用于抗ErbB2抗体治疗的制剂的制作方法

专利名称：用于抗ErbB2抗体治疗的制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及以过度表达ErbB2或者以表达表皮生长因子受体(EGFR)为特征的病症的治疗，包括向患有所述病症的人或动物施用治疗量的将要与ErbB2结合的抗体。更具体而言，本发明涉及对易患或已诊断患有过度表达ErbB2或者表达EGFR的癌症的人类患者进行治疗，所述治疗是在治疗过程中通过静脉和/或皮下给药方式施用前沿负荷量抗ErbB2抗体。本发明任选地包括使用抗ErbB2抗体与化疗剂，例如但不限于taxoid，联合来治疗人类癌症患者。taxoid可以是但不限于紫杉醇或紫杉萜。本发明进一步包括抗ErbB2抗体与化疗剂，例如但不限于蒽环类抗生素的衍生物，联合来治疗人类癌症患者。任选地，抗ErbB2抗体与蒽环类抗生素的衍生物的联合治疗包括使用有效量的心脏保护剂。本发明还涉及抗ErbB2抗体的非频繁用药。
背景技术：
编码生长因子和生长因子受体的原-癌基因，已被证实在各种人类恶性肿瘤包括乳腺癌的病因学中起着重要作用。业已发现，编码与表皮生长因子受体(EGFR)有关的185个碱基对跨膜糖蛋白受体(p185HER2)的人ErbB2基因(erbB2，也称为her2或c-erbB-2)，在约25％～30％的人乳腺癌中过度表达(Slamon等，Science 235177-182；Slamon等，Science 244707-712)。
数条线索支持ErbB2在ErbB2过度表达性肿瘤的病因学和临床侵润中的直接作用。将ErbB2导入非-肿瘤细胞中，已被证明能够引起恶性肿瘤转移(Hudziak等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 847159-7163；DiFiore等，Science 23778-182)。已经发现，表达HER2的转基因小鼠发生乳腺肿瘤(Guy等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 8910578-10582)。
针对人erbB2蛋白产物和针对由erbB2基因的大鼠等价物(neu)编码的蛋白质的抗体已有报道。Drebin等在Cell 41695-706(1985)中提到了针对大鼠neu基因产物的IgG2a单克隆抗体。称作7.16.4的该抗体引起B104-1-1细胞(用neu原癌基因转染的NIH-3T3细胞)表面p185表达下调并抑制这些细胞形成集落。Drebin等在PNAS(USA)839129-9133(1986)中证明，7.16.4抗体抑制neu-转化的NIH-373细胞以及植入裸鼠的大鼠神经母细胞瘤细胞(neu癌基因就是从该细胞中分离出的)的癌性生长。Drebin等在癌基因(Oncogene)2387-394(1988))中讨论了针对大鼠neu基因产物的一组抗体的产生。发现所有这些抗体对悬浮在软琼脂中的neu-转化型细胞的生长产生细胞静止作用。在补体的存在下，IgM、IgG2a和IgG2b抗体亚型能够介导离体neu-转化型细胞的显著溶解，而无一抗体能够介导neu-转化型细胞的高水平抗体-依赖性细胞毒性(ADCC)。Drebin等在癌基因2273-277(1988)中报道，与p185neu的两种不同区域反应的抗体混合物对移植入裸鼠体内的neu转化型NIH-3T3细胞有协同抗癌作用。抗-neu抗体的生物作用见Myers等在Meth.Enzym.198277-290(1991)中的综述。另见1994年10月13日公布的WO94/22478。
Hudziak等在分子细胞生物学9(3)1165-1172(1989)中报道了一组用人乳腺癌细胞系SK-BR-3鉴定的抗ErbB2抗体的制备。暴露于所述抗体72小时之后，SK-BR-3细胞单层通过结晶紫染色确定相对细胞增殖。利用这种检测方法，用称为4D5的抗体得到了最大抑制率，该抗体抑制细胞增殖达56％。在此检测中，该组其它抗体包括7C2和7F3降低细胞增殖的程度较低。Hudziak等得出结论4D5抗体对SKBR3细胞的作用是细胞静止作用而非细胞毒性，因为从介质中去除抗体后SKBR3细胞重新开始按照近于正常速度生长。进一步发现，抗体4D5使p185erbB2-过度表达的乳腺癌细胞系对TNF-α的细胞毒作用更为敏感。参见1989年7月27日公布的WO89/06692。Hudziak等所讨论的抗ErbB2抗体在下述文献中有进一步的描述Fendly等，癌症研究501550-1558(1990)；Kotts等，In Vitro 26(3)59A(1990)；Sarup等，生长调节17272-82(1991)；Shepard等，临床免疫学杂志11(3)117-127(1991)；Kumar等，分子细胞生物学11(2)979-986(1991)；Lewis等，Cancer Immunol.Immunother.37255-263(1993)；Pietras等，癌基因91829-1838(1994)；Vitetta等，癌症研究545301-5309(1994)；Sliwkowski等，生物化学杂志269(20)14661-14665(1994)；Scott等，生物化学杂志26614300-5(1991)；和D’souza等，美国国家科学院院刊917202-7206(1994)。
Tagliabue等在Int.J.Cancer 47933-937(1991)中描述了两种抗体，这两种抗体是根据其对于过度表达ErbB2的肺腺癌细胞系(Calu-3)的反应性而被选出的。其中的一种抗体称作MGR3，发现它内化、诱导ErbB2磷酸化和在体外抑制肿瘤细胞生长。
McKenzie等在Oncogene 4543-548(1989)中制备了一组具有不同表型特征的抗ErbB2抗体，包括称为TA1的抗体。发现该TA1抗体诱导加速ErbB2的胞吞作用(参见Maier等Cancer Res.515361-5369)。Bacus等在Molecular Carcinogenesis 3350-362(1990)中报道TA1抗体诱导乳腺癌细胞系AU-565(该细胞过度表达erbB2基因)和MCF-7(该细胞不过度表达erbB2基因)的成熟。发现这些细胞生长和获得成熟表型受到抑制，与ErbB2受体在细胞表面水平下降和在胞浆内水平短暂升高有关。
Stancovski等在PNAS(USA)888691-8695(1991)中制备了一组抗ErbB2抗体，将所制抗体给裸鼠腹腔注射，评价其对过度表达erbB2基因转化的鼠成纤维细胞瘤生长的作用。对于四种抗体检测到不同水平的肿瘤抑制作用，但是一种抗体(N28)却持续地刺激肿瘤生长。单克隆抗体N28显著诱导ErbB2受体磷酸化，而其它四种抗体一般显示出低的或者无磷酸化-诱导活性。对于抗ErbB2抗体对SKBR3细胞增殖的作用也作了评价。在此SKBR3细胞增殖试验中，与对照相比，两种抗体(N12和N29)降低细胞增殖。对于各种抗体通过依赖于补体的细胞毒性(CDC)和依赖于抗体的细胞介导的细胞毒性(ADCC)体外诱导细胞裂解的能力进行了评价，该篇论文的作者归纳道抗体的抑制功能并不是主要由CDC或ADCC所致。
Bacus等在Cancer Research 522580-2589(1992)中进一步对前文Bacus等(1990)和Stancovski等所述的抗体进行了鉴定。该鉴定延伸了Stancovski等的腹腔注射研究，评价了给携带过度表达人ErbB2的小鼠成纤维细胞瘤的裸鼠静脉注射这些抗体后的作用。在他们的早期研究工作中观察到，N28促进肿瘤生长，而N12和N29则明显抑制ErbB2表达型细胞的生长。还观察到，N24抗体具有部分肿瘤抑制作用。Bacus等还测试了抗体促进人乳腺癌细胞系AU565和MDA-MB453(过度表达ErbB2)以及MCF-7(受体含量低)中成熟表型的能力。Bacus等发现，肿瘤的体内抑制与细胞分化相关；肿瘤刺激性抗体N28对分化无影响；N12、N29和N24抗体对肿瘤的抑制作用与它们诱导的分化程度相关。
Xu等Int.J.Cancer 53401-408(1993)评价了一组抗ErbB2抗体的表位结合特异性，及其抑制SKBR3细胞不依赖于贴壁和依赖于贴壁的生长(通过单个抗体和联合)、调控细胞表面ErbB2和抑制配体刺激的不依赖于贴壁生长的能力。参见1994年1月6日公布的WO94/00136，和Kasprzyk等CancerRes.522771-2776(1992)关于抗ErbB2抗体的结合。另外，其它抗ErbB2抗体的讨论见下述文献Hancock等Cancer Res.514575-4580(1991)；Shawver等Cancer Res.541367-1373(1994)；Arteaga等Cancer Res.543758-3765(1994)，和Harwerth等J.Biol.Chem.26715160-15167(1992)。
重组人源化抗ErbB2单克隆抗体(鼠抗ErbB2抗体4D5的人源化版本，称作rhuMAb HER2，HERCEPTIN，或者HERCEPTIN抗ErbB2抗体)对已经接受过广泛抗癌治疗的ErbB2过度表达型转移性乳腺癌患者进行的临床治疗有效(Baselga等，J.Clin.Oncol.14737-744(1996)。HERCEPTIN的推荐初始负荷剂量为4mg/kg，按90分钟输注给药。推荐周维持剂量为4mg/kg，如果对于初始负荷剂量能够很好耐受的话，则可以按30分钟输注给药。
ErbB2过度表达通常被认为是预后差的预示，特别是对于累及腋窝淋巴结的原发疾病的患者而言(Slamon等和，supra；Ravdin和Chamness，Gene 15919-27；及Hynes和Stern，Biochim Biophys Acta1198165-184)，并且与对激素治疗和化疗方案的敏感性和/或抵抗性有关，包括CMF(环磷酰胺、甲氨蝶呤、fluoruracil)和蒽环类抗生素(Baselga等Oncology 11(3 Suppl 1)43-48)。然而，尽管ErbB2过度表达与预后差有关，但是HER2-阳性患者对于taxanes治疗的临床反应较HER2-阴性患者大3倍(Ibid)。RhuMab HER2被证明增强紫杉醇(TAXOL)和阿霉素对抗注射了BT-474人乳腺癌细胞的裸鼠乳腺癌异种移植物的活性，所述乳腺癌细胞表达大量HER2(Raselga等，Breast Cancer，Proceedings of ASCO，第13卷，摘要53)。
发明概述本发明涉及这样一个发现通过提供初始剂量的抗ErbB2抗体继而提供继续量的等量或小量该抗体(前沿负荷量较大)而早期获得的有效目标谷(trough)血清浓度较常规治疗更为有效。在4周或更短，优选3周或更短，更优选2周或更短，以及最优选1周或更短包括1天或更短时间，达到有效目标谷血清浓度。因而，用治疗方案的余量通过维持剂量或更少量给药而维持目标谷血清浓度或者直至疾病症状减轻。
本发明还涉及治疗易患或诊断患有以过度表达ErbB2受体为特征的疾病的人类患者的方法，包括皮下施用治疗有效量的抗ErbB2抗体。优选地，初始剂量(一次或多次)和继后的维持剂量(一次或多次)经皮下给药。任选地，当患者对抗ErbB2抗体的耐受力未知时，初始剂量经静脉输注给药，如果患者对该抗体的耐受力可以接受的话，则接着经皮下给药施用维持剂量。
根据本发明，治疗方法包括施用大于约4mg/kg，优选大于约5mg/kg的初始剂量的抗ErbB2抗体。最大初始剂量或继续量不超过50mg/kg，优选不超过40mg/kg，更优选不超过30mg/kg。经静脉或皮下给药，优选静脉输注或快速灌注，或者更优选皮下快速灌注。初始剂量可以一次或多次给药，其足以在4周或更短，优选3周或更短，更优选2周或更短，以及最优选1周或更短包括1天或更短时间内达到目标谷血清浓度。
根据本发明，初始剂量之后，以足以将抗体谷血清浓度接近维持在或高于有效目标水平的间隔继续施用等量或较小量抗体。优选初始剂量或继续量不超过50mg/kg，并且每次继续量至少为0.01mg/kg。优选给药量足以维持目标谷血清浓度，使得给药周期之间的间歇则为至少1周。优选治疗期间的谷血清浓度不超过2500μg/ml且不低于0.01μg/ml。本发明的前负荷给药治疗方法的优点是通过在治疗早期即达到目标血药浓度而提高效率。本发明皮下施用维持剂量的优点是方便患者和保健人员，节约时间和药物治疗的花费。优选地，初始剂量(或者系列初始剂量内的最后一次剂量)与第一次继续量给药时间相隔4周或更少，优选3周或更少，更优选2周或更少，最优选1周或更少。
本发明的一个实施方案中，抗ErbB2的初始剂量是6mg/kg、8mg/kg或12mg/kg，经静脉或皮下给药，如静脉输注或皮下快速灌注。继续维持剂量是2mg/kg，经静脉输注、静脉快速浓注、皮下注射或皮下快速灌注给药，每周给药一次。根据动物或者病人对于抗体进入机体的方式的耐受能力来选择初始剂量和维持剂量的给药方法。在对抗体良好耐受的部位，可以缩短输注时间。该实施方案公开的给药方法的选择适用于本发明的所有给药方案。
在另一实施方案中，发明包括抗ErbB2抗体的初始剂量为12mg/kg，之后的继续维持剂量为6mg/kg每3周一次。
还有一实施方案，发明包括抗ErbB2抗体的初始剂量为8mg/kg，之后的继续维持剂量为6mg/kg每3周一次。
另一实施方案，发明包括抗ErbB2抗体的初始剂量为8mg/kg，之后的继续维持剂量为8mg/kg每周一次，或者8mg/kg每2～3周一次。
另一实施方案，发明包括抗ErbB2抗体的初始剂量为至少1mg/kg，优选4mg/kg，1、2、3日每天一次，之后的继续维持剂量为6mg/kg每3周一次。
再一实施方案，发明包括抗ErbB2抗体的初始剂量为4mg/kg，之后的继续维持剂量为2mg/kg每周二次，其中维持剂量间隔3天。
还有一实施方案，发明包括一给药周期，其中抗ErbB2抗体每周给药2-3次，给药3周。在发明的一个实施方案中，对病人每次给药约25mg/kg或更少，优选约10mg/kg或更少。优选根据抑制疾病症状的需要重复该3周的周期。
另一实施方案，发明包括一给药周期，其中每日施用抗ErbB2抗体，给药5天。根据本发明，优选根据抑制疾病症状的需要重复该周期。
病症优选是以过度表达ErbB2受体为特征的良性或恶性肿瘤，例如癌，如乳腺癌、鳞状上皮细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、胃肠癌、胰腺癌、恶性胶质瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、唾液腺癌、肾癌、肝癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝性癌和各种类型的头颈部癌症。本发明方法进一步包括施用蒽环类抗生素之外的化疗剂，例如阿霉素或表阿霉素。化疗剂优选是taxoid，如TAXOL(紫杉醇)或TAXOL衍生物。
优选抗ErbB2抗体与ErbB2受体的细胞外结构域相结合，优选与ErbB2胞外结构域序列内的表位4D5或3H4结合。更优选地，所述抗体是抗体4D5，最优选人源化形式。其它优选的ErbB2-结合型抗体包括但不限于抗体7C2、7F3和2C4，优选人源化形式。
本发明方法特别适于治疗以过度表达ErbB2受体为特征的乳腺癌或卵巢癌。
本申请也提供涉及不频繁施用抗ErbB2抗体的治疗方法。更具体而言，本发明提供治疗病人癌症(例如以过度表达ErbB2受体为特征的癌症)的方法，包括向患者施用首次剂量的抗ErbB2抗体，接着施用至少一次继续量的该抗体，其中首次剂量和继续量的给药在时间上以至少约2周(如，约2周至约2个月)，任选至少约3周(例如，约3周至约6周)的间隔彼此分开。举例来说，抗体可按照约每3周给药一次，约2～约20次，例如6次。首次剂量和继续量的每次给药量可以是约2mg/kg～约16mg/kg；例如约4mg/kg～约12mg/kg；和任选地，约6mg/kg～约12mg/kg。通常，向患者施用2次或更多次继续量(例如约2～约10次)的抗体，所述继续量优选至少按照约2周(约2周～约2月)的间隔分开给药，任选地以至少约3周(例如约3周～约6周)的间隔给药。2次或更多次继续量的给药，每次给药量为约2mg/kg～约16mg/kg；或者约4mg/kg～约12mg/kg；或者约6mg/kg～约12mg/kg。本发明另外提供制备的产品，该产品包括容器和其中盛放的含有抗ErbB2抗体的组合物，及包括描述按照本方法施用抗体的说明书的包装插页。
现在描述的给药方案可应用于其它抗ErbB抗体如抗表皮生长因子受体(EGFR)、抗ErbB3和抗ErbB4抗体的给药。因此，本发明提供治疗病人癌症的方法，包括向患者施用有效量的抗ErbB抗体，方法包括向患者施用初始剂量至少约5mg/kg的抗ErbB抗体；和以与初始剂量大致相同或更少的剂量向患者多次施用继续量的抗体。或者，或另外地，发明涉及治疗病人癌症的方法，包括向患者施用首次剂量的抗ErbB抗体，接着施用至少一次继续量的该抗体，其中首次剂量和继续量按照至少约2周的间隔彼此分开给药。发明还提供制备的产品，产品包括容器和其中盛放的含有抗ErbB抗体的组合物，及包括描述按照本方法施用抗体的说明书的包装插页。
另一方面，本发明涉及制备的产品，包括容器和其中盛放的含有抗ErbB2抗体的组合物，任选地贴在容器上或附带于容器的说明组合物可用于治疗以过度表达ErbB2受体为特征的病症的标签，及包括说明避免蒽环类抗生素型化疗剂与所述组合物联合应用的说明书的包装插页。根据本发明，包装插页还包括以5mg/kg初始剂量施用抗ErbB2抗体、接着以相同或较小量施用继续量(一次或多次)的说明书。在本发明的另一实施方案中，包装插页还包括抗ErbB2抗体的多次给药中至少一次是经皮下施用，优选初始剂量之后的所有继续量均经皮下给药，最优选所有给药均经皮下给药的说明书。
再一方面，本发明提供治疗病人ErbB2过度表达型癌症的方法，包括向患者施用有效量的抗ErbB2抗体和化疗剂。在本发明的一个实施方案中，化疗剂是taxoid，包括但不限于紫杉醇和紫杉萜。在另一实施方案中，化疗剂是蒽环类抗生素的衍生物，包括但不限于阿霉素或表阿霉素。在本发明的另一实施方案中，用抗ErbB2抗体和蒽环类抗生素的衍生物进行的治疗进一步包括向患者施用心脏保护剂。还有一实施方案，不向用抗ErbB2抗体治疗的患者施用蒽环类抗生素的衍生物。可以向该患者施用一种或多种其它化疗剂。癌症优选是以过度表达ErbB2为特征。
本发明进一步提供制备的产品，包括容器和其中盛放的含有抗ErbB2抗体的组合物，和指导组合物的使用者向患者施用抗ErbB2抗体和化疗剂的包装插页。在另一实施方案中，化疗剂不是蒽环类抗生素，优选是taxoid，例如是TAXOL。还有一实施方案，化疗剂是蒽环类抗生素，包括但不限于阿霉素或者表阿霉素。另外一个实施方案中，化疗剂是蒽环类抗生素，且包装插页进一步指导使用者施用心脏保护剂。
本发明方法和组合物包含抗ErbB2抗体，包括人源化抗ErbB2抗体。因此，本发明进一步涉及含有与ErbB2结合的抗体的组合物，和该抗体治疗人的ErbB2表达型癌症，例如ErbB2过度表达型癌的用途。发明还涉及该抗体治疗EGFR表达型癌症的用途。优选地，抗体是单克隆抗体4D5，如人源化4D5并优选huMAb4D5-8(HERCEPTIN抗ErbB2抗体)；或者单克隆抗体2C4，如人源化2C4。抗体可以是完整抗体(如完整的IgG1抗体)或者抗体片段(如Fab，F(ab)2，二价抗体等)。图5A和5B显示人源化抗ErbB2抗体2C4的轻链可变区和重链可变区。
附图简述

图1显示了通过截短突变分析和定点诱变测得的ErbB2胞外结构域的表位作图(Nakamura等，J.Virology 67(10)6179-6191[1993年10月])；Renz等J.Cell Biol.125(6)1395-1406[1994年1月])。抗增殖Mabs 4D5和3H4与跨膜结构域的邻近区结合。各种ErbB2-ECD截短突变体或点突变体是利用聚合酶链式反应从cDNA产生。ErbB2突变体在哺乳动物的表达质粒中表达为gD融合蛋白。这种表达质粒使用了巨细胞病毒启动子/增强子和SV40终止序列以及位于cDNA插入片段下游的聚腺苷酸信号。用质粒DNA转染293S细胞。转柒一天后，将细胞在无甲硫氨酸和半胱氨酸的低糖DMEM培养基中通过代谢(metabolically)标记过夜，所述DMEM培养基中含1％经透析的胎牛血清和25μCi35S甲硫氨酸以及25μCi35S半胱氨酸。收获上清，并向上清中加入抗ErbB2单克隆抗体或对照抗体，4℃培育2-4小时。沉淀复合物，在10-20％Tricine SDS梯度凝胶上用100V电压进行电泳。将该凝胶电印迹到膜上并通过放射自显影进行分析。SEQ ID Nos8和9分别描述3H4和4D5表位。
图2用下划线显示ErbB2结构域1(SEQ ID NO1)的氨基酸序列。粗体氨基酸表示单克隆抗体7C2和7F3识别的表位的位置(经缺失图谱测得)，即“7C2/7F3表位”(SEQ ID NO2)。
图3是抗ErbB2抗体(HERCEPTIN)谷血清浓度(μg／ml，均值±SE，黑圈)对用HERCEPTIN抗ErbB2抗体治疗ErbB2过度表达型患者的周时间的作图，所述治疗从第2周至第36周，其中抗ErbB2抗体的初始剂量为4mg/kg，继续量为每周2mg/kg。每个时间点的患者人数用“n”表示(白色方框)。
图4A是用HERCEPTIN抗ErbB2抗体治疗小鼠时，肿瘤体积随时间变化的线图。图4B是图4A相同数据的半对数作图，这样受治动物的肿瘤体积变化更为直观。
图5A和5B描述了对下述序列的排列对比(alignment)，即小鼠单克隆抗体2C4的轻链可变区(VL)(图5A)和重链可变区(VH)(图5B)氨基酸序列(分别见SEQ ID NOs 10和11)；人源化Fab版574的VL和VH区(分别见SEQ IDNos 12和13)，以及人VL和VH的共有框架(hum 1，轻链 亚群I；humIII，重链亚群III)(分别见SEQ ID Nos 14和15)。星号表明人源化Fab版574和鼠单克隆抗体2C4之间，或者人源化Fab版574和人的框架之间的差异。互补决定区(CDRs)用括号标出。人源化Fab版574(带有ArgH71Val、AspH73Arg和IleH69Leu的改变)显示恢复了与原始嵌合2C4 Fab段的结合。为了进一步精炼或增加人源化抗体的结合，可修饰其它的FR和/或CDR残基如L2、L54、L55、L56、H35和/或H48(例如如下取代IleL2Thr；ArgL54Leu；TyrL55Glu；ThrL56Ser；AspH35Ser；和ValH48Ile)。或者(或另外)，为了改善或精炼所述人源化抗体的亲和力和/或其它生物学活性，可对其进行亲和力成熟。
优选实施方案详述I.定义“ErbB受体”是受体蛋白酪氨酸激酶，属于ErbB受体家族并且包括EGFR、ErbB2、ErbB3和ErbB4受体和在将来被鉴定的此家族其它成员。ErbB受体通常包括可结合ErbB配体的细胞外结构域；亲脂性跨膜结构域；保守的细胞内酪氨酸激酶结构域；和含几个可被磷酸化的酪氨酸残基的羧基末端信号结构域。ErbB受体可以是“天然序列”ErbB受体或其“氨基酸序列变体”。优选该ErbB受体是天然序列人ErbB受体。
术语“ErbB1”、“表皮生长因子受体”和“EGFR”在本文中可互换应用，是指如Carpenter等(Ann.Rev.Biochem.56881-914(1987))公开的EGFR，包括其天然突变型(例如Humphrey等(PNAS(USA)874207-4211(1990))所述缺失突变型EGFR)。erbB1是指编码EGFR蛋白产物的基因。与EGFR结合的抗体实例包括Mab 579(ATCC CRL HB8506)、MAb 455(ATCC CRLHB 8507)、Mab 225(ATCC CRL HB 8508)、Mab 528(ATCC CRL HB 8509)(见美国专利4943533，Mendelsohn等)及其变体，例如嵌合型225(C225)和重塑型人225(H225)(见WO96/40210，Imclone Systems Inc.)。
“ErbB3”和“HER3”是指如美国专利5183884和5480968以及Kraus等(PNAS(USA)869193-9197(1989))公开的受体多肽，包括其变体。与HER3结合的抗体的实例在美国专利5868511(Akita和Sliwkowski)中作了描述，例如8B8抗体(ATCC HB 12070)或其人源化变体。
术语“ErbB4”和“HER4”是指在下述文献中公开的受体多肽，如欧洲专利申请599274、Plowman等，美国国家科学院院刊，901746-1750(1993)，和Plowman等，自然，366473-475(1993)，包括其变体，如在1999年4月22公开的WO99/19488中所述的同种型。
术语“ErbB2”、“HER2”和“c-Erb-B2”可互换应用。除非另外声明，术语“ErbB2”、“c-Erb-B2”和“HER2”在本文中是指人蛋白质，而“erbB2”、“c-erb-B2”和her2”是指人基因。人erbB2基因和ErbB2蛋白，例如在Semba等(PNAS(USA)826497-6501(1985))和Yamamoto等(自然319230-234(1986))中的描述(Genebank登记号X03363)。ErbB2包括四个结构域(结构域1-4)。
“表位4D5”是ErbB2细胞外结构域中与抗体4D5(ATCC CRL 10463)结合的区域。该表位靠近ErbB2的跨膜结构域。为了筛选与4D5表位结合的抗体，可进行常规的交叉阻断试验，例如《抗体》，实验室指南，冷泉港实验室，Harlow和David Lane编(1998)所述方法。或者，可进行表位作图(见图1)来评定抗体是否与ErbB2的4D5表位(例如ErbB2上从约残基529到残基625的区域中的任何一个或多个残基，包括这两个端点残基)结合。
“表位3H4”是ErbB2细胞外结构域中与抗体3H4结合的区域。该表位包括ErbB2细胞外结构域的氨基酸序列中从约541到约599(包括这两个端点残基)的残基，见图1。
“表位7C2/7F3”是与7C2和/或7F3抗体(均在ATCC保存，见下述)结合的ErbB2细胞外结构域N末端区域。为了筛选与7C2/7F3表位结合的抗体，可进行常规的交叉阻断试验，例如《抗体》，实验室指南，冷泉港实验室，Harlow和David Lane编(1998)所述方法。或者，可进行表位作图来评定抗体是否与ErbB2的7C2/7F3表位(例如ErbB2上从约残基22到残基53的区域中的任何一个或多个残基；SEQ ID NO2)结合。
“诱导细胞死亡”的抗体是使活细胞失去活性的抗体。所述细胞通常是表达ErbB2受体的细胞，尤其是过度表达ErbB2受体的细胞。优选所述细胞为癌细胞，例如乳腺、卵巢、胃、子宫内膜、唾液腺、肺、肾、结肠、甲状腺、胰腺或膀胱的细胞。在体外，所述细胞可以是SK-BR-3、BT474、Calu3、MDA-MB-453、MDA-MB-361或SKOV3细胞。在体外的细胞死亡可在无补体和免疫效应细胞的条件下进行检测，以便与抗体依赖性细胞介导的细胞毒(ADCC)或补体依赖性细胞毒作用(CDC)诱导的细胞死亡进行区分。因此，可使用热灭活的血清(即在无补体的条件下)并在无免疫效应细胞的条件下进行细胞死亡检测。为了检测抗体能否诱导细胞死亡，可通过评价相对于未处理细胞，对propidium iodide(PI)、台盼蓝(见Moore等，细胞技术171-11(1995))或7AAD的吸收来评估膜完整性的丧失。优选的细胞死亡诱导抗体是那些在“BT474细胞的PI摄入试验”中诱导PI摄入的抗体。
术语“诱导凋亡”或“能够诱导细胞凋亡”是指抗体诱导细胞程序性细胞死亡的能力，所述凋亡可通过膜联蛋白V的结合，DNA片段化，细胞皱缩，内织网膨胀，细胞碎裂，和/或膜泡(称为凋亡小体)的形成而确定。所述细胞通常是过度表达ErbB2受体的细胞。优选所述细胞为癌细胞，例如乳腺、卵巢、胃、子宫内膜、唾液腺、肺、肾、结肠、甲状腺、胰腺或膀胱的细胞。在体外，所述细胞可以是SK-BR-3、BT474、Calu 3、MDA-MB-453、MDA-MB-361或SKOV3细胞。可用各种方法检测与凋亡相关的细胞事件。例如，磷脂酰丝氨酸(PS)易位可通过膜联蛋白结合来测定；DNA片段化可通过DNA序列梯(laddering)来评估；与DNA片段化相伴的核/染色体浓缩可通过亚二倍体细胞中的任何增加来评估。优选凋亡诱导抗体是在BT474细胞的膜联蛋白结合试验中，导致对膜联蛋白的结合为未处理细胞的约2-50倍，优选约5-50倍，最优选约10-50倍的那些抗体(见下述)。
有时前凋亡性(pro-apoptotic)抗体是进一步阻断ErbB2/ErbB3复合物的HER结合/活化的抗体(例如7F3抗体)。在其它情况中，所述抗体是不明显阻断被HRG激活的ErbB2/ErbB3复合物的抗体(例如7C2)。而且，该抗体可以是与7C2相似的抗体，其在诱导细胞凋亡时，不引起S期细胞的百分比大幅下降(例如与对照相比仅引起这些细胞的百分比下降约0-10％的抗体)。
目标抗体可以象7C2那样，它可与人ErbB2特异性结合，且不与其它蛋白(由erbB1、erbB2、erbB3和/或erbB4基因编码的蛋白)发生显著的交叉反应。有时，抗体可能不与大鼠neu蛋白(例如Schecter等Nature 312513(1984)和Drebin等Nature 312545-548(1984)中所述的)发生明显的交叉反应。在该实例中，此抗体与这些蛋白(如结合于内源性受体的细胞表面)的结合程度将低于10％，所述结果是用荧光激活细胞分选(FACS)或放射免疫沉淀(RIA)测定的。
本文中的“遗传调节蛋白”(HRG)在是指激活ErbB2-ErbB3和ErbB2-ErbB4蛋白复合物的多肽(即，在结合到其上时诱导复合物中的酪氨酸磷酸化)。该术语中囊括的各种遗传调节蛋白多肽公开在例如下述文献中Holmes等Science 2561205-1210(1992)；WO92/20798；Wen等Mol.Cell.Biol.14(3)1909-1919(1994)；和Marchionni等，Nature 362312-318(1993)。该术语包括天然序列HRG多肽的生物学活性片段和/或其氨基酸序列变体，例如其EGF样结构域片段(如HRGβ1177-244)。
术语“ErbB2-ErbB3蛋白复合物”和“ErbB2-ErbB4蛋白复合物”是ErbB2受体分别与ErbB3受体或ErbB4受体非共价结合的寡聚物。所述复合物在表达这些受体的细胞接触HRG时形成，可通过免疫沉淀分离获得，并可用Sliwkowski等在J.Biol.Chem.269(20)14661-14665(1994)中描述的SDS-PAGE来分析。
“抗体(Ab)”和“免疫球蛋白(Ig)”是具有相同结构特征的糖蛋白。抗体表现出对特异抗原的结合特异性，而免疫球蛋白包括抗体和其它缺少抗原特异性的抗体-样分子。譬如，淋巴系统可产生少量后一类多肽，而骨髓瘤可产生较高含量的后一类多肽。
“天然抗体”和“天然免疫球蛋白”是约150000道尔顿的异四聚糖蛋白，其由两个相同的轻链(L)和两个相同的重链(H)组成，每条轻链通过一个共价二硫键与重链相连，而不同免疫球蛋白同种型的重链间的二硫键数目不同。每条重链和轻链还有规则间隔的链内二硫键。每条重链的一端有可变区(VH)，其后是多个不变区。每条轻链的一端有可变区(VL)，另一端有恒定区；轻链的恒定区与重链的第一个恒定区相对应，轻链的可变区与重链的可变区相对。据信特殊的氨基酸残基在轻链和重链的可变区之间形成界面。
术语“可变”是指可变区某些部分的序列在抗体之间有很大差异，它们可在各个抗体对其特殊抗原的结合和特异性方面发挥作用。然而，该变异性不是均匀的分布于整个抗体的可变区。它集中于轻链和重链可变区中三个称为互补决定区(CDR)或超变区的节段中。可变区中保守性较高的区域称为框架区(FR)。天然重链和轻链的可变区各包括4个FR，主要采取β折叠构象，由形成环状连接的三个CDR相连接，而在某些情况下可形成部分β折叠结构。每条链的CDR通过FR紧密的靠近在一起，并且与其它链的CDR一起形成抗体的抗原结合位点(见Kabat等，NIH Publ.No.91-3242，第I卷，第647-669页(1991))。恒定区不直接参与抗体与抗原的结合，但是表现出各种效应功能，例如参与抗体的抗体依赖性细胞毒性作用。
木瓜蛋白酶消化抗体可产生两个相同的各带有单个抗原结合位点的抗原结合片段(称为“Fab”片段)和残余的“Fc”片段，Fc段的名称反应了其易于结晶的能力。经胃蛋白酶处理可产生具有两个抗原结合位点并仍然能交联抗原的F(ab’)2片段。
“Fv”段是含有完整的抗原识别和抗原结合位点的最小抗体片段。此区由紧密地非共价连接的一个重链可变区与一个轻链可变区的二聚体组成。在这个构象中每个可变区的三个CDR相互作用，在VH-VL二聚体表面限定一个抗原结合位点。这六个CDR共同赋予抗体以抗原结合特异性。然而，即使是单个可变区(或FV的一半仅含有三个抗原特异性CDR)也具有识别和结合抗原的能力，尽管与完整的结合位点相比其亲和力较低。
Fab段还包括轻链恒定区和重链的第一个恒定区(CH1)。Fab’与Fab的差别在于Fab’在重链CH1的羧基末端多出几个残基，包括抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab’-SH在本文中是指恒定区半胱氨酸残基中至少有一个游离巯基的Fab’。F(ab’)2抗体片段在最初产生为Fab’片段对，在它们之间具有铰链区半胱氨酸。抗体片段的其它化学偶联是众所周知的。
脊椎动物任何物种的抗体(免疫球蛋白)的“轻链”，可依据其恒定区氨基酸序列而归为两种完全不同的两类(称为κ和λ)中的一类。
根据其重链恒定区的氨基酸序列，可将免疫球蛋白分为不同种类。主要有5类免疫球蛋白IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中一些还可进一步分成“亚类”(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。对应于不同类抗体的重链恒定区分别称为α、δ、ε、γ和μ。不同类免疫球蛋白的亚单位结构和三维构象是众所周知的。
本文中术语“抗体”是指最广义上的抗体，具体包括完整的单克隆抗体，多克隆抗体，由至少两种完整抗体形成的多特异性抗体(例如双特异性抗体)和抗体片段，只要其显示所需生物学活性即可。
“抗体片段”包括完整抗体的一部分，优选包括其抗原结合区或可变区。抗体片段的实例包括Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段；二价抗体；线性抗体(Zapata等，Protein Eng.8(10)1057-1062)；单链抗体分子；和由抗体片段形成的多特异性抗体。
本文中术语“单克隆抗体”是指来自基本上同质的抗体群的抗体，即除了可能少量存在的天然突变以外，该抗体群中的各个抗体均相同。单克隆抗体具有高度的特异性，针对单个抗原位点。而且，与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的常规(多克隆)抗体制剂相反，每种单克隆抗体是针对抗原上的单个表位。除了其特异性之外，单克隆抗体的优点在于它们可被合成并不受其它抗体的污染。修饰词“单克隆”表明该抗体的特点，即其来自基本上同质的抗体群，不解释为需通过任何特殊方法产生该抗体。例如，根据本发明应用的单克隆抗体可通过由Kohler等(自然，256495(1975))首先描述的杂交瘤法进行制备，或者可通过重组DNA法进行制备(例如见美国专利4816567)。“单克隆抗体”还可利用例如Clackson等(自然，352624-628(1991))和Marks等(分子生物学杂志，222581-597(1991))所述技术从噬菌体抗体文库中分离。
本文中单克隆抗体特别包括“嵌合”抗体，其重链和/或轻链的一部分与源自特殊物种或属于特殊抗体种类或亚类的抗体的相应序列相同或同源，但所述链的剩余部分的序列与源自另一个物种或属于另一个抗体种类或亚类的抗体(以及此抗体的片段，只要它们显示所需的生物学活性)的相应序列相同或同源(美国专利4,816,567；和Morrison等，美国国家科学院院刊，816851-6855(1984))。
“人源化”型非人(例如小鼠)抗体是嵌合的免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(如Fv、Fab、Fab’、F(ab)’)或抗体的其它抗原结合序列，它们包含非人免疫球蛋白的最小序列。在很大程度上，人源化抗体是人免疫球蛋白(受者抗体)中受者的互补决定区(CDR)残基被具有所需特异性、亲和力和性能的小鼠、大鼠、家兔或非人灵长类等非人源物种抗体(供体抗体)的CDR残基所取代。在一些实例中，人免疫球蛋白的框架区(FR)残基由相应的非人类残基所取代。而且，人源化抗体可包括在受者抗体或供体CDR或框架序列中不存在的残基。这些修饰旨在进一步改善和最大化抗体的性能。通常，人源化抗体基本上包括至少一个(通常包括两个)可变区的全部，其中CDR的全部或基本上全部对应于非人免疫球蛋白的相应部分，而FR序列的全部或基本上全部是人免疫球蛋白序列。人源化抗体还任选包括免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常为人免疫球蛋白的恒定区的至少一部分。详见Jones等，自然，321522-525(1986)；Riechmann等，自然332323-329(1988)；和Presta，Curr.Op.Struct.Biol.2593-596(1992)。人源化抗体包括PRIMATIZEDTM抗体，其中抗体的抗原结合区可从通过感兴趣抗原免疫接种猕猴制得的抗体中衍生获得。
“单链Fv”或“scFv”抗体片段包括抗体的VH和VL结构域，这些结构域存在于单个多肽链上。优选Fv多肽在VH和VL结构域之间还包含一个多肽接头，它能使scFv形成抗原结合所需的结构。关于scFv的综述见Pluckthun在《单克隆抗体的药理学》，第113卷，Rosenburg和Moore编，Springer-Verlag，New York，第269-315页(1994)。
术语“二价抗体”是指具有两个抗原结合位点的小分子抗体片段，这些片段在一条多肽链(VH-VL)上含有相连的一个重链可变区(VH)和一个轻链可变区(VL)。利用一种非常短的接头，其使得同一条链上的两个结构域无法配对，不得不与另一条链上的互补结构域配对，从而形成两个抗原结合位点。在EP 404,097；WO93/11161；和Hollinger等，美国国家科学院院刊，906444-6448(1993)中有对二价抗体的更详细描述。
“分离的”抗体是已从其天然环境的组成中鉴定、分离和/或回收的抗体。其天然环境的污染成分是干扰抗体的诊断或治疗应用的物质，可包括酶、激素和其它蛋白性或非蛋白性溶质。在优选的实施方案中，该抗体的纯度应达到(1)经Lowery法确定的抗体重量的95％以上，最优选所述重量的99％以上，(2)足以获得用旋转杯状(spinning cup)序列分析仪所测至少15个残基的N端或内部氨基酸序列，(3)通过还原或非还原条件下的SDS-PAGE以及考马斯亮蓝染色、优选银染色所证实的同质性。分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体，因为该抗体的自然环境中的至少一种组分已不存在。一般情况下分离的抗体可通过至少一个纯化步骤来制备。
本文所用术语“补救受体结合表位”是指IgG分子(如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)Fc区的一种表位，它负责延长IgG分子的体内血清半衰期。
“治疗”是指治疗和预防措施，那些需要治疗的对象是已经患有疾病以及有待预防疾病的个体。
需要治疗的“哺乳动物”是指哺乳类任何动物，包括人、家禽、农用动物，和动物园、运动项目用的动物或宠物，如犬、马、猫、牛等。优选哺乳动物是人。
“疾病”是将受益于抗BrbB2抗体治疗的任何病症。这包括慢性和急性疾病，包括使哺乳动物易患上所讨论疾病的病理状况。这些被治疗疾病的非限定实例包括良性和恶性肿瘤；白血病和淋巴样恶性肿瘤；神经元、神经胶质细胞、星形交质细胞、下丘脑和其它腺体、巨噬细胞、上皮细胞、间质和囊胚腔的疾病；炎性、血管原性和免疫性疾病。
术语“治疗有效量”是指具有已知增生效果的量。优选地，治疗有效量具有细胞凋亡(apoptotic)活性，或者能够诱导细胞死亡，并且优选良性或恶性肿瘤细胞尤其是癌细胞死亡。根据所治病症的情况，可用常规方法测定治疗效力。对于癌症治疗来说，可通过例如评估疾病进展时间(TTP)或测定应答率(RR)来测定其效力(见下述实施例1)。治疗有效量也指目标血清浓度，如谷血清浓度，当在一段期间保持该浓度时，能够有效抑制疾病症状。
术语“癌症”和“癌性的”是指或描述哺乳动物中以细胞生长失控为典型特点的病理状态。癌症的实例包括但不限定于癌(carcinoma)，淋巴瘤，母细胞瘤，肉瘤和白血病或淋巴样恶性肿瘤。更具体而言，这些癌包括鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)，肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞状上皮癌)，腹膜癌，肝细胞癌(hepatocellular cancer)，胃癌(包括胃肠癌)，胰腺癌，胶质母细胞瘤，宫颈癌，卵巢癌，肝癌(liver cancer)，膀胱癌，肝细胞瘤(hepatoma)，乳腺癌，结肠癌，直肠癌，结直肠癌，子宫内膜或子宫癌，唾液腺癌，肾癌，前列腺癌，外阴癌，甲状腺癌，肝癌(hepaticcrcinoma)，以及各种头、颈部癌。
本文所用术语“细胞毒性剂”是指抑制或阻止细胞功能和/或引起细胞破坏的物质。该术语意在包括放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32和Lu的放射性同位素)，化疗剂，毒素如细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素或其片段。
“化疗剂”是在肿瘤治疗中使用的化学化合物。化疗剂实例包括烷化剂，如噻替哌(thiotepa)；环磷酰胺(cyclosphamide)(CYTOXANTM)；烷基磺酸酯如白消安(busulfan)，英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶(aziridine)如苯并多巴(benaodopa)，卡波醌(carboquone)，美妥替哌(meturedopa)和尿烷亚胺(uredopa)；氮丙啶和methylamelamine包括六甲蜜胺(altretamine)，三亚胺嗪(triethylenemelamine)，三亚乙基磷酰胺，三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲基蜜胺(trimethylolomelamine)；氮芥(nitrogen mustards)如苯丁酸氮芥，萘氮芥，胆磷酰胺(cholophosphamide)，雌氮芥(estramustine)，异环磷酰胺(ifosfamide)，氮芥(mechlorethamine)，盐酸氧氮芥；左旋苯丙氨酸氮芥(melphalan)，新氮芥(novembichin)，胆甾醇苯乙酸氮芥，松龙苯芥(prednimustine)，曲磷胺(trofosfamide)，尿嘧啶氮芥；亚硝基脲(nitrosureas)如亚硝基脲氮芥(carmustine)，氯脲菌素(chlorozotocin)，福莫司汀(fotemustine)，洛莫司汀(lomustine)，尼莫司汀(nimustine)，雷莫司汀(ranimustine)；抗生素如阿克拉霉素，放线菌素，authramycin，重氮丝氨酸，博来霉素，放线菌素C(cactinomycin)，加利车霉素(caiicheamicin)，carabicin，洋红霉素(chromomycin)，嗜癌素(carzinophilin)，色霉素，放线菌素D，柔红菌素(daunorubicin)，地托比星(detorubicin)，6-重氮-5-氧-L-正亮氨酸，阿霉素(doxorubicin)，表阿霉素(epirubicin)，依索比星(esorubicin)，伊达比星(idarubicin)，发波霉素(marcellomycin)，丝裂霉素，霉酚酸，诺加霉素(nogalamycin)，橄榄霉素(olivomycin)，培洛霉素(peplomycin)，potfiromycin，嘌呤霉素，三铁阿霉素(quelamycin)，罗多比星(rodorubicin)，链黑菌素；链脲霉素(streptozocin)，杀结核菌素，乌苯美司(ubenimex)，净司他丁(zinostatin)，佐柔比星(zorubicin)；抗代谢药如氨甲蝶呤，5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物如二甲叶酸(denopterin)，氨甲蝶呤，蝶罗呤，三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物氟达拉滨(fludarabine)，6-巯基嘌呤，硫咪嘌呤，硫鸟嘌呤；嘧啶类似物如安西他滨(ancitabine)，阿扎胞苷(azacitidine)，6-氮尿苷，卡莫氟(carmofur)，阿糖胞苷，双脱氧尿苷，去氟氧尿苷(doxifluridine)，依诺他滨(enocitabine)，氟尿苷，5-FU；雄激素类如二甲睾酮(calusterone)，丙酸甲雄烷酮(dromostanolong propionate)，环硫雄醇(epitiostanol)，美雄氨(mepitiostane)，睾内酯(testolactone)；抗肾上腺类如氨鲁米特(aminoglutethimide)，米托坦(mitotane)，曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂如frolinic acid；醋葡内酯；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；安吖啶(amsacrine)；bestrabucil；比生群(biasntrene)；依达曲沙(edatraxate)；defofamine；秋水仙胺；地吖醌(diaziquone)；elfornithine；依利醋铵(elliptinium acetate)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidamine)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidamol)；硝呋旦(nitracrine)；喷司他丁(pintostatin)；phenamet；吡柔比星(pirarubicin)；鬼臼树酸(podophyllinic acid)；2-乙基酰肼；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK；雷佐生(razoxane)；西索菲兰(sizofiran)；锗螺胺(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2，2′，2″-三氯三乙胺(trichlorrotriethylamine)；乌拉坦(urethan)；长春碱酰胺；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇；哌泊溴烷(pipobroman)；gacytosine；阿拉伯糖苷(“Ara-C”)；环磷酰胺；三胺硫磷(thiotepa)；taxoid(taxanes)，如紫杉醇(TAXOL，Bristol-Myers Squibb Oncology，Princeton，NJ)和紫杉萜(TAXOTERE，Rhone-Poulenc Rorer，Antony，France)；苯丁酸氮芥；吉西他滨(gemcitabine)；6-硫代鸟嘌呤；巯基嘌呤；氨甲蝶呤；铂类似物如顺铂和卡铂；长春花碱；铂；依托泊甙(etoposide)(VP-16)；异环磷酰胺；丝裂霉素C；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞宾(vinorelbine)；新霉酰胺(navelbine)；novantrone；替尼泊甙(teniposide)；柔红霉素；氨基蝶呤；xeloda；伊拜膦酸盐(ibandronate)；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；维甲酸；esperamicins；capecitabine；以及上述任何物质的可药用盐，酸或衍生物。此定义还包括能调节或抑制激素对肿瘤的作用的抗激素制剂，如抗雌激素制剂包括他莫昔芬(tamoxifen)，雷洛昔芬(raloxifene)，芳香酶抑制剂4(5)-咪唑，4-羟基他莫昔芬，曲沃昔芬(trioxifene)，keoxifene，LY117018，onapristone，和托瑞米芬(Fareston)；和抗雄激素制剂如氟他氨(flutamide)，尼鲁米特(nilutamide)，bicalutamide，亮丙瑞林(leuprolide)和戈舍瑞林(goserelin)；和上述任何物质的可药用盐、酸或衍生物。
本文中“生长抑制剂”是指在体内或体外抑制细胞生长，尤其抑制表达ErbB的癌症细胞生长的化合物或组合物。因此，生长抑制剂可以是显著降低S期ErbB表达细胞百分比的药物。生长抑制剂的实例包括阻断细胞周期(在除S期以外的某个阶段)进展的药物，例如诱导G1停滞和M期停滞的药物。经典的M期阻断剂包括长春花类(长春新碱和长春花碱)，taxoid(taxane)和topo II抑制剂如阿霉素、表阿霉素、柔红霉素、依托泊甙(etoposide)和博来霉素等。那些使G1期停滞的药物还连带(spill over)使S期停滞，例如DNA烷化剂象他莫昔芬、强的松、达卡巴嗪、氮芥(mechlorethamine)、顺铂、氨甲蝶呤、5-氟尿嘧啶和阿糖胞苷等。详见《癌症的分子基础》Mendelsohn和Israel编，第一章，Murakami等的题为“细胞周期的调节、癌基因和抗肿瘤药”的文章(WB SaundersPhiladephia，1995)，尤其见13页。4D5抗体(和其功能性等同物)也可用于此目的。
“阿霉素”是蒽环类抗生素。阿霉素的化学全称为(8S-顺式)-10-[(3-氨基-2，3，6-三去氧-α-L-来苏-吡喃糖苷)]-7，8，9，10-四氢-6，8，11-三羟-8-(羟乙酰)-甲氧基-5，12-naphthacenedion。
术语“细胞因子”是一般性术语，指由一个细胞群释放的对另一个细胞群起细胞间介质作用的蛋白。这些细胞因子包括生长激素，如人生长激素，N-甲二磺酰人生长激素，和牛生长激素；甲状旁腺素；甲状腺素；胰岛素；前胰岛素；松驰素；前松驰素；糖蛋白激素如卵泡刺激素(FSH)，甲状腺刺激素(TSH)，促黄体(生成)激素(LH)；肝细胞生长因子；成纤维细胞生长因子；催乳激素；胎盘催乳素；肿瘤坏死因子-α和β；缪氏抑制物质(mullerian-inhibiting substance)；小鼠促性腺激素相关肽；抑制素；苯丙酸诺龙；血管内皮细胞生长因子；整联蛋白；血小板生成素(TPO)；神经生长因子如NGF-β；血小板生长因子；转化生长因子(TGF)如TGF-α和TGF-β；胰岛素样生长因子-I和-II；促红细胞生成素(EPO)；骨诱导因子(osteoinductive factors)；干扰素如干扰素-α，-β，-γ；集落刺激因子(CSF)如巨噬细胞-CSF(M-CSF)；粒细胞-巨噬细胞-CSF(GM-CSF)；粒细胞-CSF(G-CSF)；白细胞介素(IL)如IL-1，IL-1α，IL-2，IL-3，IL-4，IL-5，IL-6，IL-7，IL-8，IL-9，IL-11，IL-12；肿瘤坏死因子如TNF-α或TNF-β；和其它多肽因子包括LIF和kit配体(KL)。本文中术语细胞因子包括天然蛋白或来自重组细胞培养物的蛋白以及天然序列细胞因子的生物活性等效物。
本申请使用的术语“前体药物”是指药物活性物质的前体或衍生物形式，其相对于亲本药物对肿瘤细胞的细胞毒作用较小且可酶促活化或被转换成更具活性的亲本形式。例见Wilman，“癌症化疗中的前体药物”Biochemical Society Transaction，14，pp.375-3 82，615thMeeting Belfast(1986)和Stella等，“前体药物一种药物定向运送的化学方法”定向药物运送，Borchardt等(编)，pp.247-267，Humana press(1985)。本发明的前体药物包括，但不限于含有磷酸盐的前体药物，含有硫代磷酸盐的前体药物，含有硫酸盐的前体药物，含有肽的前体药物，D-氨基酸修饰的前体药物，糖基化的前体药物，含有β-内酰胺的前体药物，任选含有取代的苯氧乙酰胺的前体药物或任选含有取代的苯基乙酰胺的前体药物，5-氟胞嘧啶和可转化为更具细胞毒活性的游离药物的其它5-氟尿嘧啶前体药物。可衍生为本发明所用前体药物形式的细胞毒药物包括，但不限于上述化疗剂。
“固相”是指本发明抗体可粘附的非水性基质。本文中固相的实例包括部分或全部由玻璃(如具有控制孔径的玻璃)、多糖(如琼脂糖)、聚丙烯酰胺、聚苯乙烯、聚乙烯醇和硅氧烷制成的那些固相。在某些实例中，根据上下文的内容，固相可包括测试板的孔；在其它的例子中，它可以是纯化柱(如亲和层析柱)。该术语也包括美国专利4275149中公开的分散颗粒的不连续固相。
“脂质体”是由能向哺乳动物有效运送药物(如本文公开的抗ErbB2抗体，和任选的一种化疗剂)的各类脂质、磷脂和/或表面活性剂组成的小分子囊泡。脂质体的组分通常排列为双层形式，与生物膜的脂质排列相似。
所用的术语“包装插页”是指通常包括在治疗产品的商业包装中，含有与这些治疗产品使用有关的说明、用法、剂量、给药、禁忌和/或警示等的说明书。
术语“血清浓度”、“血清药物浓度”或“血清HERCEPTIN抗ErbB2抗体浓度”是指药物(如HERCEPTIN抗ErbB2抗体)在接受该药物治疗的病人或动物血清中的浓度。例如，HERCEPTIN抗ErbB2抗体优选是用免疫分析法测定的。免疫分析法优选根据本文公开的ELISA方法。
术语“峰血清浓度”是指向动物或病人给药后不久药物已经分布在整个血液系统但尚未在机体内发生明显组织分布、代谢或排泄时的最大血清药物浓度。
术语“谷血清浓度”是指在前一剂量给药后和在紧接着就要施用一系列继续量之前的那一时间点的血清药物浓度。一般而言，谷血清浓度是系列给药期间维持效力的最小药物浓度。此外，谷血清浓度经常定位为发生效力的最低血清浓度，因为它代表以下血清浓度，在此血清浓度时就要施用作为治疗方案一部分的另一剂量的药物。如果经静脉施用药物，最优选在施用前负荷初始剂量的1天内达到谷血清浓度。如果经皮下施用药物，则优选在3天或更短时间达到峰浓度。根据本发明，使用本文公开的任一给药方法，优选在4周或更短、优选3周或更短、更优选2周或更短、最优选1周或更短包括1天或更短时间达到谷血清浓度。
术语“静脉输注”是指在大于约5分钟、优选在约30至90分钟的时间内将药物引入到动物或人类患者的静脉内，但根据本发明静脉输注也可以给药10小时或更短时间。
术语“静脉快速灌注”是指将药物施用到动物或人类患者的静脉内以使机体在约15分钟或更短、优选5分钟或更短时间内接受该药物。
术语“皮下给药”是指从药物容器中以相对缓慢、持续释放的方式把药物引入到动物或人类患者的皮下部位，优选在位于皮肤和皮下组织之间的囊袋中。所述囊袋可以通过捏起或拉起皮肤离开皮下组织而造成。
术语“皮下输注”是指从药物容器中以相对缓慢、持续释放一段时间的方式把药物引入到动物或人类患者的皮下部位，优选在位于皮肤和皮下组织之间的囊袋中，所述一段时间包括但不限于30分钟或更短、或90分钟或更短。任选地，可以通过在动物或人类患者的皮下植入药物释放泵来实现输注，所述泵在预定时间如30分钟、90分钟或治疗方案全程时间跨度内释放预定量的药物。
术语“皮下快速灌注”是指将药物施用到动物或人类患者的皮下，其中快速灌注给药优选小于约15分钟，更优选短于5分钟，更优选短于60秒。优选将药物施用到位于皮肤和皮下组织之间的囊袋中，所述囊袋可以通过例如捏起或拉起皮肤离开皮下组织而造成。
当在谈到药物给药时，术语“前负荷”是为了描述初始较高剂量，在该较高剂量之后则间歇地施用等量或较低剂量。初始较高剂量(一次或多次)是为了更快地增加动物或人类患者的血清药物浓度以达到有效的目标血清浓度。根据本发明，前负荷量可通过在3周或更短时间内给药起始剂量(一次或多次)，使动物或病人的血清浓度达到目标血清谷浓度而获得。优选地，初始前沿负荷量(单次或一系列量)在2周或更短时间、优选在1周或更短时间包括1天或更短时间内施用。最优选地，当初始剂量是单次剂量且至少1周不跟随继续维持量时，初始剂量在1天或更短时间内施用。当初始剂量是一系列量时，每一次剂量之间至少相隔3小时，但不超过3周或更短，优选2周或更短，更优选1周或更短，最优选1天或更短。为避免那些先前未用抗体如抗ErbB2抗体(HERCEPTIN抗ErbB2抗体)治疗过的动物或病人对该抗体产生不利的免疫反应，优选经静脉输注施用初始剂量。本发明包括通过静脉或皮下经输注或快速灌注方式来施用初始前沿负荷量和维持量的药物。
与抗ErbB2抗体有关的出版物信息包括下述发行的专利和公布的申请PCT/US89/00051，1989年1月公布；PCT/US90/02697，1990年5月18日公布；EU0474727，1997年7月23日公告；DE69031120.6，1997年7月23日公告；PCT/US97/18385，，1997年10月9日公布；SA97/9185，1997年10月14日公告；US5677171，1997年10月14日公告；US 5720937，1998年2月24日公告；US 5720954，1998年2月24日公告；US 5725856，1998年3月10日公告；US 5770195，1998年6月23日公告；US 5772997，1998年6月30日公告；PCT/US98/2626，1998年3月10日公布；和PCT/US99/06673，1999年3月26日公布，每一个专利和出版物均以其全部在此引入作为参考。
II.抗ErbB2抗体的制备下面是关于本发明所用抗体的制备技术实例的叙述。用于制备抗体的ErbB2抗原可以是例如ErbB2的可溶型细胞外结构域或其含所需表位的一部分。或者，可用在其表面表达ErbB2的那些细胞(例如转化为过度表达ErbB2的NIH-3T3细胞；或SK-BR-3细胞等癌细胞系，见Srancovski等，PNAS(USA)888691-8695(1991))来制备抗体。ErbB2的可用于制备抗体的其它形式对于本领域技术人员是显而易见的。
(i)多克隆抗体多克隆抗体优选通过多次给动物皮下(sc)或腹膜内(ip)注射相关抗原和佐剂而产生。将所述相关抗原与针对所免疫的物种具有免疫原性的蛋白(如匙孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin)、血清白蛋白、牛甲状腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制剂)用双功能试剂或衍生试剂，如马来酰亚氨苯甲酰基硫代琥珀酰亚胺酯(通过半胱氨酸残基结合)、N-羟基琥珀酰亚胺(通过赖氨酸残基)、戊二醛、琥珀酸酐、SOCl2或R1N＝C＝NR(R和R1是不同烷基，进行偶联是有效的。
用所述抗原、免疫原性偶联物或衍生物免疫动物，方法是，将100μg或5μg蛋白或偶联物(分别针对兔或鼠)与3倍体积的弗氏完全佐剂混合，在多位点皮内注射该溶液。1个月后，多位点皮内注射初始量为1/5-1/10的肽或与弗氏完全佐剂的偶联物来加强免疫。7-14天后，对动物采血，测定血清中的抗体效价。对动物的加强免疫直到效价达到平台期为止。优选给动物加强注射相同抗原的偶联物，但也可以是偶联至不同蛋白和/或通过不同的交联剂偶联的偶联物。偶联物还可以是重组细胞培养物产生的融合蛋白。此外，可用明矾等聚集剂增强免疫应答。
(ii)单克隆抗体单克隆抗体来自基本均一的抗体群，即该群体中的每个抗体除了可能的很小量天然突变外都相同。因此，修饰词“单克隆”指所述抗体的并非不同抗体混合物的特性。
例如，单克隆抗体可用由Kohler等，自然(1975)首次描述的杂交瘤技术制备，或用重组DNA方法制备(美国专利4,816,567)。
在杂交瘤方法中，如上述免疫小鼠或其它适合的宿主动物如仓鼠，以激发那些产生或能产生与用于免疫之蛋白特异性结合的抗体的淋巴细胞。另外，可体外免疫淋巴细胞。然后用适当融合剂，如聚乙二醇，使淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞(Goding，单克隆抗体原理及应用，pp.59-103(Academic Press，1986))。
将如此制备的杂交瘤细胞接种至适当培养基中并进行培养，优选该培养基含有一或多种能抑制未融合的亲本骨髓瘤细胞生长或存活的物质。例如，如果亲本骨髓瘤细胞缺乏次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(HGPRT或HPRT)，杂交瘤培养基通常将包含次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸腺嘧啶核苷(HAT培养基)，这些物质阻止HGPRT-缺陷型细胞的生长。
优选骨髓瘤细胞是那些能有效融合、支持所选抗体生成细胞以稳定的高水平产生抗体，并对诸如HAT培养基等类似培养基敏感的细胞。其中，优选的骨髓瘤细胞系是鼠骨髓瘤系，如由Salk Institute Cell DistreibutionCenter，San Diego，California USA提供的MOPC-21和MPC-11小鼠肿瘤细胞和由美国典型培养物保藏中心，Rockville，Maryland USA提供的SP-2或X63-Ag8-653细胞。也有报道称人骨髓瘤以及小鼠-人异质性骨髓瘤细胞系可用于产生人单克隆抗体(Kozbor，免疫学杂志1333001(1984)；Brodeur等，单克隆抗体制备技术及应用，第51-63页(Marcel Dekker，Inc.，NewYork，1987))可在含有生长的杂交瘤细胞培养基中分析直接针对所述抗原的单克隆抗体的产生。杂交瘤细胞所产生的单克隆抗体的结合特异性通过免疫沉淀或通过体外结合试验，如放射免疫分析(RIA)或酶联免疫吸附试验(ELISA)来分析。
单克隆抗体的结合亲和力可通过如Muson等，Anal.Biochem.，107220(1980)所述Scatchard分析来测定。
一旦鉴定出能产生具有所需特异性、亲和力、和/或活性的抗体的杂交瘤细胞后，将这些克隆通过有限稀释法进一步克隆并用标准方法进行培养(Goding，单克隆抗体原理及应用，第59-103页(Academic Press，1986))。适于此目的的培养基包括如D-MEM或RPMI-1640培养基。另外，杂交瘤细胞可作为腹水中肿瘤的形式在动物体内生长。
由亚克隆分泌的单克隆抗体可用常规免疫球蛋白纯化方法如蛋白-A-Sepharose、羟基磷灰石层析、凝胶电泳、透析或亲和层析从培养基、腹水或血清中分离。
编码单克隆抗体的DNA可用常规方法很容易的分离和测序(如利用能与编码小鼠抗体重链和轻链的基因特异结合的寡核苷酸探针)。杂交瘤细胞是这类DNA的优选来源。DNA分离后，可将其插入表达载体中，然后用此表达载体转染宿主细胞，如大肠杆菌细胞、猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或不产生免疫球蛋白的骨髓瘤细胞，以便在重组宿主细胞中合成单克隆抗体。编码抗体的DNA在细菌中的重组表达的综述见Skerra等，Curr.Opinion in Immunol.，5256-262(1993)和Pluckthun，Immunol.Revs.，130151-188(1992)。
在另一实施方案中，可从用McCafferty等，自然，348552-554(1990)所述技术产生的抗体噬菌体文库中分离抗体或抗体片段。Clackson等，自然，352624-628(1991)和Marks等，分子生物学杂志222581-597(1991)分别描述了用噬菌体文库分离鼠和人的抗体。后来的文献描述了通过链改组制备高亲和力(nM范围)的人型抗体(Marks等，生物/技术10779-783(1992))，以及用于构建大规模噬菌体文库的组合感染和体内重组方法(Waterhouse等，核酸研究212265-2266(1993))。因此，这些技术都可取代传统单克隆抗体杂交瘤技术来分离克隆抗体。
DNA也可通过用人类重链和轻链的恒定区编码序列取代小鼠同源序列来修饰(美国专利4,816,567；Morrison等，美国国家科学院学报816851(1984))，或通过将非免疫球蛋白多肽的全部或部分编码序列与免疫球蛋白编码序列共价结合来修饰。
通常用所述非免疫球蛋白多肽取代抗体恒定区，或取代抗体上一个抗原结合点的可变区，形成二价嵌合抗体，其中一个抗原结合位点特异于一种抗原而另一个抗原结合位点特异于另一抗原。
(iii)人源化抗体和人抗体关于人源化非人抗体的制备方法为本领域所熟知。优选人源化抗体中已导入一或多个源自非人类的氨基酸残基。这些非人类氨基酸残基常称为“引进的”残基，它们通常来自“引进的”可变区。人源化过程基本如Winter及其同事(Jones等，自然，321522-525(1986)；Riechmann等，自然，332323-327(1988)；Verhoeyen等，科学，2391534-1536(1988))所述的方法，用啮齿动物CDRs或CDR序列取代人抗体的相应序列来进行。因此，这样的“人源化”抗体是嵌合抗体(美国专利4,816,567)，其中完整(intact)人类可变区的很少一部分被非人物种的相应序列取代。实践中，人源化抗体通常是人的抗体，其中CDR残基且可能有部分FR残基被啮齿类抗体中类似位点的残基取代。
对用于制备人源化抗体的人类可变区(包括重链和轻链)的选择，对降低抗原性非常重要。根据所谓“最适应”方法，针对已知人类可变区序列的整个文库筛选啮齿类抗体可变区序列。将与啮齿类的序列最相似的人类序列作为人源化抗体的人框架区(FR)(Sims等，免疫学杂志，1512296(1993)；Chothia等，分子生物学杂志，196901(1987))。另一种方法是用人类轻链或重链特定亚型的所有抗体的共有序列作为特定框架区。相同的框架可用于几种不同的人源化抗体(Carter等，美国国家科学院学报，894285(1992)；Presta等，免疫学杂志，1512623(1993))。
更重要的是，将抗体人源化后保留了对抗原的高亲和力和其它有利的生物特性。为达到此目的，在一种优选方法中，通过用亲本序列和人源化序列的三维模型分析亲本序列和各种概念性人源化产物来制备人源化抗体。免疫球蛋白三维模型已有商品，是本领域技术人员所熟悉的。还有用于描述和展示所选免疫球蛋白序列可能的三维构象的计算机程序。通过观察这些展示结果可分析残基在候选免疫球蛋白序列的功能中可能发挥的作用，即分析能影响候选免疫球蛋白与其抗原结合的能力的残基，通过这种方法，可从受者和引进序列中选出FR残基并组合，从而得到所需抗体性质，如对靶抗原的亲和力增加。总之，CDR残基直接并且最主要影响到抗原的结合。
或者，现在可以制备转基因动物(如小鼠)，所述转基因动物能够经免疫接种而在没有内源性免疫球蛋白产生时产生出人抗体的全部组成成分。例如，有报道称，嵌合抗体和种系(germ-line)突变型小鼠中抗体重链连接区(JH)基因的纯合缺失导致内源抗体的产生被完全抑制。将人种系免疫球蛋白基因阵列转移到这些种系突变型小鼠中，能使其在抗原攻击时产生人抗体。例如参见下列文献Jakobovits等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，902551(1993)；Jakobovits等，Nature 362255-258(1993)；Bruggermann等，Year in Iminuno.733(1993)。人抗体也可从噬菌体展示文库中获得(Hoogenboom等，J.Mol.Biol.227381(1991)；Marks等，J.Mol.Biol.222581-597)。
(iv)抗体片段已开发了生成抗体片段的多种技术。传统上，这些片段通过对完整抗体的蛋白水解性消化获得(见Morimoto等，生物化学和生物物理学方法杂志(Journal of Biochemical and Biophysical Methods)24107-117(1992))和Brennan等，科学，22981(1985))。但现在可直接通过重组宿主细胞产生这些片段。例如，可从上述抗体噬菌体库分离抗体片段。另外，可从大肠杆菌直接回收Fab’-SH片段，并经化学连接形成F(ab’)2片段(Carter等，生物/技术10163-167(1992))。依据另一种方法，可直接从重组宿主细胞培养中分离F(ab’)2片段。其它产生抗体片段的技术对本领域技术人员是显而易见的。在其它实施方案中，所选抗体是单链Fv片段(scFv)。见WO 93/16185。
(v)双特异性抗体双特异性抗体是具有针对至少两种不同表位的结合特异性的抗体。代表性双特异性抗体可以与ErbB2蛋白的两种不同表位结合。譬如，一个臂可以与ErbB2结构域1中的表位如7C2/7F3表位结合，另一个臂可以与不同表位如4D5结合。其它这种抗体可将ErbB2结合位点与针对EGFR、ErbB3和/或ErbB4的结合位点组合起来。或者，可将抗ErbB2臂与结合白细胞上引发分子的臂结合，从而集中针对ErbB2表达细胞的细胞防御机制，所述引发分子如T细胞受体分子(CD2或CD3)，或IgG Fc受体(FcγR)如FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)和FcγRIII(CD16)。双特异性抗体还可用于将细胞毒制剂定位至表达ErbB2的细胞。这些抗体具有ErbB2结合臂和结合细胞毒制剂(例如皂草素，抗INF-α，长春花生物碱，蓖麻毒蛋白A链，氨甲蝶呤或放射性同位素半抗原)的臂。双特异性抗体可制备成全长抗体或抗体片段(如F(ab’)2双特异性抗体)。
制备双特异性抗体的方法是本领域已知的。完整双特异性抗体的传统制备方法是基于两种具有不同特异性的免疫球蛋白重链-轻链对的共表达，(Millstein等，自然，305537-539(1983))。由于免疫球蛋白重链轻链随机分配，这些杂交瘤(细胞杂交瘤(quadroma))可能产生10种不同抗体分子的混合物，其中只有一种具有正确的双特异性结构。对所述正确分子的纯化(通常通过亲和层析步骤来进行)非常复杂，且产量很低。类似的方法见WO93/08829和Traunecker等，EMBO J.，103655-3659(1991)。
依据另一种方法，可将具有所需结合特异性(抗体-抗原结合位点)的抗体可变区与免疫球蛋白恒定区序列融合。该融合优选与包含铰链区的至少一部分、CH2及CH3区的免疫球蛋白重链恒定区融合。优选使含有轻链结合所需位点的第一重链恒定区(CH1)出现在至少在一种融合中。可将编码免疫球蛋白重链融合体，以及必要时，编码免疫球蛋白轻链的DNA插入不同表达载体，共转染至适当宿主生物。这使得在使用非等比的三种多肽链进行构建的实施方案中，能较灵活地调整三种多肽片段的相互比例，以获得最佳产量。但也可在至少两种多肽链以等比例表达而获得高产时或所述比例无关紧要时，将两种或所有三种多肽链的编码序列插入同一表达载体。
在该方法的一个优选实施方案中，所述双特异性抗体由一条臂上的带有第一结合特异性的杂合免疫球蛋白重链和另一条臂上的杂合免疫球蛋白重链-轻链对(提供第二结合特异性)构成。已发现这种不对称结构有利于从非必要免疫球蛋白链的混合中分离出所需双特异性化合物，因为只有该双特异性分子的一半上存在免疫球蛋白轻链，这使得分离更加容易。此方法公开于WO94/04690中。制备双特异性抗体的进一步细节，见Suresh等，酶学方法，121210(1986)。
根据WO96/27011中描述的另一种方法，可改造一对抗体分子之间的界面，使得从重组细胞培养中回收获得的异源二聚体的百分比最大。优选的界面包括抗体恒定区CH3结构域的至少一部分。在该方法中，第一抗体分子界面上的一条或多条氨基酸小侧链被较大侧链(如酪氨酸或色氨酸)取代。与所述大侧链大小相同或相近的互补“沟”可通过将氨基酸大侧链用小侧链(如丙氨酸或苏氨酸)取代而在第二抗体分子的界面上形成。这使得异二聚体的产量高于不想要的终产物如同型二聚体。
双特异性抗体包括交联抗体或“异源偶联的”抗体。例如，可使异源偶联物中的抗体之一与抗生物素蛋白偶联，使另一抗体与生物素偶联。有观点认为，这类抗体可用于将免疫细胞导向不想要的细胞(美国专利4676980)，也可用于治疗HIV感染(WO91/00360，WO92/200373，EP03089)。异源偶联抗体可通过任何适当的交联方法制备。适当的交联制剂和多种交联技术为本领域已知，可在美国专利4676980中获知。
从抗体片段制备双特异性抗体的技术也已有文献描述。例如，双特异性抗体可利用化学连接制备。Brennan等，科学22981(1985)中描述了将完整抗体经蛋白水解制备F(ab’)2片段的方法。这些片段在二巯基复合剂亚砷酸钠存在时被还原，从而稳定相邻的巯基，并阻止分子间二硫键的形成。生成的Fab’片段被转化为硫硝基苯甲酸盐(TNB)衍生物。其中一种Fab’-TNB衍生物经巯基乙胺还原成Fab’-硫醇，再与等分子量的其它Fab’-TNB衍生物混合形成双特异性抗体。如此产生的双特异性抗体可作为酶的选择性固相化中所用的试剂。
近期的进展促进了从大肠杆菌中直接回收可化学偶联形成双特异性抗体的Fab’-SH片段。Shalaby等，实验医学杂志，175217-225(1992)中描述了完全人源化双特异性抗体F(ab’)2分子的产生。每一Fab’片段分别从大肠杆菌中分泌出来，体外直接化学偶联形成双特异性抗体。如此制备的双特异性抗体能与过度表达ErbB2受体的细胞和正常人T细胞结合，还能触发人细胞毒淋巴细胞对人乳腺肿瘤细胞的裂解活性。
直接从重组细胞培养中制备并分离双特异性抗体片段的多种技术也已有描述。例如，可用亮氨酸拉链制备双特异性抗体。Kostelny等，免疫学杂志，148(5)1547-1553(1992))。将来自Fos和Jun蛋白的亮氨酸拉链肽与两种不同抗体的Fab’部分通过基因融合而连接。使抗体的同型二聚体在铰链区被还原成单体，然后被再氧化形成抗体的异二聚体。该方法也可用于制备抗体同型二聚体。由Hollinger等，美国国家科学院学报，906444-6448(1993))描述的“二价抗体”技术提供了另一种制备双特异性抗体片段的方法。所述片段中含有重链可变区(VH)，其通过接头与轻链可变区(VL)相连，该接头非常短，使得同一链的两个结构域之间无法配对。因此，同一片段上的VH和VL结构域被迫与另一片段上的互补VL和VH结构域配对，从而形成两个抗原结合位点。此外还报道了另一种用单链Fv(sFv)二聚体来制备双特异性抗体的策略。见Gruber等，免疫学杂志，1525368(1994)。
还考虑了二价以上的抗体。如可制备三特异性抗体。Tutt等，免疫学杂志，14760(1991)。
(vi)筛选具有所需特性的抗体上面描述了制备抗体的方法。现在挑选具有本文所述特性的那些抗体。
为了筛选诱导细胞死亡的抗体，可评价相对于对照，膜完整性的丧失，其可由例如PI、台盼蓝或7AAD摄入来指示。优选的试验是利用BT474细胞进行的PI摄入试验。根据该试验，将BT474细胞(可从美国典型培养物保藏中心(Rockville，MD)获得)培养在含10％热灭活的FBS(Hyclone)和2mML-谷氨酰胺的Dulbeco’s改良型Eagle培养基(D-MEM)Ham’s F-12(50∶50)中。(因此，该检测是在无补体和免疫效应细胞的条件下进行)。将BT474细胞以3×106/皿的浓度接种至100×20mm的培养皿中，并使其粘附过夜。然后弃去培养基，仅用新鲜培养基或用含10μg/ml适当单克隆抗体的培养基取代。细胞以3天为一周期进行培养。每次处理后，单层细胞用PBS洗涤，并用胰酶消化使其脱附。然后将细胞在4℃以1200rpm离心5分钟，将沉淀重悬于3ml冰冷的Ca2+结合缓冲液(10mM Hepes，pH7.4，140mMNaCl，2.5mM CaCl2)中，再分装到35mm滤器封盖的12×75试管中(每管1ml，每处理组3管)以去除细胞团块。然后向试管中加入PI(10μg/ml)。样品利用FACSCANTM流式细胞仪和FACSCONVERTTMCellQuest软件(BectonDickinson)分析。可将那些诱导统计显著水平的细胞死亡(如PI摄入法所测)的抗体选为诱导细胞死亡的抗体。
为了筛选凋亡诱导抗体，可采用“利用BT474细胞进行的膜联蛋白结合试验”。将BT474细胞按上段所述接种并培养。然后弃去培养基，仅用新鲜培养基或用含10μg/ml单克隆抗体的培养基取代。细胞以3天为一周期进行培养后，将单层用PBS洗涤，并用胰酶消化使其脱附。然后如上文细胞死亡试验所述将细胞离心，重悬于Ca2+结合缓冲液中，并分装到试管中。向试管中加入标记的膜联蛋白(例如膜联蛋白V-FTIC)(1μg/ml)。利用FACSCANTM流式细胞仪和FACSCONVERTTMCellQuest软件(BectonDickinson)分析样品。在用PI摄入法检测时，可将那些诱导统计显著水平的膜联蛋白结合(如PI摄入法所测)的抗体选为凋亡诱导抗体。
除了膜联蛋白结合试验，还可用“利用BT474细胞进行的DNA染色试验”。为此，将已如前两段所述用目的抗体处理过的BT474细胞与9μg/mlHOECHST 33342TM于37℃温育2小时，然后在EPICS ELITETM流式细胞仪(Coulter Corporation)上用MODFITLTTM软件(Verity Software House)进行分析。引起凋亡细胞百分率改变(比未处理细胞高两倍或更多(优选高3倍或更多)(直到100％的凋亡细胞))的抗体可用此试验筛选为前凋亡抗体。
为了筛选能与结合目的抗体之ErbB2上某一表位结合的抗体，可如《抗体，实验室指南》，冷泉港实验室，Ed Harlow和David Lane(1998)所述进行常规交叉阻断试验。或者，可通过本领域已知技术进行表位作图。
为了鉴定细胞培养中50-100％地抑制SKBR3细胞生长的抗ErbB2抗体，进行WO89/06692中所述的SKBR3试验。根据该试验，SKBR3细胞在F12和DMEM培养基(添加了10％胎牛血清、谷氨酰胺和青霉素链霉素)的混合物(1∶1)中生长。在35mm细胞培养碟中接种20000个SKBR3细胞(2ml/35mm碟)。每个碟中加入2.5μg/ml抗ErbB2抗体。6天后，用COULTERTM电子细胞计数仪来计数细胞数目，与未处理细胞计数进行比较。选出50-100％地抑制SKBR3细胞生长的那些抗体，按照所需与细胞凋亡抗体联合使用。
(vii)效应物功能的工程改造在效应物功能方面可能希望改进本发明的抗体，以增强在治疗(例如治疗癌症)时的效果。例如，可在Fc区域中引入半胱氨酸残基，从而在该区域中形成链间二硫键。这样制得的均二聚体可能有改进的内化能力和/或提高的补体介导细胞杀伤能力及依赖于抗体的细胞毒性(ADCC)。参见Caron等，J.Exp Med.1761191-1195(1992)和Shopes，B.J.Immunol.1482918-2922(1992)。也可如Wolff等，Cancer Research 532560-2565(1993)描述的那样，用异二聚功能性交联剂来制备抗肿瘤活性增强的均二聚抗体。或者，可将抗体工程改造成具有双Fc区，从而可能增强补体裂解和ADCC能力。见Stevenson等，Anti-Cancer Drug Design 3219-230(1989)。
(viii)免疫偶联物本发明还涉及免疫偶联物，其中含有与细胞毒药物偶联的抗体，所述细胞毒药物如化疗剂、毒素(例如小分子毒素或细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素，包括其片段和/或变体)或放射性同位素(即放射偶联物)。
适用于制备这类免疫偶联物的化疗剂在上文已作描述。可以应用的酶活性毒素及其片段包括白喉毒素A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链(来自铜绿假单孢菌)、蓖麻毒蛋白A链、相思豆毒蛋白A链、蒴莲根毒素A链、α-帚曲毒素、油桐(Aleutites fordii)蛋白、石竹素蛋白、美洲商陆(Phytolaca Americana)蛋白(PAPI，PAPII，PAP-S)、苦瓜(momordicacharantia)抑制因子、麻疯树毒蛋白、巴豆毒蛋白、肥皂草(sapaonariaofficinalis)抑制剂，白树毒素，米托菌素(mitogellin)、局限曲菌素、酚霉素、依诺霉素和单端孢菌毒素(tricothecenes)。多种放射性同位素可用于制备放射性偶联的抗ErbB2抗体，实例包括Bi212、I131、In131、Y90和Re186。
抗体与细胞毒制剂的偶联物可通过多种双功能蛋白偶联剂来连接，所述双功能蛋白偶联剂如N-琥珀酰亚氨基-3-(2-吡啶基二巯基)丙酸酯(SPDP)，琥珀酰亚氨基-4-(N-马来酰亚氨甲基)环己烷-1-羧酸酯，亚氨基硫烷(iminothiolane)(IT)，亚氨酸酯的双功能衍生物(如亚氨基己二酸二甲酯盐酸盐)，活性酯类(如二琥珀酰亚胺基辛二酸酯)，醛类(如戊二醛(glutareldehyde))，双-叠氮化合物(如双(对-叠氮基苯甲酰基)己二胺)，双-重氮衍生物(如双-(对-重氮苯甲酰基)-乙二胺)，二异氰酸酯(如亚甲代苯基2，6-二异氰酸酯)，和双-活性氟化合物(如1，5-二氟-2，4-二硝基苯)。例如，蓖麻毒蛋白免疫毒素可如Vitetta等，科学2381098(1987)所述制备。C14标记的1-异硫氰酸苯甲基-3-甲基二亚乙基三氨五乙酸酯(MX-DTPA)是将放射性核苷酸偶联至抗体的偶联剂之一。见WO94/11026。
在另一实施方案中，抗体可与肿瘤预靶向中应用的“受体”(如链霉抗生物素蛋白)偶联，将该抗体-受体偶联物给予患者，之后用清除剂除去循环中未结合的偶联物，再给予已偶联了细胞毒制剂(如放射性核苷酸)的“配体”(如抗生物素蛋白)。
(ix)免疫脂质体本文公开的抗-ErbB2抗体还可制成免疫脂质体。含抗体的脂质体可通过本领域已知方法制备，如Epstein等，美国国家科学院学报823688(1985)；Hwang等，美国国家科学院学报774030(1980)；美国专利4,485,045和4,544,545及1997年10月23日公开的WO97/38731。在美国专利5,013,566中公开了循环时间已增加了的脂质体。
特别有用的脂质体可利用包含磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG衍生的磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)的脂质组合物经反相蒸发法而制得。脂质体挤压通过限定孔径的滤膜，获得具有所需直径的脂质体。本发明抗体的Fab’片段可如Martin等，生物学化学杂志，257286-288(1982)所述的那样，经二硫化物交换反应与脂质体偶联。可任选在所述脂质体中包含一种化疗剂。见Gabizon等，J.National Cancer Inst，81(19)1484(1989)。
(x)抗体依赖性酶介导的前体药物治疗(ADEPT)
本发明的抗体还可与前体药物活化酶相结合，然后用于ADEPT，所述活化酶可以将前体药物(如肽基化疗剂，见WO81/01145)转化为活性抗癌药物。见WO88/07378和美国专利4,975,278。
这些用于ADEPT的偶联物中的酶组分包括能作用于前体药物使其转化为活性更强的细胞毒形式的任何酶。
本发明的方法中用到的酶包括，但不限于，能将含磷酸基的前体药物转化为游离药物的碱性磷酸酶；可将含硫酸基的前体药物转化为游离药物的芳香基硫酸酯酶；将无毒的5-氟胞嘧啶转化为抗癌药物，如5-氟尿嘧啶的胞嘧啶脱氨酶；能将含肽的前体药物转化为游离药物的蛋白酶，如沙雷氏菌属蛋白酶、嗜热菌蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、羧肽酶和组织蛋白酶(如组织蛋白酶B和L)等；可转化含D-氨基酸取代基的前体药物的D-丙氨酰羧肽酶；能将糖基化前体药物转化为游离药物的碳水化合物裂解酶类如β-半乳糖苷酶和神经氨酸酶；能将β-内酰胺衍生的药物转化为游离药物的β-内酰胺酶；能在药物中的氨基氮处分别用苯氧乙酰基或苯乙酰基转化而使药物游离的青霉素酰胺酶如青霉素V酰胺酶或青霉素G酰胺酶。或者，可用本领域称为“抗体酶”的具有酶活性的抗体，将本发明的前体药物转化为游离的活性药物(见Massey，自然328457-458(1987))。可如本文所述制备抗体-抗体酶偶联物以便将抗体酶运送至肿瘤细胞群。
本发明的酶可通过本领域已知的技术，如上述异源双功能交联试剂的使用而与抗ErbB2抗体共价结合。或者，可以利用本领域熟知的DNA重组技术(如Neuberger等，自然，312604-608(1984))构建含至少本发明抗体的抗原结合区的融合蛋白，所述抗体与本发明酶的至少一个功能活性部分连接。
(xi)抗体补救性受体结合表位融合在本发明的某些实例中，希望采用抗体片段而不是完整的抗体，以提高肿瘤穿透性。在这种情况下，希望对抗体片段进行修饰，以延长其血清半衰期。例如，可通过在抗体片段中掺入补救(salvage)受体结合表位(如，通过抗体片段中合适区域的突变，或通过在肽尾端中掺入表位，然后通过例如DNA或肽合成而融入抗体片段末端或中部)来实现。
制备体内半衰期延长的这种抗体变体的系统性方法包括以下步骤首先鉴定IgG分子Fc区的补救受体结合表位的序列和构象。一旦确定了该表位，就可以修饰目的的抗体序列使其包括经鉴定的结合表位序列及构象。在序列发生突变后，测定该抗体变体，以检查其体内半衰期是否比原来的抗体长。如果在测试时抗体变体没有较长的半衰期，则再一次改变其序列使其包括经鉴定的结合表位序列和构象。测试变化后的抗体是否有延长的体内半衰期，继续该过程直至获得具有延长的体内半衰期的分子。
如此掺入目标抗体的补救受体结合表位是上述任何合适的表位，其特征取决于例如被修饰的抗体类型。所进行的转移应使目标抗体仍然具有本文所述的生物活性。
优选地，表位构成一个区域，其中来自Fc区的一个或两个环的任何一个或多个氨基酸残基被转移到抗体片段的类似位置上。更优选，Fc区中一个或两个环的三个或多个氨基酸残基被转移。更加优选的是，表位取自(例如IgG的)Fc中CH2区，并被转移到抗体的CH1、CH3或VH区或者一个以上的此类区域中。或者，表位取自Fc的CH2区，并被转移到抗体片段的CL区或VL区或这两者中。
在一最佳实施方案中，补救受体结合表位包含以下序列(从5’到3’)PKNSSMISNTP(SEQ ID NO3)，还任选地包括选自HQSLGTQ(SEQ IDNO4)、HQNLSDGK(SEQ ID NO5)、HQNISDGK(SEQ ID NO6)或VISSHLGQ(SEQ ID NO7)的序列，尤其当抗体片段是Fab或F(ab’)2时。在另一最优选实施方案中，补救受体结合部位是含有下述序列(从5’到3’)的多肽HQNLSDGK(SEQ ID NO5)、HQNISDGK(SEQ ID NO6)或VISSHLGQ(SEQ ID NO7)和PKNSSMISNTP(SEQ ID NO3)。
(xii)抗ErbB2抗体的纯化当使用重组技术时，抗体可以在细胞内胞质空间中产生，或直接分泌到培养基中。如果所述抗体在细胞内产生，第一步通过离心或超滤除去颗粒状碎片，即宿主细胞或其裂解片段。Carter等，生物/技术10163-167(1992)中叙述了用于分离分泌到大肠杆菌周质空间中的抗体的方法。简言之，在醋酸钠(pH3.5)、EDTA和苯甲基磺酰氟(PMSF)存在的条件下融解细胞团超过30分钟。通过离心可以将细胞碎片除去。在抗体分泌到培养基的情况中，通常首先用市售的蛋白浓缩滤膜(例如Amicon或Millipore Pellicon超滤单位)浓缩此类表达系统的上清。在任何上述步骤中可以包括抑制蛋白裂解的PMSF等蛋白酶抑制剂，并且可以包括抑制外来污染物生长的抗生素。
从所述细胞中制备的抗体组合物可利用例如羟基磷灰石层析、凝胶电泳、透析和亲和层析等方法纯化，优选亲和层析。蛋白A作为亲和配体的适合性取决于该抗体上任何免疫球蛋白Fc区的种类和同种型。蛋白A可用于纯化基于人γ1、γ2或γ4重链的抗体(Lindmark等，免疫学方法杂志，621-13(1983))。蛋白G被建议用于所有的小鼠同种型和人γ3(Guss等，EMBO J.51567-1575(1986))。与亲和配体结合的基质最常用琼脂糖，但也可利用其它基质。具有机械稳定性的基质如控制孔径的玻璃或聚(苯乙烯二乙烯)苯等，比琼脂糖允许更快的流速且耗时更短。在所述抗体包括CH3结构域的情况中，Bakerbond ABXTM树脂(J.T.Baker，PhilliPBSurg，NJ)有利于纯化。根据待回收的抗体，还可以应用其它蛋白纯化技术，例如在离子交换柱上的分级分离、乙醇沉淀、反向HPLC、硅层析、在阳离子或阴离子交换树脂层析(例如聚天冬氨酸柱)上进行的肝素SEPHAROSETM层析、聚焦层析、SDS-PAGE和硫酸铵沉淀。
在任何最初纯化步骤之后，利用pH约2.5-4.5的洗脱缓冲液，可以对包括所述目的抗体和污染物的混合物进行低pH疏水相互作用层析，优选在低盐浓度条件下进行(例如大约0-0.25M盐浓度)。
III.抗ErbB2抗体血清浓度的测定下述非-限制性分析法用于测定特异性rhuMab HER2(人源化抗p185HER2单克隆抗体，包括HERCEPTIN抗ErbB2抗体)在哺乳动物体液，包括但不限于血清、羊水、乳汁、脐带血清、眼房水和玻璃体液以及玻璃体凝胶中的存在及定量。
rhuMab HER2(人源化抗D185HER2单克隆抗体)的平板结合活性分析测定本文描述的rhuMab HER2的测定方法只是作为方法的一个实例，并非是旨在限定于本方法。用分析稀释液(Assay diluent)(PBS/0.5％BSA/吐温20/0.01％硫汞撒)稀释rhuMab HER2标准化制剂(Genentech，Inc.，South SanFrancisco，CA)、对照和血清样本。制备标准化rhuMab HER2稀释液，其浓度跨度范围适宜于制作标准曲线。稀释样本使其浓度落入该标准曲线范围。
等份包被缓冲液中的包被抗原(溶于0.05M碳酸钠缓冲液的重组p185HER2)加入到微量滴定板上的每一个孔中，并于2-8℃孵育12-72小时。弃去包被溶液，用水洗涤每个孔6遍，然后去除多余的水。
向每一个孔中加入等份的分析稀释液，室温下搅拌保温1-2小时。按照前一步所述方法洗涤每一个孔。
向孔中加入等份的稀释标准品、对照和样本溶液，在室温下搅拌保温1小时，以使得抗体与包被抗原结合。仍按前面步骤所述方法用水洗涤孔。
用分析稀释液稀释辣根过氧化物酶-偶联物(HRP-偶联，山羊抗人IgG Fc偶联到辣根过氧化物酶上；Organon Teknika catalog #55253或等价物)以制得处于最高和最低标准品浓度之间的适合的光密度范围。向每个孔中加入等份HRP-偶联物溶液，室温下搅拌保温1小时。按前面步骤所述方法用水洗涤孔。
向每个孔中加入等份底物溶液(5mg邻苯二胺(OPD)片剂(Sigma P6912或等同物)溶于12.5ml 4mM H2O2的PBS溶液)，室温避光孵育足够长时间(接近8-10分钟)，以显色。用一等份4.5N硫酸溶液终止该反应。读取490-492nm处的光密度以检测吸收度，405nm处的光密度作为参照吸收。用标准曲线的数据作图，并从所作标准曲线上得出对照和样本的测定结果。
IV.药物制剂形式根据本发明使用的抗体的药用制剂通过将具有所需纯度的抗体与任选的药用载体、赋形剂或稳定剂(雷氏药学(Remington’s PharmaceuticalSciences)第16版，Osol，A.编(1980))混合而制备，然后以冻干剂或含水剂的形式保存。可药用载体、赋形剂、稳定剂在所用剂量及浓度下对受者无毒性，并包括缓冲剂例如磷酸盐，柠檬酸盐及其它有机酸；抗氧化剂包括抗坏血酸和蛋氨酸；防腐剂(例如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化己烷双胺；氯化苄烷铵(benzalkonium chloride)，苯索氯铵；酚、丁醇或苯甲醇；烷基对羟基苯甲酸酯如甲基或丙基对羟基苯甲酸酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；间甲酚)；低分子量多肽(少于10个残基)；蛋白质如血清白蛋白，明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸如甘氨酸，谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖，二糖及其它碳水化合物包括葡萄糖、甘露糖、或糊精；螯合剂如EDTA；糖类如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐反离子如钠；金属复合物(例如锌-蛋白复合物)；和/或非离子表面活性剂如吐温TM，PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。WO97/04801叙述了优选的冻干型抗ErbB2抗体剂型，在此引入本文作为参考。
所述制剂还可根据所治疗的具体情况而包含一种以上活性成分，优选具有互补活性但相互无负面影响的那些。例如，可能需要在一种制剂中进一步提供与EGFR、ErbB2(例如结合ErbB2上不同表位的抗体)、ErbB3、ErbB4或血管内皮生长因子(VEGF)结合的抗体。或者(或另外)，所述组合物可进一步包括化疗剂、细胞毒性剂、细胞因子、生长抑制剂、抗激素药、EGFR-靶向药、抗血管生成药、和/或心脏保护剂。这些分子以对所需目的有效的总量在组合中适当地存在。
活性成分也可容纳在通过凝聚技术或界面聚合作用制备的微胶囊中，如分别在胶体性质的药物运送系统(如脂质体，白蛋白微珠，微乳剂，纳米颗粒及纳米胶囊)或大乳剂(macroemulsions)的羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(异丁烯酸甲酯)微胶囊。这些技术见雷氏药学，第16版Osol，A.编(1980)。
用于体内给药的制剂必须是无菌的。这可以通过除菌滤膜过滤而轻易实现。
也可制备控释制剂。控释制剂的适当实例包括含有抗体的固态疏水聚合物的半通透性基质，所述基质为具有一定形状的制品，如膜或微胶囊。控释制剂实例包括聚酯、水凝胶(如聚(2-羟基乙基-异丁烯酸酯)或聚(乙烯醇)，聚交酯(美国专利3,773,919)，L-谷氨酸与γ乙基-L-谷氨酸酯的共聚物，不可降解的乙烯乙酸乙酯，可降解的乳酸-羟基乙酸共聚物如LUPRONDEPOTTM(由乳酸-羟基乙酸共聚物和亮氨酰脯氨酸(leuprolide)乙酸酯组成的可注射的微球体)，以及聚D-(-)-3-羟丁酸。尽管聚合物如乙烯-乙酸乙烯酯和乳酸-羟基乙酸能持续释放分子100天以上，但是某些水凝胶释放蛋白的时间却较短。当胶囊化的抗体长时间停留在体内时，它们会由于暴露在37℃潮湿环境下而变性或凝聚，从而导致生物活性损失，且免疫原性可能会改变。可以根据涉及的机理来设计稳定化的合理策略。例如，如果发现凝聚的机理是通过硫代二硫键互换而形成了分子间S-S键，则可通过修饰巯基残基、从酸性溶液中冻干、控制湿度、采用合适的添加剂和开发特殊的聚合物基质组合物来达到稳定化。
V.用抗ErbB2抗体进行的治疗根据本发明，抗ErbB2抗体可用于治疗以ErbB2受体过度表达和/或激活为特征的各种病症。例举性病症的实例包括良性或恶性肿瘤(如肾(renal)癌、肝癌、肾(kidney)癌、膀胱癌、乳腺癌、胃癌、卵巢癌、结肠直肠癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝细胞癌；肉瘤；恶性胶质瘤和各种类型的头颈部癌症)；白血病和淋巴的恶性疾病；其它疾病，如神经细胞、神经胶质细胞、星形胶质细胞、下丘脑和其它腺体、巨噬细胞、上皮、基质和囊胚腔的病症；及炎症性、血管生成性和免疫性的病症。
可根据已知的方法将本发明的抗体施用于病人，所述方法例如，经快速灌注或一定期间的持续输注方式的静脉给药，经肌内、腹腔内、脑脊髓内、皮下、关节内、滑膜腔内、鞘内、口服、局部或吸入途径给药。优选静脉或皮下施用抗体。
本发明的治疗涉及将抗ErbB2抗体施用于动物或病人，接着以一定间隔通过施用等量或较小量的继续量从而达到目标血清浓度并在治疗期间维持此浓度。优选地，以快速灌注方式优选皮下快速灌注给予维持量，使得治疗更为便捷和对患者和保健专业人士而言取得花费低疗效高的效果。
期望与化疗剂(蒽环类抗生素之外)联合给药，联合给药包括共同给药(使用分离的制剂或单个药物制剂)和以任何次序联贯给药，其中优选有一段时间为两种(或所有)活性药物同时发挥它们的生物活性。这些化疗剂的制剂和剂量方案，可根据生产商的说明书来使用，或者根据专业医师的实践经验来确定。这类化疗的制剂和给药分案亦参见Chemotherapy Service Ed.，M.C.Perry，Williams和Wilkins，Baltimore，MD(1992)。化疗剂可在给予抗体前、后或同时给予。抗体可以与抗雌激素化合物(如三苯氧胺)或抗黄体酮(如onapristone)按照这些分子的已知剂量联合用药(见EP 616812)。
还希望给予抗其它肿瘤相关抗原的抗体，如与EGFR、ErbB3、ErbB4或血管内皮生长因子(VEGF)结合的抗体，或者另外，可以将两种或多种抗ErbB2抗体施用于患者。有时，还可将一种或多种细胞因子施用于患者。在一个优选的实施方案中，抗ErbB2抗体与生长抑制剂一起给药。例如，可以首先给予生长抑制剂，然后再给予抗ErbB2抗体。然而，也可考虑同时给药，或者首先给予抗ErbB2抗体。生长抑制剂的合适剂量是目前使用的那些剂量，而且由于生长抑制剂与抗ErbB2抗体的联合作用(协同作用)，该剂量还可以降低。
除了上述治疗方案外，患者可以接受肿瘤细胞的手术切除和/或放射治疗。
进行疾病的预防或治疗时，抗体ErbB2抗体的的适当剂量依赖于所治疾病的类型(如上所述)，疾病的严重程度和进程，抗体给药的目的是预防还是治疗，先前的治疗，患者的临床病史和对抗体的应答，以及主治医生的判断。抗体适宜一次性地或在一系列治疗中施用于患者。当治疗涉及一系列治疗时，初始剂量(一次或多次)之后，以每日一次或每周一次的间隔施用维持量。每次维持量与初始剂量所施用抗体量相比，相同或者更少量。
施用于患者的抗体的初始候选剂量是约1μg/kg～15mg/kg(如0.1-20mg/kg)，无论是例如通过一次或分多次给药，还是通过连续输注给药，取决于受治疾病的严重程度和类型。依据上述因素，代表性的每日剂量为约1μg/kg～100mg/kg或更多。重复给药数天或更长时间时，视具体情况而将治疗持续至出现对疾病症状的所需抑制为止。治疗的进展很容易通过常规技术和试验来监测。
根据本发明，剂量方案可以包括经静脉或皮下输注施用初始剂量为6mg/kg、8mg/kg或12mg/kg的抗ErbE2抗体，接下来经静脉输注、静脉快速灌注、皮下输注或皮下快速灌注每周一次继续施用2mg/kg维持量。如果患者对抗体耐受性好，则可以缩短输注时间。
或者，本发明包括抗ErbE2抗体初始剂量为12mg/kg，接下来的继续维持量为6mg/kg每3周一次。
另一剂量方案包括抗ErbE2抗体初始剂量为8mg/kg，接下来的继续维持量为6mg/kg每3周一次。
再一剂量方案包括抗ErbE2抗体初始剂量为8mg/kg，接下来的继续维持量为8mg/kg每周一次或者8mg/kg每2-3周一次。
另一方案包括第1、2、3天每天施用初始剂量为4mg/kg的抗ErbE2抗体，接下来施用6mg/kg继续维持量每3周一次。
另一方案包括抗ErbE2抗体初始剂量为4mg/kg，接下来的继续维持量为2mg/kg每周两次，其中维持量以3天的间隔分开。
或者，本发明可包括一个给药周期，其中每周施用抗ErbE2抗体2-3次，共3周。优选重复3周的周期以达到抑制疾病症状的效果。
本发明还包括周期性给药方案，其中每日施用抗ErbE2抗体，共5天。根据本发明，优选必要地重复周期方案以达到抑制疾病症状的效果。关于合适剂量的进一步信息在下文实施例中提供。
VI.产品在本发明的另一个实施方案中，提供了含有用于治疗上述疾病的物质的产品。所述产品包括一个容器、一个标签和一张包装插页。适当的容器包括瓶子，小瓶，注射器等。容器可由各种材料如玻璃或塑料制成。该容器内盛放能有效治疗病症的组合物，并具有无菌存取口(例如该容器可以是静脉注射袋或带有能通过皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。组合物中至少一种活性剂是抗ErbB2抗体。容器上的或附带的标签说明该组合物用于治疗所列出的病症。产品还包括第二个容器，其中含可药用的缓冲液，例如磷酸盐缓冲液，Ringer’s溶液和葡萄糖溶液。产品还可进一步包括具有商业需要以及符合用户需要的其它材料，如其它缓冲液、稀释剂，滤器，针头和注射器。另外，制备的产品可以包括有使用说明的包装插页，插页包括例如组合物不与蒽环类化疗剂如阿霉素或表阿霉素联合使用的警告。
材料的保藏下述杂交瘤细胞已保藏在美国典型培养物保藏中心，12301 ParklawnDrive，Rockville，MD，美国(ATCC)抗体命名ATCC编号 保藏日7C2 ATCC HB-12215 1996年10月17日7F3 ATCC HB-12216 1996年10月17日4D5 ATCC CRL 104631990年5月24日2C4 ATCC HB-12697 1999年4月8日本发明的进一步细节通过下述非限定性实施例举例说明。
实施例实施例1HERCEPTIN抗ErbB2抗体的制备和效力材料与方法抗ErbB2单克隆抗体按Fendly等，癌症研究501550-1558(1990)和WO89/06692中所述方法，制备与ErbB2的细胞外结构域特异性结合的抗ErbB2 IgG1κ鼠单克隆抗体4D5。简言之，用含25mM EDTA的磷酸盐缓冲液(PBS)收获按Hudziak等(美国国家科学院院刊847159(1987))所述方法制备的NIH 3T3/HER2-3400细胞(约表达1×105ErbB2分子/细胞)，并用其免疫BALB/c小鼠。在第0、2、5和7周给小鼠腹腔注射含107个细胞的0.5ml PBS。于第9和第13周，给带有特定抗血清(其可与32P-标记的ErbB2免疫共沉淀)的小鼠腹腔注射麦胚凝集素-Sepharose(WGA)纯化的ErbB2膜提取物。之后静脉注射0.1ml ErbB2制剂，并将脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系X63-Ag8.653融合。通过ELISA和放射性免疫沉淀法，筛选杂交瘤细胞上清液的ErbB2结合。MOPC-21(IgG1)(Cappell，Durham，NC)用作同种异型-匹配对照。
用鼠4D5抗体的人源化版(HERCEPTIN抗ErbB2)进行治疗。对该人源化抗体进行工程改造，方法是将鼠4D5抗体的互补决定区插入人免疫球蛋白IgG1(IgG1)共有序列的框架区中(Carter等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA894289)。所得人源化抗ErbB2单克隆抗体对p185HER2有很高的亲和力(Dillohiation常数[Kd]＝0.1nmol/L)，在体外和人异体移植物中明显抑制含有高水平p185HER2的乳腺癌细胞的生长，诱导出依赖于抗体的细胞毒性(ADCC)作用，而且发现作为单一治疗剂，对接受过广泛先期治疗的ErbB2过度表达型转移乳腺癌患者具有临床活性。HERCEPTIN由经基因工程改造的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系产生，该细胞系大规模生长，并将抗体分泌到培养基中。该抗体用标准的层析和过滤方法，从CHO培养物中纯化获得。对用于本研究的每批抗体进行检验，以确认它的性质、纯度和效力，并符合“食品和药品管理局”对无菌性和安全性的要求。
合格标准 患者必须符合研究许可的下列合格标准-转移乳腺癌-ErbB2(HER2)癌基因过度表达(经免疫组织化学或荧光原位杂交(FISH)测定为2+至3+)。[ErbB2的肿瘤表达可如前面所述(Slamon等和)的方法，通过免疫组织化学分析从石蜡包埋的患者肿瘤块制得的一系列薄切片来测定。所用主要检测抗体是鼠4D5 Mab，它具有和用于治疗的人源化抗体相同的CDR。如果至少25％的肿瘤细胞表现出特征性的p185HER2膜染色，则认为肿瘤过度表达ErbB2]。
-通过放射照相手段、物理检查或照片表现出可二维测量的疾病(包括溶解性骨病变)可测量的疾病定义为，在两个垂直直径中可通过物理检查、X-射线(平片)、计算机化的X线断层摄影术(CT)、磁共振成像(MRI)、超声或照片可重复测出的任何块状物。
成骨细胞转移灶、胸膜腔积液或腹水不认为是可测量的。可测量的病变的最大尺寸至少为1cm。转移性疾病的可评价部位的叙述以及可评价部位(如肺)中的病变数目，必须记录在合适的病例报告表格(CRF)中。如果肺或肝存在多处病变，则跟踪每个部位最大的6个病变。
-能理解并愿意签署书面知情同意书-妇女应年满18周岁-通过对血液、肾、肝和代谢功能的筛选性实验室评价，证明候选人适合接受同时进行的细胞毒化疗。
排除的标准 具有下列任一情况的患者应被排除在研究之外-以前接受过转移乳腺癌的细胞毒化疗-患者可能在以前曾接受过转移性疾病的激素治疗(如三苯氧胺)或佐剂环境中的细胞毒性治疗。
-伴发的恶性肿瘤未被有效治愈-用Karnofsky评分，性能状况低于60％-妊娠或正在受护理的妇女；有怀孕可能的妇女，除非经研究者确定已经采取有效避孕措施-双侧乳腺癌(原发性肿瘤必须有2+至3+的HER2过度表达，或者转移部位必须有2+至3+的HER2过度表达)-在研究前30天内使用了调查性或未经许可的制剂一临床上不稳定的或有不能治疗的转移到脑部的转移灶(例如需要放射治疗)根据上述标准，选择469位患者参加本研究。随机地使半数患者(通过化学治疗分层)另外接受HERCEPTIN抗ErbB2抗体(见下文)。
给药和剂量抗ErbB2抗体在第0天，用90分钟的时间静脉内施用4mg/kg人源化抗ErbB2抗体(HERCEPTIN)。从第7天起，患者接受每周一次的用90分钟时间施用的2mg/kg抗体。
化疗只要患者的疾病没有进展，患者就接受下列两种化疗方案之一至少6个周期a)环磷酰胺和阿霉素或表阿霉素(AC)，如果患者没有在佐剂背景中接受过蒽环类抗生素治疗，或b)紫杉醇(T，TAXOL)，如果患者在佐剂背景中接受过蒽环类抗生素治疗。HERCEPTIN抗ErbB2抗体的初始剂量在任一化疗方案第一个周期之前24小时给药。如果抗体的初始剂量能够被很好地耐受的话，则在化疗剂即将开始前施用继续量抗体。如果抗体的首次剂量未被很好地耐受的话，则在化疗剂给药前24小时继续输注。如果在主治医师看来患者继续治疗有利的话，则让患者在6个周期后继续接受化疗。
环磷酰胺(600mg/m2)的给药，可以在最短3分钟内静脉推注或在最长2小时内输注。
阿霉素(60mg/m2)或表阿霉素(75mg/m2)的给药，可根据方案规定的程序，在最短3-5分钟内静脉缓慢推入或者在最长2小时内输注。
紫杉醇(TAXOL)的给药剂量是在3小时内静脉输入175mg/m2。接受紫杉醇的所有患者，预先在给予紫杉醇之前12和6小时口服地塞米松(或其等价物)20mg×2；在紫给予杉醇之前30分钟静脉输入50mg苯海拉明(或其等价物)，并在紫杉醇之前给予二甲茚啶(dimetidine)300mg(或另一H2阻断剂)。
应答标准进展性疾病 任何可测定的病变有增加25％或更多的客观证据。进展性疾病还包括出现新病变的那些情况。对于骨病变，进展定义为平片、CT、MRI客观测得增加25％；并非由骨折引起的有症状的新损伤；或需要姑息放射治疗。
完全应答 所有放射照片和/或肉眼能看到的肿瘤在最短4周内消失。皮肤和胸壁完全应答，必须通过活检来确证。
部分应答 所有可测定的病变的垂直直径总和在最短4周内减小至少50％。既没有新的病变出现，任何病变的大小也没有进展。
最小应答 所有可测定的病变的垂直直径总和减少25～49％。既没有新的病变出现，任何病变的大小也没有进展。
疾病稳定 可测定的病变的大小变化不超过25％。没有出现病变。
从治疗开始到进展计算出疾病进展时间(TTP)。用针对单一部分的确切方法计算应答速度的置信度。(Fleiss，JL，Statistical Methods for Rates andProportions(第2版)New York，NY，Wiley，1981，13-17)。
结果在10.5个月的中期随访中，疾病进展时间(TTP，月为单位)和应答比例(RR)的评价结果表明，HERCEPTIN抗ErbB2抗体显著增加化疗剂的效果，而毒副作用(AE)在总体上没有增加表1HERCEPTIN抗ErbB2抗体的效力参与者TTP(月) RR(％) AE(％)CRx234 5.5 36.2 66CRx+H 235 8.6*62.00**69AC 145 6.5 42.1 71AC+H 146 9.0 64.9 68T 894.2 25.0 59T+H897.1 57.3 70*对数秩和检验p＜0.001；**X2检验p＜0.01；CRx化疗；AC蒽环类抗生素/环磷酰胺治疗；HHERCEPTIN抗ErbB2抗体；TTAXOL据报道，AC+H(18％级3/4)联合治疗比单用AC(3％)、T(0％)或T+H(2％)更经常出现类似于用蒽环类抗生素时所观察到的心肌功能紊乱。
这些数据表明，正如由应答比例和疾病进展所评价的那样，抗ErbB2抗体治疗与化疗剂联合能提高临床效果。但是，由于阿霉素或表阿霉素增加心肌副作用，因此，蒽环类抗生素与抗ErbB2抗体治疗的联合使用是禁忌的。从危险性和有益方面考虑，该结果表明联合治疗方案优选HERCEPTIN抗ErbB2抗体和紫杉醇(TAXOL)的联合治疗。
实施例2抗ErbB2抗体(HERCEPTIN)的药动学和药效学特性经静脉输注向按照实施例1提供的标准选出的患者施用HERCEPTIN抗ErbB2抗体。静脉输注初始剂量为4mg/kg的HERCEPTIN抗ErbB2抗体，接着每周一次连续数周静脉输注继续量为2mg/kg的HERCEPTIN抗ErbB2抗体。213名患者开始此治疗方案，由于对发生疾病快速进展的患者进行选择性中断，所以仅采集到其中不足90名患者超过8周的血药浓度。在开始治疗的213名患者中，对应于不同时间能测得血清谷浓度的人数是在12周时80名，16周时77名，20周时44名，24周时51名，28周时25名，32周时23名和36周时37名。
HERCEPTIN抗ErbB2抗体第0-36周的谷血清浓度从第2周到36周的HERCEPTIN抗ErbB2抗体谷血清浓度(μg/ml，均值±SE)作图见图3(黑圈)。将由于疾病快速进展而未继续疗程的患者的数据排除在此分析之外，因而患者的人数相当恒定。在12周期间谷血清浓度逐渐增加，之后趋于平台水平。
HERCEPTIN抗ErbB2抗体第1-8周的谷和峰血清浓度测得了开始治疗的213名患者中212名的HERCEHPTIN抗ErbB2抗体的血清浓度数据。得到了212名患者中195名的反映首次HERCEPTIN抗ErbB2抗体输注的谷和峰血清浓度。在第7次输注时，测得137/212患者的谷血清浓度和114/212患者的峰血清浓度的数据。表2总结了治疗开始后前8周的谷和峰血清浓度的统计情况。在HERCEHPTIN抗ErbB2抗体给药结束后不久即采集峰样本；继续量给药前(即1周后)采集谷样本。按照本文公开的方法测定HERCEHPTIN抗ErbB2抗体的血清浓度。
表2治疗开始后前8周HERCEHPTIN抗ErbB2抗体的谷和峰血清浓度(μg/ml)
表2中的数据提示，谷血清浓度随时间增加。在第2至8周期间，在研究的众多患者中，有18名患者的谷血清浓度不超过20μg/ml。基于先前在动物和在临床试验上进行的探索性检测，20μg/ml HERCEPTIN抗ErbB2抗体谷血清浓度作为这些研究的名义上的目标。
对患者HERCEPTIN抗ErbB2抗体血清浓度的应答状态进行了评价。为了此目的，计算出各个时间的平均血清浓度(谷浓度和峰浓度的平均值)和患者应答状态(由独立应答评价委员会测定应答状态)。第2周和第8周之间血清浓度的增加幅度在应答者大于无应答者，提示反应状况与HERCEPTIN抗ErbB2抗体血清浓度之间存在关联性。第2周谷血清浓度值以及第7和8周的平均值与应答状态相关性统计分析(方差分析)表明，应答状态与第7和8周谷血清平均值之间具有显著相关性(p＜0.001)。该结果指明，在应答者和无应答者之间的谷血清浓度(第7和8周谷血清浓度的平均值)有显著的差异应答者的谷血清浓度为60±20μg/ml，而在无应答者则为44±25μg/ml(均值±SD)。转移部位的HER2过度表达水平和类型与谷血清浓度的显著差异有关。在第2周，具有2+HER2过度表达水平的患者的谷血清浓度(n＝40，均值＝28.8μg/ml，SD＝10.4)，明显高于3+HER2过度表达水平的患者的谷血清浓度(n＝155，均值＝24.1μg/ml，SD＝13.1)。这种在第7和8周谷血清浓度平均值之间的差异不再具有统计学意义的显著性。另外，在第2周，患浅表疾病患者的谷血清浓度(n＝12，均值＝34.1μg/ml，SD＝12.0)明显高于内脏疾病患者的谷血清浓度(n＝183，均值＝24.4μg/ml，SD＝12.6)。这种在第7和8周谷血清浓度平均值之间的差异具有显著性。这些数据表明，患不同疾病患者在第2周和第7/8周之间的谷血清浓度升高。
在接下来设计的类似研究中，用8mg/kg负荷量继而用每周一次4mg/kg维持量对人乳腺癌患者进行治疗。该项初步用于人的研究表明，8mg/kg负荷量每周一次4mg/kg维持量的给药方案在缩小患者肿瘤体积方面非常有效。
本实施例的数据证明，前负荷施用抗体使较快达到目标血清浓度，其可能与提高治疗效果有关。
实施例3HERCEPTIN抗ErbB2抗体I.V快速灌注给药和皮下输注有效缩小鼠肿瘤体积检测了人源化抗ErbB2抗体(HERCEPTIN，制备见实施例1)输注或快速灌注的效力，无论是静脉注射还是皮下注射。本研究的目的是考察皮下给药是否可行和方便的皮下快速灌注给药是否能治疗接种了过度表达HER2基因的细胞系的动物体内转移性乳腺癌。结果(详见下述)表明，静脉和皮下输注及快速灌注给药是可行的治疗方法。
在掺入了天然过度表达HER2基因的人乳腺癌细胞系(BT-474M1，衍生自BT-747细胞，ATCC登记号为HTB-20)的裸鼠异种移植模型的研究中，按下述步骤比较经静脉快速灌注与经皮下输注给药时的肿瘤体积函数。在第一项研究中，从Taconic Inc(Germantown，NY)购进7-9周龄雌性无胸腺裸小鼠。为了引发肿瘤，给每只鼠皮下接种悬浮在MatrigelTM中的3×106个BT474 M1细胞。当肿瘤结节达到约100mm3时，将动物随机分为4个治疗组。按照表3的指示对各组进行治疗。
表3I.V.快速灌注与S.C.输注的动物分组和剂量比较
血清浓度＝血清中的浓度。LD＝负荷量。MD＝维持量。
使用Alzet渗透性小型泵(Alza Corp.Palo Alto，CA)计算Infusate浓度以获得目标血清浓度。
在开始给药前，通过皮下持续释放雌激素小丸9天使动物暴露于雌激素环境，从而促进所移植的肿瘤细胞生长。开始治疗前8天，给动物接种BT474M1细胞并让肿瘤生长。然后，按照表3的指示，让动物接受非相关抗体E25(对HER2受体无特异性，但属于单克隆IgG类的成员)或受测试抗体HERCEPTIN抗ErbB2抗体。选择剂量水平以达到HERCEPTIN的目标血清浓度，即通过皮下泵输注的1μg/ml或通过静脉快速灌注给药的20μg/ml。研究组接受治疗至35天。使用3只小鼠/组/时间点，每周一次(在第4组给药前)测定HERCEPTIN抗ErbB2抗体的血清浓度。按照本文公开的有关标准化技术的方法测定抗ErbB2抗体浓度。给药开始前2天和在本研究第6-35天期间每周2次测量肿瘤体积，结果列于下表。测量肿瘤三维尺寸，其体积用mm3表示。通过受试动物肿瘤体积与未治疗的对照动物的统计学比较(ANOVA)来测定疗效。
如下表4所见，用HERCEPTIN抗ErbB2抗体对BT474M1荷瘤小鼠按照所指示的剂量方法治疗，显著抑制肿瘤的生长。相对于对照组而言，所有HERCEPTIN治疗组均显示出对肿瘤增长的类似抑制。未观察到剂量-应答效应。
表4S.C.输注和I.V.快速灌注给药的比较
S.C.＝皮下给药；I.V.＝静脉给药。
*4.0mg/kg负荷量和2.0mg/kg/周维持量。
**给药前的浓度(维持量给药前的最后谷血清浓度)。
上表结果表明，本研究中维持约2μg/ml的血清浓度与20μg/ml浓度的效果相同。结果证明，皮下输注与静脉快速灌注效果相同并达到类似的谷血清浓度。结果还表明，研究的剂量水平在本模型剂量应答曲线的顶端，皮下给药对于治疗乳腺癌有效。因此，皮下施用维持量作为HERCEPTIN抗ErbB2抗体治疗方案的一部分是可行的。
实施例4HERCEPTIN抗-ErbB2抗体I.V.快速灌注和皮下快速灌注给药有效缩小小鼠肿瘤体积对于患者和医务人员而言，皮下快速灌注给药是便捷和低消费高效率的。本实施例研究的结果表明，皮下快速灌注给药在减小小鼠乳腺细胞肿瘤大小方面与静脉快速灌注给药同样有效。
本研究按照实施例3公开的方法设计，以比较静脉快速灌注和皮下快速灌注给药。如实施例3所述，在肿瘤细胞接种前1天，将持续释放雌激素的植入体埋入皮下。肿瘤细胞接种6天后，初次测量肿瘤大小。肿瘤细胞接种7天后，施用首次剂量的对照抗体或者HERCEPTIN抗ErbB2抗体。表4列出动物分组、给药类型、负荷量和维持量情况。对动物每周给药一次，给药4周。
表5用于I.V.快速灌注和S.C.快速灌注给药比较的动物分组和剂量
IV＝静脉；SC＝皮下；n＝每组动物只数。
按照表4给出的信息和实施例3公开的技术对小鼠进行治疗。按照本文公开的方法和使用标准化技术，在每周一次静脉施用维持量之前每周一次测定HERCEPTIN抗ErbB2抗体的血清浓度。根据标准免疫分析技术测定E25对照抗体的血清浓度。表6显示HERCEPTIN抗ErbB2抗体的血清浓度随时间增加。
表6IV和SC给药HERCEPTIN抗ErbB2抗体血清浓度血清浓度，μg/ml
在第0、7和14天的时间点n＝10，在第21天的时间点n＝9。
表7显示组1-5经静脉快速灌注和皮下快速灌注给药达到表6所示血清抗体浓度的相对效率。此研究中，以肿瘤体积的缩小作为检测效率的指标。肿瘤体积每周测两次。
表7测量肿瘤体积变化作为比较HERCEPTIN抗ErbB2抗体经静脉快速灌注和皮下快速灌注给药的效率指标，均值(SD)
每个数据点N＝10。TM＝肿瘤测量。IV＝静脉。SC＝皮下。MD＝维持量。肿瘤体积，mm3。
*由于测量错误而剔除了第17天的数据。
计算第21天-第31天肿瘤生长速率Log(TM+1)。曲线下面积是肿瘤体积对时间作图的曲线下面积。
图4A和4B是肿瘤体积对时间所作的图，其中一些数据见表7。图4A是肿瘤体积对时间的线图。图4B是相同数据的半对数图，使得检测点更为直观、清晰。表7的数据和图4A和4B表明，尽管HERCEPTIN-治疗组之间未观察到剂量-相关效应，但是经皮下快速灌注给药与静脉快速灌注给药同样有效并且达到类似的谷血清浓度。
实施例5抗ErbB2抗体的静脉和皮下给药方案根据本发明，抗ErbB2抗体(例如HERCEPTIN)的给药方法包括较大前沿负荷量的药物以在近4周或更短、优选3周或更短、更优选2周或更短、最优选1周或更短包括1天或更短时间达到目标血清浓度。根据本发明，该初始剂量后继续施用等量或较小量的维持目标血清浓度的继续量。本发明方法的优点是维持量给药频率小和/或由皮下注射给药，使得本发明治疗方案的抗体给药对于患者和医务人员而言是便捷和低消费高效率的。另外，当患者的化疗需要经静脉注射施用其它药物时，维持量皮下给药方案可以被静脉给药(如输注)打断。
为了测试下述剂量方案，按照前面实施例1公开的标准选择受试人。初始剂量给药一次或多次，其应足以在近4周或更短、优选3周或更短、更优选2周或更短、最优选1周或更短包括1天或更短时间达到有效目标血清浓度。维持量给药次数可以是一次或多次，其应足以达到抑制疾病症状如使肿瘤体积缩小的效果。维持量等于或小于初始量，与本发明通过提供更大前沿负荷量给药方案来施用HERCEPTIN抗ErbB2抗体的目的一致。本文公开的特定药物给药方案是代表性的，而不是限定性的。
在一个临床试验中，经静脉或皮下注射方式将初始剂量为6mg/kg、8mg/kg、或12mg/kg的HERCEPTIN抗ErbB2抗体施用于患者。初始剂量(负荷量)经静脉输注或快速灌注或优选皮下快速灌注方式施用。优选HERCEPTIN抗ErbB2抗体的目标谷血清浓度达到约10-20μg/ml(治疗组所有患者的平均值)，并且通过施用等于或小于初始量的抗ErbB2抗体继续量而维持。在另一方法中，达到一个目标谷血清浓度，并通过静脉或皮下注射方式每周一次施用2mg/kg HERCEPTIN抗ErbB2抗体，给药至少8周来维持。或者，对于本文公开的这个或任何一个给药方案，可使用皮下泵经皮下连续输注来施用后续维持量。
在另一方法中，经静脉注射(输注或快速灌注)或皮下快速灌注施用初始量(前沿负荷量)为8mg/kg的HERCEPTIN抗ErbB2抗体。接着，按照3周的间隔通过静脉快速灌注、静脉输注、皮下输注或皮下快速浓注6mg/kg来维持近10-20μg/ml的谷血清浓度(整个组的平均值)。
在另一方法中，经静脉注射(输注或快速灌注)或皮下快速灌注施用初始量(前沿负荷量)为12mg/kg的HERCEPTIN抗ErbB2抗体。接着，按照3周的间隔通过静脉快速灌注、静脉输注、皮下输注或皮下快速浓注6mg/kg来维持近10-20μg/ml的谷血清浓度。
还有一方法，经静脉输注或快速灌注，优选以皮下快速灌注或输注施用初始量(前沿负荷量)为8mg/kg的HERCEPTIN抗ErbB2抗体。接着，按照每周或每2-3周施用8mg/kg来维持HERCEPTIN抗ErbB2抗体近10-20μg/ml的谷血清浓度。维持量是通过静脉输注或静脉快速灌注，优选经皮下输注或皮下快速灌注来施用的。
在另一方法中，前负荷初始量是一系列静脉或皮下注射给药，例如在第1、2和3天每日一次注射至少1mg/kg(初始注射施用抗ErbB2抗体的总量大于4mg/kg)，接着每3周一次施用6mg/kg的继续量来维持HERCEPTIN抗ErbB2抗体的谷血清浓度(例如近10-20μg/ml)。维持量是通过静脉输注或静脉快速灌注，或皮下输注或皮下快速灌注来施用的。
再一方法中，每连续5天静脉输注至少1mg/kg，优选4mg/kg的前沿负荷量，接着重复此周期足够次数以达到抑制疾病症状的效果。如果患者能够耐受，则在初始剂量(一次或数次)后，经皮下输注或快速灌注施用继续量。这样的皮下给药对于患者和医务人员而言是便捷和低花费高效率的。
还有一方法，每周至少2次静脉输注初始量的HERCEPTIN抗ErbB2抗体，共输注3周，接着重复此周期以维持HERCEPTIN抗ErbB2抗体的有效谷血清浓度。此剂量至少为4mg/kg抗ErbB2抗体，优选至少5mg/kg。经静脉或皮下施用维持量药物。
只要动物或病人在初始给药期间或之后能够耐受所用抗体，就可以经皮下施用继续量，由此给患者和医务人员带来极大便捷和低花费高效率。
在动物实验中，经静脉或皮下注射施用大于4mg/kg，优选大于5mg/kg的初始量，接着每周2次(每隔3天)经皮下快速灌注2mg/kg以维持约10-20μg/kg的谷血清浓度。而且，如果知道动物或患者能够耐受抗体的话，则任选地并且优选经皮下快速灌注初始量HERCEPTIN抗ErbB2抗体，接着经皮下注射维持量。
尽管本文为了比较动物研究和人体试验的目的而公开了目标血清浓度，但是临床使用的目标血清浓度可以不同。本文公开的内容指导使用者选择能提供有效目标谷血清浓度的前沿负荷量药物给药方案。
本文公开的本发明方法任选地包括HERCEPTIN抗ErbB2抗体与化疗剂(除蒽环类抗生素的衍生物外)联合给药以抑制疾病症状。化疗剂与HERCEPTIN抗ErbB2抗体可以一起给药或者分开给药，还可根据另一种剂量方案给药。例如，本发明包括TAXOL与HERCEPTIN抗ErbB2抗体一起皮下给药。另外，8mg/kg HERCEPTIN抗ErbB2抗体静脉或皮下注射，接着6mg/kg HERCEPTIN抗ErbB2抗体与化疗剂一起每3周一次静脉或皮下注射，所述化疗剂如taxoid(如紫杉醇175mg/m2，每3周给药一次)或蒽环类抗生素的衍生物(如阿霉素60mg/m2或表阿霉素75mg/m2，每3周给药一次)。任选地，当施用蒽环类抗生素的衍生物时，也施用心脏保护剂(如600mg/m2环磷酰胺，每3周给药一次)。在另一联合治疗中，施用抗ErbB2抗体的负荷量大于4mg/kg，优选大于5mg/kg，更优选至少8mg/kg。负荷量之后的维持量是至少2mg/kg，每周一次，优选6mg/kg每3周一次。联合治疗包括在用抗ErbB2抗体治疗期间施用taxoid。根据本发明的一个实施方案，taxoid是紫杉醇且施用剂量为70-100mg/m2/周。根据本发明的另一实施方案，taxoid是紫杉萜且施用剂量为30-70mg/m2/周。
实施例6HERCEPTIN与紫杉醇联合每3周一次静脉给药目前，HERCEPTIN推荐剂量是2mg/kg，每周一次。代替每周一次给药，在用紫杉醇(175mg/m2，每3周一次)治疗的同时向患者每3周一次施用HERCEPTIN。模拟所提出的治疗方案建议谷血清浓度将是17mcg/ml，在前面HERCEPTIN静脉给药临床试验得出的目标血清浓度的范围(10-20mcg/ml)之内。在开始评定了首批12个患者的PK参数之后，如果认为剂量不够，那么接着将剩下的12名患者的剂量增加至8mg/kg，每3周一次。
入选标准1)≥18岁的女性2)组织学确定ErbB2过度表达型转移性乳腺癌3)最近已经确诊患转移癌疾病的患者4)Karnofsky性能状况≥70％5)在进行任何特定筛选程序之前，给予书面知情同意书，使患者知道有权在任何时间没有任何偏见地退出研究。
排除标准1)妊娠或哺乳期妇女2)可能会怀孕的妇女，除非(1)手术绝育或(2)使用有效(adequate)避孕措施如口服避孕药、子宫内避孕器或采用与杀精子凝胶联合的避孕隔离措施。
3)CNS转移灶的临床或放射学证据。
4)任何明显的心脏病病史5)LVEF≤50％6)在任何治疗背景中均没有在先的taxane治疗7)下列任一项血液值基线异常-Hb＜9g/dl-WBC＜3.0×109/l-粒细胞＜1.5×109/1-血小板＜100×109/l8)下述任一项肝功能检测值基线异常-血胆红素＞1.5×ULN(正常上限)-ALT和/或AST＞2.5×ULN(如果肝脏或骨转移的话，大于4.0×ULN)-碱性磷酸酶＞2.5×ULN(如果肝脏或骨转移的话，大于4.0×ULN)9)下述肾功能检测值基线异常-血肌酐＞1.5×ULN10)有妨碍患者参加试验研究的其它严重医学病症的病史。
HERCEPTIN负荷量和方案首次剂量8mg/kg。维持量和方案6mg/kg，每3周一次。
紫杉醇-175mg/m2静脉注射每3周一次×6个周期，按3-小时输注。
注意在治疗的首轮周期中，在施用HERCEPTIN前8小时施用紫杉醇，以测定紫杉醇单独用药的PK。只是在第一个周期中，HERCEPTIN于施用紫杉醇8小时后给药。在接下来的治疗周期中，HERCEPTIN在紫杉醇之前给药。
整个研究共18周。受试者接受最多6个总HERCEPTIN剂量(dose)。最后一个受试者接受最后一个周期的紫杉醇之后，停止有关安全性和药代动力学的数据采集，研究趋向于拟定特定的治疗方案。根据研究者的判断，受试者可继续接受HERCEPTIN+/-紫杉醇。
据信不管对患者施用HERCEPTIN的频率如何，上述治疗方案在治疗转移型乳腺癌中是有效的。
尽管详细证明和公开的本发明的特定方面和实施方案能够实现本发明目的并提供本文前面提到的有益效果，但是应当理解这只是本发明优选实施方案的某些例证性说明，并不意味着对所示方法的细节和制备产品加以限制，本发明的保护范围见权利要求书。说明书中所有引证的出版物，在本文中清楚地引入作为参考。
权利要求
1.治疗易患或已诊断患有以过度表达ErbB2受体为特征的病症的人类患者的方法，包括向患者施用治疗有效量抗ErbB2抗体的步骤，所述方法包括向患者施用初始剂量至少约5mg/kg的抗ErbB2抗体；和向患者多次施用接近等于或小于初始剂量的继续量的所述抗体。
2.权利要求1的方法，其中所述初始剂量是至少约6mg/kg。
3.权利要求2的方法，其中所述初始剂量是至少约8mg/kg。
4.权利要求3的方法，其中所述初始剂量是至少约12mg/kg。
5.权利要求1的方法，其中所述继续量是以至少1周的间隔分开给药。
6.权利要求1的方法，其中所述继续量是以至少2周的间隔分开给药。
7.权利要求1的方法，其中所述继续量是以至少3周的间隔分开给药。
8.权利要求1的方法，其中初始剂量通过静脉注射给药，且其中至少一次继续量是通过皮下注射给药。
9.权利要求1的方法，其中初始剂量通过静脉注射给药并施用至少两次继续量，所述继续量是通过选自基本上由静脉注射和皮下注射组成的组中的一种方法来给药的。
10.权利要求1的方法，其中初始剂量和至少一次继续量是通过皮下注射给药。
11.权利要求1的方法，其中所述初始剂量选自约6mg/kg、8mg/kg或12mg/kg，其中所述多次继续量均至少约2mg/kg，并且所述继续量以至少1周的间隔分开给药。
12.权利要求11的方法，其中所述多次继续量以至少2周的间隔分开给药。
13.权利要求12的方法，其中所述多次继续量以至少3周的间隔分开给药。
14.权利要求13的方法，其中初始量是约8mg/kg，其中至少一次继续量是约6mg/kg。
15.权利要求13的方法，其中初始量是约12mg/kg，其中至少一次继续量是约6mg/kg。
16.权利要求11的方法，其中初始量是约8mg/kg，其中至少一次继续量是约8mg/kg。
17.权利要求11的方法，其中初始量是约8mg/kg，其中至少一次继续量是约8mg/kg，并且所述初始量和继续量以至少2周的间隔分开。
18.权利要求17的方法，其中所述初始量和继续量以至少3周的间隔分开。
19.权利要求1的方法，其中初始量是多次剂量，所述多次剂量的每一次剂量是至少约1mg/kg并且连续给药至少2天，其中至少一次继续量是至少2mg/kg，并且所述最后一次初始剂量给药和第一次继续量给药之间以及其它继续量之间的给药相隔至少1周。
20.权利要求19的方法，其中初始量是多次剂量，所述多次剂量的每一次剂量是至少约1mg/kg并且连续给药至少3天，其中至少一次继续量是至少约6mg/kg，并且所述最后一次初始剂量和第一次继续量之间以及其它继续量之间的给药相隔至少3周。
21.权利要求1的方法，其中初始量是多次剂量，所述多次剂量的每一次剂量是至少约1mg/kg并按照每周至少2次给药3周作为最初的剂量周期，重复该剂量周期，每个周期中的每次给药相隔至少1天，而每周期之间的给药相隔至少1周。
22.权利要求1的方法，其中所述病症是良性或恶性肿瘤。
23.权利要求23的方法，其中所述病症是癌症。
24.权利要求23的方法，其中所述癌症选自乳腺癌、白血病、鳞状上皮细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、胃肠癌、胰腺癌、恶性胶质瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、唾液腺癌、肾癌、肝癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝性癌和各种类型的头颈部癌症。
25.权利要求24的方法，其中所述癌症是乳腺癌。
26.权利要求25的方法，其中所述癌症是转移性乳腺癌。
27.权利要求1的方法，其中所述抗体与ErbB2受体的胞外结构域相结合。
28.权利要求27的方法，其中所述抗体与ErbB2胞外结构域序列内的4D5表位相结合。
29.权利要求28的方法，其中所述抗体是人源化4D5抗EbrB抗体。
30.权利要求1的方法，进一步包括施用有效量的化疗剂。
31.权利要求30的方法，其中所述化疗剂是taxoid。
32.权利要求31的方法，其中所述taxoid是紫杉醇或紫杉萜。
33.权利要求30的方法，其中有效量抗ErbB2抗体和有效量化疗剂联合时的用量，小于有效量的该抗ErbB2抗体和有效量的该化疗剂各自单独用药时用量的总和。
34.权利要求30的方法，其中化疗剂是蒽环类抗生素的衍生物。
35.权利要求34的方法，其中蒽环类抗生素的衍生物是阿霉素或表阿霉素。
36.权利要求34的方法，其中该方法进一步包括施用心脏保护剂。
37.权利要求1的方法，其中效力是通过测定疾病进展时间或应答速率而测出的。
38.一种产品，包括容器、盛在容器中的含抗ErbB2抗体的组合物和包装插页，所述包装插页包括向给药者说明抗ErbB2抗体初始剂量至少5mg/kg和至少一次继续量等于或小于初始量的说明书。
39.权利要求38的产品，其中说明书用于说明初始量通过静脉注射给药和至少一次继续量通过皮下注射给药。
40.权利要求38的产品，其中初始剂量为至少6mg/kg。
41.权利要求40的产品，其中初始剂量为至少8mg/kg。
42.权利要求41的产品，其中初始剂量为至少12mg/kg。
43.权利要求38的产品，其中继续量以至少1周的间隔彼此分开给药。
44.权利要求38的产品，其中继续量以至少2周的间隔彼此分开给药。
45.权利要求38的产品，其中继续量以至少3周的间隔彼此分开给药。
46.权利要求38的产品，其中初始量和至少一次继续量经皮下注射给药。
47.权利要求38的产品，其中所述初始剂量选自约6mg/kg、8mg/kg或12mg/kg，其中所述多次继续量均至少约2mg/kg，并且所述继续量以至少1周的间隔分开给药。
48.权利要求47的产品，其中所述多次继续量以至少2周的间隔分开给药。
49.权利要求48的产品，其中所述多次继续量以至少3周的间隔分开给药。
50.权利要求49的产品，其中初始量是约8mg/kg，其中至少一次继续量是约6mg/kg。
51.权利要求49的产品，其中初始量是约12mg/kg，其中至少一次继续量是约6mg/kg。
52.权利要求47的产品，其中初始量是约8mg/kg，其中至少一次继续量是约8mg/kg。
53.权利要求47的产品，其中初始量是约8mg/kg，其中至少一次继续量是约8mg/kg，并且所述初始量和继续量以至少2周的间隔分开给药。
54.权利要求53的产品，其中所述初始量和继续量以至少3周的间隔分开给药。
55.权利要求38的产品，其中初始量是多次剂量，所述多次剂量的每一次剂量是至少约1mg/kg并且连续给药至少2天，其中至少一次继续量是至少约2mg/kg，并且所述最后一次初始剂量给药和第一次继续量给药之间以及其它继续量之间的给药相隔至少1周。
56.权利要求55的产品，其中初始量是多次剂量，所述多次剂量的每一次剂量是至少约1mg/kg并且连续给药至少3天，其中至少一次继续量是至少约6mg/kg，并且所述最后一次初始剂量给药和第一次继续量给药之间以及其它继续量之间的给药相隔至少3周。
57.权利要求38的产品，其中初始量是多次剂量，所述多次剂量的每一次剂量是至少约1mg/kg并按照每周至少2次给药3周作为最初的剂量周期，重复该剂量周期，每个周期中的每次给药相隔至少1天，而每周期之间的给药相隔至少1周。
58.权利要求38的产品，其中说明书用于说明初始剂量经皮下注射给药和至少一次继续量经皮下注射给药。
59.权利要求58的产品，其中初始量为至少约6mg/kg。
60.权利要求59的产品，其中初始量为至少约8mg/kg。
61.权利要求60的产品，其中初始量为至少约12mg/kg。
62.权利要求58的产品，其中继续量以至少1周的间隔彼此分开给药。
63.权利要求58的产品，其中继续量以至少2周的间隔彼此分开给药。
64.权利要求58的产品，其中继续量以至少3周的间隔彼此分开给药。
65.权利要求58的产品，其中所述初始剂量选自约6mg/kg、8mg/kg或12mg/kg，其中所述多次继续量均至少约2mg/kg，并且所述继续量以至少1周的间隔分开给药。
66.权利要求58的产品，其中所述多次继续量以至少2周的间隔分开给药。
67.权利要求66的产品，其中所述多次继续量以至少3周的间隔分开给药。
68.权利要求67的产品，其中初始量是约8mg/kg，其中至少一次继续量是约6mg/kg。
69.权利要求67的产品，其中初始量是约12mg/kg，其中至少一次继续量是约6mg/kg。
70.权利要求65的产品，其中初始量是约8mg/kg，其中至少一次继续量是约8mg/kg。
71.权利要求65的产品，其中初始量是约8mg/kg，其中至少一次继续量是约8mg/kg，并且所述初始量和继续量以至少2周的间隔分开给药。
72.权利要求71的产品，其中所述初始量和继续量以至少3周的间隔分开给药。
73.权利要求58的产品，其中初始量是多次剂量，所述多次剂量的每一次剂量是至少约1mg/kg并且连续给药至少2天，其中至少一次继续量是至少约2mg/kg，并且所述最后一次初始剂量给药和第一次继续量给药之间以及其它继续量之间的给药相隔至少1周。
74.权利要求73的产品，其中初始量是多次剂量，所述多次剂量的每一次剂量是至少约1mg/kg并且连续给药至少3天，其中至少一次继续量是至少约6mg/kg，并且所述最后一次初始剂量给药和第一次继续量给药之间以及其它继续量之间的给药相隔至少3周。
75.权利要求58的产品，其中初始量是多次剂量，所述多次剂量的每一次剂量是至少约1mg/kg并按照每周至少2次给药3周作为最初的剂量周期，重复该剂量周期，每个周期中的每次给药相隔至少1天，而每周期之间的给药相隔至少1周。
76.权利要求38的产品，其中说明书进一步包括化疗剂给药的说明。
77.权利要求76的产品，其中化疗剂是taxoid。
78.权利要求77的产品，其中taxoid是紫杉醇或紫杉萜。
79.权利要求76的产品，其中化疗剂是蒽环类抗生素的衍生物。
80.权利要求79的产品，其中说明书进一步包括施用心脏保护剂的说明。
81.权利要求38的产品，进一步包括贴在容器上的或由容器附带的一个标签，所述标签指明该组合物可用于治疗以过度表达ErbB2受体为特征的病症。
82.权利要求81的产品，其中所述标签指明所述组合物可用于治疗乳腺癌。
83.权利要求38的产品，其中所述抗ErbB2抗体与所述受体的胞外结构域相结合。
84.权利要求83的产品，其中所述抗ErbB2抗体与ErbB2胞外结构域序列内的4D5表位相结合。
85.权利要求84的产品，其中所述抗体是人源化4D5抗EbrB2抗体。
86.治疗人类癌症患者的方法，包括向患者施用首次剂量的抗ErbB2抗体，接着施用至少一次继续量的该抗体，其中首次剂量和继续量给药以至少约2周的间隔彼此分开。
87.权利要求86的方法，其中首次剂量和继续量给药以至少约3周的间隔彼此分开。
88.权利要求86的方法，其中首次剂量和继续量分别是约2mg/kg～约16mg/kg。
89.权利要求88的方法，其中首次剂量和继续量分别是约4mg/kg～约12mg/kg。
90.权利要求89的方法，其中首次剂量和继续量分别是约6mg/kg～约12mg/kg。
91.权利要求86的方法，其中向患者施用两次或多次继续量的所述抗体。
92.权利要求91的方法，其中向患者施用约2次～约10次继续量的所述抗体。
93.权利要求91的方法，其中两次或多次继续量彼此之间按照至少约2周的间隔给药。
94.权利要求93的方法，其中两次或多次继续量彼此之间按照至少约3周的间隔给药。
95.权利要求91的方法，其中两次或多次继续量给药分别是约2mg/kg～约16mg/kg。
96.权利要求91的方法，其中两次或多次继续量给药分别是约4mg/kg～约12mg/kg。
97.权利要求91的方法，其中两次或多次继续量给药均是约6mg/kg～约12mg/kg。
98.权利要求86的方法，其中该方法进一步包括向患者施用有效量的化疗剂。
99.权利要求98的方法，其中化疗剂是taxoid。
100.一种产品，包括容器、盛在容器中的含有抗ErbB2抗体的组合物和包装插页，所述包装插页包括按照权利要求86-99任一方法给药的说明书。
101.治疗人类癌症患者的方法，包括向患者施用有效量的抗ErbB抗体，所述方法包括向患者施用初始剂量至少为约5mg/kg的抗ErbB抗体；和向患者多次施用继续量的所述抗体，所述继续量大约等于或小于所述初始剂量。
102.权利要求101的方法，其中所述抗ErbB抗体选自抗-表皮生长因子受体(EGFR)、抗ErbB3和抗ErbB4抗体。
103.治疗人类癌症患者的方法，包括向患者施用首次剂量的抗ErbB抗体，接着施用至少一次继续量的该抗体，所述首次剂量和继续量以至少均2周的间隔彼此分开给药。
104.权利要求103的方法，其中所述抗ErbB抗体选自抗-表皮生长因子受体(EGFR)、抗ErbB3和抗ErbB4抗体。
105.一种产品，包括容器、盛在容器中的含有抗ErbB抗体的组合物和包装插页，所述包装插页含有按照权利要求101～104中任一项的方法给药的说明书。
全文摘要
本发明涉及以过度表达ErbB2为特征的病症的治疗。更具体而言,本发明涉及用抗ErbB2抗体治疗易患或诊断患有过度表达ErbB2的癌症的人类患者。
文档编号A61K39/395GK1382060SQ00814590
公开日2002年11月27日 申请日期2000年8月25日 优先权日1999年8月27日
发明者沙伦·A·鲍曼, 史蒂文·谢克 申请人:杰南技术公司