一种朝医复方鹿茸保健食品及其制备方法和用图

一种朝医复方鹿茸保健食品及其制备方法和用图
【专利摘要】本发明涉及一种保健食品及其制备方法和用途，是以鹿茸、天冬、升麻、苦杏仁、五味子作为配方主要原料制备的保健食品，具有有助于增强免疫力功能，属于保健食品研制、生产、使用领域。该保健食品组合物原料由鹿茸3份、天冬20份、升麻15份、苦杏仁15份、五味子15份组成，所制备的制剂是颗粒剂、胶囊剂和片剂。制剂是通过如下工艺过程制备的：①原料准备；②鹿茸粉碎；③植物原料提取；④鹿茸提取；⑤提取液精制；⑥收膏；⑦制软材；⑧制粒；⑨制剂成型。功能评价实验表明，根据本发明生产的保健食品制剂具有助于增强免疫力功能。
【专利说明】
一种朝医复方鹿茸保健食品及其制备方法和用途
技术领域
[0001] 本发明涉及一种保健食品及其制备方法和用途，具体是指以鹿茸、天冬、升麻、苦 杏仁、五味子作为配方主要原料制备的保健食品，该保健食品具有有助于增强免疫力功能， 属于保健食品研制、生产、使用领域。
【背景技术】
[0002] 本发明是以中国朝鲜族民族医药学(简称:朝医药学)理论为指导，根据《保健食品 注册管理办法》的规定，研制一种具有增强免疫力功能的保健食品组合物及其制备方法。组 合物配方主要依据朝医药学中的"四象医学"理论，参考临床防治"太阴人"肺气虚的方剂 "鹿茸大造汤"，以增强免疫功能为评价指标，通过现代药理学拆方实验，筛选出适合作为保 健食品的原料及其使用剂量，经科学设计而成。
[0003] 据世界卫生组织调查，全球约有35%以上的人处于亚健康状态，各种原因使免疫系 统不能正常发挥保护作用，在此情况下，极易招致细菌、病毒、真菌等感染，因此免疫力低下 最直接的表现就是容易生病。因经常患病，加重了机体的消耗，所以一般有体质虚弱、营养 不良、精神萎靡、疲乏无力、食欲降低、睡眠障碍等表现，生病、打针吃药便成了家常便饭。每 次生病都要很长时间才能恢复，而且常常反复发作。长此以往会导致身体和智力发育不良， 还易诱发重大疾病。
[0004] 免疫力是人体自身的防御机制，是人体识别和消灭外来侵入的任何异物(病毒、细 菌等）;处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细 胞的能力。现代免疫学认为，免疫力是人体识别和排除"异己"的生理反应。
[0005] 中医学认为，"免疫"一词，最早见于中国明代医书《免疫类方》，指的是"免除疫 疠"，也就是防治传染病的意思。中医学认为免疫力低下即"正气耗损"，《内经》指出："正气 存内，邪不可干""邪之所凑，其气必虚"。而扶正祛邪、调理阴阳为提高免疫力之本，扶正是 指扶助抗体的正气，通过补益、强壮的方向，来调升人体脏腑经络，气血津液等的不足，以调 动抗体的抗病能力，提高抗体的免疫功能，增强其稳定性，此所谓"旺盛邪自祛"；祛邪是祛 除邪气，排除或削弱病邪侵袭和损害的一种中医药治疗原则，即所谓"邪去则正安"。扶正和 祛邪相辅相成，能增强人自身的免疫力。
[0006] 朝医药学是在朝鲜族固有文化基础及东医药的基础上，吸收中医药学的理论，结 合本民族防病治病经验，逐步形成和发展起来的。朝医药学是以"天、人、世、地"整体观为理 论指导，以"四维之四象"的结构为主要形式，以辨象(体质、病）与辩证相结合的诊断治疗 学。朝医药学中的"四象医学"理论认为，"太阴人"在四象人中超过50%，太阴人的一切病症 均由其体质禀赋寒盛所决定，治疗其病之根本在于祛除其寒胜从而保证其健康无病。朝医 学认为，所有疾病在于"养"而非"治"。因此，要增强免疫力就要滋养五脏、理气消滞、调理阴 阳、补肾益气、固本培元。
[0007] 本发明保健食品配方由动物药鹿茸，植物药天冬、升麻、苦杏仁、五味子为原料，加 入保健食品可接受的辅料或辅助性成分。配方中鹿茸、天冬、升麻、苦杏仁、五味子是可用于 保健食品的物品，全部原料组成符合保健食品对原料来源的要求。
[0008]鹿茸（CERVI CORNU PANT0TRICHUM)，鹿茸是鹿科动物梅花鹿Cerras Temminck或马鹿Cerras eiapAus Linnaeus的雄鹿未骨化密生鸾毛的幼角，夏秋季采收，锯 茸或砍茸。味甘、咸，性温。鹿茸作为药用历史悠久，早在先秦时期，在《五十二病方》中就有 记载，后世广泛应用，逐步归纳和完善了鹿茸的治疗作用。《本草纲目》记载："生精补髓，养 血益阴，强健筋骨，"主治虚劳赢瘦、腰膝酸痛、心悸耳鸣、阳痿滑精、子宫虚冷、崩漏带下等 症。鹿茸是一种名贵的滋补药，在中医临床占有重要地位，用于多种疾病的治疗和保健，在 俄罗斯、日本、朝鲜、韩国及东南亚民间医学中也有广泛应用。中医学认为，鹿茸有补肾阳之 功，用于肾阳不足;有益精血之功，用于精血亏虚所致的腰脊酸软、筋骨无力、精神疲倦、眩 晕耳鸣等证;有强筋骨之功；以及借鹿茸之温补内托之功。鹿茸含有比人参更丰富的氨基 酸、卵磷脂、维生素和微量元素等。鹿茸性温而不燥，具有振奋和提高机体功能，对全身虚 弱、久病之后患者，有较好的保健作用。它能增加机体对外界的防御能力，调节体内的免疫 平衡而避免疾病发生和促进创伤愈合、病体康复，从而起到强壮身体、抵抗衰老的作用。朝 医学认为，鹿茸是太阴人要药，可大补肾阳、益精血、补肺，用于太阴人虚劳及气虚症。太阴 人的一切病症均由其体质禀赋寒盛所决定，治疗其病之根本在于祛除其寒胜从而保证其健 康无病。鹿茸因具有温阳大补作用，故在临床上把其作为太阴人的药物。鹿茸治疗虚劳，即 虚损。因气血不足，精神困乏引起的虚损症，此症的根在酒色伤之外因，四情伤之内因，先察 不足，饮食劳倦，嗜欲无节，大病之后，失于调理，旧病不愈等所致;治疗以补益气血、温通助 阳、滋阴健脾等为宜，太阴人用以鹿茸为主药的方剂。现代医学已证实，鹿茸含有蛋白质，月旨 肪，鹿茸胶质，硬骨素，磷酸胺及多种生物活性物质，能促进机体的生长发育和新陈代谢，增 强机体的免疫功能，对神经系统，心血管系统有良好的调节作用。有助于恢复和保持机体的 健康，对长期不易愈合的溃疡和创口，能增强再生过程，并能促进消化系统溃疡及骨折的愈 合。鹿茸可以提高机体的细胞免疫和体液免疫功能，促进淋巴细胞的转化，具有免疫促进剂 的作用。鹿茸的化学成分和活性成分丰富，可被认为是天然的生长因子库，具有广泛的药理 活性和医疗保健功能。
[0009]天冬（ASPARAGI RADIX)为百合科植物天冬yisparagtZs cocAi/3cAi/3e/3sis(Lour ·) Merr.的干燥块根。天冬是传统补阴中药，性寒，味甘，微苦，有滋阴润燥，清肺降火之功效。 中医有安神，养心，润肺，补益，滋肾等功效。《名医别录》载"去寒热，养肌肤，益气力"。《月华 于本草》载"镇心，润五脏，益皮肤，悦颜色"。能使肌肤艳丽，保持青春活力。能治虚劳绝伤， 老年衰损羸瘦。朝医学认为，天冬益气力，保定肺气，通肾气，利小便。主效用是补阴。天冬可 以通过补太阴人肺气和肾气，改变太阴人肺虚体质。而此方中鹿茸为大补肾阳之要药，大量 服用会阳升风动，或伤阴动血。而天冬及麦门冬是传统补阴中药，滋阴润燥，止渴生津，此方 用以鹿茸与天冬、麦门冬配伍，可以防气阴两伤，使补而不滞、协调阴阳，有利于常服久服。 现代医学认为，天冬除了有传统的抑菌、抗肿瘤作用以外，天冬还具有升高外周白细胞、增 强网状内皮系统吞噬功能、有利于抗体形成、增强体液免疫力等功能。以甲胎球蛋白作抗原 免疫家兔的实验中，天冬有延长抗体存在时间的作用。天冬含天冬素 、B -固留醇、留体皂 甙，粘液质、糠醛衍生物等成分。实验证明，天冬有升高血细胞、增强网状内皮系统吞噬功能 和延长抗体存在时间的作用。
[0010] 升麻(CHMICIFUGAE RHIZ0MA)入药史载于《神农本草经》，列为上品。中国药典2010 年版一部中规定:升麻为毛茛科植物大三叶升麻Cifflici/uga Aeradei/Wia Kom.，兴安升 M-Cimicifuga dahurica (Turcz. )Maxim.或升麻Ciffliciftzga foetic/a L·的干燥根莖。气 微，味微苦而涩。传统中医认为升麻具有清热解毒，升举阳气的功效，用于治疗风热头痛、咽 喉肿痛、子宫脱垂等。《本经》记载:主解百毒，辟温疾、障邪。医学家李杲提出：升麻，发散阳 明风邪，升胃中清气，又引甘温之药上升，以补卫气之散而实其表，故元气不足者，用此于阴 中升阳。又缓带脉之缩急。朝医学认为，升麻发表，升阳，升气解毒。主效用是解表升阳。在此 方中，升麻作为辅药，可以协助鹿茸增强益精血之力，不过，《本草新编》中记载:升麻，必须 同气血药共用，可佐使而亦不可以为君臣，世虑其散气，不敢多用是也。因此，"汤"体现了朝 医"辨象施治，随证加减"的独特用药规律。现代医学认为，升麻具有抗菌、抗炎、降压、镇静、 解热等作用。升麻清热解毒的作用颇佳。
[0011] 苦杏仁（ARMENIACAE SEMEN AMARUM)为蔷薇科植物山杏Prtwus ar?e/3iaca L · var. a/3st/ Maxim.、西伯利亚杏 JpTtwtzs sibirica L.、东北杏 JpTtwtzs mandshurica (Maxim. )Koehne或杏JpTtmus a_rae/3iaca L.的干燥成熟种子。性苦，微温;有小毒。本品主 入肺经。味苦能降，且兼疏利开通之性，降肺气之中兼有宣肺之功。《现代实用中药》记载： "苦杏仁内服具有轻泻作用，并有滋补之效。"朝医学认为，苦杏仁能散能降，解肌，散风，降 气，润燥，消积，疏利开通，破壅降逆，开痹止喘。主效用是止咳平喘。现代药理证实，苦杏仁 含丰富的黄酮类化合物(简称类黄酮），因其分子量小，易被人体吸收，能通过血脑屏障，进 入脂肪组织，所以它对人体的健康具有广泛的作用，如抗炎症、抗过敏、抑制细菌、抑制病 毒、防治肝病、降血压、降血脂、防止血栓形成、降低血管脆性、增强免疫、改善心脑血管血液 循环、抗肿瘤等。苦杏仁的营养价值很高，苦杏仁含有丰富的单不饱和脂肪酸，有益于心脏 健康;含有维生素 E等抗氧化物质，能预防疾病和早衰。此外，研究表明，甜苦杏仁是一种健 康食品，适量食用不仅可以有效控制人体内胆固醇的含量，还能显著降低心脏病和多种慢 性病的发病危险。素食者食用甜苦杏仁可以及时补充蛋白质、微量元素和维生素，例如铁、 锌及维生素 E。甜苦杏仁中所含的脂肪是健康人士所必需的，是一种对心脏有益的高不饱和 脂肪。 五味子（SCHISAM3RAE CHINENSIS FRUCTUS)为木兰科植物五味子ScAisaficZra cAi/3e/3sis(Turcz . )Bail的干燥成熟果实。药性:酸、甘、温。归肺、心、肾经。具有收敛固湿， 益气生津，补肾宁心的功效。用于治疗久咳虚喘、津少口干、遗精久泻、健忘失眠等症。朝医 认为，五味子是太阴人用药，有健肺补肺之功效。主要用于太阴人咳嗽、口渴多汗、心悸、失 眠、多梦。本品具有健肺之功，常配麦门冬、桔梗等。现代研究表明，五味子含有丰富的有机 酸、维生素、类黄酮、植物固醇及有强效复原作用的木脂素类(如五味子甲素、五味子乙素或 五味子醇），它也是兼具精、气、神三大补益的少数药材之一，能益气强肝、增进细胞排除废 物的效率、供应更多氧气、营造和运用能量、提高记忆力及性持久力。在增强免疫力方面，五 味子多糖有较好的免疫兴奋作用。五味子多糖对荷瘤小鼠的免疫器官有较好的保护作用， 说明五味子多糖能抑制肿瘤的生长，具有预防和治疗癌症的潜在价值。五味子多糖能抑制 S180荷瘤的增长同时，还对脾脏、胸腺有刺激增生作用。此外，五味子水提液及其有效成分 五味子酚、北五味子粗多糖具有延缓衰老、抗氧化的作用。
[0012] 以上原料中，鹿茸具有温阳大补、增强机体免疫力作用，为配方中的主药;天冬具 有滋阴生津的功效，因鹿茸大补圣元，久服易耗气伤阴，形成虚热现象，方中鹿茸配以天冬， 使补而不滞、协调阴阳，有利于常服久服，为配方中的辅药;升麻发表、升阳、升气解毒，具有 协助鹿茸增强益精血之力，为配方中的辅药;苦杏仁宣肺，降气;五味子健肺补肺，均为配方 中的佐药。诸药合用，共奏大补肺肾之功效。本发明配方针对"太阴人"的一切病症均由其体 质禀赋寒盛所决定的特点，通过祛除其寒胜从而保证其健康无病，以及通过滋养五脏、理气 消滞、调理阴阳、补肾益气、固本培元达到增强免疫力的目的，为开发保健食品提供了一种 新的选择。
[0013] 经功能评价实验证明，本发明保健食品具有增强免疫力的作用，可明显地调节机 体体液免疫，细胞免疫功能，增强自然杀伤细胞的活性。
[0014] 目前未见以中国朝医学养生理论为配方依据的保健食品上市，检索中国专利及文 献数据库未见与本发明组合物配方相似的保健食品专利和研究报导，本发明组合物设计理 论和思路创新。以本发明为基础开发具有增强免疫力功能的保健食品，市场需求前景广阔。

【发明内容】

[0015] 本发明的技术方案提供了一种在朝医药学理论指导下，以鹿茸等作为配方主要原 料的保健食品组合物，该保健食品组合物具有增强免疫力功能。本发明还提供了该保健食 品的制备方法。
[0016] 本发明提供了一种具有增强免疫力功能的保健食品组合物，它是由下述重量配比 的原料组成:鹿茸3份、天冬20份、升麻15份、苦杏仁15份、五味子15份。
[0017] 本发明保健食品，它是以鹿茸、天冬、升麻、苦杏仁、五味子的提取物为活性成分， 加上保健食品可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。
[0018] 其中，所述的制剂是:颗粒剂、胶囊剂和片剂。
[0019] 本发明还提供了该保健食品的制备方法，它包括如下步骤： (1)原料准备:按保健食品组合物配方称取鹿茸片、天冬、升麻、苦杏仁、五味子，各原料 质量均应符合《中华人民共和国药典》2015版(一部)的规定。
[0020] (2)鹿茸粉碎:取鹿茸片，粉碎，过筛，通过120目筛的为鹿茸细粉，未通过120目筛 的为鹿茸粗粉，备用。
[0021] (3)植物原料提取：取天冬、升麻、苦杏仁、五味子加水提取2次，料液比分别为1: 14、1:12,提取时间为1.5，1 h，滤过，合并滤液，得提取液I，备用。
[0022] (4)鹿茸提取：取鹿茸粗粉，采用超声循环法在室温下提取2次，间隔超声比为 0.6s:0.5 s ~ 0.6s:4.5s，功率为300~700 W;第一次以水为溶剂，料液比1:10~1:12,提取 时间0.5h~l. 5h;第二次以60%~85%乙醇为溶剂，料液比1:8，提取时间0.5h;提取后料液离 心，取上清液滤过，得滤液，收集第一次滤液，得提取液Π ，收集第二次滤液，得提取液m，备 用。
[0023] (5)精制:采用吸附澄清法进行精制，提取液I浓缩至料液比1:2,在65°C~75°C下缓 缓加入ZTC 1+1天然澄清剂B组分，同时搅拌，用量为3%~6%，吸附澄清后冷藏静置24h以上， 取上清液离心，滤过，滤液加入澄清剂A组分（用量为B组分的1/2)，静置4 h，滤过，得精制 液。
[0024] (6)收膏:取精制液与提取液Π 混合，减压浓缩，低温干燥，粉碎，得浸膏粉;或者进 行喷雾干燥，得浸膏粉，备用。
[0025] (7)制软材:取鹿茸细粉与辅料和浸膏粉等量递加混合，加入提取液m为粘合剂， 捏合，即得软材。
[0026] (8)制粒:取软材，置制粒机中制粒，得湿颗粒，取湿颗粒沸腾干燥，干燥后整粒，得 干颗粒。
[0027] (9)成型:取干颗粒填充于铝塑包装袋中，即得颗粒剂;填充于空胶囊中，即得胶囊 剂;填加填充剂、崩解剂或矫味剂制颗粒后置于压片机中压片，即得片剂。
[0028] (10)包装，贴标签，即得成品。
[0029] 本发明的组合物主要用于有助于增强免疫力功能的保健食品。
[0030] 本发明的制备方法主要用于生产包含鹿茸、天冬、升麻、苦杏仁、五味子等原料的 固体制剂。
[0031]
【具体实施方式】 以下结合实验例和实施例对本发明进行更为详细的说明。
[0032] 实验例1本发明保健食品中植物原料的提取工艺研究 原料提取方法的选择应根据配方原料特点、有效成分、剂型要求和生产实际等综合考 察。本实验用水提、醇提、超声提取三种提取方法对本发明保健食品组合物中植物原料部分 进行提取，以总多糖和总黄酮提取量为指标，对比考察并优化工艺参数，确定其最佳提取工 -H- 〇
[0033]配方分析 天冬主要含有多糖、高异黄酮类等，其中天冬多糖具有免疫活性，能显增加胸腺和脾脏 重量、增强吞噬细胞功能、提高血清溶血素抗体水平等，是一种低毒多效的免疫增强剂。五 味子多糖有较好的免疫兴奋、延缓衰老、抗氧化的作用。其他原料多含黄酮类成分，故选择 以总多糖和总黄酮为该方剂提取的指标成分。
[0034]总多糖含量测定的方法学考察 1.2.1溶液的配制 1.2.1.1蒽酮溶液精密称取蒽酮0.2 g，加100 mL浓硫酸，摇匀至溶解即得，临时配 制。
[0035] 1.2.1.2对照品溶液称取干燥至恒重的葡萄糖加蒸馏水制成（100 mg/L)溶液， 即得。
[0036] 1.2.1.3供试品溶液取提取液980 mL(相当于生药35 g)，减压浓缩至100 mL，待 冷却后加入乙醇至醇含量在80%以上，不断搅拌，有大量沉淀生成，静置12 h，离心，收集沉 淀，取沉淀溶于蒸馏水中配成溶液，滤过，滤液定容至1000 mL，摇匀，即得。
[0037] 1.2.2线性关系的考察分别精密量取葡萄糖对照品溶液0.1，0.3,0.5,0.7,0.9 mL于10 mL具塞刻度试管中，分别加水至体积为1.0 mL，空白管加入I mL蒸馏水做对照，各 管在冰水浴中加入4 mL蒽酮试剂后摇匀，置沸水浴中加热，加塞，以防蒸发，自水浴重新煮 沸开始计时，准确煮沸10 min，流水冷却，于600 nm处比色。以对照品溶液浓度(X)与吸光度 值(Y)进行线性回归，得回归方程为F= 0.0107Z+0.0018，r = 0.9999(n=5)，结果表明， 在10.0~90.0 ug .ml/1范围内对照品浓度与吸光度值呈良好的线性关系。
[0038] 1.2.3精密度、稳定性、重复性考察按1.2.2项下重复测定，结果精密度RSD为 0.42%;稳定性RSD为0.27%;重复性RSD为1.09%。表明仪器精密度良好;供试品溶液在12 h内 稳定;本法重复性良好。
[0039] 1.2.4加样回收率考察精密量取已知含量的样品溶液共6份，分别精密加入对 照品适量，制备供试品溶液，计算回收率，见表1。结果总多糖平均回收率为99.58%，RSD= 0.88 %，表明本法准确度较好，方法可行。
[0040] 表1加样回收率考察结果
1.3总黄酮含量测定的方法学考察 1.3.1溶液的配制 1.3.1.1对照品溶液精密称取干燥至恒重的芦丁标准品加甲醇制成0.05 mg.ml/1对 照品溶液。
[0041] 1.3.1.2供试品溶液精密吸取本发明保健食品提取液0.5 mL于蒸发皿中，用I g 聚酰胺粉吸附，蒸干，转入聚酰胺层析柱。先用30 mL石油醚冲洗，弃去石油醚液，然后加100 mL甲醇洗脱，得洗脱液，至水浴锅上挥干洗脱液，最后加甲醇定容至25 mL，即得。
[0042] 1.3.2线性关系的考察分别精密量取对照品溶液1，2,3,4,5,61^于1〇11^容量 瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，于360 nm处测定吸光度。以对照品溶液浓度(Z )与吸光度 值)进行线性回归，得回归方程为Γ = 0.0147Z + 0.1025，r = 0.9999(n=6)，结果表明， 在10.0012~60.0072 ug.ml/1范围内对照品浓度与吸光度值呈良好的线性关系。
[0043] 1.3.3精密度、稳定性、重复性考察按1.3.2项下重复测定，结果精密度RSD为 0.22%，稳定性RSD为0.21%，重复性RSD为0.99%。表明仪器精密度良好;供试品溶液在12 h内 稳定;本法重复性良好。
[0044] 1.3.4加样回收率考察精密量取已知含量的样品溶液共6份，分别精密加入对 照品适量，制备供试品溶液，计算回收率，见表2。结果总黄酮平均回收率为99.91%，RSD= 0.92 %，表明本法准确度较好，方法可行。
[0045] 表2加样回收率考察结果
1.3.5小结 本节采用的紫外分光光度法，以总多糖和总黄酮为指标作为本发明保健食品的含量测 定方法，结果表明，此法重复性、稳定性良好，回收率稳定，表明此法准确、可靠，可用于总多 糖和总黄酮的含量测定。
[0046] 1.4工艺优化 1.4.1提取方法的选择根据本配方中药材的性质、功效成分及剂型要求和生产实际 因素进行综合考察。对比考察常规溶剂提取法与超声提取法对配方中总多糖及总黄酮含量 的影响。取配方量原料3份，分别加入10倍量溶剂浸泡I h。第一份水煎煮I h，，第二份室温 下超声提取I h，第三份60 °C下超声提取I h，滤过，离心。按1.2.1及1.3.1项下制备供试 品溶液，按1.2.2及1.3.2项下测定总多糖与总黄酮吸光度。结果如表3。结果表明，常规溶剂 提取法总黄酮及总多糖含量均高于常温超声提取法，总多糖含量低于加热超声提取法，而 总黄酮含量高于加热超声提取法，综合考虑实验成本和设备，故采用常规溶剂提取法。
[0047] 表3提取方法选择结果(?土 S，η = 3)
1.4.2提取溶剂和用量的选择分别采用水、50%乙醇为提取溶剂，再分别加9、7倍量 与14、12倍量溶剂浸泡I h后煎煮I h、0.5 h，提取2次，合并，滤过，离心。按1.1.1及1.2.1项 下制备供试品溶液，按1.1.2及1.2.2项下测定总多糖与总黄酮吸光度。结果表明，水提液中 的总黄酮及总多糖吸光度值均最高，故采用水作为提取溶剂;高倍量溶剂比低倍量吸光度 高，故采用高倍量溶剂，见表4。
[0048] 表4溶剂与用量的比较(5T 土 S，η = 3)
1.4.3浸泡时间及溶剂吸收率的考察 精密称取配方量药材，加水浸泡，每隔20 min称量药渣重量，至重量不变化为止，结果 表明药材浸泡1.5 h后，吸水率增加不明显，吸水率为75%。
[0049] 1.4.4试验方案的设计 采用正交设计试验，以样品中总多糖与总黄酮量为评价指标，优选本发明保健食品提 取的最佳工艺。在提取工艺中，影响提取率的主要因素为提取时间、溶剂用量。因此，选用L9 (32)正交设计安排实验。因素水平设置见表5，正交实验安排及结果见表6。 表5水提法试验因素水平
1.4.5结果分析以各实验组总黄酮和总多糖的含量为指标进行分析，方差分析结果 见表7和表8。结果表明，因素 B对总黄酮及总多糖提取量无显著性影响，因素 A对总黄酮及总 多糖提取量有显著性影响，进一步进行多水平均值检验，结果和表10。表2-15结果表明，对 总黄酮提取量的影响AOA 2 >八^^与知间无显著性差异;对总多糖提取量的影响A3>A2 > A !，知与知间无显著性差异，综合考虑选择A2，即提取时间为1.5，Ih;又总黄酮提取量的影响B3 >82>81，82与出间没有显著性差异;对总多糖提取量的影响出>8 3>81，但出与出间没有显 著性差异，B2的溶剂用量节省资源，故选择B 2,即溶剂用量为14,12倍量水，最佳生产工艺为 A2B2，即提取时间为1.5，I h，溶剂用量为14，12倍量水。
[0050] 表7统计分析结果(总黄酮）
1.5验证性实验 称取2倍配方量原料，按照上述优化提取工艺进行提取。重复进行3次平行试验，测得样 品中总多糖总量为（51 · 03 ± 0 · 32)ug·mL-1;总黄酮含量（25 · 21 ±0 · 35 )ug·mL-1与正交实 验最大值50.64 ug.mL-1、24·18±0·32 ug.mL-1接近，表明工艺优化成功，该工艺稳定、合 理、可行。
[0051] 实验例2本发明保健食品植物原料提取液的精制工艺研究 为了进一步提高有效成分在制剂中的相对含量，减少服用剂量，对提取液进行精制，根 据企业实际生产的需要和可行性，采用吸附澄清法进行精制。本实验采用ZTC1+1澄清剂对提 取液进行精制处理。因水提液PH接近中性，所以澄清时先加入B组分再加 A组分，用量为2:1。 [0052] 2.1澄清剂的配制 按要求将A组分用水配成1 %溶液，B组分用1 %醋酸配成1 %溶胶液。
[0053] 2.2吸附澄清法试验方案设计 根据药液性质，选择在70 °C下，加入澄清剂B组分至药液出现大量絮状沉淀，静置24 h，过滤，滤液加入澄清剂A组分(B组分的1/2)，静置4 h，过滤，得精制液。本实验主要考察加 入吸附澄清剂后对出膏率和总黄酮、总多糖含量的影响以及药液不同浓缩程度对精制后药 液澄明度的影响。
[0054] 2.2.1精制前后出膏率比较将提取液和精制液浓缩烘干至质量不再减少，称量 膏体质量，测定精制前和精制后的出膏率，见表11。结果表明，精制后提取液出膏率减少了 10.1%，除杂效果良好。
[0055] 表11精制前后出膏率比较(黑土 S，η = 3)
2.2.2精制前后含量测定测定精制前和精制后总多糖和总黄酮的含量，见表12。结果 表明，精制工艺对提取液有效成分含量无显著影响。
[0056]表12精制前后含量测定
2.2.3药液浓缩对吸附澄清剂用量和澄清效果的影响选择不同的药液浓缩比例，按 上法操作，考察澄清剂用量与药液澄明度，见表13、14。结果表明，药液浓缩程度对澄明度有 显著影响，确定最佳浓缩料液比为1: 2。
[0057]表13药液浓缩对用量的影响
注:+++严重浑浊++浑浊+轻微浑浊-澄明 2.3吸附澄清剂的用量趋势考察为了放大生产规模化，对吸附澄清剂的用量趋势做 了初步判断。取处方量的原料，分别按最佳提取工艺提取，滤过，分别取滤液50 mL、100 mL、 150 mL、200 mL、300 mL、400 mL、500 mL、1000 mL，置磁力搅拌器上，控制温度在70 °C，加 入吸附澄清剂B至大量沉淀生成，考察澄清剂用量，见表15。结果表明，吸附澄清剂B组份用 量为2.3%-6%(A组分为B组分的1/2)时澄清效果均较好，且随着药液量增多澄清剂用量比反 而减少。从生产实际角度考虑，选择吸附澄清剂B组份用量为3-6 %(A组分为B组分的1/2)。
[0058] 衷1；5潜清剂用量
2.4精制工艺优化结果最优澄清工艺为:药液浓缩比为1:2,加入吸附澄清剂B组份， 用量为3-6 %(A组分为B组分的1 /2)。按最优澄清工艺精制的药液，澄明度好，稳定性高，能 够在较大程度上祛除鞣质、蛋白质、树脂、蜡质等胶体不稳定成分，并且不影响有效成分总 黄酮和总多糖的含量。
[0059] 实验例3鹿茸加工工艺研究 本发明组合物中君药为鹿茸，因鹿茸为贵重药材，因此本方采取鹿茸粉碎过筛，细粉直 接入药，粗粉进一步提取的方式对鹿茸加以全面的利用。方法为:鹿茸片粉碎，过120目筛， 过筛的细粉备用，未过筛的粗粉进行提取。
[0060] 3.1鹿茸片粉碎出粉率考察 对鹿茸用万能粉碎机进行粉碎，过120目筛考察出粉率，结果见表16。结果表明按本法 粉碎鹿茸细粉出粉率为58.5%。
[0061] 表16出粉率考察结果
3.2鹿茸粗粉提取工艺研究 药理研究表明，鹿茸多糖是鹿茸提高机体免疫功能的功效成分之一。因此，本实验鹿茸 的提取以鹿茸多糖为指标，采用蒽酮一硫酸比色法，对鹿茸的提取工艺进行研究。
[0062] 3.2.1方法学考察 3.2.1.1溶液的配制 (1)蒽酮溶液精密称取蒽酮0.2 g，加100 mL浓硫酸，摇匀至溶解，即得，临时配制。 [0063] (2)对照品溶液精密称取干燥至恒重的葡萄糖加蒸馏水制成（100 mg/L)溶液。
[0064] (3)供试品溶液取鹿茸提取液，减压浓缩，待冷却后加入95%乙醇至醇含量在80% 以上，不断搅拌，有大量沉淀生成，静置12 h，离心，收集沉淀，取沉淀溶于蒸馏水中配成溶 液，过滤，滤液定容至1 〇〇〇 mL，摇勾，即得。
[0065] 3.2.1.2线性关系的考察按1.1.2项下进行，以对照品溶液浓度(Z )与吸光度 值（Γ)进行线性回归，绘制标准曲线，得回归方程为F= 0.0107Z+0.0018，r = 0.9994(n =5)，对照品浓度在10.0002-90.0018ug.mL-1范围内与吸光度值A呈良好的线性关系。
[0066] 3.2.1.3精密度、稳定性、重复性考察按1.2.2项下重复测定，结果精密度RSD为 0.42%，稳定性RSD为0.95%，重复性RSD为1.04%。表明仪器精密度良好，供试品溶液在12 h内 稳定，本法重复性良好。
[0067] 3.2.1.4加样回收率考察精密量取已知含量的样品溶液共6份，分别精密加入 对照品适量，制备供试品溶液，计算回收率，结果总多糖平均回收率为100.28%，RSD=O. 68 %，表明本法准确度较好，方法可行，见表17。
[0068]表17加样回收率考察结果
3.2.2提取工艺优化 3.2.2.1提取溶剂对总多糖提取率的影响取鹿茸粗粉4组，加入不同溶剂，在超声功 率500 W，间隔超声时间比0.6:1.5 s，室温条件下循环超声提取I h，滤过，得提取液，照上 述方法测定总多糖含量。结果表明，提取溶剂采用水提取最佳，见表18。 表18不同溶剂总多糖提取率(:无土 s，/3= 3)
3.2.2.2料液比对总多糖提取率的影响取鹿茸粗粉3组，每组3份，各150 g，以水为提 取溶剂，原料与提取溶剂分别按1:10，1:12，1:14配比，按"3.2. Γ项下条件提取，测定总多 糖含量，结果表明，料液比对总多糖提取率有影响，1:12,1:14提取率接近，明显高于1:10， 故确定料液比为1:12。
[0069] 3.2.2.3超声工艺参数对总多糖提取率的影响选取间隔超声时间比U )、提取 时间(5 )、超声功率（C )为考察因素，以提取率为评价指标，采用正交设计试验优选工艺参 数。因素水平见表19,试验安排见表20,方差分析结果见表21。取鹿茸粗粉，加入12倍量水， 按表20方案提取，提取液滤过，滤液定容为样品液，测定总多糖含量。计算总多糖提取率，结 果见表20。结果表明，在所选水平范围内d 3因素对提取率影响程度一致，均无显著性 差异。根据直观实验结果，确定优选工艺参数为，即间隔超声时间比0.6:0.5,提取 时间I h，超声功率500 W。
[0070] 表19正交设计试验因素及水平
3.2.3验证实验取鹿茸粗粉按优选工艺条件提取，进行3次平行实验。结果，总多糖 提取量为25.58 %与正交设计试验最大值接近，表明优选的工艺参数合理。
[0071] 3.2.4上述实验采用鹿茸多糖含量作为鹿茸提取工艺的指标成分有一定的局限 性，鹿茸中除含多糖外，尚含有其它多种活性成分，为了使鹿茸中其他有效成分(如脂溶性 成分)得以充分提取，最终确定提取工艺为:采用超声循环法在室温下提取二次，第一次以 水为溶剂，料液比1:12，提取时间Ih;第二次以70%乙醇为溶剂，料液比1:8，提取时间0.5h; 超声工艺参数:间隔超声比均为0.6s:0.5 s，功率为500 W。
[0072] 实验例4本发明保健食品制备咀嚼片的成型工艺研究 咀嚼片具有物理、化学稳定性好，生产成本低，服用与携带方便等优点。咀嚼片的制备 重点在于制剂辅料的筛选。
[0073] 4.1制备方法 4.1.1浸膏粉的制备 取精制液与提取液Π 混合，减压浓缩，低温干燥，粉碎，得浸膏粉，或者进行喷雾干燥， 得浸膏粉，计算出膏率为26% 4.1.3制粒、压片 取鹿茸细粉与浸膏粉和辅料等量递加混合，加入提取液m为粘合剂，捏合，即得软材， 置制粒机中制粒，湿颗粒干燥，过16目筛整粒，即得干颗粒;用压片机((620 mm圆形冲模)压 片，即得咀嚼片。
[0074] 4.2辅料筛选 4.2.1填充剂淀粉是最常用的填充剂亦可作为崩解剂，但淀粉可压性差，用作填充剂 的用量不宜太多，以防止压成的药片松散，可与有较强粘合力的糊精合用来增强其可压性。 还可再加入乳糖，乳糖无吸湿性，有良好的可压性，制成的片剂光洁美观，不影响药物的溶 出，是一种优良的片剂填充剂。以糊精、淀粉及乳糖作本发明保健食品咀嚼片的填充剂，制 成的片剂不仅具有一定的硬度和光滑表面，还可以改善其口感。
[0075] 根据咀嚼片的外观、色泽、硬度、口感等感官指标为主要依据进行填充剂筛选，评 价指标及结果见表21。
[0076] 弄21昍卩爵片感亩质量评分标准及结里
4.2.2矫味剂本发明制剂成型前的物料入口后以酸为主、略苦，带有鹿茸特有腥味。 为了符合大众的口味，采用乙基麦芽酚、甜味剂、柠檬酸、甘露醇分别进行了配伍实验。结果 在咀嚼片中加入甜蜜素和甘露醇做矫味剂以及适当喷以少量乙基麦芽酚溶液后口感最好、 成本低廉。其中加入少量乙基麦芽酚主要目的为掩盖药片中鹿茸的腥味，并适当优化口感。
[0077] 4.2.3润湿剂本发明制剂成型前的物料含糖量大，因此浸膏粉粘性很大，遇水 粘性过强而不易制粒，所以分别采用40%、50%、60%、70%乙醇溶液为润湿剂。随着乙醇浓度的 增大，润湿后所产生的黏性降低。以40%、50%、60%乙醇作润湿剂粉料粘性偏大，粉料易结块 成团，70%乙醇作润湿剂粉料粘性适中，粉末易制成软材。故采用本发明提取工艺研究中的 提取液ΙΠ 为粘合剂（乙醇浓度为70%左右），可适当降低浸膏粘性而粉料又不至于太松散，易 于制备软材;同时以提取液作为粘合剂，可以节约辅料乙醇的用量。
[0078] 4.3压片成型工艺 4.3.1干颗粒各项指标测定 4.3.1.1流动性、粒度分布、含水量的测定按《中国药典》(2010版)(一部)要求进行测 定。流动性采用固定漏斗法测定休止角，粒度分布采用筛分法测定分布比例，含水量采用烘 干法测定，测定结果见表22。
[0079] 表22干颗粒各项指标测定结果(n=3)
4.3.1.2吸湿性考察按《中国药典》（10版）（一部)要求进行测定。计算吸湿增重百分 率，绘制吸湿曲线。结果表明，在相对湿度为42%条件下，该颗粒放置5天吸湿可达到平衡。
[0080] 4.3.2压片压片前计算片重，本品可按下式计算片重。
[0081] 理论片重=(植物原料配方量X出膏率/片剂中浸膏比例)/每日服用片数 =(19.5X26%/0.5)/ 6 =1.7 g 实际服用量为1.7g/片左右，日服6片，分3次服用，符合保健食品规定。
[0082] 4.4 结论 咀嚼片制剂处方为:浓浸膏:糊精:淀粉:乳糖=1:0.5:0.2:0.1，用甜蜜素和甘露醇为矫 味剂，含70%乙醇的m为粘合剂。按此种方法筛选的辅料及配比进行批量生产，其外观、性 状、重量差异、硬度、含量均符合要求，证明该工艺条件稳定、合理、可行。
[0083] 实验例5本发明保健食品制备的咀嚼片质量标准研究 5.1鉴别 照薄层色谱法(《中国药典》2010版(一部)附录VIB)试验。
[0084] 5.1.1天冬薄层鉴别取本品粉末4g，加无水乙醇40ml，浸泡过夜，滤过，滤液蒸 干，残渣加甲醇定容至lml。另取天冬对照药材4g，同法制成对照药材溶液。取缺天冬制剂 4g，同法制成阴性对照溶液。吸取上述四种溶液各5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，经比 较研究选用的展开剂为，以正丁醇一冰醋酸一乙醇一水(4:1:1:2)。展开，取出，晾干，喷以 10%硫酸溶液，日光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑 点，阴性对照品则无相应斑点。
[0085] 5.1.2升麻薄层鉴别取本品粉末3g，加乙醇50 mL，加热回流1小时，滤过，滤液蒸 干，残渣加乙醇I mL使溶解，作为供试品溶液。取缺升麻制剂2g，同法制成阴性对照溶液。另 取阿魏酸对照品，加乙醇制成每I mL含Img的溶液，作为对照品溶液。吸取上述三种溶液各 IOlIl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯一三氯甲烷一冰醋酸(6:1:0.6)为展开剂，展开， 取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显 相同颜色的荧光斑点，阴性对照品则无相应斑点。
[0086] 5.1.3五味子薄层鉴别取本品粉末5g，加三氯甲烷50 mL，加热回流30分钟，滤 过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷I mL使溶解，作为供试品溶液。取五味子对照药材2g，同法制 成对照药材溶液。再取五味子醇甲对照品，加三氯甲烷制成每I mL含Img的溶液，作为对照 品溶液。取缺五味子的制剂2g，同法制成阴性对照溶液。吸取上述四种溶液，分别点于同一 硅胶GF254薄层板上，以石油醚（30-60 °C ) -乙酸乙酯一甲酸（15:5 :1)的上层溶液为展开 剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。结果在与对照药材色谱相应位置上，供试 品色谱均显相同颜色的斑点，阴性对照品则无相应斑点。
[0087] 5.1.4苦苦杏仁薄层鉴别取本品粉末4g，，加二氯甲烷适量，加热回流2小时，弃 去二氯甲烷液，药渣挥干，加甲醇30ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液作为供试品溶液。 另取苦苦杏仁对照药材4g，同法制成对照药材溶液。取缺苦苦杏仁制剂4g，同法制成阴性对 照溶液。吸取上述两种溶液各3μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲 醇-水（15:40:22:10)5~10°C放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，立即用0.8%磷 钼酸的15%硫酸乙醇溶液浸板，在105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色 谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
[0088] 5.2咀嚼片中总黄酮的测定 采用紫外分光光度法，测定咀嚼片中总黄酮含量。
[0089] 5.2.1溶液的配制 (1)样品溶液取本品研细，精密称取精密称取Ig加乙醇定容至10mL，摇匀后，超声 20min，静置，微孔滤膜滤过，得样品溶液。
[0090] (2)供试品溶液精密量取样品溶液ImL于蒸发皿中，加 Ig聚酰胺粉吸附，于水 浴或恒温箱中挥去乙醇，然后转入层析柱，先用20mL石油醚洗脱，弃去石油醚液，再用甲醇 洗脱，收集甲醇液，减压蒸干，甲醇溶解定容至25mL即得。
[0091] (3 )对照品溶液精密称取芦丁标准品5mg至105 °C至恒重，用甲醇溶解定容至100 HiL容量瓶中，超声放冷，用甲醇补足，即得0.05mg/mL标准溶液。
[0092] 5.2.2线性关系考察分别量取对照品溶液l，2,3,4,5,6,7mL于10 mL容量瓶 中，加甲醇至刻度，摇匀，于256nm处测定吸光度。以对照品溶液浓度(X)与吸光度值(Y)进 行线性回归，得回归方程为F= 0.7339Z+0.1025 r2= 0.9996(n=6)。结果表明，在 10.0012-60.0072ug .ml/1范围内对照品浓度与吸光度值呈良好的线性关系。
[0093] 5.2.3精密度考察精密量取对照品溶液，重复测定5次，结果RSD值为0.22%，表 明仪器精密度良好。
[0094] 5.2.4稳定性考察精密量取供试品溶液，分别于0,2,4,6,8，10，1211，测定吸光 度，结果RSD值为1.26%。表明，供试品溶液在12 h内稳定。
[0095] 5.2.5重复性考察精密称取同一批样品，按供试品溶液项下制备5份供试品， 测定吸光度。结果RSD值为1.06%。表明，本法重复性良好。
[0096] 5.2.6加样回收率考察精密量取已知含量的样品溶液共6份，分别精密加入对 照品适量，按供试品溶液项下制备，计算回收率，结果见表23。结果本法平均回收率为 99.82%，RSD=I. 14 %，表明本法准确度较好，方法可行。
[0097]表23加样回收率考察结果
5.2.7样品含量测定按上述测定方法对3批样品进行测定，计算含量，结果见表24。 根据3批样品的含量测定结果，暂定本品每Ig含总黄酮不得少于8.8mg/g。 「00981 耒?!4烊品含量涮宙结里
5.3咀嚼片及鹿茸原药材中尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷的含量测定 采用高效液相色谱法，测定咀嚼片及鹿茸原药材中尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷的含量。 [0099] 5.3.1 色谱条件色谱柱为Thermo 0DS-2HYPERSIL (4.6 mm X 250 mm，5 μπι)， 流动相为甲醇--O.Olmol.L-1磷酸二氢钾溶液=(2 : 98)，流速0.8 mL ·π?η-1;检测波长 254nm，柱温25 cC0
[0100] 5.3.2溶液的配制 混合对照品溶液:精密分别称取尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷对照品8. Omg分别置于5ml容量 瓶中，加纯水溶解并稀释至刻度，作为对照品储备液。然后各精密量取〇.5ml、lml、lml，置于 同一IOml容量瓶中，加纯水至刻度，再取Iml稀释至IOml，最终配制成浓度分别为8以8·!!^-1、16.4 yg*mL_l、16.4yg*mL_l的溶液，即得。
[0101]供试品I溶液:取鹿茸原药材过120目筛细粉Ig，置于50ml容量瓶中，加 IOml纯水， 超声处理(功率250W，频率50kHz )30min，离心5min，取上清液，残渣同法处理2次，收集3次上 清液，定容至50ml，即得。
[0102] 供试品Π 溶液:取样品研细成粉末(过三号筛），精密称取4 g，置于50ml容量瓶中， 同供试品I制备方法制备，即得。
[0103] 阴性样品溶液:取缺鹿茸的样品咀嚼片4 g，同供试品制备方法制备，即得。
[0104] 5.3.3系统适用性试验分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各10 uL，注入色谱仪，测定，在本色谱条件下尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷的保留时间分别为5.856、 8.351、10.217min，理论塔板数按尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷峰计算不低于5590。样品可得到较 好的分离，供试品I和供试品Π 在与对照品色谱保留时间相应处有相同色谱峰，而阴性对照 无干扰。
[0105] 5.3.4线性关系的考察精密量取对照品溶液5，10，15，20、25、30 uL，注入色 谱仪，测定峰面积，以峰面积(Y)对进样量(X)进行回归，结果得尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷回归 方程分别为：Y= 2.2E+5X +6134.4，r2 = 0·9999(η=6)，Υ= 49655X +5596，r2= 0·9999(η =6),Y= 40901Χ +3498.2, r2 = 0.9999(η=6)〇
[0106] 3种生物碱基成分进样浓度均在0.082~0.492 ug范围内，尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷 进样量与峰面积呈良好的线性关系。
[0107] 5.3.5精密度考察精密吸取上述混合对照品溶液，每次进样10 uL，重复进样5 次，以峰面积计算尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷RSD(n=5)分别为1.06%、1.60%、0.85%，结果表明仪 器精密度良好。
[0108] 5.3.6稳定性考察精密吸取同一批供试品I溶液和供试品Π 溶液，分别于0,2， 4，8，12h，每次进样10 uL，测定，供试品1溶液RSD分别为1.23%、1.18%、1.89%，供试品2溶液 RSD分别为2.16%、1.78%、1.84%结果表明供试品溶液在12h内稳定。
[0109] 5.3.7重现性考察精密称取供试品1、供试品2同一批样品5份，按供试品溶液项 下制备，每次进样1 〇 uL，测定，供试品1溶液RSD分别为1.73%、1.30%、1.70%，供试品2溶液 RSD分别为1.87%、1.70%、1.67%，表明本法重现性良好。
[0110] 5.3.8加样回收率考察取已知尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷含量分别为59.22 ug/g、 140.35ug/g、78.48ug/g的本保健食品Ig共9份，平均分为3组，每组分别加入混合对照品适 量，按供试品制备项下方法制成溶液，平行测定，进样IOul，计算尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷的 测得值和平均回收率见表1.结果表明，各浓度下加样回收率的稳定性均较好，该测定方法 测定结果较准确。
[0111]表25种生物碱基成分回收率实验结果
5.3.9咀嚼片样品的含量测定分别精密吸取对照品溶液与3批供试品溶液各IOul进 行HPLC法测定，通过外标法以峰面积计算尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷的含量，结果见表26。
[0112] 表26 3批样品中尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷含量测定结果
结果表明，咀嚼片中尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷含量分别为59.22 ug/g、140.35ug/g、 78.48ug/g. 根据上述3批样品的含量测定结果，暂定本品每Ig含尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷分别不得 少于53.30ug、126.32ug、70.63 ug(按每个组分含量X 90%)，每片片重为1.7g，故暂定本品 每片含尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷分别不得少于106.6ug、252.64ug、141.26 ug。
[0113] 5.3.10鹿茸饮片样品测定所测样品中尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷的含量分别为： 0 · 7598mg. g-\ 1 · 4326mg. g-1J · 9984mg. g-1 5.4咀嚼片中五味子醇甲的含量测定 采用高效液相色谱法，测定咀嚼片及五味子原药材中中五味子醇甲的含量。
[0114] 5.4.1 色谱条件色谱柱为Thermo 0DS-2HYPERSIL (4.6 mm X 250 mm，5 μπι)， 流动相为甲醇：水=(65 : 35)，流速lmL.min-1;检测波长250nm，柱温25 °C。
[0115] 5.4.2溶液的配制 对照晶溶液的制备:取五味子醇甲对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含五味子 醇甲0.57mg的溶液，即得。
[0116]供试品溶液I的制备：取五味子原药材Ig，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇约 20ml，超声处理（功率250W，频率20kt {z) 30分钟，取出，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤 液，即得。
[0117]供试品溶液Π 的制备:取咀嚼片粉末(过三号筛）约4g，按供试品溶液I项下制备， 即得。
[0118]阴性样品溶液:取缺五味子的咀嚼片2 g，同供试品制备方法制备，即得。
[0119] 5.4.3系统适用性试验分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各10 uL，注入色谱仪，测定，在本色谱条件下五味子醇甲的保留时间为8.119min，理论塔板数按 五味子醇甲峰计算不低于7186。样品可得到较好的分离，供试品I和供试品Π 在与对照品色 谱保留时间相应处有相同色谱峰，而阴性对照无干扰。
[0120] 5.4.4线性关系的考察精密量取对照品溶液5，10,15，20、2、30 uL，注入色谱 仪，测定峰面积，以峰面积（Y)对进样量(X)进行回归，结果得五味子醇甲回归方程为Y= 1.0E+5X-6631.0, r2 = 1·0000(η=5)五味子醇甲进样浓度在0.285~1.71 Ug范围内，五味 子醇甲进样量与峰面积呈良好的线性关系 5.4.5精密度考察精密吸取上述混合对照品溶液，每次进样10 uL，重复进样5次，以 峰面积计算五味子醇甲RSD( n=5 )为0.6548%，结果表明仪器精密度良好。
[0121] 5.4.6稳定性考察精密吸取同一批供试品I溶液和供试品Π 溶液，分别于0,2， 4，8，12h，每次进样10 uL，测定，RSD分别为1.1364%、2.8932%，结果表明供试品溶液在12h内 相对稳定。
[0122] 5.4.7重现性考察精密称取同一批样品5份，按供试品溶液项下制备，每次进样 10 uL，测定，RSD为1.55%，表明本法重现性良好。
[0123] 5.4.8加样回收率考察精密量取已知含量的咀嚼片样品溶液共6份，分别精密 加入对照品适量，按供试品溶液项下制备，每次进样10 uL，测定，计算回收率，结果见表27。
[0124] 表27加样回收率考察结果 结采表明，本法干均回叹卒为99.6217%
，KSU=I. 0922%，表明本法准佛度较奸，万法可 行。
[0125] 5.4.9咀嚼片样品的含量测定 按上述测定方法对3批样品进行测定，以外标法计算，结果见表28。
[0126] 表28 3批样品中五味子醇甲含量测定结果
结果表明，咀嚼片中五味子醇甲含量为41.17 ug/g. 根据上述3批样品的含量测定结果，暂定本品每Ig含五味子醇甲不得少于37.05g (41.17 ug X 90%)，每片片重为1.7g，故暂定本品每片含五味子醇甲不得少于74.10ug。
[0127] 5.4.10五味子饮片测定所测五味子饮片样品中五味子醇甲含量为:4.92mg.g， 艮口0.492%。符合2010版中国药典的规定(含五味子醇甲（02纽3207)不得少于0.40%)。
[0128] 实施例1本发明保健食品组合物制备颗粒剂 配方：
制法： (1)按上述保健食品重量配比称取原料，取鹿茸片，粉碎，过筛，通过120目筛的为鹿茸 细粉，未通过120目筛的为鹿茸粗粉，备用； (2 )取天冬、升麻、苦杏仁、五味子加水提取2次，料液比分别为1:14、1:12，提取时间为 1.5，1 h，滤过，合并滤液，得提取液I，备用； (3) 取鹿茸粗粉，采用超声循环法在室温下提取二次，第一次以水为溶剂，料液比1:10， 提取时间〇. 5h，第二次以60%乙醇为溶剂，料液比1:8，提取时间0.5h，间隔超声比均为0.6s: 0.5 s，功率为500 W，提取后料液离心，取上清液滤过，得滤液，收集第一次滤液，得提取液 Π ，收集第二次滤液，得提取液m，备用； (4) 提取液I浓至料液比1: 2，在70°C~75°C下缓缓加入ZTC 1+1天然澄清剂B组分，同时 搅拌，用量为4%，吸附澄清后冷藏静置30h，取上清液离心，滤过，滤液加入澄清剂A组分（用 量为B组分的1/2)，静置4 h，滤过，得精制液； (5) 取精制液与提取液Π 混合，减压浓缩，低温干燥，粉碎，得浸膏粉，或者进行喷雾干 燥，得浸膏粉； (6) 取鹿茸细粉与浸膏粉或加辅料等量递加混合，加入提取液m为粘合剂，捏合，即得 软材，置制粒机中制粒，湿颗粒干燥整粒，即得干颗粒； (7) 取干颗粒填充于铝塑包装袋中，即得颗粒剂。 实施实例2本发明保健食品组合物制备咀嚼片 配方：
制法： (1)按上述保健食品重量配比称取原料，取鹿茸片，粉碎，过筛，通过120目筛的为鹿茸 细粉，未通过120目筛的为鹿茸粗粉，备用； (2 )取天冬、升麻、苦杏仁、五味子加水提取2次，料液比分别为1:14、1:12，提取时间为 1.5，1 h，滤过，合并滤液，得提取液I，备用； (3) 取鹿茸粗粉，采用超声循环法在室温下提取二次，第一次以水为溶剂，料液比1:10， 提取时间〇. 5h，第二次以60%乙醇为溶剂，料液比1:8，提取时间0.5h，间隔超声比均为0.6s: 0.5 s，功率为500 W，提取后料液离心，取上清液滤过，得滤液，收集第一次滤液，得提取液 Π ，收集第二次滤液，得提取液m，备用； (4) 提取液I浓至料液比1: 2，在70°C~75°C下缓缓加入ZTC 1+1天然澄清剂B组分，同时 搅拌，用量为4%，吸附澄清后冷藏静置30h，取上清液离心，滤过，滤液加入澄清剂A组分（用 量为B组分的1/2)，静置4 h，滤过，得精制液； (5) 取精制液与提取液Π 混合，减压浓缩，低温干燥，粉碎，得浸膏粉，或者进行喷雾干 燥，得浸膏粉； (6) 取鹿茸细粉与浸膏粉加甘露醇、乳糖、糊精量递加混合，加入提取液m为粘合剂，捏 合，即得软材，置制粒机中制粒，湿颗粒干燥整粒，即得干颗粒； (7) 取干颗置于压片机中压片，即得咀嚼片。
[0129]实施例3本发明保健食品制备的阻嚼片功能评价 1增强免疫力功能评价实验 1.1样品受试样品为根据本发明生产的三批咀嚼片（20130420、20130430、 20130513)，咀嚼片2 g/片，人口服推荐剂量为每日6片，按成人体重60 kg计算，折合剂量为 0.2 g/(kg.d)。本实验采用10、30倍服用剂量作为受试物。
[0130] 实验动物清洁级昆明种雄性小鼠250只，体重18-22 g。豚鼠5只，250~300 g。
[0131] 剂量分组及受试样品给予时间实验设2个剂量组，1个空白对照组。据人体口服 推荐剂量，设中、高剂量分别为2、6 g*kg_l bw(分别相当于人体推荐剂量的10、30倍）。受 试样品给予时间为30天。
[0132] 建立评价指标将雄性昆明种小鼠随机分为4组，，高、中、低剂量组及阴性对照组 每组各10只。阴性对照组每天灌蒸馏水，实验设11.00g/(kg.d)、22.00g/(kg.d)、44.00g/ (kg. d) 3个剂量组(相当于人体推荐摄入量的5、10、20倍，分别为低剂量组、中剂量组、高剂 量组）。每天灌胃1次，连续30天，解剖前动物禁食不禁水24小时，实验第31天，按卫生部发布 的《保健食品功能学评价程序和检验方法规范》中增强免疫力功能检验方法进行。动物灌胃 受试物1小时后再以抗原攻击小鼠，使小鼠产生免疫。继续灌胃4天后进行各个指标的评价， 以细胞免疫功能、体液免疫功能、单核一巨噬细胞功能、NK细胞活性为评价指标。
[0133] 数据处理和结果判定 1.5.1统计学处理组间数据差异的显著性检验使用SPSS16.0统计软件进行单因素 方差分析处理，以P<〇. 05为差异有显著性。
[0134] 结果在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核一巨噬细胞功能及NK细胞活性四个 方面测定中，小鼠迟发型变态反应实验、血清溶血素测定、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬荧光微球 实验结果均成阳性，经单因素方差分析，差异有统计学意义(P<〇.05)表明该实验成功，实验 系统可靠。实验所设的高、中两个剂量组与对照组有显著性差异，免疫功能有增强的趋势， 差异具有统计学意义。
[0135] 上述功能评价实验表明，根据本发明生产的咀嚼片样品具有增强免疫力功能。
[0136] 本发明的保护范围不能认为只局限于上述【具体实施方式】及具体实例。对所属技术领域 的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的基本前提下，还可以做出若干简单推演或等 同替换，这些等同替换方案仍然将被视为在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种朝医复方鹿茸保健食品，其特征在于，它是由下述重量配比的原料组成：鹿茸3 份、天冬20份、升麻15份、苦杏仁15份、五味子15份。2. 根据权利要求1所述的保健食品，其特征在于，它是以鹿茸、天冬、升麻、苦杏仁、五味 子的提取物为活性成分，加上保健食品可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。3. 根据权利要求2所述的制剂，其特征在于，所述制剂的剂型是：颗粒剂、胶囊剂和片 剂。4. 根据权利要求2~3所述的制剂是通过如下工艺过程制备的：①原料准备;②鹿茸粉 碎;③植物原料提取;④鹿茸提取;⑤提取液精制;⑥收膏;⑦制软材;⑧制粒;⑨制剂成型。5. 根据权利要求4所述制剂的制备方法，其特征在于： (1)按上述保健食品组合物重量配比称取原料，取鹿茸片，粉碎，过筛，通过120目筛的 为鹿茸细粉，未通过120目筛的为鹿茸粗粉，备用； (2 )取天冬、升麻、苦杏仁、五味子加水提取2次，料液比分别为1:14、1:12，提取时间为 1.5，1 h，滤过，合并滤液，得提取液I，备用； (3) 取鹿茸粗粉，采用超声循环法在室温下提取二次，第一次以水为溶剂，料液比1:10~ 1:12，提取时间0.5h~ 1.5h，第二次以60%~85%乙醇为溶剂，料液比1:8，提取时间0.5h，间 隔超声比均为0.6s:0.5 s ~ 0.6s:4.5s，功率为300~700 W，提取后料液离心，取上清液滤 过，得滤液，收集第一次滤液，得提取液Π ，收集第二次滤液，得提取液m，备用； (4) 提取液I浓缩至料液比1: 2，在65°075 °C下缓缓加入ZTC 1 + 1天然澄清剂B组分，同 时搅拌，用量为3%~6%，吸附澄清后冷藏静置24h以上，取上清液离心，滤过，滤液加入澄清剂 A组分(用量为B组分的1/2)，静置4 h，滤过，得精制液； (5) 取精制液与提取液Π 混合，减压浓缩，低温干燥，粉碎，得浸膏粉，或者进行喷雾干 燥，得浸膏粉； (6) 取鹿茸细粉与浸膏粉或加辅料等量递加混合，加入提取液m为粘合剂，捏合，即得 软材，置于制粒机中制粒，湿颗粒干燥整粒，即得干颗粒； (7) 取干颗粒，填充于铝塑包装袋中，即得颗粒剂;填充于空胶囊中，即得胶囊剂;置于 压片机中压片，即得片剂。6. 根据权利要求1~2所述的保健食品组合物，主要用于有助于增强免疫力功能的保健 食品。7. 根据权利要求3~5项所述的制备方法，主要用于生产包含鹿茸、天冬、升麻、苦杏仁、 五味子为原料的颗粒剂、胶囊剂和片剂。
【文档编号】A23L33/105GK106072626SQ201610393497
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月6日 公开号201610393497.7, CN 106072626 A, CN 106072626A, CN 201610393497, CN-A-106072626, CN106072626 A, CN106072626A, CN201610393497, CN201610393497.7
【发明人】郭建鹏, 杨建玲, 南极星, 林长青, 朴明贯
【申请人】延吉朝耀生物科技有限公司, 郭建鹏