专利名称：喜树碱配糖体的制备方法
技术领域：
本发明涉及喜树碱配糖体制备方法，属于天然药物结构修饰研究领域。
背景技术：
喜树(Camptotheca acuminata)是珙桐科(Nyssacea)乔木，为我国特有植物。分布于江西、浙江、湖南、湖北、四川、贵州、广西、广东等地。其根、茎、皮、叶、果实，可供药用，从喜树中提取的生物碱——喜树碱及其衍生物，具有抗癌活性。
由于喜树碱(CPT)的毒副作用很大，如脱发、膀胱炎、骨髓抑制、中度白细胞下降、血小板减少、恶心、呕吐、腹泻、贫血等，这些毒性反应使喜树碱在临床癌症治疗中受到限制，近年来，美国、日本、英国、加拿大等国家都积极投入到喜树碱的研究开发中，合成了数百个喜树碱衍生物进行筛选。例如CPT-11，TPT，GG211，DX-8951，NB-506，9-amino-CPT等。其中CPT-11和TPT已经上市，其它几种正处于临床阶段。这些药物保持了喜树碱的抗癌活性，还提高了喜树碱的溶解度，减少了毒副作用。
如上所述，以降低毒性和提高抗癌活性为目标进行的喜树碱结构修饰，国内外有关这方面的研究报道很多，有些新喜树碱的类似物已经申请专利并进入临床研究阶段，但这些研究大多采用小分子官能团对喜树碱进行结构修饰，从天然产物中寻找活性官能团对喜树碱进行结构修饰的报到很少。考虑到天然产物中存在相当一部分具有解毒功能的化合物，以这些化合物作为官能团对喜树碱进行结构修饰，所得喜树碱衍生物在体内代谢可以考虑能够降低喜树碱的毒性。本发明选用具有解毒功能的天然单体糖类作为活性官能团对喜树碱进行结构修饰，得到喜树碱配糖体。在保持喜树碱原有抗癌活性基础上，增加药物在体液中的溶解度，提高生物利用度，而且喜树碱配糖体大部分可经尿排出体外，降低药物毒性。
发明内容
本发明的目的在于采用了具有解毒功能的天然单体糖类为活性官能团，对喜树碱进行化学修饰，合成喜树碱配糖体，提高喜树碱在癌症治疗中的生物利用度和降低其毒性。
本发明采用的技术方案是a选择活性较高的乙酰卤糖和乙酰卤糖醛酸酯与10—羟基喜树碱的酚羟基进行取代反应，生成乙酰化喜树碱配糖体。
b采用硅胶柱层析方法分离纯化乙酰化喜树碱配糖体。
c乙酰化喜树碱配糖体脱去乙酰基，生成喜树碱配糖体。
d采用制备高效液相层析和溶剂结晶法得到纯喜树碱配糖体。
本发明的优点是1、本发明采用具有解毒功能的天然单体糖类化合物对喜树碱进行结构修饰，合成喜树碱配糖体，提高喜树碱在癌症治疗中的生物利用度并且降低其毒性。喜树碱配糖体有望成为新一代高效低毒的抗癌新药。
2本发明的制备工艺路线简单、反应条件温和、周期短。
具体实施例方式
下面对本发明的实施例作进一步详细描述喜树碱配糖体的制备方法a选择活性较高的乙酰卤糖和乙酰卤糖醛酸酯与10—羟基喜树碱的酚羟基进行取代反应，生成乙酰化喜树碱配糖体。
b采用硅胶柱层析方法分离纯化乙酰化喜树碱配糖体。
c乙酰化喜树碱配糖体脱去乙酰基，生成喜树碱配糖体。
d采用制备高效液相层析和溶剂结晶法得到纯喜树碱配糖体。
所述的喜树碱配糖体的制备方法，采用天然单体糖类化合物对喜树碱进行结构修饰，与10-羟基喜树碱进行取代反应的程度受到所选糖的类型的影响，所选择的乙酰卤糖包括四-O-乙酰-1-溴-α-D-葡萄糖、四-O-乙酰-1-溴-α-D-甘露糖、四-O-乙酰-1-溴-α-D-半乳糖、七-O-乙酰-1-溴-麦芽糖、七-O-乙酰-1-溴-乳糖；所选择的乙酰卤糖醛酸酯包括三-O-乙酰-1-溴-D-葡萄糖醛酸酯、三-O-乙酰-1-溴-D-甘露糖醛酸酯、三-O-乙酰-1-溴-D-半乳糖醛酸酯。
所述的喜树碱配糖体的制备方法，乙酰卤糖和乙酰卤糖醛酸酯与10—羟基喜树碱进行取代反应的程度受到反应所用溶剂的影响，所选择溶剂包括乙醇、甲醇、丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷。
所述的喜树碱配糖体的制备方法，乙酰卤糖和乙酰卤糖醛酸酯与10—羟基喜树碱进行取代反应的程度受到所用催化剂的影响，所选择的催化剂包括氢氧化钾、氢氧化钠、氧化银、高氯酸银、碳酸钾、碳酸钠、碳酸银、碳酸氢钾、碳酸氢钠、阳离子交换树脂。
所述的喜树碱配糖体的制备方法，硅胶柱层析方法分离纯化乙酰化喜树碱配糖体时，采用的洗脱液是氯仿-甲醇系统。
所述的喜树碱配糖体的制备方法，乙酰化喜树碱配糖体去乙酰化反应程度，受到反应所用溶剂的影响，所选择溶剂包括甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷。
所述的喜树碱配糖体的制备方法，乙酰化喜树碱配糖体去乙酰化反应程度，受到去乙酰化试剂的影响，所选选择的去乙酰化试剂包括氢氧化钠、氢氧化钾、硫化钠、甲醇钠。
所述的喜树碱配糖体的制备方法，在纯化喜树碱配糖体过程中，采用制备高效液相层析所用的流动相是甲醇-水系统，溶剂结晶法所选溶剂包括乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯和二氯甲烷、三氯甲烷。
实施例1喜树碱葡萄糖甙，向反应器中加入300毫升丙酮，先后加入16.0毫摩尔10-羟基喜树碱、32.0毫摩尔四-O-乙酰-1-溴-α-D-葡萄糖、10.0毫摩尔碳酸钾，加热回溜反应4小时，反应完毕后，水泵真空过滤，滤液浓缩，采用硅胶柱层析纯化，用氯仿-甲醇系统梯度洗脱，得到乙酰化喜树碱葡萄糖甙，收率26.9％。
向反应器中加入100毫升甲醇，然后加入1.0毫摩尔乙酰化喜树碱葡萄糖甙，在室温搅拌下滴加60％甲醇钠溶液1.0毫升，搅拌反应50分钟，加入5毫升水，过滤，真空浓缩滤液，用乙醇-乙酸乙酯-氯仿液重结晶，得到喜树碱葡萄糖甙，收率92.3％。
实施例2喜树碱甘露糖甙向反应器中加入300毫升甲醇，先后加入16.0毫摩尔10-羟基喜树碱、32.0毫摩尔四-O-乙酰-1-溴-α-D-甘露糖、10.0毫摩尔碳酸钠，回溜反应6小时，反应完毕后，水泵真空过滤，滤液浓缩，采用硅胶柱层析纯化，用氯仿-甲醇系统梯度洗脱，得到乙酰化喜树碱甘露糖甙，收率21.3％。
向反应器中加入100毫升甲醇，然后加入1.0毫摩尔乙酰化喜树碱甘露糖甙，在室温搅拌下滴加50％甲醇钠溶液1毫升，搅拌反应50分钟，加入5毫升水，过滤，真空浓缩滤液，用氯仿-甲醇液重结晶，得到喜树碱甘露糖甙，收率90.4％。
实施例3喜树碱半乳糖甙向反应器中加入300毫升甲醇，先后加入16.0毫摩尔10-羟基喜树碱、32.0毫摩尔四-O-乙酰-1-溴-α-D-半乳糖、10.0毫摩尔碳酸银，回溜反应4小时，反应完毕后，水泵真空过滤，滤液浓缩，采用硅胶柱层析纯化，用氯仿-甲醇系统梯度洗脱，得到乙酰化喜树碱半乳糖甙，收率23.0％。
向反应器中加入100毫升甲醇，然后加入1.0毫摩尔乙酰化喜树碱半乳糖甙，在室温搅拌下滴加50％甲醇钠溶液1.0毫升，搅拌反应50分钟，加入5毫升水，过滤，真空浓缩滤液，用丙酮-氯仿液重结晶，得到喜树碱半乳糖甙，收率88.8％。
实施例4喜树碱麦芽糖甙向反应器中加入30毫升氯仿，先后加入3.0毫摩尔10-羟基喜树碱、6.0毫摩尔七-O-乙酰-1-溴-麦芽糖，滴加0.1当量氢氧化钠溶液，室温搅拌2小时，反应完毕后，水泵真空过滤，滤液浓缩，采用硅胶柱层析纯化，用氯仿-甲醇系统梯度洗脱，得到乙酰化喜树碱麦芽糖甙，收率34.9％。
向反应器中加入5毫升乙醇，然后加入0.06毫摩尔乙酰化喜树碱麦芽糖甙，在室温搅拌下滴加2N氢氧化钾溶液3.9毫升，反应50分钟，加入1N盐酸6毫升，过滤，真空浓缩滤液，用制备高效液相色谱纯化，进行甲醇-水梯度洗脱，得到喜树碱麦芽糖甙，收率96.4％。
实施例5喜树碱乳糖甙向反应器中加入30毫升丙酮，先后加入3.0毫摩尔10-羟基喜树碱、6.0毫摩尔七-O-乙酰-1-溴-乳糖，滴加0.1当量氢氧化钾溶液，室温搅拌2小时，反应完毕后，水泵真空过滤，滤液浓缩，采用硅胶柱层析纯化，用氯仿-甲醇系统梯度洗脱，得到乙酰化喜树碱乳糖甙，收率31.4％。
向反应器中加入5毫升甲醇，然后加入0.06毫摩尔乙酰化喜树碱乳糖甙，在室温搅拌下滴加2N氢氧化钾溶液3.9毫升，反应50分钟，加入1N盐酸6毫升，过滤，真空浓缩滤液，用制备高效液相色谱纯化，进行甲醇-水梯度洗脱，得到喜树碱乳糖甙，收率91.3％。
实施例6喜树碱葡萄糖醛酸甙向反应器中加入300毫升乙醇，先后加入16.0毫摩尔10-羟基喜树碱、32.0毫摩尔三-O-乙酰-1-溴-D-葡萄糖醛酸酯、适量阳离子交换树脂，回溜反应5小时，反应完毕后，水泵真空过滤，滤液浓缩，采用硅胶柱层析纯化，用氯仿-甲醇系统梯度洗脱，得到乙酰化喜树碱葡萄糖醛酸甙，收率15.3％。
向反应器中加入30毫升丙酮，然后加入0.62毫摩尔乙酰化喜树碱葡萄糖醛酸甙，在室温搅拌下滴加0.7N氢氧化钠溶液20毫升，反应160分钟，用1N盐酸调PH6，真空浓缩反应液，用制备高效液相色谱纯化，进行甲醇-水梯度洗脱，得到喜树碱葡萄糖醛酸甙，收率64.3％。
实施例7喜树碱甘露糖醛酸甙向反应器中加入300毫升乙醇，先后加入16.0毫摩尔10-羟基喜树碱、32.0毫摩尔三-O-乙酰-1-溴-D-甘露糖醛酸酯、25.0毫摩尔碳酸氢钾，回溜反应6小时，反应完毕后，真空水泵过滤，滤液浓缩，采用硅胶柱层析纯化，用氯仿-甲醇系统梯度洗脱，得到乙酰化喜树碱甘露糖醛酸甙，收率11.4％。
向反应器中加入30毫升丙酮，然后加入0.62毫摩尔乙酰化喜树碱甘露糖醛酸甙，在室温搅拌下滴加0.7N氢氧化钠溶液20毫升，反应180分钟，用1N盐酸调PH6，真空浓缩反应液，用制备高效液相色谱纯化，进行甲醇-水梯度洗脱，得到喜树碱甘露糖醛酸甙，收率62.8％。
实施例8喜树碱半乳糖甙向反应器中加入300毫升乙醇，先后加入16.0毫摩尔10-羟基喜树碱、32.0毫摩尔三-O-乙酰-1-溴-D-半乳糖醛酸酯、25.0毫摩尔碳酸氢钠，回溜反应6小时，反应完毕后，真空水泵过滤，滤液浓缩，采用硅胶柱层析纯化，用氯仿-甲醇系统梯度洗脱，得到乙酰化喜树碱半乳糖醛酸甙，收率9.8％。
向反应器中加入30毫升丙酮，然后加入0.62毫摩尔乙酰化喜树碱半乳糖醛酸甙，在室温搅拌下滴加0.7N氢氧化钠溶液1毫升，反应180分钟，用1N盐酸调PH6，真空浓缩反应液，用制备高效液相色谱纯化，进行甲醇-水梯度洗脱，得到喜树碱半乳糖醛酸甙，收率60.3％。
权利要求
1喜树碱配糖体的制备方法，其特征在于采用具有解毒功能的天然单体糖类化合物对喜树碱进行结构修饰，喜树碱配糖体的制备过程包括以下几步a选择活性较高的乙酰卤糖和乙酰卤糖醛酸酯与10-羟基喜树碱的酚羟基进行取代反应，生成乙酰化喜树碱配糖体。b采用硅胶柱层析方法分离纯化乙酰化喜树碱配糖体。C乙酰化喜树碱配糖体脱去乙酰基，生成喜树碱配糖体。d采用制备高效液相层析和溶剂结晶法得到纯喜树碱配糖体。
2权利要求1所述的喜树碱配糖体的制备方法，其特征在于采用天然单体糖类化合物对喜树碱进行结构修饰，与10-羟基喜树碱进行取代反应的程度受到糖的类型的影响，所选择的乙酰卤糖包括四-O-乙酰-1-溴-α-D-葡萄糖、四-O-乙酰-1-溴-α-D-甘露糖、四-O-乙酰-1-溴-α-D-半乳糖、七-O-乙酰-1-溴-麦芽糖、七-O-乙酰-1-溴-乳糖；所选择的乙酰卤糖醛酸酯包括三-O-乙酰-1-溴-D-葡萄糖醛酸酯、三-O-乙酰-1-溴-D-甘露糖醛酸酯、三-O-乙酰-1-溴-D-半乳糖醛酸酯。
3权利要求1所述的喜树碱配糖体的制备方法，其特征在于乙酰卤糖和乙酰卤糖醛酸酯与10-羟基喜树碱进行取代反应的程度受到反应所用溶剂的影响，所选择溶剂包括乙醇、甲醇、丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷。
4权利要求1所述的喜树碱配糖体的制备方法，其特征在于乙酰卤糖和乙酰卤糖醛酸酯与10-羟基喜树碱进行取代反应的程度受到所用催化剂的影响，所选择的催化剂包括氢氧化钾、氢氧化钠、氧化银、高氯酸银、碳酸钾、碳酸钠、碳酸银、碳酸氢钾、碳酸氢钠、阳离子交换树脂。
5权利要求1所述的喜树碱配糖体的制备方法，其特征在于硅胶柱层析方法分离纯化乙酰化喜树碱配糖体时，采用的洗脱液是氯仿-甲醇系统。
6权利要求1所述的喜树碱配糖体的制备方法，其特征在于乙酰化喜树碱配糖体去乙酰化反应程度，受到反应所用溶剂的影响，所选择溶剂包括甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷。
7权利要求1所述的喜树碱配糖体的制备方法，其特征在于乙酰化喜树碱配糖体去乙酰化反应程度，受到去乙酰化试剂的影响，所选选择的去乙酰化试剂包括氢氧化钠、氢氧化钾、硫化钠、甲醇钠。
8权利要求1所述的喜树碱配糖体的制备方法，其特征在于在纯化喜树碱配糖体过程中，采用制备高效液相层析所用的流动相是甲醇-水系统，溶剂结晶法所选溶剂包括乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯和二氯甲烷、三氯甲烷。
全文摘要
喜树碱配糖体的制备方法，本发明的主要特点是采用具有解毒功能的天然单体糖类化合物对喜树碱进行结构修饰，合成喜树碱配糖体，提高喜树碱在癌症治疗中的生物利用度并且降低其毒性。喜树碱配糖体的制备过程包括以下几步a乙酰卤糖的C
文档编号A61P35/00GK1500797SQ0214485
公开日2004年6月2日 申请日期2002年11月14日 优先权日2002年11月14日
发明者祖元刚, 李庆勇, 付玉杰, 张宝友, 杨逢建 申请人:东北林业大学, 祖元刚