专利名称：一种具有免疫活性的多糖及其制备方法
技术领域：
本发明涉及免疫制剂，具体涉及一种具有免疫活性的多糖(简称李特多糖)及其制备方法。
多糖具有较强的生物活性及功能，并具有非特异性免疫调节作用，因此为肿瘤、艾滋病及其他疾病治疗开辟了新方向。
经过研究开发，目前已有多种多糖问世。但是，现有的多糖活性不高，服用剂量大，从甜菜中提取的多糖尚不尽如人意。本发明的目的在于克服上述缺点，研制一种从甜菜中提取的李特多糖。
本发明提供了一种李特多糖，其特征在于该李特多糖是由从甜菜中提取的多糖与药用辅料组成的，其中多糖是由阿拉伯糖、半乳糖、鼠李糖及其各自的糖醛酸所构成的酸性多糖。
本发明的李特多糖理化数据如下1、分子量＞670k。2、含碳量38～40％，含氮量5～16％。3、中性糖含量40～70％，糖醛酸含量45～70％。4、旋光度+50～+705、组成其结构的单糖有阿拉伯糖、半乳糖、鼠李糖6、红外吸收光谱数据3430～3433cm-1、2935～2940cm-1、2150～2160cm-1、1742～1748cm-1、1620cm-1、1440cm-1、1245～1248cm-1、1146cm-1、1022cm-1、633cm-1。7、紫外吸收光谱数据323～327nm本发明的李特多糖对免疫功能的实验研究如下(上海医药工业研究院药理室试验)1、受试药物1.1名称李特多糖1.2送样单位上海交大昂立股份有限公司1.3批号986041.4溶剂生理盐水1.5配制方法精确称取所需样品量，以生量盐水稀释至所需浓度即可。2、动物2.1来源、种属、品系昆明种小鼠，由上海医药工业研究院动物组提供，动物合格证号“沪动(字)第107号”。C57BL/6及ICR小鼠由上海中科院实验动物中心提供，动物合格证号“中科动管会第005号”。实验动物环境清洁级。2.2体重20±2克2.3性别根据实验所需，每批实验使用同一性别动物。2.4动物数试验组及阳性对照组每组10只，阴性对照组每组20只。3、其他材料3.1培养基RPMI 1640，Difco产品，内含10～15％灭活小牛血清(NBS)。3.2培养细胞Yac-1、L929本实验室传代维持。3.3刀豆球蛋白A(ConA)Sigma产品。3.4阳性对照品云芝精华，香港百草堂产品。4、剂量设置李特多糖50、10及2mg/kg。阳性对照云芝精华2g/kg。5、给药方案灌胃，每天一次，连续十四天。6、试验主要步骤6.1李特多糖对正常C57BL/6小鼠淋巴细胞的增殖试验取C57BL/6小鼠随机分组，按实验设计方案给药，末次给药后次日在无菌条件下取小鼠脾脏，用100目筛制成单个脾细胞悬液，用含10％灭活小牛血清的RPMI1640培养液调节细胞浓度为1×107个细胞/ml，加入96孔细胞培养板，每孔100μl(1×106个细胞/孔)，再加入含ConA(5ug/ml)的培养液100μl，置37℃5％CO2条件培养72小时。轻轻吸弃上清液100μl，加入MTT溶液(MTT溶液为5mg/ml)20μl。放置37℃5％CO2条件培养2小时后加入消化液100μl，再放置至次日测各孔OD值并以公式计算刺激指数。刺激指数＝实验组OD值/对照组OD值实验结果表明，李特多糖以50、10、2mg/kg po×14qd的治疗方案能促进正常C57BL/6小鼠淋巴细胞的增殖作用，各剂量组的刺激指数与对照组相比均有显著性差异(P＜0.01)。详见表1、2。
表1 李特多糖对正常C57BL/6小鼠淋巴细胞的增殖试验组别 剂量给药方案 OD值 刺激指数/kgX±SD李特多糖50mgpo×14qd 0.89±0.08***2.23李特多糖 10mgpo×14qd0.87±0.05***2.18李特多糖 2mg po×14qd0.79±0.08***1.98云芝精华 2g po×14qd0.86±0.07***2.15对照 相应溶剂 po×14qd0.40±0.07与对照组相比***P＜0.01表2 李特多糖对正常C57BL/6小鼠淋巴细胞的增殖试验组别 剂量 给药方案OD值 刺激指数/kg X±SD李特多糖 50mg 0.79±0.07***2.19李特多糖 10mg 0.74±0.08***2.06李特多糖 2mg0.68±0.06***1.89云芝精华 2g 0.78±0.07***2.17对照 相应溶剂 0.36±0.04与对照组相比***P＜0.016.2李特多糖对正常C57BL/6小鼠的NK细胞活性试验取C57BL/6小鼠随机分组，按实验设计给药，末次给药后次日在无菌条件下取小鼠脾脏，用100目筛网制成单个脾细胞悬液，低渗除去红细胞，将细胞悬液转入培养瓶中，37℃ 5％CO2条件培养1小时后去除贴壁细胞，计数活细胞并调整细胞浓度为3×106个细胞/ml作为效应细胞。靶细胞取L929体外培养细胞，常规培养24小时，以培养液调整细胞浓度为1.5×105个细胞/ml，使效靶细胞之比为20∶1。取96孔培养板分别加入效应细胞和靶细胞，另设效应细胞和靶细胞对照，于37℃5％CO2条件培养4小时后，加入MTT染色液，再培养2小时后加入消化液于次日测各孔OD值，按公式计算NK细胞毒活性。
NK细胞毒活性％＝{[靶细胞对照组OD均值-(实验组OD均值-效应细胞OD均值)]/靶细胞对照组OD均值}×100。
实验结果表明，李特多糖以50、10、2mg/kg po×14qd的治疗方案能明显地激活正常C57BL/6小鼠的NK细胞活性，NK细胞活性提高率与剂量有一定的相关性，详见表3、4。
表3 李特多糖对正常C57BL/6小鼠的NK细胞活性试验组别 剂量 给药方案OD值 NK活性/kgX±SD 提高率％李特多糖 50mg0.39±0.06***30.36李特多糖 10mg0.40±0.07***28.57李特多糖 2mg 0.46±0.08**18.57云芝精华 2g 0.39±0.06***30.89对照 相应溶剂 0.56±0.09与对照组相比***P＜0.01**P＜0.01表4 李特多糖对正常C57BL/6小鼠的NK细胞活性试验组别 剂量 给药方案 OD值NK活性/kg X±SD 提高率％李特多糖 50mg 0.40±0.06***29.82李特多糖 10mg 0.42±0.07***25.96李特多糖 2mg 0.47±0.06**18.07云芝精华 2g0.38±0.08***34.21对照 相应溶剂0.57±0.11与对照组相比***P＜0.01**P＜0.016.3李特多糖对正常C57BL/6小鼠的溶血素抗体生成影响取C57BL/6小鼠，每鼠腹腔注射5％生理盐水配制的鸡红细胞混悬液0.2ml/只进行免疫。当日随机分组，按实验设计方案给药，末次给药后次日摘眼球取血，离心，取血清用生理盐水稀释100倍。取稀释血清1ml与鸡红血球悬液0.5ml、10％补体0.5ml混合，在37℃恒温箱中保温30分钟后，0℃冰箱中止反应、离心取上清液于分光光度计570nm处比色，测录光密度(OD值)，另设不加血清的空白对照，取其上清液作为比色时调“0”的基准。以光密度(OD值)读数作为判定血清溶血素的指标，比较各组的差异。
实验结果表明李特多糖以50、10、2mg/kg po×14qd的治疗方案对正常C57BL/6小鼠的溶血素抗体的生成与对照组相比有明显的增强(P＜0.01)，其增强的作用与剂量之间有明显的相关性。详见表5、6。
表5 李特多糖对正常C57BL/6小鼠的溶血素抗体生成影响组 别剂量 给药方案 OD值/kg X±SD李特多糖 50mg po×14qd0.266±0.02***李特多糖 10mg po×14qd0.149±0.03***李特多糖2mg po×14qd0.104±0.10***云芝精华 2g po×14qd0.298±0.03***对照 相应溶剂 po×14qd0.053±0.01与对照组相比***P＜0.01表6李特多糖对正常C57BL/6小鼠的溶血素抗体生成影响组别 剂量 给药方案 OD值/kg X±SD李特多糖 50mg po×14qd 0.271±0.02***李特多糖 10mg po×14qd 0.143±0.02***李特多糖 2mg po×14qd 0.089±0.01***云芝精华2g po×14qd 0.248±0.01***对照 相应溶剂 po×14qd 0.053±0.01与对照组相比***P＜0.016.4李特多糖对正常昆明种小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬功能试验取雄性昆明种小鼠随机分组，按实验设计方案给药，末次给药后各组小鼠腹腔注射0.5％水解蛋白1.5ml/只，24小时后腹腔注射每毫升1×106的鸡红细胞悬液0.2ml/只；隔40分钟后用生理盐水洗脱、收集小鼠腹腔液；离心，取细胞沉淀液制成涂片，用甲醇固定，吉姆萨染色封片，用油镜计数100个巨噬细胞中吞噬鸡红血球的巨噬细胞数及吞噬鸡红血球的总数，按下列公式计算吞噬百分比和吞噬指数。吞噬百分比％＝(100个巨噬细胞中吞噬鸡红血球的巨噬细胞数/100个巨噬细胞)×100吞噬指数＝100个巨噬细胞中吞噬鸡红血球的总数/100个巨噬细胞实验结果表明李特多糖以50、10、2mg/kg po×14qd的治疗方案对正常昆明种鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能有显著的提高，其吞噬百分率及吞噬指数与对照组相比均有显著性差异(P＜0.01)，各剂量组之间无明显的差异。详见表7、8。
表7 李特多糖对正常昆明种小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能试验组别 剂量 给药方案 吞噬百分率吞噬指数/kg李特多糖 50mg41.6±4.4***78.8±11.0***李特多糖 10mg39.4±2.1***73.0±9.6***李特多糖 2mg 38.6±3.2***72.0±8.9***云芝精华 2g 42.8±3.3***79.4±15.3***对照 相应溶剂 20.4±6.0 40.4±5.7与对照组相比***P＜0.01表8 李特多糖对正常昆明种小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能试验组别 剂量给药方案 吞噬百分率 吞噬指数/kg李特多糖 50mg 37.2±4.6***73.0±15.0***李特多糖 10mg 37.0±3.5***68.4±5.3***李特多糖 2mg 36.8±8.3***69.6±9.6***云芝精华 2g 38.4±8.6***70.2±25***对照相应溶剂 17.8±6.832.8±12.0与对照组相比***P＜0.016.5李特多糖对正常C57BL/6小鼠IL～2的生成试验取C57BL/6小鼠随机分组，按实验设计方案给药，末次给药后次日解剖动物，在无菌条件下摘取小鼠脾脏，常规制备成单个细胞悬液，低渗除去红细胞，再经洗涤红细胞三次后，用含10％灭活小牛血清-RPMI1640培养液调节细胞浓度为5×106个细胞/ml，加入24孔细胞培养板中，每孔1ml。再加入内含5μg/mlConA的含10％灭活小牛血清-RPM1640培养液1ml，混合后置37℃5％CO2条件培养24小时，离心取上清液透析后备用(待测)。将体外培养的CTLL细胞经二次洗涤后，用10％NBS-RPMI1640培养液配制成1×106个细胞/ml的细胞悬液，加入96孔培养板中，每孔100μl，再加入上述待测样品100μl，置37℃5％CO2条件培养24小时后，轻轻吸弃上清液100μl，加入MTT溶液(MTT溶液为5mg/ml)20μl。放置37℃5％CO2条件培养2小时后加入消化液100μl，于次日测各孔OD值。比较实验组与对照组的显著性差异。
实验结果表明，李特多糖以50、10、2mg/kg po×14qd的治疗方案能明显增加正常C57BL/6小鼠IL-2的生成，其作用与剂量有一定的相关性。详见表9、10。
表9 李特多糖对正常C57BL/6小鼠IL-2的生成试验结果组别 剂量给药方案OD值/kgX±SD李特多糖 50mgpo×14qd 0.978±0.07***李特多糖 10mgpo×14qd 0.906±0.06***李特多糖 2mgpo×14qd 0.618±0.05**云芝精华 2gpo×14qd 0.878±0.11***对照 相应溶剂po×14qd 0.51±0.07与对照组相比***P＜0.01**P＜0.01表10 李特多糖对正常C57BL/6小鼠IL-2的生成试验结果组别 剂量 给药方案OD值/kgX±SD李特多糖 50mg po×14qd 1.06±0.10***李特多糖 10mg po×14qd 0.954±0.09***李特多糖 2mg po×14qd 0.705±0.10**云芝精华 2g po×14qd 0.939±0.08***对照 相应溶剂 po×14qd 0.59±0.11与对照组相比***P＜0.01**P＜0.016.6李特多糖对正常ICR小鼠的迟发性超敏反应的影响取ICR小鼠，随机分组。除抗原攻击的对照组，每鼠腹部去毛约为2×1cm2，并将1％二硝基氟苯(DNFB)丙酮麻油溶液50μ均匀涂抹致敏，按设计的方案给药，末次给药后将1％(DNFB)均匀涂抹于小鼠右耳(两侧)进行攻击，对照组同样涂耳但未致敏。攻击后24小时各组小鼠剪下左右耳壳，用打洞器取下直径8mm的耳壳，同时取小鼠胸腺及脾脏称重。以给药组左右耳重量之差与对照组左右耳重量之差进行比较，以下列公式计算肿胀度。分别以每10克小鼠的脾重(mg)和胸腺重(mg)作为脾指数和胸腺指数。肿胀度-[(对照组左右耳重量之差-给药组左右耳重量之差)/对照组左右耳重量之差]×100实验结果表明李特多糖以50、10、2mg/kg po×7qd的治疗方案对正常ICR小鼠的迟发性超敏反应有明显的增强作用，其肿胀率给药组与对照组相比有显著性差异(P＜0.01)，但各剂量组之间无明显差异。对脾脏的重量有一定的增加，对胸腺重量无明显的影响。详见表11、12、13、14、15、16。
表11 李特多糖对正常ICR小鼠的迟发性超敏反应的影响组别 剂量 给药方案 肿胀度肿胀率/kg X±SD ％李特多糖50mg po×14qd 0.038±0.013***192.31李特多糖10mg po×14qd 0.039±0.021***200李特多糖2mg po×14qd 0.039±0.018***200云芝精华2gpo×14qd 0.039±0.019***200对照 相应溶剂 po×14qd 0.013±0.007与对照组相比***P＜0.01表12 李特多糖对正常ICR小鼠的迟发性超敏反应的影响组别 剂量 给药方案肿胀度 肿胀率/kg X±SD ％李特多糖50mg po×7qd 0.037±0.012***144李特多糖10mg po×7qd 0.036±0.015***140.7李特多糖2mg po×7qd 0.037±0.01***148云芝精华2gpo×7qd 0.039±0.014***163对照 相应溶剂po×7qd 0.015±0.007与对照组相比***P＜0.01
表13 李特多糖对正常ICR小鼠脾脏重量的影响组别剂量给药方案 动物体重 脾重 脾指数/kgX、g X±SD、mg mg/10g李特多糖 50mg po×7qd 32.1 170.7±33.7**54.9李特多糖 10mg po×7qd 30.5 163.0±24.2**53.4李特多糖 2mg po×7qd 31.9 159.1±33**49.8云芝精华 2g po×7qd 30.6 165.8±30.0**54.2对照 相应溶剂po×7qd 31.6 136.4±23.1 43.2与对照组相比**P＜0.05表14 李特多糖对正常ICR小鼠脾脏重量的影响组别剂量 给药方案 动物体重 脾重 脾指数/kg X、gX±SD、mg mg/10g李特多糖 50mg po×7qd 32.1 181.2±41.3**56.4李特多糖 10mg po×7qd 32.7 171.5±36.5**52.4李特多糖 2mg po×7qd 32.8 162.7±35.4**49.6云芝精华 2g po×7qd 33.2 179.6±47.6**54.1对照 相应溶剂po×7qd 31.9 139.4±21.7 43.7与对照组相比**P＜0.05表15 李特多糖对正常ICR小鼠胸腺重量的影响组别剂量 给药方案 动物体重胸腺重 胸腺指数/kg X、g X±SD、mg mg/10g李特多糖 50mg po×7qd31.1 148.3±16.4**47.68李特多糖 10mg po×7qd30.5 145.4±12.3**47.67李特多糖 2mg po×7qd31.9 138.2±14.7**43.32云芝精华 2gpo×7qd30.6 149.5±17.7**48.86对照 相应溶剂 po×7qd31.6 132.8±18.242.03
表16 李特多糖对正常ICR小鼠胸腺重量的影响组别剂量 给药方案 动物体重胸腺重胸腺指数/kg X、g X±SD、mg mg/10g李特多糖 50mg po×7qd 32.1 152.7±18.2 47.57李特多糖 10mg po×7qd 32.7 147.3±15.7 45.05李特多糖 2mg po×7qd 32.8 136.4±12.1 41.59云芝精华 2g po×7qd 33.2 147.3±19.2 44.37对照 相应溶剂po×7qd 31.9 141.6±21.3 44.406.7李特多糖对正常昆明种小鼠的抗疲劳试验取雄性昆明种小鼠，随机分组，按实验设计方案给药，末次给药后次日将各组小鼠每鼠按体重5％的重量在尾部加上铁圈，放入25～30℃池内游泳。记录各鼠沉入水中的时间，得出各组的均值及标准差与对照组进行比较。
李特多糖以50、10、2mg/kg po×14qd的治疗方案对正常昆明种小鼠的抗疲劳试验，结果表明李特多糖对正常昆明种小鼠的抗疲劳有一定的作用，但不显著。详见表17、18。
表17 李特多糖对正常昆明种小鼠的抗疲劳试验组别 剂量 给药方案 游泳时间/kg X±SD，分李特多糖 50mgpo×7qd 16.9±9.3*李特多糖 10mgpo×7qd 16.2±7.7*李特多糖2mgpo×7qd 16.0±5.6*对照 相应溶剂 po×7qd 13.9±10.8与对照组相比*P＜0.1表18 李特多糖对正常昆明种小鼠的抗疲劳试验组别 剂量 给药方案 游泳时间/kg X±SD，分李特多糖 50mgpo×7qd 16.6±8.6*李特多糖 10mgpo×7qd 16.4±6.9*李特多糖 2mg po×7qd14.9±7.3*对照 相应溶剂 po×7qd13.7±6.4与对照组相比*P＜0.16.8李特多糖对正常昆明种小鼠的常压耐缺氧试验取昆明种小鼠，随机分组，按实验设计方案给药，末次给药后次日将各组小鼠分别置于投有5克钠石灰的125ml容量的广口瓶中，瓶口涂以凡士林，使之密闭。记录各组小鼠的存活时间的均值及标准差与对照组进行显著性比较。
实验结果表明李特多糖以50、10、2mg/kg po×14qd的治疗方案对正常昆明种小鼠的耐缺氧试验无明显的影响，详见表19、20。
表19 李特多糖对正常昆明种小鼠的耐缺氧试验组别剂量 给药方案 耐缺氧时间/kg X±SD，分李特多糖 50mg po×7qd 23.8±6.6李特多糖 10mg po×7qd 22.1±4.9李特多糖 2mg po×7qd 21.9±3.4对照相应溶剂po×7qd 21.6±4.1表20 李特多糖对正常昆明种小鼠的耐缺氧试验组别 剂量 给药方案 耐缺氧时间/kg X±SD，分李特多糖50mg po×7qd 23.2±4.6李特多糖10mg po×7qd 22.4±5.7李特多糖 2mg po×7qd 22.0±4.7对照 相应溶剂 po×7qd 20.7±5.07、结论李特多糖以50、10以及2mg/kg，口服灌胃，每天一次，连续14天或7天的给方案对正常小鼠的免疫功能的研究结果表明李特多糖无论对特异性免疫和非特异性免疫，体液免疫或细胞免疫均有一定的促进作用。表现为能明显地激活正常C57BL/6小鼠的NK细胞活性；能提高正常昆明种小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬功能；能促进正常C57BL/6小鼠淋巴细胞的增殖作用以及IL-2的生成；能增加正常C57BL/6小鼠的溶血素抗体的生成；能增强正常ICR小鼠的迟发性超敏反应以及对脾重有一定的增加；此外李特多糖对正常昆明种小鼠的抗疲劳也有一定的作用；但对正常昆明种小鼠的耐缺氧试验无明显的影响；对ICR小鼠的胸腺重量也无明显的影响。
在对正常小鼠的免疫功能的研究结果表明其无论在对特异性免疫和非特异性免疫，体液免疫或细胞免疫均有促进作用，且与云芝多糖比较①对正常c57BL/6小鼠淋巴细胞的增殖作用是云芝精华的200倍②对正常c57BL/6小鼠NK细胞的活性作用是云芝精华的400倍③对正常c57BL/6小鼠溶血素抗体生成作用是云芝精华的40倍④对正常昆明小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能作用是云芝精华的40倍⑤对正常c57BL/6小鼠IL-2的生成作用是云芝精华的200倍制备方法甜菜或甜菜粕粉碎至50目，加入5～10倍量的去离子水室温浸提2小时，过滤得滤液，并且滤渣加入5～10倍量的去离子水室温再次浸泡2小时，过滤，合并滤液，进行离心，将离心所得的上清液通过微孔滤膜，得滤液，滤液通过300K的超滤膜进行超滤，保留了300K以上的残留液，或经过半透膜透析，冻干或醇沉后冻干，得粗多糖，粗多糖冻干物脱蛋白，然后分别通过阴离子交换树脂、凝胶分子筛树脂，最后通过冻干后得到此活性多糖。
实例1、粗多糖产物的制备取粉碎为50目的甜菜粕2000克，加去离子水18000毫升浸泡2小时，滤去残渣得滤液1500毫升(I)，将残渣中再加入12000毫升去离子水浸泡2小时，滤去残渣，得滤液10000毫升(II)，合并滤液(I)和(II)，在室温下，以5000转/分钟的转速进行离心，得上清液(III)。将上清液(III)通过0.1μm的微孔滤膜得滤液(IV)。将滤液(IV)通过300K的超滤膜进行超滤截流，并不断加入蒸馏水进行透析。当导电导率合格后，将残留液浓缩至2000毫升，冷冻干燥，得灰白色疏松状固体38.8克，为粗多糖产物。
实例2、粗多糖产物的制备取粉碎为50目的甜菜粕2000克，加去离子水18000毫升浸泡2小时，滤去残渣得滤液1500毫升(I)，将残渣中再加入12000毫升去离子水浸泡2小时，滤去残渣，得滤液10000毫升(II)，合并滤液(I)和(II)，在室温下，以5000转/分钟的转速进行离心，得上清液(III)。将上清液(III)通过0.1μm的微孔滤膜得滤液(IV)。将滤液(IV)进行半透膜透析。当导电导率合格后，将残留液浓缩至2000毫升，并加入无水乙醇至酒精浓度为65％进行沉淀。过滤后，将沉淀溶于蒸馏水溶解，离心，将离心所得的上清液进行冷冻干燥，得粗多糖产物30.8克。
实例3、粗多糖产物的精制先将粗多糖用蒸馏水溶解，然后按Savege法脱蛋白。将除蛋白后的样品上DEAE-SepheroseF.F.离子交换柱，用含50mmol/L氯化钠溶液洗脱，收集洗脱峰进行透析。透析后的样品上Blue Destran2000分子筛，用蒸留水洗脱，收集洗脱峰，冷冻干燥，即得此活性多糖。
权利要求
1.一种具有免疫活性的多糖，其特征在于该多糖是由从甜菜中提取的多糖与药用辅料组成的，其中多糖是由阿拉伯糖、半乳糖、鼠李糖及其各自的糖醛酸所构成的酸性多糖。
2.根据权利要求1所述的一种具有免疫活性的多糖，其特征在于该多糖的分子量＞670k；含碳量38～40％，含氮量5～16％；中性糖含量40～70％，糖醛酸含量45～70％；旋光度+50～+70；组成其结构的单糖有阿拉伯糖、半乳糖、鼠李糖；红外吸收光谱数据3430～3433cm-1、2935～2940cm-1、2150～2160cm-1、1742～1748cm-1、1620cm-1、1440cm-1、1245～1248cm-1、1146cm-1、1022cm-1、633cm-1；紫外吸收光谱数据323～327nm。
3.一种如权利要求1所述的具有免疫活性的多糖的制备方法，其特征在于该方法是将甜菜或甜菜粕粉碎至50目，加入5～10倍量的去离子水室温浸提2小时，过滤得滤液，并且滤渣加入5～10倍量的去离子水室温再次浸泡2小时，过滤，合并滤液，进行离心，将离心所得的上清液通过微孔滤膜，得滤液，滤液通过300K的超滤膜进行超滤，保留了300K以上的残留液，或经过半透膜透析，冻干或醇沉后冻干，得粗多糖，粗多糖冻干物脱蛋白，然后分别通过阴离子交换树脂、凝胶分子筛树脂，最后通过冻干后得到此活性多糖。
全文摘要
本发明涉及免疫制剂,具体涉及一种具有免疫活性的多糖(简称李特多糖)及其制备方法。本发明的多糖是由阿拉伯糖、半乳糖、鼠李糖及其各自的糖醛酸所构成的酸性多糖。本发明的多糖对特异性和非特异性免疫、体液免疫或细胞免疫均有促进作用,其效果胜于云芝多糖。
文档编号A61P37/00GK1306861SQ0011164
公开日2001年8月8日 申请日期2000年2月1日 优先权日2000年2月1日
发明者范小兵 申请人:上海交大昂立股份有限公司