专利名称：由偶蹄哺乳动物获得抗肿瘤物质的方法
技术领域：
本发明涉及由患有造白细胞组织增生的偶蹄(even-toe hoofed)哺乳动物(偶蹄目动物)获得抗肿瘤物质的方法。
国际公开WO 00/40256涉及得自患有急性白血病的患者的血浆对不同类型肿瘤的抑肿瘤作用。在说明书中公开了若干实验，其中与对照组相比，所应用的物质导致20％的改善。这种改善构成了可被视为具有显著性的低限。
在本人的匈牙利专利申请P 0002587中已经确认由患有造白细胞组织增生的偶蹄哺乳动物(偶蹄目动物)的不含脂质的血浆部分，可获得较得自白血病血液的血浆而言基本上更有效的抑肿瘤作用，并且公开了获得具有所述作用的血浆部分的方法。
所述作用是通过引用的专利申请中所公开的、对患有不同类型肿瘤的动物进行的实验证实。
在要求所引用匈牙利专利申请的优先权的公开的国际专利申请WO02/07739中，公开了其它用于验证抑肿瘤作用的动物实验，其涉及其它肿瘤类型，且证明了以不同方式(肌内、皮下、腹膜内和口服)施用活性物质情况下的所述作用。
由于显著的抑肿瘤作用，获得活性物质的制备方法和效率均具有重要的意义。除了由动物血液获得所述物质的可能性外，人们必须探寻所有可获得相同物质的其它方法。
本发明的目的是提供获得所引用专利申请中所述的活性物质的更有效的方法。
本人已经确认在怀孕期间动物血液中的抑肿瘤物质(如免疫抗体)的浓度处于变化之中，此外，分娩后所述物质立即出现在乳汁中。在分娩后首次哺乳和数次随后的哺乳中提供的乳汁称为初乳。
在动物机体中，免疫系统确保新生儿通过在最初几个哺乳期中吮吸初乳以浓缩方式获得授乳动物(suckler)免疫系统中的有用抗体，凭借这些抗体其可抵抗外来感染。因此，在分娩后的一段时间内，授乳动物血液中的抗体浓度将下降，这些物质将浓缩在初乳中。在哺乳期的最初几周可观察到该现象。
根据本发明的第一方面，利用患有造白细胞组织增生的偶蹄哺乳动物(偶蹄目动物)主要是牛(母牛)的初乳获得具有抑肿瘤作用的活性物质。
根据本发明的第二方面，利用了如下事实在孕期中期和后三分之一期间，怀孕动物血液中的抗体浓度升高，可由处于该孕期阶段的供体怀孕动物的血液中获得活性物质。最优选的动物是牛和羊。可利用的时期结束于孕期的最后几天以及哺乳期的前几天，因为在此期间血中的抗体水平下降并在初乳中升高至高水平。
活性物质是通过使用与以上提及专利申请中所公开的方法类似的分离方法由初乳中获得，其中起始物质为动物血浆。
所述分离方法优选包括以下步骤1)在振摇机中，将初乳与等体积的异丙醇和氯仿的1∶1混合物于室温下振摇8小时；2)将所述物质在冷却状态下以10000转/分钟的速度离心20分钟；3)分离漂浮的上层和中间的渣壳(crust)层(倾出有机相)，将剩余的物质加入氯仿和苯甲醇的1∶1混合物进行稀释，以达到初始体积并用振摇机振摇8小时；4)将所述物质在+2至4℃下贮存10小时；5)如步骤2将所述物质离心并倾出有机相；6)将漂浮的上层深度冷冻并冻干，并用生理盐水溶液调至所要求的浓度，将该产品用于观察对肿瘤小鼠的功效并已证明其具有生物学活性；7)将(步骤3中的)中间的果冻样渣壳层冷冻并冻干，并如步骤6继续处理，将如此获得的物质进行生物学试验，其对肿瘤小鼠有效；8)将步骤6和7中分别获得的样品合并，该物质视为终产物。
通过使用相同剂量的如此分离的活性物质，重复进行了引用的匈牙利专利申请和国际专利申请中所公开的动物实验，但是全部经口(口服)给予活性物质。
对于所有观察的肿瘤类型而言，所述实验得到了与以往用得自血浆的活性物质进行的实验同样良好的结果，这是可以理解的，因为活性物质基本相同。
通过使用本发明的方法，可获得实质上更大量的物质，如同自相同动物的血液获得该物质一样。此外，利用初乳不会引起对动物的伤害。
为了阐述定量比例，应注意的是具有平均重量的母牛在分娩后的最初阶段每天可提供约20升初乳，该阶段可持续甚至达3-4周。
权利要求
1.由患有造白细胞组织增生的偶蹄哺乳动物(偶蹄目动物)获得抗肿瘤物质的方法，其中所述物质得自动物的不含脂质的血浆部分，其特征在于所述血液取自处于第二或第三孕期至最多分娩前一周初时的怀孕的雌性供体动物。
2.权利要求1所要求的方法，其中的供体动物为牛或羊。
3.由患有造白细胞组织增生的偶蹄哺乳动物(偶蹄目动物)获得抗肿瘤物质的方法，其特征在于所述物质取自动物的初乳。
4.权利要求3所要求的方法，包括以下步骤a)将初乳与等体积的异丙醇和氯仿的1∶1混合物于室温下振摇预定的一段时间；b)将所述物质在冷却状态下以至少5000转/分钟的速度再离心预定的一段时间；c)分离漂浮的上层和中间的渣壳层，将剩余的物质加入氯仿和苯甲醇混合物进行稀释，以达到初始体积并振摇给定的一段时间；d)将所述物质在+2至4℃下贮存；e)如步骤b)将所述物质离心并倾出有机相；f)将漂浮的上层深度冷冻并冻干，并用生理盐水溶液稀释。
5.权利要求4所要求的方法，其中将步骤c)中分离的中间的果冻样渣壳层冷冻并冻干，然后用生理盐水溶液稀释。
全文摘要
本发明涉及由患有造白细胞组织增生的偶蹄哺乳动物(偶蹄目动物)获得抗肿瘤物质的方法。根据第一种选择，所述物质由动物的不含脂质的血浆部分获得，所述血液取自处于第二或第三孕期至最多分娩前一周初时的怀孕的雌性供体动物。根据第二种选择，所述物质由雌性供体动物、优选牛或羊的初乳获得。
文档编号A61K35/16GK1615142SQ03802264
公开日2005年5月11日 申请日期2003年1月15日 优先权日2002年1月15日
发明者安德拉什·贝尔塔 申请人:安德拉什·贝尔塔