专利名称：一种多糖免疫药物的制备的制作方法
一种多糖免疫药物的制备，属于制药工程领域。
现有的药品的研发，生产总是不能满足于人类健康的需要，特别是一些顽固的、对人类生存危害极其严重的疾病，如肿瘤、艾滋病及病毒、细菌等，科学工作者、相关研发机构一直在进行研究，以期寻求高效低毒的药品。
以恶性肿瘤为例，现在全世界普遍采用的治疗方法是放射性疗法、手术切除和化学疗法。手术疗法具有不彻底性；放射疗法和化学疗法，在治疗过程中可直接杀伤肿瘤细胞，但也不可避免地对正常身体细胞同样具有杀伤力。经治疗后，会使人体的白细胞显著下降，具有较大的毒副作用。
目前，世界范围内业内人士都在共同寻求一种新的疗法——免疫疗法。
免疫疗法是通过刺激机体的各种免疫活性细胞的成熟、分化和衍生，使机体免疫系统趋于平衡，当机体具有正常的生理功能时，这些免疫活性细胞能吞噬和清除衰亡、突变的细胞(如恶性肿瘤细胞)，各种病原体，如细菌、病毒、血脂，甚至寄生虫。在治疗过程中不会损伤人体的正常细胞。因此，免疫疗法被认为是制服恶性肿瘤、艾滋病及其它疾病的最有前途的治疗方法。其中引起各国高度重视的是多糖免疫疗法。
寻找、生产活性高、对肿瘤、艾滋病更有效的多糖药物成为药物工作者共同的目标。
但是由于东、西方两种不同的制药原则有很大的不同，因此按中医配制的药物，往往不被认可。西方国家要求药物的化学结构的准确性，中医讲究多种物质的协调作用。本发明人认为随着现代医学的不断进步，且人类在不断了解药物代谢的过程中，两种原则都应相互借鉴。不但要在多种物质的协调中，找出其规律性原则，也要加强对药物本身活性成份的了解。本发明人经过不断研究发现，不同药物的组成，有时可以产生出更高的药物活性，包括不同物质的多糖的组成，可以得到单一物质不能达到的药物效果。
多糖具有复杂的、多方面的生物活性与功能，多糖的糖链能控制细胞的分裂与分化，调节细胞的生长与衰老，作为广谱免疫调节剂在免疫疾病治疗上的应用，不仅能治疗机体免疫系统严重损伤的恶性肿瘤、艾滋病，还能治疗多种免疫缺损疾病及由某些细菌、病毒引起的疾病。多糖的免疫疗法已给近代肿瘤、艾滋病治疗及其它疾病的治疗开辟了新的研究方向。
本发明的目的就是提供一种多糖免疫药物的制备方法。
本发明是这样来实现的，采集天然的真菌类中的侧耳，经过化学处理过程，将侧耳中的多糖分离出来，也可以针对不同疾病的需要，再进行化学处理，使其变异为活性极高的多糖。使用时，可将侧耳多糖单独使用，也可与黄芪多糖配合作用，以适应对不同的疾病的治疗。
侧耳属担子菌纲，伞菌目侧耳科，侧耳属，是一种来源广泛的天然可食用菌类，历史上侧耳就有相当的药用价值，其香气浓郁、营养丰富，具有高蛋白、低脂肪、低热量聚糖，富含维生素、氨基酸，常食用有降低胆固醇、防止血管硬化，增进人体免疫功能，提高人体的生理活性功能，并能显著增强对恶性肿瘤的抵抗力，这种生理活性物质就是侧耳多糖。
侧耳多糖是一种杂多糖，一般多糖的定义是含十个以上的单糖称为多糖。单糖的羟基可以被取代，并通过苷键连接起来，形成多糖链。而侧耳多糖还有肽链和脂类成分，所以定为杂多糖，分子量在6000～1000000之间，其结构呈β-1.3支链和β-1.3-葡聚糖，虽然分子量较大，但由于含多个极性基团(主要是羟基和其它极性取代基)，所以水溶性较好，特别是在热水中溶解度较大。不溶解的部分一般分散性也较好，并且其水溶液在浓缩的情况下，可用极性有机溶剂如乙醇、丙酮等将其析出。其基本的制备流程为侧耳采购→干燥→筛选→粉碎→清水漂洗→温水浸泡→蒸煮→浓缩→逐次沉析，其中逐次沉析可按量添加有机溶剂，分几次进行，如加30％的有机溶剂时，可沉析出侧耳多糖中大分子量部分，再使分离出大分子量后的母液中的有机溶剂浓度增加到50％时，便能将中等分子量的多糖沉析出来，再增加有机溶剂浓度，可将小分子量部分沉析出来，还可以进一步采用深层发酵的方法，得到不同结构的菌丝体多糖。
侧耳多糖的构效关系
由于侧耳多糖是由许多单糖基以糖苷键相连接而形成的高聚物，相对分子量也较大，糖基环化的方式不同(五元环或六元环)，糖苷键连接方式不同(1→2，1→3，1→4……等)，糖基上羟基被取代的种类、位置和数量发生变化，可使一级结构出现千差万别，而它的高级结构(二、三、四级结构)，则主要取决于它的一级结构。而结构的不同，其功能就不同，即构效成一一对应的关系。高级结构的变化就会带来活性的改变，侧耳多糖由于其结构是四层的右手三股螺旋立体结构，因此具有极强的生理活性，处理后的多糖具显著的抗肿瘤作用，虽然，目前技术手段尚不能定量的与其它多糖，如香菇多糖，从结构立体图上鉴别它们的差异，但从生理活性和对肿瘤的抵御能力上，可以认为侧耳多糖与香菇多糖在免疫功能上相类似，但其成本相对低廉，制备相对容易。侧耳多糖在加入其它物质结构发生变化后，则发现其对艾滋病具有抵御能力，并对其它细菌、病毒类引起的各种疾病同样具有免疫能力，研究证明就像其它真菌多糖一样，侧耳多糖对多种恶性肿瘤均有明显的抑制作用，如乳腺癌、胃癌等，侧耳多糖具有延缓衰老的功能，侧耳多糖具有降血脂、抗血栓及对心血管疾病有预防作用，同样也具有降血糖作用，并有增强骨髓造血功能的作用，能对各种感染和各种化学因素对脏器的损伤有抵御作用。
实施例1取侧耳(糙皮侧耳)新鲜子实体200kg，经水洗后捣碎，加入100L沸水中浸渍8～15小时，用LS-2型离心机分离去渣，得到无渣溶液，放入反应釜中减压浓缩，温度为50℃左右。浓缩液至1∶15后先加入一倍量的乙醇，静至24小时后去上清液得沉淀物350克，设为A部分。
上清液再加入3倍量的乙醇，得沉淀物200克为B部分。
将A部分加入22L水搅拌均匀，在强烈搅拌下滴入0.2M氢氧化十六烷基三甲基铵(CTA-OH)水溶液，调至pH值为7～8时，开始有部分沉淀，直至pH值为10.5～11.5，则析出大量沉淀物，完全停止沉淀，加至pH值为12分离停止，得沉淀物，用乙醇洗涤后，加入20％ 1.2L的醋酸，在0℃下搅拌5分钟，分成不溶和溶解两部分L1和L2。L1可溶解部分于0℃下用11.50％醋酸搅拌后，用回流器反复洗涤后离心。不溶解物L2于2L 66％氢氧化钠溶液中处理搅拌后离心。澄清液加4L乙醇沉淀，收集沉淀，用乙醇、乙醚依次洗涤、干燥，用Sevag法用氯仿、正丁醇去蛋白，水层加入3倍量乙醇沉淀后收集沉淀，用甲醇、乙醚依次洗涤后，置真空干燥器中干燥，即得灰白色侧耳多糖，获得率为40克。
经测定pH5.0，α-萘酚反应为阳性，多糖含量见下表总糖含量 还原糖含量 可溶性糖类含量/％％％ 寡糖 蔗糖 葡萄糖 半乳糖 甘露糖 果糖21.0 16.30 1.43 1.28 18.750.081.700.12组成比77.62 6.81 6.11 89.290.388.110.57试验表明，紫外吸收光谱在200～260nm处有明显的吸收峰，表明多糖中含有可溶性核苷酸成分。
红外光谱扫描表现出多糖特征吸收3390cm-1、2930cm-1、1625cm-1、1410cm-1。
利用高效液相色谱法测定糖的组成以葡萄糖为主。
10000～20000之间的小分子量多糖占1098％，相对分子质量，在10000～100000之间的大分子量多糖占89.01％。
进一步分级处理可以肯定在侧耳子实体中至少含有6种以上的多糖。
实施例2侧耳多糖与黄芪多糖的配合作用。
黄芪为豆科植物，蒙古黄芪的干燥根，它的水溶性物多含黄芪葡聚糖，分子量5000左右，其酸性提取物，也具有显著的生理免疫促进活性，其结构也为多层立体结构，其制备方法同实施例1一样。
将侧耳多糖按组分的0～90％，与黄芪多糖按混合组分的相应比例配合，将得到不同的活性多糖，因此更具有广泛的免疫、抗感染、抗细菌及病毒的能力。不同的配比，可以起到抵御恶性肿瘤、消灭艾滋病病毒的作用，能达到延缓衰老、预防心血管病的目的。
研究表明，侧耳多糖与其它生物类多糖配合，在某药理上具有更强的作用。
权利要求
1.一种多糖免疫药物的制备，其特征是采用天然菌类植物侧耳和豆科植物黄芪为原料，经提取后制备而成。
2.根据权利要求书1所述的一种多糖免疫药物的制备，其特征是侧耳提取物和黄芪多糖可以单独使用也可以混合配制使用。
全文摘要
一种多糖免疫药物的制备，是用天然的侧耳或黄芪，经过一定提取工艺处理，分别得到侧耳多糖或黄芪多糖，这两种多糖可根据需要配合使用，或单独使用，可有效预防或治疗恶性肿瘤、艾滋病，可延缓衰老、提高对心血管病的防御能力等。
文档编号A61P37/00GK1443567SQ0210404
公开日2003年9月24日 申请日期2002年3月7日 优先权日2002年3月7日
发明者全龙浩, 王彩平 申请人:北京美华联创生物技术有限公司