专利名称：清开灵注射液或注射粉针剂的制备方法及其质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种清开灵注射液或注射粉针剂的制备方法及清开灵粉针剂的质量控制方法，具体来说，是一种清开灵注射液或注射粉针剂的改进制备方法和清开灵注射液或注射粉针剂的质量控制方法以及鉴别方法。
尽管如此，我们可以看出上述清开灵粉针剂的制备方法是十分繁琐的，非常不利于工业化大生产，并且清开灵粉针剂的质量还有待进一步提高。其次，现有技术中没有公开清开灵注射液或注射用粉针剂对胆酸、猪去氧胆酸、栀子甙和绿原酸的质量控制。
同时，本发明也提供了清开灵注射液或注射粉针剂中黄芩甙、胆酸、猪去氧胆酸、栀子甙和绿原酸的质量控制方法。
本发明还提供了清开灵注射液或注射用粉针剂的鉴别方法。
本发明方法主要在栀子、板蓝根和金银花的提取过程中使用了高速离心的技术，这样有效去除了这三种中药材的提取液中的杂质，为以后的简化步骤做好准备。具体来说是(1)栀子提取液的制备取栀子，用水煮醇沉法，滤液高速离心，制得栀子提取液，备用。
(2)板蓝根提取液的制备取板蓝根饮片，用水煮醇沉法，滤液高速离心，制得板蓝根提取液，备用。
(3)金银花提取液的制备取金银花，用水煮醇沉法，滤液高速离心，制得金银花提取液，备用。
在上述高速离心中离心速度为10000-20000转/分钟范围内，优选离心速度为16000转/分钟。
另外，本发明的方法和在制备水牛角和珍珠母粉混合物液步骤中加入了超滤步骤。因为水牛角含有较多的蛋白质和异性蛋白质等成分，可刺激机体产生相应的抗体，引起过敏反应，临床也有较多的报道。超滤技术的应用有效地除去了蛋白质类、鞣质等成分，有效的除去了致敏原。
具体来说，水牛角粉和珍珠母粉混合水解液的制备取珍珠母粉水解液，搅拌下加入水牛角粉水解液，用氢氧化钡溶液调节PH值至4，静置，滤取上清液检查钡离子呈阴性，用氢氧化钠溶液调节PH值至6～7，滤过，滤液浓缩至20℃测相对密度为1.05的清膏，放冷，加入乙醇，使含醇量达70％，冷藏，滤过，减压回收乙醇至无醇味，放冷，加入乙醇，使含醇量达80％，冷藏，滤过，减压回收乙醇，滤过，将浓缩液超滤，超滤液冷置，滤过，即得水牛角和珍珠母粉混合水解液。
取珍珠母粉水解液，搅拌下加入水牛角粉水解液，用氢氧化钡溶液调节PH值至4，静置，滤取上清液用10％硫酸溶液检查钡离子，应呈阴性，用10％氢氧化钠溶液调节PH值至6～7，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05(20℃)的清膏，放冷，搅拌下加入95％乙醇，使含醇量达70％，冷藏24小时，滤过，减压回收乙醇至无醇味，放冷，搅拌下加入乙醇，使含醇量达80％，冷藏24小时，滤过，减压回收乙醇，滤过，将浓缩液超滤，超滤液冷置24小时，滤过，即得水牛角和珍珠母粉混合水解液。
正因为采用了上述步骤，使得制备总混合液变得简便，也就是，取猪去氧胆酸粉、黄芩甙粉、胆酸粉分别加以10％氢氧化钠溶液调节PH值至8的注射用水适量使溶解，混匀；加入上述药材提取液中，搅匀，调节PH值至7，得混合液，加注射用水至全量，调节PH值至7；将混合液超滤，滤液冷冻干燥，即得。
在本发明的方法中，超滤选用了0.2-0.8μm的无菌滤膜，优选0.22μm的无菌滤膜。
本发明所述的清开灵注射液或注射用粉针剂中黄芩甙的质量控制方法包在黄芩甙中加甲醇溶解，过滤，得黄芩甙溶液，备用。高效液相色谱仪，以乙腈(或甲醇)--0.3～0.6％磷酸(或冰乙酸)(20～45∶80～55)为流动相，测定清开灵注射液或注射用粉针剂中黄芩甙应为标示量的90.0～110.0％。
本发明所述的清开灵注射液或注射用粉针剂中胆酸和猪去氧胆酸的质量控制方法，包括将胆酸加入乙腈-磷酸盐缓冲液系统溶解，过滤，得供试液，备用；用高效液相色谱仪，色谱柱为C18或C4或C8柱，流动相用40～85∶60～15∶0.1～0.5比例的甲醇或乙腈-水-冰醋酸或磷酸测定，含胆酸、猪去氧胆酸应为标示量的90.0％～110.0％。
本发明所述的清开灵注射液或注射用粉针剂中栀子甙的质量控制方法，包括在栀子甙中加甲醇-水溶解，过滤，得供试液，备用；用高效液相色谱仪，以15～40∶85～60比例的甲醇或乙腈-水为流动相，测定清开灵注射液或注射用粉针剂的产品含栀子甙不得少于1.52％。
本发明所述的清开灵注射液或注射用粉针剂中绿原酸的质量控制方法，包括在绿原酸中加甲醇溶解，过滤，得供试液，备用；用高效液相色谱仪，以8～20∶92～80比例的乙腈或甲醇--0.2～0.6％磷酸为流动相，测定清开灵注射液或注射用粉针剂的产品含绿原酸不得少于0.5％。
本发明方法所制备的清开灵注射液或注射用粉针剂使用上述测定方法测定的质量标准是黄芩甙(C21H18011)应为标示量的90.0～110.0％；含氮(N)应为标示量的90.0～120.0％；含胆酸、猪去氧胆酸应为标示量的90.0％～110.0％；含栀子甙不得少于1.52％，含绿原酸不得少于0.5％。
本发明所述的清开灵注射液或注射用粉针剂的鉴别方法，包括取样品加1-10ml新制的糖醛溶液，与1-10ml硫酸溶液混匀，水浴加热，溶液呈灰紫色；同时取样品，加甲醇溶解，滤过，滤液浓缩，得供试液；取栀子药材，加甲醇溶解，滤过，滤液浓缩的残留物加甲醇，得栀子药材溶液；取栀子甙加甲醇溶解，得对照品溶液试液；照薄层色谱法，吸取三种溶液，点于GF254预制版上，以8-12∶1-3∶0.5-1.5的乙酸乙脂-无水乙醇-冰醋酸展开，喷以香夹兰醛-浓硫酸溶液，供试品色谱中在与对照品色谱相应位置上显有相同颜色斑点。
使用本发明方法所制得的清开灵注射液或注射粉针剂，稳定性好，有效期长，运输贮存方便，各项技术指标符合《中华人民共和国药典》要求。本发明所述的清开灵注射液或注射粉针剂的使用方法是肌肉注射一日2～4ml。重症患者静脉注射20～40ml，以10％葡萄糖注射液200ml或生理盐水100ml稀释后使用。
具体优选的实施方式实施例1胆酸32.5g 猪去氧胆酸37.5g黄芩甙50g珍珠母粉500g水牛角粉250g 栀子250g 板蓝根2000g 金银花提取物50g制备粉针剂的详细工艺步聚如下1、药物的提取和水解处理①栀子提取液的制备按处方量称取栀子，加6倍量水煮沸1小时，过滤，滤渣再加4倍量水，煮提半小时，过滤，滤液合并，加热浓缩至原料重量相当的体积，放冷后在搅拌下加入浓乙醇，使含醇量达60％，冷藏2～3小天，抽滤，取澄清滤液，沉淀用60％冷乙醇洗涤，合并洗液和滤液，减压回收乙醇，超速离心10000转/分钟，冷藏24小时后，过滤得澄清栀子提取液，冷藏放置供配液用；②板蓝根提取液的制备按处方量称取板蓝根饮片，加入6～7倍量水，煮沸1小时，过滤，滤渣再加入4～5倍量水，煮沸半小时，滤取提取液，弃去药渣；合并滤液，加热使药液浓缩至原料重量相当的体积时，放冷，在搅拌下加入浓乙醇，至含醇量达60％，冷藏2～3天，过滤，滤液减压回收乙醇，浓缩液冷藏放置24小时，过滤，得澄清浓缩液；取浓缩液在搅拌下滴加氨水，充分搅拌，使pH值调至8.5～9.0，冷藏放置24小时，勿让氨气挥散，以纸浆饼抽滤，滤液在水浴上加热，在不断搅拌下除氨至氨味消失，至pH到5.5～6.0时，冷藏放置，供配液用；③金银花提取物的提取称取金银花置煮提锅中，加入15倍水，微沸煮提1小时，过滤，药渣加10倍量水，煮提半小时，过滤，弃去药渣；合并两次滤液，加热浓缩至原体积的1/8～1/9时，取出用20％石灰乳调节pH为12，滤取沉淀物；取沉淀物于容器中，在搅拌下加入沉淀物2～3倍量95％乙醇，用50％硫酸调pH＝3～4，充分搅拌后，过滤，滤液用40％氢氧化钠中和，调pH＝6.5～7，过滤，滤液回收乙醇，超速离心10000转/分钟，再浓缩至稠膏状，置干燥箱中80℃烘干，得棕色提取物；放干燥器中保存备用；④按处方量称取水牛角粉，置烧杯中，加入8倍量4N氢氧化钠Ba(OH)2热溶液，加热至沸，不断搅拌，进行水解6～8小时，待水牛角粉全部被水解成无褐色颗粒为止；放温至40～50℃时，倾取上清液，过滤，滤渣用少量热水洗1～2次，收取所有溶液，放置备用；⑤按处方量，称取珍珠母粉，置烧瓶中，加入6～8倍量4N硫酸溶液，加热至沸，水解6～8小时，待珍珠母粉末由灰色转为黄色沉淀物(CaSO4↓)，停止加热，放温至40～50℃，过滤，滤渣用少量热水洗涤3次，洗液与滤液合并，放冷后有白色针状结晶析出，再过滤除掉，得淡黄色透明溶液；中和除去硫酸钡(BaSO4)等杂质取水牛角粉水解液，在搅拌下加入到珍珠母水解液中，全部水牛角水解液加完后，如混合液过酸，再补加适量Ba(OH)2固体，搅拌溶解调pH值为4；放置使沉淀下沉，超滤10000分子量，滤取混和水解液，其中用10％H2SO4液检查Ba2+，应呈阴性，再用10％NaOH液调Ph＝6～7，抽滤，得淡黄色澄清液；混合水解液浓缩与醇处理将澄清的混合水解液置蒸发皿内，加热蒸发浓缩，至相当原料总量2～3倍量时，放冷；在搅拌下加入浓乙醇，使含醇量达60％，冷藏24小时，过滤，减压回收乙醇至近无醇味止；放出冷藏供配液用；2、注射液的配制(1)提取药液的混合取水牛角和珍珠母混合提取液，在搅拌下加入板蓝根提取液；再加入栀子提取液；混合均匀，调节pH6～7，抽滤，得澄明的橙红色溶液A；(2)牛胆酸和猪胆酸的溶解取用固体NaOH饱和的95％乙醇适量，搅拌下逐渐撒入牛胆酸细粉，调pH8.5～9.0，使其全部溶解；合并两个胆酸钠溶液，加入到A液中；(3)混合药液的醇处理取水牛角等混合药液，加入95％乙醇使含醇量达70％，调节pH6.5～7.0，冷藏24小时，过滤，滤液减压回收乙醇至无醇味；(4)黄芩素和金银花提取物处理与溶解取适量注射用水，用10％NaOH调pH至8左右，在搅拌下撒入黄芩素细粉，使全部溶解后，调pH至7左右；取金银花提取物，加入少量注射用水，用95％乙醇调含醇量达80％，冷藏24小时，抽滤，沉淀用80％乙醇洗涤，合并洗液与滤液，减压回收乙醇至无醇味，继续浓缩得金黄色稠膏；用含黄芩素的溶液溶解精制的金银花提取液，并入混合药液中，得总混合药液；(5)总混合药液的处理量取混合药液，补加注射用水至2000ml，调节pH6.5～7.0，加入0.2％活性炭，水浴煮沸1小时，放温后过滤，滤液冷藏放置过夜，过滤，滤液用沸水浴加热半小时，再冷藏过夜，用0.2μm滤膜超滤，得澄明的橘红色药液，pH值应为6.5～7.0；分装成2000瓶，每瓶1ml，相当生药1.6g，冷冻干燥即得。
中和除去硫酸钡(BaSO4)等杂质取水牛角粉水解液，在搅拌下加入到珍珠母水解液中，全部水牛角水解液加完后，如混合液过酸，再补加适量Ba(OH)2固体，搅拌溶解调pH值为4；放置使沉淀下沉，超滤10000分子量，滤取混和水解液，其中用10％H2SO4液检查Ba2+，应呈阴性，再用10％NaOH液调Ph＝6～7，抽滤，得淡黄色澄清液；混合水解液浓缩与醇处理将澄清的混合水解液置蒸发皿内，加热蒸发浓缩，至相当原料总量2～3倍量时，放冷；在搅拌下加入浓乙醇，使含醇量达60％，冷藏24小时，过滤，减压回收乙醇至近无醇味止；放出冷藏供配液用；2、注射液的配制(1)提取药液的混合取水牛角和珍珠母混合提取液，在搅拌下加入板蓝根提取液；再加入栀子提取液；混合均匀，调节pH6～7，抽滤，得澄明的橙红色溶液A；(2)牛胆酸和猪胆酸的溶解取用固体NaOH饱和的95％乙醇适量，搅拌下逐渐撒入牛胆酸细粉，调pH8.5～9.0，使其全部溶解；合并两个胆酸钠溶液，加入到A液中；(3)混合药液的醇处理取水牛角等混合药液，加入95％乙醇使含醇量达70％，调节pH6.5～7.0，冷藏24小时，过滤，滤液减压回收乙醇至无醇味；(4)黄芩素和金银花提取物处理与溶解取适量注射用水，用10％NaOH调pH至8左右，在搅拌下撒入黄芩素细粉，使全部溶解后，调pH至7左右；取金银花提取物，加入少量注射用水，用95％乙醇调含醇量达80％，冷藏24小时，抽滤，沉淀用80％乙醇洗涤，合并洗液与滤液，减压回收乙醇至无醇味，继续浓缩得金黄色稠膏；用含黄芩素的溶液溶解精制的金银花提取液，并入混合药液中，得总混合药液；(5)总混合药液的处理量取混合药液，补加注射用水至2000ml，调节pH6.5～7.0，加入0.2％活性炭，水浴煮沸1小时，放温后过滤，滤液冷藏放置过夜，过滤，滤液用沸水浴加热半小时，再冷藏过夜，用0.5μm滤膜超滤，得澄明的橘红色药液，pH值应为6.5～7.0；分装成2000瓶，每瓶1ml，相当生药1.6g即得。
用含黄芩素的溶液溶解精制的金银花提取液，并入混合药液中，得总混合药液；(5)总混合药液的处理量取混合药液，补加注射用水至2000ml，调节pH6.5～7.0，加入0.2％活性炭，水浴煮沸1小时，放温后过滤，滤液冷藏放置过夜，过滤，滤液用沸水浴加热半小时，再冷藏过夜，用0.8μm滤膜超滤，得澄明的橘红色药液，pH值应为6.5～7.0；分装成2000瓶，每瓶1ml，相当生药1.6g，冷冻干燥即得。
实施例4清开灵注射液或注射用粉针剂的质量控制方法鉴别a.取本品1瓶加5ml注射用水溶解，取0.5ml加新配制的糠醛溶液(1→10ml)1ml、硫酸溶液(取硫酸50ml，加水65ml混合)10ml，混匀，在70℃水浴中加热10分钟，溶液显灰紫色；b.取本品1瓶加5ml甲醇溶解，滤过，滤液减压浓缩至1ml，作为供试品溶液，称取栀子药材0.5g，加甲醇10ml浸提过夜，滤过，滤液浓缩后的残留物加甲醇溶至2ml得栀子药材溶液；再称取栀子甙2mg加甲醇溶至1ml作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254预制板上，以10∶2∶1的乙酸乙酯-无水乙醇-冰醋酸展开，晾干，喷以1％香夹兰醛-浓硫酸溶液，105℃烘5分钟，供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上显有相同颜色斑点；含量测定a.黄芩甙，取清开灵粉针剂样品3mg左右，精密称定，置5ml容量瓶中，加甲醇溶至刻度，孔径为0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试溶液；另取黄芩甙对照品，精密称定，加甲醇溶解制成每1ml含50μg的溶液，作为对照品溶液；照高效液相色谱法(《中国药典》1995年版一部附录VI D)测定；分别精密吸取黄芩甙对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，流动相用28∶72乙腈-0.025M磷酸，检测波长为276nm，测定峰面积积分值，以外标法计算即得；本品含黄芩甙(C21H18011)应为标示量的90.0～110.0％；b.胆酸、猪去氧胆酸对照品溶液制备，精密称取胆酸2mg，置2ml容量瓶中，加35∶65乙腈-0.025M磷酸盐缓冲液pH3.0溶至刻度；精密称取猪去氧胆酸2mg，置2ml容量瓶中，加35∶65乙腈-0.025M磷酸盐缓冲液pH3.0溶至刻度；供试液制备精密称取清开灵粉针剂样品20mg置2ml容量瓶中，加35∶65乙腈-0.025M磷酸盐缓冲液pH3.0溶至刻度，微孔滤膜过滤，得供试液；照高效液相色谱法《中国药典》一部附录VI D测定；分别精密吸取胆酸、猪去氧胆酸对照品溶液与供试液各10μl，注入高效液相色谱仪，色谱柱C18ODS柱，流动相用35∶65乙腈-0.025M磷酸盐pH3.0，流速1.0ml/min，检测波长为205nm，测定胆酸、猪去氧胆酸峰面积积分值，以外标法计算；本品含胆酸、猪去氧胆酸应为标示量的90.0％～110.0％；c.栀子甙对照品溶液制备，精密称取栀子甙标准品1mg，置2ml容量瓶中，加30∶70甲醇-水溶至刻度；供试液制备精密称取清开灵粉针剂样品5mg置2ml容量瓶中，加30∶70甲醇-水溶至刻度，微孔滤膜过滤，得供试液；照高效液相色谱法《中国药典》一部附录VI D测定；分别精密吸取栀子甙对照品溶液与供试液各10μl，注入高效液相色谱仪，色谱柱C18ODS柱，流动相用30∶70甲醇-水，流速1.0ml/min，检测波长为237nm，测定栀子甙峰面积积分值，以外标法计算；本品含栀子甙不得少于1.52％；d.绿原酸对照品溶液制备，精密称取绿原酸1mg置10ml容量瓶中，加甲醇溶至刻度；供试液制备精密称取样品20mg，置2ml容量瓶中，加甲醇溶至刻度，微孔滤膜过滤，得供试液；照高效液相色谱法《中国药典》一部附录VI D测定；分别精密吸取绿原酸对照品溶液与供试液各10μl，注入高效液相色谱仪，色谱柱C18ODS柱，流动相用10∶90乙腈-0.025M磷酸盐，流速1.0ml/min，检测波长为326nm，测定绿原酸峰面积积分值，以外标法计算；本品含绿原酸不得少于0.5％；e.含氮量，精密称取本品2mg，照氮测定法(《中国药典》1995年版一部附录IX L第二法)测定，即得，本品含氮(N)应为标示量的90.0～120.0％；实施例5本发明注射液或注射粉针剂的鉴别方法鉴别a.取清开灵粉针剂1瓶加5ml注射用水溶解或清开灵注射液5ml，取0.5ml加新配制的糠醛溶液(1→10ml)1ml、硫酸溶液(取硫酸50ml，加水65ml混合)10ml，混匀，在70℃水浴中加热10分钟，溶液显灰紫色；b.取清开灵粉针剂1瓶力5ml甲醇溶解，滤过，滤液减压浓缩至1ml，作为供试品溶液，称取栀子药材0.5g，加甲醇10ml浸提过夜，滤过，滤液浓缩后的残留物加甲醇溶至2ml得栀子药材溶液；再称取栀子甙2mg加甲醇溶至1ml作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254预制板上，以10∶2∶1的乙酸乙酯-无水乙醇-冰醋酸展开，晾干，喷以1％香夹兰醛-浓硫酸溶液，105℃烘5分钟，供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上显有相同颜色斑点；含量测定a.黄芩甙，取清开灵粉针剂3mg左右，精密称定，置5ml容量瓶中，加甲醇溶至刻度，孔径为0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试溶液；另取黄芩甙对照品，精密称定，加甲醇溶解制成每1ml含50μg的溶液，作为对照品溶液；照高效液相色谱法(《中国药典》1995年版一部附录VI D)测定；分别精密吸取黄芩甙对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，流动相用30∶70乙腈-0.025M磷酸，检测波长为276nm，测定峰面积积分值，以外标法计算即得；本品含黄芩甙(C21H18O11)应为标示量的90.0～110.0％；b.胆酸、猪去氧胆酸对照品溶液制备，精密称取胆酸2mg，置2ml容量瓶中，加35∶65乙腈-0.025M磷酸盐缓冲液pH3.0溶至刻度；精密称取猪去氧胆酸2mg，置2ml容量瓶中，加35∶65乙腈-0.025M磷酸盐缓冲液pH 3.0溶至刻度；供试液制备精密称取本品20mg置2ml容量瓶中，加35∶65乙腈-0.025M磷酸盐缓冲液pH3.0溶至刻度，微孔滤膜过滤，得供试液；照高效液相色谱法《中国药典》一部附录VI D测定；分别精密吸取胆酸、猪去氧胆酸对照品溶液与供试液各10μl，注入高效液相色谱仪，色谱柱C18ODS柱，流动相用38∶62乙腈-0.025 M磷酸盐pH3.0，流速1.0ml/min，检测波长为205nm，测定胆酸、猪去氧胆酸峰面积积分值，以外标法计算；本品含胆酸、猪去氧胆酸应为标示量的90.0％～110.0％；c.栀子甙对照品溶液制备，精密称取栀子甙标准品1mg，置2ml容量瓶中，加30∶70甲醇-水溶至刻度；供试液制备精密称取清开灵粉针剂5mg置2ml容量瓶中，加30∶70甲醇-水溶至刻度，微孔滤膜过滤，得供试液；照高效液相色谱法《中国药典》一部附录VI D测定；分别精密吸取栀子甙对照品溶液与供试液各10μl，注入高效液相色谱仪，色谱柱C18ODS柱，流动相用35∶65甲醇-水，流速1.0ml/min，检测波长为237nm，测定栀子甙峰面积积分值，以外标法计算；本品含栀子甙不得少于1.52％；d.绿原酸对照品溶液制备，精密称取绿原酸1mg置10ml容量瓶中，加甲醇溶至刻度；供试液制备精密称取清开灵粉针剂样品20mg，置2ml容量瓶中，加甲醇溶至刻度，微孔滤膜过滤，得供试液；照高效液相色谱法《中国药典》一部附录VI D测定；分别精密吸取绿原酸对照品溶液与供试液各10μl，注入高效液相色谱仪，色谱柱C18ODS柱，流动相用15∶85乙腈-0.025 M磷酸盐，流速1.0ml/min，检测波长为326nm，测定绿原酸峰面积积分值，以外标法计算；本品含绿原酸不得少于0.5％；e.含氮量，
精密称取清开灵粉针剂样品2mg，照氮测定法(《中国药典》1995年版一部附录IX L第二法)测定，即得，本品含氮(N)应为标示量的90.0～120.0％；实施例6本发明注射液或注射用粉针剂的质量控制方法鉴别a.取清开灵粉针剂1瓶加5ml注射用水溶解或取清开灵注射液5ml，取0.5ml加新配制的糠醛溶液(1→10ml)1ml、硫酸溶液(取硫酸50ml，加水65ml混合)10ml，混匀，在70℃水浴中加热10分钟，溶液显灰紫色；b.取本品1瓶加5ml甲醇溶解，滤过，滤液减压浓缩至1ml，作为供试品溶液，称取栀子药材0.5g，加甲醇10ml浸提过夜，滤过，滤液浓缩后的残留物加甲醇溶至2ml得栀子药材溶液；再称取栀子甙2mg加甲醇溶至1ml作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254预制板上，以10∶2∶1的乙酸乙酯-无水乙醇-冰醋酸展开，晾干，喷以1％香夹兰醛-浓硫酸溶液，105℃烘5分钟，供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上显有相同颜色斑点；含量测定a黄芩甙，取清开灵粉针剂样品3mg左右，精密称定，置5ml容量瓶中，加甲醇溶至刻度，孔径为0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试溶液；另取黄芩甙对照品，精密称定，加甲醇溶解制成每1ml含50μg的溶液，作为对照品溶液；照高效液相色谱法(《中国药典》1995年版一部附录VI D)测定；分别精密吸取黄芩甙对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，流动相用40∶60乙腈-0.025M磷酸，检测波长为276nm，测定峰面积积分值，以外标法计算即得；本品含黄芩甙(C21H18O11)应为标示量的90.0～110.0％；b.胆酸、猪去氧胆酸对照品溶液制备，精密称取胆酸2mg，置2ml容量瓶中，加35∶65乙腈-0.025M磷酸盐缓冲液pH3.0溶至刻度；精密称取猪去氧胆酸2mg，置2ml容量瓶中，加35∶65乙腈-0.025M磷酸盐缓冲液pH3.0溶至刻度；供试液制备精密称取本品20mg置2ml容量瓶中，加35∶65乙腈-0.025M磷酸盐缓冲液pH3.0溶至刻度，微孔滤膜过滤，得供试液；照高效液相色谱法《中国药典》一部附录VI D测定；分别精密吸取胆酸、猪去氧胆酸对照品溶液与供试液各10μl，注入高效液相色谱仪，色谱柱C18ODS柱，流动相用30∶70乙腈-0.025 M磷酸盐pH3.0，流速1.0ml/min，检测波长为205nm，测定胆酸、猪去氧胆酸峰面积积分值，以外标法计算；本品含胆酸、猪去氧胆酸应为标示量的90.0％～110.0％；c.栀子甙对照品溶液制备，精密称取栀子甙标准品1mg，置2ml容量瓶中，加30∶70甲醇-水溶至刻度；供试液制备精密称取清开灵粉针剂样品5mg置2ml容量瓶中，加30∶70甲醇-水溶至刻度，微孔滤膜过滤，得供试液；照高效液相色谱法《中国药典》一部附录VI D测定；分别精密吸取栀子甙对照品溶液与供试液各10μl，注入高效液相色谱仪，色谱柱C18ODS柱，流动相用20∶80甲醇-水，流速1.0ml/min，检测波长为237nm，测定栀子甙峰面积积分值，以外标法计算；本品含栀子甙不得少于1.52％；d.绿原酸对照品溶液制备，精密称取绿原酸1mg置10ml容量瓶中，加甲醇溶至刻度；供试液制备精密称取样品20mg，置2ml容量瓶中，加甲醇溶至刻度，微孔滤膜过滤，得供试液；照高效液相色谱法《中国药典》一部附录VI D测定；分别精密吸取绿原酸对照品溶液与供试液各10μl，注入高效液相色谱仪，色谱柱C18ODS柱，流动相用18∶82乙腈-0.025 M磷酸盐，流速1.0ml/min，检测波长为326nm，测定绿原酸峰面积积分值，以外标法计算；本品含绿原酸不得少于0.5％；e.含氮量，精密称取清开灵粉针剂样品2mg，照氮测定法(《中国药典》1995年版一部附录IX L第二法)测定，即得，本品含氮(N)应为标示量的90.0～120.0％。
权利要求
1.一种清开灵注射液或注射用粉针剂的制备方法，它是将胆酸16.25g、猪去氧胆酸18.75g、黄芩甙25g、珍珠母粉250g、水牛角粉125g、栀子125g板蓝根1000g、金银花100g为主要原料，将栀子、板蓝根和金银花分别进行提取制得提取液，然后将水牛角制得水解液，将珍珠母粉制得水解液，其特征在于在分别制备栀子、板蓝根和金银花提取液中将提取液都进行了高速离心，然后取珍珠母粉水解液，搅拌下加入水牛角粉水解液，用氢氧化钡溶液调节PH值至4，静置，滤取上清液检查钡离子呈阴性，用氢氧化钠溶液调节PH值至6～7，滤过，滤液浓缩至20℃测相对密度为1.05的清膏，放冷，加入乙醇，使含醇量达70％，冷藏，滤过，减压回收乙醇至无醇味，放冷，加入乙醇，使含醇量达80％，冷藏，滤过，减压回收乙醇，滤过，将浓缩液超滤，超滤液冷置，滤过，即得水牛角和珍珠母粉混合水解液，备用；取猪去氧胆酸粉、黄芩甙粉、胆酸粉分别加以氢氧化钠溶液调节PH值至8的注射用水使溶解，混匀；加入上述药材提取液中，搅匀，调节PH值至7，得混合液，加注射用水至全量，调节PH值至7；将混合液超滤，滤液就得注射液，或者冷冻干燥或喷雾干燥，即得注射用粉针剂。
2.按照权利要求1所述的方法，其中高速离心的速度为10000-20000转/分钟范围内。
3.照权利要求2所述的方法，其中高速离心的速度为16000转/分钟。
4.按照权利要求1-3中任何一项所述的方法，其中超滤用0.2-0.8μm的无菌滤膜。
5.按照权利要求4所述的方法，其中超滤用0.22μm的无菌滤膜。
6.清开灵注射液或注射用粉针剂中黄芩甙的质量控制方法，它包括将黄芩甙加甲醇溶解，过滤，得黄芩甙溶液，备用；用高效液相色谱仪，以20～45∶80～55比例的乙腈或甲醇-0.3～0.6％磷酸或冰乙酸为流动相，测定清开灵注射液或注射用粉针剂，其中含黄芩甙应为标示量的90.0～110.0％。
7.清开灵注射液或注射用粉针剂中胆酸和猪去氧胆酸的质量控制方法，它包括将胆酸加入乙腈-磷酸盐缓冲液系统溶解，过滤，得供试液，备用；用高效液相色谱仪，色谱柱为C18或C4或C8柱，流动相用40～85∶60～15∶0.1～0.5比例的甲醇或乙腈-水-冰醋酸或磷酸测定清开灵注射液或注射用粉针剂，含胆酸、猪去氧胆酸应为标示量的90.0％～110.0％。
8.清开灵注射液或注射用粉针剂中栀子甙的质量控制方法，它包括在栀子甙中加甲醇-水溶解，过滤，得供试液，备用；用高效液相色谱仪，以15～40∶85～60比例的甲醇或乙腈-水为流动相，测定清开灵注射液或注射用粉针剂的产品，含栀子甙不得少于1.52％。
9.清开灵注射液或注射用粉针剂中绿原酸的质量控制方法，它包括在绿原酸中加甲醇溶解，过滤，得供试液，备用；用高效液相色谱仪，以8～20∶92～80比例的乙腈或甲醇-0.2～0.6％磷酸为流动相，测定清开灵注射液或注射用粉针剂的产品，含绿原酸不得少于0.5％。
10.清开灵注射液或注射用粉针剂的鉴别方法，它包括取清开灵注射液或注射用粉针剂样品加1-10ml新制的糖醛溶液，与1-10ml硫酸溶液混匀，水浴加热，溶液呈灰紫色；同时取清开灵注射液或注射用粉针剂样滤过，滤液浓缩的残留物加甲醇，得栀子药材溶液；取栀子甙加甲醇溶解，得对照品溶液试液；照薄层色谱法，吸取三种溶液，点于GF254预制版上，以8-12∶1-3∶0.5-1.5的乙酸乙脂-无水乙醇-冰醋酸展开喷以香夹兰醛-浓硫酸溶液，供试品色谱中在与对照品色谱相应位置上显有相同颜色斑点。
全文摘要
本发明公开了一种清开灵注射液或注射用粉针剂的制备方法，该方法是在原有清开灵注射液或注射粉针剂的制备工艺基础上进一步加以改进，在栀子、板蓝根、金银花的各提取液制备过程中使用了高速离心的技术，然后在合并提取液后使用了超滤技术制备而成。本发明方法制备的清开灵注射液或注射用粉针剂产品稳定性更好，有效期更长。本发明还公开了清开灵注射液或注射用粉针剂中黄芩甙、胆酸和猪去氧胆酸、栀子甙、绿原酸的质量控制方法。本发明也公开了清开灵注射液或注射用粉针剂的鉴别方法。
文档编号A61K9/08GK1440773SQ0310942
公开日2003年9月10日 申请日期2003年4月10日 优先权日2003年4月10日
发明者蔡剑前 申请人:于文勇