专利名称：丹参在制备预防前列腺癌发生的药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药领域，更具体地涉及丹参在制备预防前列腺癌发生的药物中的应用。
背景技术：
前列腺癌为美国男性最常发生的肿瘤之一，并且是美国男性的第二大癌症死亡原因。约有1/5的美国男性在一生中被诊断出患有前列腺癌。在2004年，估计约有230,000多例的新发前列腺癌病例，约有29,900的前列腺癌死亡病例。另一方面，美国男性中病理上显现的前列腺癌的比例更高，在50岁的男性中约34％，在80岁以上的男性中则高达70％。约有60％以上的新诊断病例在病理上不断进展，预后不佳。随着社会经济的发展，我国的肿瘤发生谱也愈来愈接近发达国家，前列腺癌发病率逐年升高。由于前列腺癌的发病率高、死亡数多，因此寻找预防前列腺癌的有效措施至关重要。在前列腺癌发生的过程中(包括癌前病变、癌变开始和进展)，采取适当的干预预防和中断癌症发生的措施，将有效地降低前列腺癌前病变的发生率和前列腺癌的发病率。目前有关前列腺癌预防的研究主要集中在化学预防和饮食预防。实践中发现，通过药物干预使肿瘤的生成发展延迟，可以使临床可检测到的前列腺癌的发生率大大降低。目前已发现多种对前列腺癌可能有预防作用的物质，其中毒副作用小的天然物质尤其受到关注，如绿茶、维生素E等。(American Cancer Society[Online].CancerFacts & Figures(2004)http//www.cancer.org/docroot/STT/stt_0.asp[accessedJuly 28，2004].)(Thompson I，et al.Chemoprevention of prostate cancer withfinasteride.Important Adv Oncol 1995；57-76.)(Nelson PS，et al.Chemoprevention for prostatic intraepithelial neoplasia.Eur Urol1996；30(2)269-278.)(Thompson IM，et al.The influence of finasteride on thedevelopment of prostate cancer.N Engl J Med 2003；349215-224.)(Nelson WG，et al.Prostate cancer.N Engl J Med 2003；349366-381.)(Adhami VM，et al.Molecular targets for green tea in prostate cancer prevention.J Nutr2003；1332417S-2424S.)(Thompson TA，et al.Androgen antagonist activity by theantioxidant moiety of vitamin E，2，2，5，7，8-pentamethyl-6-chromanol in humanprostate carcinoma cells.Molecular Cancer Therapeutics.2003；2797-803.)。
丹参(Radix Salviae Miltiorrhizae)为唇形科植物丹参的干燥根，是我国的传统中药，具有活血调经、祛瘀止痛、养心安神的功效。丹参的主要成份有原儿茶醛、原儿茶酸、丹参酚、丹参酮等。
孙婧璄，等.丹参对肝癌转移复发防治作用的研究.中国中西医结合杂志.1999；19(5)292-5中公开了丹参可预防小鼠肝癌肝切除术后的癌转移和复发。
严瑞琪，等.广西医学院学报.1986；3(1)21中公开了丹参对于黄曲霉素诱发大鼠肝癌前病变γ-谷氨酰转肽酶阳性肝细胞增生灶有抑制作用。
中国专利申请02136970.4“丹酚酸B在制备治疗肿瘤药物中的应用”中公开了丹参的水溶性成份丹酚酸B在体外研究中对多种肿瘤细胞的杀伤作用和在小鼠肝癌模型中对肿瘤的治疗作用。
药物对肿瘤是具有治疗作用还是预防作用，研究方法和评判标准是不同的。研究药物对肿瘤治疗作用的动物实验，是通过对正常动物使用化学诱导剂或直接接种肿瘤进行肿瘤造模，造模成功后，对患有肿瘤的动物给药，经过一定的给药期后，观察药物对肿瘤的治疗效果，观察指标为肿瘤生长的抑制(包括生长的减缓、停止或消退)和动物患病体征的改善。研究药物对肿瘤预防作用的动物实验，是对正常的动物给药，在长期给药的同时使用诱导剂诱导肿瘤的发生，未给药的对照组造模成功后，停止诱导，观察药物对肿瘤的预防效果，观察指标为动物的肿瘤发生率和癌前病变发生率。通常，在肿瘤预防研究中的给药期较肿瘤治疗研究中的时间要长。
由于通常对肿瘤细胞具有较强杀伤作用的药物同时对正常组织细胞也会产生损伤，因此不能长期用药，而且目前还没有药物能够彻底有效地治愈肿瘤，仅能在一定程度上抑制肿瘤的生长和改善患者的症状，故多数可用于治疗肿瘤的药物是不能够预防肿瘤的。
人类有史以来有三次庞大的科研计划，分别是阿波罗登月计划、攻克癌症计划及人类基因组计划，其中第1、3项计划都顺利完成，唯有针对癌症的计划可以说是久攻不克，投入的大量金钱却见不到明确的回报。因此，近年来人们在对抗癌症的观念上有了根本的改变，从以前的重治疗改为现在的重预防。
现代的对抗癌症的观念是“目标和控制”(Target and control)，其策略是用遗传学和流行病学的知识和技术跟踪易感人群，用化学预防(Chemoprevention)的方法调整和逆转癌症的病变行为，从而降低癌症的发病率和死亡率。2002年，美国国立肿瘤研究所发布了肿瘤研究方向和2005年度预算提案，提案将癌症的预防、癌症的早期诊断，以及延缓甚至逆转致癌进程等方面，列为今后肿瘤研究的首要方向(顾心彬，等.美国抗癌新策略化学预防.科学2004；56(3)8-11)。
癌细胞与正常细胞相比有两大特点失去控制的细胞增值能力；浸润临近组织和转移到其它器官的能力。从细胞遗传学上分析，绝大多数的癌症起源于一个单独的变异细胞。这个有遗传能力的变异癌细胞经历多阶段和长时间的增值过程后，才演变成能够致命的癌症。以上皮细胞癌(Epithelial malignancy)为例，人体80％以上的恶性肿瘤，包括肺、肠、乳腺、前列腺、胰腺和卵巢等器官的恶性肿瘤，都发生于上皮细胞。50％以上的癌症病人死于上皮细胞癌。一般情况下，临床中在X射线下观察到的上皮细胞癌实体，至少由一亿个上皮细胞聚集而成。在人体内，从一个变异的上皮细胞增值到一亿个上皮癌细胞，需要十年甚至更长的时间。然而，从一亿个上皮癌细胞继续增值到一百亿个上皮癌细胞，可能只需要几个月的时间。而一百亿个上皮癌细胞足以造成患者全身衰竭而死亡。
斯波恩(M.Sporn)博士是一位公认的现代化学防癌的开创人，他在1976年就提出，控制癌症的目标不应该是在癌症形成后的阶段，而应该是在致癌的前期和癌变的过程中，预防变异的细胞转化为有浸润和转移能力的癌细胞。化学防癌的概念是采用药理学的方法来控制和逆转癌细胞的演变过程，从而达到控制癌症的目的。大量的体内和体外实验证明，50-80％的癌症是可以预防的，化学预防是一种行之有效的控制癌症的方法。这种控制癌症的效果可能不是表现在真正消灭或者根除癌细胞，而更多的是表现在延缓癌症的发生。根据流行病学统计的结果，癌症多发于55岁以上的人群。这种延缓癌症发生的效果对年长者来说尤为重要。它可以为年长者在其它能够危及生命的疾病(如心血管疾病)到来之前，提供较好的生活质量。化学防癌的目标是发展天然的和合成的化学物质用于预防癌症，而不是用传统概念中的化疗药物去治疗已经存在的癌症。这样一类的化学防癌剂，必须可长期给药，具备安全和有效的特点，并具备简便的给药途径。本发明旨在满足这一需求。
此外，前列腺癌的癌前病变是指可能发展成为前列腺癌的增生性病变。目前较为公认的前列腺癌前病变有两类前列腺上皮内瘤(PIN)，是指前列腺腺泡和导管上皮的异常增生，也称为前列腺上皮原位癌。另一个是非典型性腺瘤样增生(AAH)，是指有新的腺体形成，是腺体异常增生的结果。
(1)前列腺上皮内瘤(PIN)PIN发生的高峰年龄较前列腺癌为早，若以前列腺的分区来评定PIN的发生，则移行区PIN发生率最少为2.6％，外周区则高达68.80％，这与前列腺癌的发生相似，我国前列腺PIN的发生率虽低于西方国家，但亦有逐年递增的趋势。
(2)非典型性腺瘤样增生(AAH)AAH的发生率比PIN低，因良性前列腺增生(BPH)而行经尿道电切的标本中，3.7-19.60％的病例可检出AAH，而在20-40岁年龄组的尸检前列腺中，AAH的检出率为15-24％，其中有前列腺癌的尸检前列腺中，AAH的检出率高达31％。
前列腺癌前病变的存在增加了患前列腺癌的危险，其唯一的诊断途径为前列腺活组织病理检查。由于诊断措施的限制，要做到“早发现”十分困难，因此“早预防”是控制和延缓前列腺癌发生的最有效的措施。
本领域迫切需要一种可长期使用、无毒副作用且安全有效的预防前列腺癌发生的药物。
发明内容
本发明的目的在于证实丹参具有预防前列腺癌的作用，本发明的目的还在于提供将丹参开发成预防前列腺癌发生的药物，所述的药物含有丹参作为预防前列腺癌发生的主要成分。
在本发明的第一方面，提供了丹参的新用途，它用于制备预防前列腺癌前病变和前列腺癌发生的药物。
在另一优选例中，所述的药物是植物丹参的干燥根或其粉碎物。
在另一优选例中，所述的药物是丹参提取物，所述的丹参提取物选自下组丹参提取液、浓缩物或干燥物。
在另一优选例中，所述的药物的剂型为任何一种药剂学上所述的剂型。
在另一优选例中，所述的药物以口服方式给药。
在本发明的第二方面，提供了丹参的新用途，它用于制备预防前列腺癌前病变和前列腺癌发生的保健食品。
在另一优选例中，所述的保健食品是植物丹参的干燥根或其粉碎物。
在另一优选例中，所述的保健食品是丹参提取物，所述的丹参提取物选自下组丹参提取液、浓缩物或干燥物。
在另一优选例中，所述的保健食品以口服方式给药。
具体实施例方式
本发明人经过广泛而深入的研究，发现丹参可有效地预防前列腺癌的发生，具有极其优异的综合性能，即可长期使用、无毒副作用且安全有效。在此基础上完成了本发明。
丹参如本文所用，术语“丹参”指唇形科植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)的干燥根或其经研磨后的粉碎物。
丹参提取物如本文所用，术语“丹参提取物”指植物丹参的提取液、提取液浓缩物或干燥物。
药物组合物本发明还包括含有丹参的药物组合物。本发明的丹参及其药物组合物可用于预防前列腺癌，即给哺乳动物施用安全有效量的丹参或其提取物。
当丹参或其提取物用于预防前列腺癌时，它可与一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂混合，如溶剂、稀释剂等，从而形成药物组合物。
固态载体包括淀粉、乳糖、磷酸氢钙、微晶纤维素、蔗糖和白陶土，而液态载体包括无菌水、聚乙二醇、非离子型表面活性剂和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)，只要适合活性成分的特性和所需的特定给药方式。在制备药物组合物中通常使用的佐剂也可有利地被包括，例如调味剂、色素、防腐剂和抗氧化剂如维生素E、维生素C、2，6-二叔丁基对甲酚(BHT)和叔丁基羟基茴香醚(BHA)。
通常，本发明的药物组合物包括以下剂型口服给药的片剂、胶囊、可分散的粉末、颗粒或悬浮液(混悬剂)(含有如约0.05-5％悬浮剂(助溶剂))、糖浆(含有如约10-50％糖)和酏剂(含有约20-50％乙醇)，直肠或阴道给药的栓剂，或者以无菌可注射溶液或混悬剂形式(在等渗介质中含有约0.05-5％助溶剂)进行非肠胃给药。这些药物制剂通常可含有与载体混合的约0.01-99.9wt％，较佳地0.1-99.5wt％，更佳地1-99wt％(重量)的丹参或其提取物，按组合物的总重量计。
本发明所用的丹参或其提取物可通过口服、静脉内、肌内或皮下途径给药。优选口服给药方式。
本发明所用的丹参或其提取物可肠胃外或腹腔内给药。也可在甘油、液体、聚乙二醇及其在油中的混合物中制备分散液。在常规储存和使用条件下，这些制剂中含有防腐剂以防止微生物生长。
在使用本发明所述的丹参或其提取物时，还可与其它预防肿瘤的手段或其它药物(如托瑞米芬)联用。
所用的活性成分的有效剂量可随给药的模式和待预防的疾病的严重程度而变化。然而，通常当本发明化合物每天以约0.1-8000mg/kg动物体重(较佳地5-5000mg/kg体重，更佳地20-3000mg/kg体重给药)的剂量给予时，能得到令人满意的效果，较佳地每天以1-4次的剂量给予，或以缓释形式给药。对大部分大型哺乳动物而言，每天的总剂量约为1-16000mg或更高，较佳地10-8000mg。适用于内服的剂量形式，包含与固态或液态药学上可接受的载体混合的约0.1-8000mg的丹参。可调节此剂量方案以提供最佳治疗应答。例如，由治疗状况的迫切要求，可每天给予若干次分开的剂量，或将剂量按比例地减少。
从易于制备和给药的立场看，优选的药物组合物是固态或液态组合物。丹参或其提取物的口服给药是优选的。
保健食品或食品补充剂除了将丹参用于制备预防前列腺癌的药物之外，在本发明中，还可将丹参或其提取物用于制备保健食品或饮食补充剂(或食品添加剂)。
所谓饮食补充剂(dietary supplement)是利用植物制成的制品，它也与化学药物一样经过严格的科学和临床研究，一般讲比较廉价、安全，治疗慢性病比西药更有效，而且在美国不需经FDA批准就能上市。
在本发明中，保健食品和饮食补充剂可互换使用，它们含有安全有效量的丹参或其提取物和药学上可接受(或保健食品上可接受)的载体。
本发明的保健食品或饮食补充剂可与药物组合物一样含有相同含量的丹参或其提取物。通常，保健食品或饮食补充剂中丹参或其提取物的含量可略低一些，例如含0.1-98wt％丹参或其提取物。
本发明的保健食品或饮食补充剂，可以通过常规方法制成任何常规的制剂形式，优选的是片剂、口服液、颗粒剂和胶囊制剂。
本发明的主要优点在于1)可有效地预防前列腺癌的发生，降低前列腺癌前病变和前列腺癌的发生率；2)丹参为我国广为使用的传统中药，安全性好，可长期使用，对人体无毒副作用；3)口服给药即可达到良好的预防肿瘤的效果，使用方便。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1丹参的水提取液、浓缩液及干燥物的制备丹参去除泥沙等杂质后粉碎成20目粉，用2.3倍量的水浸润12小时，然后用8倍量水以0.6BV/h的流速渗漉，得到渗漉液(即提取液)。将渗漉液减压回收，过滤，得浓缩液。将浓缩液干燥后得到干燥物。
实施例2丹参的醇提取液、浓缩液及干燥物的制备丹参去除泥沙等杂质后粉碎成20目粉，用4倍量的80％乙醇于20℃浸泡12小时后，放出浸泡液(即提取液)。将药渣再次用4倍量的80％乙醇于20℃浸泡12小时后，放出浸泡液(即提取液)。将2次提取液合并，回收，过滤，得浓缩液。将浓缩液干燥后得到干燥物。
实施例3丹参及其水提取物和醇提取物对大鼠前列腺癌的预防作用实验观察
1.实验材料(1)实验动物F344雄性大鼠，5周龄，体重约90克；(2)前列腺癌化学诱导剂3，2’-二甲基-4-氨基苯胺(3，2’-dimethyl-4-aminobiphenyl，DMAB)(购自日本Nard研究院)；(3)实验药物a.丹参粉末；b.实施例1中制备的丹参水提取液的干燥物(简称丹参水提取物)；c.实施例2中制备的丹参醇提取液的干燥物(简称丹参醇提取物)；2.实验分组实验动物共分14组。
(1)空白对照组(正常饲料，无DMAB化学诱导)1组，6只/组；(2)丹参粉末对照组(丹参粉末混合饲料，无DMAB化学诱导)1组(2.4g/kg/day剂量组)，6只/组；(3)丹参水提取物对照组(丹参水提取物混合饲料，无DMAB化学诱导)1组(1.6g/kg/day剂量组)，6只/组；(4)丹参醇提取物对照组(丹参醇提取物混合饲料，无DMAB化学诱导)1组(1.6g/kg/day剂量组)，6只/组；(5)DMAB模型对照组(正常饲料，有DMAB化学诱导)1组，30只/组；(6)丹参粉末实验组(丹参粉末混合饲料，有DMAB化学诱导)3组(0.6，1.2，2.4g/kg/day剂量组)，30只/组；(7)丹参水提取物实验组(丹参水提取物混合饲料，有DMAB化学诱导)3组(0.4，0.8，1.6g/kg/day剂量组)，30只/组。
(8)丹参醇提取物实验组(丹参醇提取物混合饲料，有DMAB化学诱导)3组(0.4，0.8，1.6g/kg/day剂量组)，30只/组。
3.给药方法依据不同给药剂量制备丹参粉末或其提取物的混合饲料，丹参粉末或其提取物在各剂量组的饲料中的含量如下(1)丹参粉末混合饲料(0.6g/kg/day)丹参粉末含量为0.75％；(2)丹参粉末混合饲料(1.2g/kg/day)丹参粉末含量为1.5％；(3)丹参粉末混合饲料(2.4g/kg/day)丹参粉末含量为3％；
(4)丹参水提取物混合饲料(0.4g/kg/day)丹参水提取物含量为0.5％；(5)丹参水提取物混合饲料(0.8g/kg/day)丹参水提取物含量为1％；(6)丹参水提取物混合饲料(1.6g/kg/day)丹参水提取物含量为2％；(7)丹参醇提取物混合饲料(0.4g/kg/day)丹参醇提取物含量为0.5％；(8)丹参醇提取物混合饲料(0.8g/kg/day)丹参醇提取物含量为1％；(9)丹参醇提取物混合饲料(1.6g/kg/day)丹参醇提取物含量为2％；将混合饲料于造模前一周开始给予大鼠，任其随意进食，直至实验结束时终止。
4.实验周期自丹参粉末或其提取物给药开始至实验结束共60周。
5.实验步骤(1)大鼠购进后饲养一周，适应环境。随后进行分组，开始给丹参粉末对照组和丹参粉末实验组大鼠喂食丹参粉末混合饲料，给丹参水提取物对照组和丹参水提取物实验组大鼠喂食丹参水提取物混合饲料，给丹参醇提取物对照组和丹参醇提取物实验组大鼠喂食丹参醇提取物混合饲料，空白对照组和DMAB模型对照组大鼠喂食正常饲料，直至实验结束，每周记录各组大鼠的进食量；(2)喂食丹参粉末或其提取物的混合饲料一周后，丹参粉末实验组、丹参水提取物实验组、丹参醇提取物实验组和DMAB模型对照组大鼠皮下注射DMAB(以玉米油为溶剂)，剂量为50mg/kg，每隔2周注射一次，共注射10次。空白对照组、丹参粉末对照组、丹参水提取物对照组和丹参醇提取物对照组大鼠皮下注射不含DMAB的赋形剂(玉米油)，每隔2周注射一次，共注射10次；(3)实验中每2周测定大鼠体重一次。实验中每天观察大鼠状态一次，对于在实验结束前即已濒临死亡的大鼠进行处死并按步骤(4)进行尸检和组织学检查；(4)丹参粉末或其提取物给药喂食60周后，停止给药，处死所有大鼠，肉眼观察主要脏器器官，以确定有无异常变化，随后进行尸检和组织学检查。尸检时，取出大鼠前列腺及精囊，用10％的福尔马林液进行固定，随后用石蜡包埋，将腹侧前列腺按矢状方向、背外侧前列腺按横截面方向、前侧前列腺及精囊按纵截面方向进行切片，用苏木精和曙红染色后进行组织学检查。
6.实验结果(1)体重检查对不同周记录的各组大鼠平均体重进行统计，结果见表1。
表1.各组大鼠的体重变化
(2)组织学检查对各组前列腺癌前病变和前列腺癌的发生率进行统计，结果见表2。
表2.丹参及其水提取物和醇提取物对化学致癌剂诱导的大鼠前列腺癌的预防作用
a)有效观察动物总数各组排除实验过程中因非肿瘤原因死亡的动物后的总数；b)癌前病变包括前列腺上皮内瘤(PIN)和非典型性腺瘤样增生(AAH)；c)圆括号内表示各组中前列腺癌前病变或前列腺癌的发生率(单位％)；
7.结果分析结果表明丹参粉末、丹参水提取物和丹参醇提取物实验组的前列腺癌前病变和前列腺癌发病率显著低于DMAB模型对照组，DMAB模型对照组的前列腺癌前病变和前列腺癌发病率分别为91％和61％，经丹参粉末给药后可分别将至72％和42％，经丹参水提取物给药后可分别降至67％和38％，经丹参醇提取物给药后可分别降至72％和46％。丹参粉末或其提取物高剂量长期给药后的大鼠无明显的体重减轻等不良反应。
以上说明丹参粉末及其水提取物和醇提取物对前列腺癌有良好的预防作用，且可高剂量长期给药。
实施例4丹参水提取物口服胶囊的制备口服胶囊配方300毫克丹参水提取液的干燥物。
实施例5丹参醇提取物口服胶囊的制备口服胶囊配方300毫克丹参醇提取液的干燥物。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
权利要求
1.丹参的新用途，其特征在于，用于制备预防前列腺癌前病变和前列腺癌发生的药物。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的药物是植物丹参的干燥根或其粉碎物。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的药物是丹参提取物，所述的丹参提取物选自下组丹参的提取液、提取液浓缩物或干燥物。
4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的药物的剂型为任何一种药剂学上所述的剂型。
5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的药物以口服方式给药。
6.丹参的新用途，其特征在于，用于制备预防前列腺癌前病变和前列腺癌发生的保健食品。
7.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述的保健食品是植物丹参的干燥根或其粉碎物。
8.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述的保健食品是丹参提取物，所述的丹参提取物选自下组丹参的提取液、提取液浓缩物或干燥物。
9.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述的药物的剂型为任何一种药剂学上所述的剂型。
10.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述的保健食品以口服方式给药。
全文摘要
本发明提供了丹参的新用途，即丹参在制备预防前列腺癌发生的药物中的应用。动物体内实验证明其具有预防前列腺癌发生的作用。本发明所述的丹参，可以是丹参的干燥根、经研磨后的粉碎物、以及丹参的提取液、提取液浓缩物或干燥物。本发明所述的制备预防前列腺癌发生的药物的剂型可以为任何一种药剂学上所述的剂型，可以为片剂、胶囊、口服液、喷雾剂或栓剂。
文档编号A61P35/00GK1872159SQ20051002645
公开日2006年12月6日 申请日期2005年6月3日 优先权日2005年6月3日
发明者谢天培, 戈萌, 季红光, 朱洪莉 申请人:上海天甲生物医药有限公司