专利名称：维生素k的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，确切地说它是一种维生素K1乳剂及其冻干乳剂及制备方法。
背景技术：
维生素K1其化学名称为2-甲基-3-(3，7，11，15-四甲基-2-十六碳烯基)-1，4-萘二酮。本品为维生素类药，是肝脏合成因子II、VII、IX、X所必须的物质。维生素K缺乏可引起这些凝血因子合成障碍或异常，临床可见出血倾向和凝血酶原时间延长。维生素K与血液凝固密切相关，缺乏时，可引起肝脏对多种凝血因子的合成障碍，引起机体凝血时间延长和出血倾向，及时补充维生素K可使凝血功能恢复。维生素K1还有直接的护肝与消炎作用，对肝炎所致的黄疸和ALT升高者，能使胆红素水平下降，并达到降酶效果。临床常用维生素K来治疗肝硬化引起的消化道出血。常用脂溶性维生素K1，肌注或静脉点滴，每次10毫克，每日2次。适应症用于维生素K缺乏引起的出血，如梗阻性黄疸、胆瘘、慢性腹泻等所致出血，香豆素类、水杨酸钠等所致的低凝血酶原血症，新生儿出血以及长期应用广谱抗生素所致的体内维生素K缺乏。
维生素K1注射液收载于《中国药典2000年版二部》中，所用增溶剂为吐温-80，由于吐温-80是聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯，该物质具有溶血作用，并且容易发生氧化，氧化产物会造成过敏。另外，维生素K1水中溶解性很差，所制成的注射液在低温放置易发生浑浊，常温下难以恢复，需要加热，才能重新溶解。由于吐温-80中的聚氧乙烯以醚键方式与失水山梨醇结合，体内降解缓慢，抗凝血作用也缓慢，不利于应急治疗。
另外，新生儿易患迟发性维生素K缺乏症，临床上易误诊、发病急、病情重、合并有颅内出血时预后不良，病死率高达18％～50％，且多数遗留永久性神经系统后遗症。本病的治疗强调静脉注射维生素K1与输血并重。并主张3个月内小婴儿坚持用药预防的原则。目前主要的预防措施有(1)正常足月新生儿、早产儿、低出生体重儿，出生后都应常规肌肉注射维生素K10.5～1mg，连用3天。口服法无效。(2)在生后1～2周、满月时及3个月时各注射维生素K11次，可有效预防本病所致的颅内出血。(3)新生儿后期乳母常规补充维生素K，并适量进食绿叶蔬菜、水果、动物肝脏、黄豆、蛋黄等营养食品，可提高母乳中维生素K含量。(4)长期腹泻或患肝胆疾病的小婴儿，应每周肌注维生素K15mg。由于现有注射液中吐温-80的安全性问题，很有必要开发一种质量更高、安全性更好的K1注射剂。
现有的乳剂注射液中的油浓度为10％、20％或30％，通过大量试验发现，油浓度越高，药效的发挥越慢，如以10％、20％或30％为溶媒制备的维生素K1注射液，在同等剂量下，小鼠的断尾凝血时间明显长于低浓度油注射液的凝血时间，不利于临床治疗应用。
发明内容
本发明的目的是提供一种维生素K1乳剂及其冻干乳剂，并提供一种工艺简单的制备方法，它能够提高药物稳定性、安全性，加快药物疗效的发挥，利于应急治疗。
它是将含有效剂量的维生素K1作为药物，并含有油相、乳化剂、稳定剂、渗透压调节剂、pH调节剂等药用辅料，冻干乳剂中含有冻干保护剂，其中药油＝1∶0～1∶50。
其处方和工艺如下注射用乳剂每1-10ml药液中含有维生素K12～100mg注射用油 10～500mg乳化剂 适量稳定剂 适量甘油 适量pH调节剂 适量注射用油的最佳应用剂量为50-300mg；可以是任何种类的植物油，如豆油、茶油、橄榄油、红花油等中的一种或几种混合物。粒度为50nm-1000nm。
乳化剂磷脂(大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂)、泊洛沙姆、HS15(聚乙二醇12-羟基硬脂酸酯、polyethylene glycol 660 hydroxystearate as a nonionic solubilizerfor injection solutions)、维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(生育酚聚乙二醇琥珀酸酯TPGS)等中的一种或几种混合物，用量为1-200mg。
稳定剂氮气、无水亚硫酸(氢)钠、硫代硫酸钠、焦亚硫酸钠、维生素C(Vc)、二丁基羟基甲苯、α-生育酚、α-醋酸生育酚、氢醌等中的一种或几种混合物，用量为1-100mg。
pH调节剂盐酸、氢氧化钠、醋酸钠、醋酸、磷酸盐、柠檬酸等中的一种或几种混合物，调节pH为3-9。
防腐剂苯甲醇，用量为0-20mg。
注射用冻干乳剂每1-10ml药液中含有维生素K12～50mg注射用油 0-50mg乳化剂适量稳定剂适量pH调节剂 适量防腐剂适量冻干保护剂适量注射用油的最佳应用剂量为0-50mg；可以是任何种类的植物油，如豆油、茶油、橄榄油、红花油等中的一种或几种混合物。粒度为10nm-1000nm。
乳化剂、稳定剂、pH调节剂等与乳剂要求相同。
防腐剂尼泊金酯类，用量为0-10mg。
冻干保护剂葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、蔗糖、海藻糖、右旋糖苷、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等中的一种或几种混合物，冻干保护剂的含量为4％-40％(W/V)。
所制得的冻干乳剂按需要量加水，水合振荡后复原成乳剂，肌肉注射或静脉给药。实验结果显示，本发明制备的乳剂大大提高了维生素K1的稳定性，见“实施例11”。
制备过程如下1、在配制罐中制备油相(药物相)在配制罐中，将注射用油加热至20-90℃(单纯药物时不加油)，加入乳化剂，20～50℃时强烈搅拌至溶解；再降温至20～40℃，在搅拌中加入药物。
2、在配制罐中制备水相将水和甘油在20～90℃下搅拌5min，使之完全混溶。
3、在20～50℃时，将水相加入油相中，强烈搅拌10～30min，形成初乳。
4、将初乳过G3漏斗抽滤，调节pH值到3～9。
5、过均质仪，第一步调节匀化压力至520～600kg/cm2，第二步再调节至100～140kg/cm2(或微射流仪，第一步调节匀化压力至4000-8000psi，第二步再调节至10000-16000psi)，形成乳剂。过微孔滤膜，分装(加入冻干保护剂，进行冷冻干燥，即得冻干乳剂)，灭菌，即得注射用乳剂。
维生素K1的含量测定用HPLC分析HPLC的色谱条件为色谱柱 十八烷基硅烷键合硅胶流动相 无水乙醇检测波长 254nm粒度测定仪本实验中应用PSS.NICOMPTM 380作为测定粒径的仪器。
本发明的优点是显著的提高了维素K1的稳定性和疗效，为广大患者提供了更安全、稳定、有效的制剂。并且工艺简单，易于实现。
下面以实施例加以说明，但不局限于所列实施例实施例1处方组成维生素K10.2g、α-生育酚0.01g、注射用大豆油1g、大豆卵磷脂1.2g、甘油2.2g、0.01g无水亚硫酸氢钠0.01g，共成100ml。
1、在配制设备中，将维生素K10.2g、0.01g α-生育酚溶解于1g注射用大豆油中混合均匀；2、将1.2g的大豆卵磷脂、2.2g的甘油(无水)与适量的注射用水混合均匀，并加入0.01g无水亚硫酸氢钠；3、将2)在搅拌的条件下加入1)中，在20℃时搅拌后得初乳，过G3漏斗抽滤，所得液体通过匀质仪(第一步调节匀化压力至520kg/cm2，第二步再调节至100/cm2)(或微射流仪，第一步调节匀化压力至4000psi，第二步再调节至10000psi)，形成乳剂。将溶液反复匀化，得到均匀的溶液；用氢氧化钠与盐酸调节pH为3.0，制得药液共100ml。过0.45um微孔滤膜，再过0.22um微孔滤膜除菌，100级下无菌分装，每支1ml，充氮气，封口，即得维生素K1注射用乳剂(必要时加入苯甲醇9mg)。粒度为50～500nm。平均粒度236nm实施例2处方组成维生素K11g、注射用橄榄油10g、蛋黄卵磷脂1.2g、甘油2.2g、无水亚硫酸钠0.01g，共成100ml。
方法同“实施例1”
1、配制设备中，将维生素K11.0g溶解于10g注射用橄榄油中混合均匀；2、将1.2g的蛋黄卵磷脂、2.2g的甘油(无水)与适量的注射用水混合均匀，并加入0.01g无水亚硫酸钠；3、将2)在搅拌的条件下加入1)中，在40℃时搅拌后通过匀质仪，将溶液反复匀化(微射流仪，第一步调节匀化压力至8000psi，第二步再调节至16000psi)，得到均匀的溶液；用氢氧化钠与醋酸调节pH为6.0。均质机处理，制得药液共100ml。分装，每支1ml，充氮气，封口，流通蒸汽灭菌30分钟，即得维生素K1注射用乳剂。
粒度为80～1000nm。
实施例3处方组成维生素K11g、α-生育酚0.1g、注射用橄榄油50g、10g的HS15 10g、甘油22g、无水亚硫酸钠0.5g，0.1g维生素C0.1g，共成1000ml。方法同“实施例1”1、制设备中，将维生素K11.0g、0.1gα-生育酚溶解于50g注射用橄榄油中混合均匀；2、将10g的HS15(聚乙二醇12-羟基硬脂酸酯、polyethylene glycol 660hydroxystearate)、22g的甘油(无水)与适量的注射用水混合均匀；加入0.5g无水亚硫酸钠、0.1g维生素C；3、将2)在搅拌的条件下加入1)中，在90℃时搅拌后通过匀质仪，将溶液反复匀化(微射流仪，第一步调节匀化压力至7000psi，第二步再调节至14000psi)，得到均匀的溶液；用氢氧化钠与磷酸调节pH为6.0。均质机处理，制得药液共1000ml。分装，通氮气，每支10ml(10mg)；或2ml(2mg)，流通蒸汽灭菌30分钟，即得维生素K1注射用乳剂。粒度为50～800nm。
实施例4处方组成维生素K11g、α-生育酚0.1g、注射用大豆油10g、蛋黄卵磷脂10g、甘油2.2g、1.0g维生素E聚乙二醇琥珀酸酯1.0g，共成500ml。方法同“实施例1”1、配制设备中，将维生素K11.0g、0.1gα-生育酚溶解于10g注射用大豆油中混合均匀；2、10.0g的蛋黄卵磷脂、1.0g维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(生育酚聚乙二醇琥珀酸酯TPGS)、2.2g的甘油(无水)与适量的注射用水混合均匀；3、将2在搅拌的条件下加入1中，在50℃时搅拌后通过匀质仪，将溶液反复匀化(微射流仪，第一步调节匀化压力至7000psi，第二步再调节至16000psi)，得到均匀的溶液；用氢氧化钠与柠檬酸调节pH为7.0。均质机处理，制得药液共500ml。分装，通氮气，每支5ml(10mg/5ml)；或1ml(2mg/1ml)，流通蒸汽灭菌30分钟，即得维生素K1注射用乳剂。粒度为50～800nm。
实施例5处方组成维生素K11g、α-生育酚0.1g、10g注射用红花油10g、大豆卵磷脂2.0g、1.0g泊洛沙姆F68、甘油2.2g，共成100ml。
方法同“实施例1”1、配制设备中，将维生素K11.0g、0.1gα-生育酚溶解于10g注射用红花油中混合均匀；2、2.0g的大豆卵磷脂、1.0g泊洛沙姆F68、2.2g的甘油(无水)与适量的注射用水混合均匀；3、将2在搅拌的条件下加入1中，在50℃时搅拌后通过匀质仪，将溶液反复匀化(微射流仪，第一步调节匀化压力至6000psi，第二步再调节至14000psi)，得到均匀的溶液；用氢氧化钠与盐酸调节pH为9.0。均质机处理，制得药液共100ml。分装，通氮气，每支2ml(20mg/支)，流通蒸汽灭菌30分钟，即得维生素K1注射用乳剂。粒度为80～900nm。
实施例6处方组成维生素K10.2g、2g的大豆卵磷脂、0.1gα-生育酚，10g蔗糖，总量100ml。
1、.配制设备中，将维生素K11.0g、0.1gα-生育酚混合均匀；2、2g的大豆卵磷脂分散于适量的注射用水，混合均匀；3、将2)在搅拌的条件下加入1)中，在20℃时搅拌后得初乳，过G3漏斗抽滤，所得液体通过匀质仪(微射流仪，第一步调节匀化压力至4000psi，第二步再调节至12000psi)，形成乳剂。将溶液反复匀化，得到均匀的溶液；用氢氧化钠与盐酸调节pH为3.0～4.0，加入10g蔗糖，制得药液共100ml。过0.3um微孔滤膜，分装，每支1ml(10mg)，经冷冻干燥去除水分，得维生素K1冻干乳剂。
4、将制得冻干乳剂按需要量加水，水合振荡后复原成乳剂。粒度10nm～400nm。
实施例7处方组成维生素K11.0g、10g的蛋黄卵磷脂、0.1g无水亚硫酸氢钠，10g甘露醇、2g葡萄糖，总量200ml。
1、配制设备中，加入维生素K11.0g；2、10g的蛋黄卵磷脂分散于适量的注射用水，混合均匀；3、将2在搅拌的条件下加入1中，在40℃时搅拌后得初乳，过G3漏斗抽滤，所得液体通过匀质仪(微射流仪，第一步调节匀化压力至6000psi，第二步再调节至16000psi)，形成乳剂。将溶液反复匀化，得到均匀的溶液；用氢氧化钠与柠檬酸调节pH为5.0～7.0，加入8g甘露醇、4g葡萄糖，制得药液共200ml。过0.22um微孔滤膜，分装，每支2ml(10mg)，经冷冻干燥去除水分，充氮气，得维生素K1冻干乳剂。
4、将制得冻干乳剂按需要量加水，水合振荡后复原成乳剂。粒度10nm～300nm。
实施例8处方组成维生素K11.0g、10g HS15、1g注射用大豆油、0.5g维生素C，50g甘露醇，总量1000ml。
1、制设备中，加入维生素K11.0g、1g注射用大豆油，溶解混匀；2、10g HS15分散于500ml的注射用水，加入0.5g维生素C，混合均匀；3、将2在搅拌的条件下加入1中，在40℃时搅拌后得初乳，过G3漏斗抽滤，所得液体通过匀质仪(微射流仪，第一步调节匀化压力至5000psi，第二步再调节至15000psi)，形成乳剂。将溶液反复匀化，得到均匀的溶液；用氢氧化钠与磷酸调节pH为6.0～8.0，加入50g甘露醇，溶解后加入注射用水至1000ml。过0.22um微孔滤膜，分装，每支2ml(2mg)，经冷冻干燥去除水分，充氮气，得维生素K1冻干乳剂。
4、将制得冻干乳剂按需要量加水，水合振荡后复原成乳剂。粒度10nm～400nm。
实施例9处方组成维生素K11.0g、5g注射用大豆油、2g蛋黄卵磷脂、4g维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(生育酚聚乙二醇琥珀酸酯TPGS)、氮气，山梨醇3g、海藻糖5g，尼泊金乙酯0.01g、总量100ml。
1、配置设备中，加入维生素K11.0g、5g注射用大豆油，溶解混匀；2、2g蛋黄卵磷脂、4g维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(生育酚聚乙二醇琥珀酸酯TPGS)分散于50ml的注射用水，混合均匀；3、将2在搅拌的条件下加入1中，在60℃时搅拌后得初乳，过G3漏斗抽滤，所得液体通过匀质仪(微射流仪，第一步调节匀化压力至5000psi，第二步再调节至15000psi)，形成乳剂。将溶液反复匀化，得到均匀的溶液；用氢氧化钠与盐酸酸调节pH为7.0～9.0，加入山梨醇3g、海藻糖5g，尼泊金乙酯0.01g，溶解后加入注射用水至100ml。过0.22um微孔滤膜，分装，每支2ml，经冷冻干燥去除水分，充氮气，得维生素K1冻干乳剂。
4、将制得冻干乳剂按需要量加水，水合振荡后复原成乳剂。粒度30nm～1000nm。
实施例10处方组成1g维生素K1、4g大豆卵磷脂、0.1g无水亚硫酸钠，6g甘露醇、6g葡萄糖，总量200ml。
1、配制设备中，加入1g维生素K1；2、4g的大豆卵磷脂分散于适量的注射用水，混合均匀；3、将2)在搅拌的条件下加入1)中，在40℃时搅拌后得初乳，过G3漏斗抽滤，所得液体通过匀质仪(微射流仪，第一步调节匀化压力至6000psi，第二步再调节至16000psi)，形成乳剂。将溶液反复匀化，得到均匀的溶液；用氢氧化钠与柠檬酸调节pH为7.0～9.0，加入6g甘露醇、6g葡萄糖，制得药液共200ml。过0.22um微孔滤膜，分装，每支2ml(10mg)，经冷冻干燥去除水分，充氮气，封口，得维生素E冻干乳剂。平均粒度为212nm。
4、将制得冻干乳剂按需要量加水，水合振荡后复原成乳剂。粒度10nm～398nm。平均粒度为206nm。
实施例11不同制剂光照实验结果见表1。
表1药物稳定性试验结果市售注射 实施例 实施例 实施例 实施例实施例液一 二 三 六七0时 100％ 100％ 100％ 100％ 100％ 100％光照10天63.1％93.2％ 92.8％ 93.3％ 97.6％98.8％由此可知，将维生素K1制成乳剂和冻干乳剂后，药物稳定性大大提高。
实施例12对小鼠断尾出血时间的影响。采用小鼠断尾法。取小鼠90只，体重18-22g，雌雄各半，按性别、体重随机分为3组，每组10只，静脉注射给药后1小时，用利剪将小鼠尾3mm处横断，计时，每隔30秒钟用滤纸轻轻吸去断面血滴一次，直至血液自然停止(滤纸吸时无血)为止，计算出出血时间，进行组间比较。结果见表2。
表2、对小鼠断尾出血时间的影响组别 剂量动物(只) 出血时间(min，X±SD)(mg/Kg)生理盐水(NS) 10 7.71±1.02市售注射液 3 10 6.06±0.88*市售注射液 6 10 5.38±0.76*维生素K1脂肪3 10 6.52±0.91*乳剂维生素K1脂肪6 10 5.67±0.87*乳剂实施例1 3 10 4.16±0.53*实施例1 6 10 3.07±0.41**实施例6 3 10 4.03±0.44*实施例6 6 10 3.16±0.41**与NS对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01；与现有的制剂相比，本品凝血时间明显缩短，具有显著性差异，与维生素K1脂肪乳剂(大豆油为10％)比较，实施例1、6的凝血时间也明显缩短，其原因为在脂肪乳剂中，由于大豆油用量为10％，维生素K1释放出来需要一定的时间，造成起效慢的结果。
实施例13治疗华法灵(别名 杀鼠灵Warfarin)的溶血作用华法灵(别名杀鼠灵Warfarin)可与维生素K1相拮抗，由华法灵引起的溶血作用只能用维生素K1，不能用维生素K3。本研究是比较不同维生素K1制剂对华法灵(杀鼠灵Warfarin)破坏血液凝血因子的治疗作用。方法家兔40只，每组5只，经口0.1mg/Kg，给药华法灵后，按2mg/Kg给予不同制剂，测定凝血时间，结果见表3。
表3.不同维生素K1制剂对华法灵破坏血液凝血因子的治疗作用结果组别剂量(mg/Kg)动物(只)出血时间(h，X±SD)NS 2 5 -市售注射液 2 5 11.6±3.6*维生素K1脂肪乳 2 5 7.3±3.3*剂实施例1 2 5 2.7±1.5**实施例4 2 5 4.1±1.5*实施例6 2 5 2.8±1.4*实施例7 2 5 2.9±0.9**实施例8 2 5 2.6±0.7*与市售注射液比较*P＜0.05，**P＜0.01。由此可知，相对于现有的注射液和脂肪乳剂，本制剂具有显著的优势，更利于临床治疗。
权利要求
1.一种维生素K1乳剂及其冻干乳剂，其特征在于含有效剂量的维生素K1作为药物，并含有油相、乳化剂、稳定剂、渗透压调节剂、pH调节剂等药用辅料，冻干乳剂中含有冻干保护剂，其中药∶油＝1∶0～1∶50。
2.根据权利要求1所述的维生素K1乳剂及其冻干乳剂，其特征在于药用辅料中可以含有防腐剂。
3.根据权利要求1所述的维生素K1乳剂，其特征在于其组方为每1-10ml药液中含有维生素K12～100mg注射用油10～500mg乳化剂 适量稳定剂 适量甘油适量防腐剂 适量pH调节剂适量
4.根据权利要求1所述的维生素K1冻干乳剂，其特征在于其组方为每1-10ml药液中含有维生素K12～50mg注射用油0-50mg乳化剂 适量稳定剂 适量pH调节剂适量防腐剂 适量冻干保护剂 适量
5.根据权利要求2所述的维生素K1乳剂，其特征在于注射用油的应用剂量为50-300mg；可以是豆油、茶油、橄榄油、红花油等任何种类的植物油中的一种或几种混合物，粒度为50nm-1000nm；乳化剂为磷脂、泊洛沙姆、HS15(聚乙二醇12-羟基硬脂酸酯、polyethyleneglycol 660 hydroxystearate)、维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS)等中的一种或几种混合物，用量为10-200mg。稳定剂为氮气、无水亚硫酸(氢)钠、Vc、二丁基羟基甲苯、α-生育酚、α-醋酸生育酚、氢醌等中的一种或几种混合物，用量为1mg-100mg；防腐剂为苯甲醇，用量为0-20mg；pH调节剂为盐酸、氢氧化钠、醋酸钠、醋酸、磷酸盐、柠檬酸等中的一种或几种混合物，调节pH为3-9。
6.根据权利要求3所述的维生素K1冻干乳剂，其特征在于注射用油的应用剂量可以为0-50mg；可以是豆油、茶油、橄榄油、红花油等任何种类的植物油等中的一种或几种混合物，粒度为10nm-1000nm。乳化剂、稳定剂、pH调节剂等与乳剂要求相同。防腐剂为尼泊金酯类，用量为0-10mg；冻干保护剂为葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、蔗糖、海藻糖、右旋糖苷、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等中的一种或几种混合物，冻干保护剂的含量为4％-40％(W/V)；所制得的冻干乳剂按需要量加水，水合振荡后复原成乳剂，肌肉注射或静脉给药。
7.根据权利要求5所述的维生素K1冻干乳剂，其特征在于冻干保护剂是葡萄糖与甘露醇的组合，两者的配比为1∶0.01～0.01∶1。
8.一种如权利要求2所述的维生素K1乳剂的制备方法，其特征在于1)配制罐中制备油相(药物相)在配制罐中，将注射用油加热至20-90℃，单纯药物时不加油，然后加入乳化剂，20～50℃时强烈搅拌至溶解；再降温至20～40℃，在搅拌中加入药物；2)在配制罐中制备水相将水和甘油在20～90℃下搅拌5min，使之完全混溶；3)在20～50℃时，将水相加入油相中，强烈搅拌10～30min，形成初乳；4)将初乳过G3漏斗抽滤，调节pH值到3～9；5)过均质仪，第一步调节匀化压力至520～600kg/cm2，第二步再调节至100～140kg/cm2或过微射流仪，第一步调节匀化压力至4000-8000psi，第二步再调节至10000-16000psi，形成乳剂，过微孔滤膜，分装；加入冻干保护剂，进行冷冻干燥，即得冻干乳剂，灭菌，即得注射用乳剂。
全文摘要
本发明公开了一种维生素K
文档编号A61P1/00GK1596882SQ20041002153
公开日2005年3月23日 申请日期2004年7月22日 优先权日2004年7月22日
发明者邓意辉, 雷杰杰, 吴琼 申请人:沈阳药科大学