。随后，将2ml0.05%膜蛋白酶-EDTA加入W脱附细胞（detachcell),并将上述细胞 培养基加回至培养瓶W使膜蛋白酶灭活。下一步，将细胞转移回上述的50ml试管中，将其 W85化pm离屯、3分钟，W去除培养基。然后用生长培养基W每培养瓶细胞1-1. 5ml将从 离屯、获得的细胞重悬。随后用20y1的普朗尼克F-127溶解一小瓶F1UO-4AM(巧指示剂， 50yg)，每培养瓶细胞加入10y1F1UO-4AM溶液（1个小瓶F1UO-4AM溶液20y1，正好用于 2个培养瓶的细胞）。然后在摇床上轻轻摇动的同时用F1UO-4AM将细胞在室溫下染色30 分钟，随后加入45ml测定缓冲液[含化Clz和MgCl2的汉克平衡盐溶液（皿SS)(Invitrogen 14025)，20mM肥阳S，抑7. 2]W洗涂一次细胞。再一次W85化pm进行3分钟离屯、，W去除 测定缓冲液。再次将获得细胞团块重悬于测定缓冲液（每培养瓶细胞用18-20ml测定缓冲 液）。将90微升的细胞装入96-孔板巧0000个细胞/孔），所述96-孔板预装有待测试 化合物（10y1的ImM测试材料，测试材料的终浓度将为100yM)。在室溫下将板放置于黑 暗中15-30分钟，然后转移至化IPR-384仪器（美谷分子仪器（MolecularDevices))。放 置含有6x激动剂（60yM血清素）的母板，所有测试板在加入激动剂后进行读板。最后通 过化IPR程序记录测试板的巧信号。使用Excel计算平均值和标准偏差，并扣除背景（缓 冲液）。然后按
Xi谢计算抑制百分比（％)。如果计算得出的抑制百分比大于 40 %，则认为测试材料对5-HT3a受体具有抑制作用。
[0121] 或者，可W使用基于细胞的血清素受体分析来筛选5-HT3a受体的抑制剂。通 过使用激动剂血清素W及共转染W过表达5-HT3a受体和发光水母素巧敏感报告子 (luminescentaequorincalciumsensitivereporter)的细胞，可进行该分析，W鉴定出 W高敏感性、可量测性和特异性祀向5-HT3a受体的适合的新型活性物。
[0122] 水母素（Aequorin)是来源于维多利亚水母（AequoreaVictoria)的光蛋白。最 初翻译为脱辅酶蛋白（apo-enzyme)，其需要疏水基腔肠素W开始向水母素转化。在结合巧 后，通过水母素将腔肠素氧化成腔肠素酷胺（coelenteramide，BFP)，导致发射出蓝光并排 放C〇2。因此，其对于可视化或检测内流化"信号尤其有利。 阳123] 可用W下步骤进行水母素辅助的血清素受体分析。解冻共表达血清素甜T3a受体 和水母素巧传感器的经丫 -射线照射的冷冻保藏的人类细胞（肥K293亲本）（巧金-埃尔 默（PerkinElmer)，目录编号ES-402-AF)，并在含Hepes缓冲液、无酪红+10%FBS的无抗 生素DMEM/F12(Invitrogen，目录编号11039-021)中培养18-24小时。在培养18-24小时 后，通过用其细胞培养基冲洗而轻轻使细胞脱附。用额外的IOmL细胞培养基洗涂确保捕获 最佳数目的细胞。然后W150Xg将细胞离屯、，计数并在福尔肯（Falcon)离屯、管中WlxIO6 个细胞AiL重悬于BSA培养基扣MEM/Ham'SF12(含15mM肥阳S、k谷氨酷胺，无酪红） 培养基（Invitrogen，目录编号11039-021)+10%无蛋白酶BSA(西格玛奥德里奇（Sigma Al化ich)，目录编号A9205)于水中，BSA终浓度为0. 1% ]。W5yM的终浓度将腔肠素加 入分析培养基中。由于腔肠素储备溶液是在甲醇中，其得到良好地混合，同时将腔肠素溶液 加入细胞悬液中W避免损坏细胞。然后用侣锥包裹IOmL化Icon管，并放置在回转轮（约 45°角和化pm)上。随后在约20°C下（溫度应保持在25°CW下），将细胞解育4小时至18 小时。在分析当天，在BSA培养基中将细胞稀释至终浓度为2.OxIO5个细胞/mL。在室溫 下再将细胞解育至少1小时。然后准备筛选板。浓度将括抗剂稀释于上面引用的BSA 培养基中，每个孔分配50^1。 阳124] 将50微升的细胞悬液（对于终浓度1.OxlO^孔，为2.OxloVml)加入括抗剂孔 中，然后在室溫下于黑暗中解育15分钟。在指定时间（attime)仅制备一个板。使用读板 器的注射器将50微升的血清素（3xEC80 (EC是有效浓度的简称）浓度（30iiM)W获得Ix ECSO(IOyM)的终浓度）注射至细胞与括抗剂的混合物中，记录发射光10s。使用激动剂血 清素完成8个点的剂量曲线，W确定对于该系统的EC50。剂量范围为3. 9E-7至5E-5[M]。 所得6〔50确定为1.92祀-6±3.71祀-6[]?]。 阳1巧]图1至图44示出具有高5-HT3a抑制作用的如上所述的化合物的5-HT3a剂量反 应曲线。 阳1%] 具体而言，图1示出泛酿-〇(CAS号605-94-7)的5-HT3a剂量反应曲线。图2示出 白襲芦醇（CAS号501-36-0)的5-HT3a剂量反应曲线。图3示出1，4-苯二酪，2, 3-二甲 基-巧Cl) (CAS号608-43-5)的5-HT3a剂量反应曲线。图4示出岩兰草醇（CAS号89-88-3) 的5-HT3a剂量反应曲线。图5示出3, 6-二径黄酬（CAS号92439-20-8)的5-HT3a剂量 反应曲线。图6不出香草壬酷胺（CAS号2444-46-4)的5-HT3a剂量反应曲线。图7不出 〇心氯化栋桐酷肉碱（CAS号6865-14-1)的5-HT3a剂量反应曲线。图8示出积雪草酸（CAS 号464-92-6)的5-HT3a剂量反应曲线。图9示出法呢醒（CAS号19317-11-4)的5-HT3a 剂量反应曲线。图10示出诺卡酬（CAS号4674-50-4)的5-HT3a剂量反应曲线。图11示 出a-戊基肉桂醇（CAS号101-85-9)的5-HT3a剂量反应曲线。图