专利名称：A型矢车菊苷配基的组合物和使用方法
技术领域：
本发明涉及含有A型矢车菊苷配基的组合物和其使用方法，用于人或兽医动物的预防或治疗处理。
背景技术：
多酚是一类非常多样的化合物(Ferriera et al.，Tetrahedron，4810，1743-1803，1992)。它们广泛存在于各种植物中，其中的一些进入了食物链。在某些情况下，它们代表了人类食物中一类重要的化合物。尽管某些多酚被认为是非营养性的，但由于它们对健康可能具有有益的效果，对这些化合物的兴趣日益增加。例如，在实验动物研究中栎精(类黄酮)显示出具有抗癌活性(Deshner et al.，Carcinogenesis，71193-1196，1991；和Kato et al.，Carcinogenesis，4，1301-1305 1983)。(+)-儿茶素和(-)-表儿茶素(黄烷-3-醇)显示出抑制白血病病毒逆转录酶的活性(Chu et al.，J.of Natural Prod.，552，179-183，1992)。Nobotanin(一种低聚可水解的鞣质)也显示出具有抗肿瘤活性(Okuda et al.，发表于XVIth International Conference of the Groupe Polyphenols，Lisbon，Portugal，July 13-16，1992)。Kikkoman公司已报道了矢车菊苷配基低聚物用作抗诱变剂(JP 04190774A，1992年7月7日)。
某些多酚，如B型矢车菊苷配基显示出对一氧化氮(NO)释放具有有益的效果，因此对治疗各种正应答NO的健康疾病有效(参见例如Romanczyk等的美国专利第6,670,390号)。
已知一氧化氮(NO)抑制了血小板聚集、单核细胞黏附和趋化性，和血管平滑肌组织的增殖，这些与动脉粥样硬化生成过程紧密相关。由于NO与氧自由基反应，NO在动脉粥样硬化组织中的浓度可降低。由于这些反应引起的NO损失导致了血小板增加和炎性细胞黏附到血管壁，进一步损害了NO的松弛机制。以这种方式，NO的损失可促进动脉粥样硬化过程，导致进行性疾病状态。
高血压是血液在血管内循环时血压高于正常状态的疾病。当收缩压超过150mmHg，或舒张压超过90mmHg持续一段时间时，将损害机体。高血压是血管疾病最主要的原因，血管疾病包括中风、心脏病、心力衰竭和肾衰竭。例如，过高的收缩压可使任何地方的血管破裂。当破裂发生在脑部时，导致了中风。高血压也可引起血管的肥厚和狭窄，其可导致动脉粥样硬化。升高的血压也可迫使心肌扩大，当泵出血液时心肌要更努力工作以克服升高的静压(舒张压)。这种扩大可最终产生不规则的心搏或心力衰竭。因为它不引起任何症状，只有当检查血压时才可被检测到，因此高血压被称为“沉默的杀手”。
血压的调节是复杂的事件，其中一种机制涉及组成型Ca+2/钙调节蛋白依赖型的一氧化氮合酶(NOS)的表达，这种一氧化氮合酶被称为内皮一氧化氮合酶或eNOS。由这种酶产生的NO产生了血管中的平滑肌松弛(扩张)，其降低了血压。当NO产生为抑制剂所阻断或在病理状态如动脉粥样硬化中被阻断时，NO的循环浓度降低，血管肌肉不能松弛到适当程度。结果血管收缩升高了血压，可引起某些形式的高血压。
由于大量的病人正遭受高血压和血管系统相关的疾病和紊乱，有相当的兴趣寻找治疗方法以维持NO池(NO pool)在其正常健康水平。能释放NO的药物如硝酸甘油或硝酸异山梨酯仍是血管舒张治疗的主要药物。本发明申请人惊奇地发现，A型矢车菊苷配基可用于保留NO池，引起血管舒张和/或治疗和/或预防NO反应性疾病和紊乱。
发明概述本发明涉及含有A型矢车菊苷配基的组合物和其使用方法，用于人或兽医动物的预防或治疗处理。
一方面，本发明涉及包含有效量A型矢车菊苷配基的组合物，如药物、食品、食品添加剂、食物补充剂。该组合物可任选含有另外的NO调节剂和/或心血管保护或治疗剂，或与这种药物组合给予。在本发明的范围内也涉及含有上述组合物和标签和/或说明书的包装产品，用于治疗或预防NO反应性健康疾病，治疗高血压、心血管疾病、冠状动脉疾病和/或血管循环紊乱，预防或降低心脏病发作、中风、充血性心力衰竭和/或肾衰竭风险，或改善血流量例如肾血流量。
本发明的另一方面涉及使用A型矢车菊苷配基以治疗和预防NO反应性健康疾病，治疗高血压、心血管疾病、冠状动脉疾病和/或血管循环紊乱，预防或降低心脏病发作、中风、充血性心力衰竭和/或肾衰竭风险，或改善血流量例如肾血流量的方法。
附图简述
图1A-C表示预收缩的的主动脉环中由A型矢车菊苷配基介导的剂量依赖型松弛A)A2二聚体；B)A1二聚体；和C)A型三聚体。
图2A-C表示使用A1二聚体的血小板聚集实验的结果。
图3-G表示使用A1二聚体的血小板聚集实验的结果。
发明详述本申请中所有的专利、专利申请和参考文献都通过引用结合到本文中。在任何不一致的情况下，以本公开为准。
本发明涉及包含有效量的A型矢车菊苷配基或其药物可接受盐或衍生物的组合物。
本发明的A型矢车菊苷配基是由n个下式的黄烷-3-醇单体单位组成的低聚物 其中(i)单体单位通过4→6和/或4→8黄烷间键连接；(ii)至少两个单体单位另外通过A型黄烷间键(4→8；2→O→7)或(4→6；2→O→7)连接；(iii)n为2-12。
本领域的技术人员理解的是，通过A型黄烷间键连接的两个黄烷醇单位之一必须在2-和4-位包含2个键。这些键都具有α或β立体化学，即该键是2α、4α或2β、4β。这些键连接到A型黄烷间键所连接的第二个黄烷醇单位的6-和7-O-位或8-和7-O-位。在C-2或C-4位不包含A型黄烷间键的低聚物的黄烷醇组成单位中，C-4位点的键可以具有α或β立体化学。黄烷醇单位C-3位的羟基具有α或β立体化学。黄烷-3-醇(单体)单位可以是(+)-儿茶素、(-)-表儿茶素和它们各自的差向异构体(例如(-)-儿茶素和(+)-表儿茶素))。
可以在一个或多个黄烷-3-醇组成单位上的一个或多个羟基上衍生化上述定义的A型矢车菊苷配基，例如酯化。给定的黄烷-3-醇单位可因此在3-、5-、7-、3′-和4′-的一个或多个环位点包含一个或多个酯基，优选没食子酸酯。具体可以是单、二、三、四、或五没食子酸化单位。
用于本发明产品和方法中的化合物的实例包括以下化合物，其中整数n为3-12；4-12；5-12；4-10；或5-10。在一些实施方案中，n为2-4、或2-5，例如n为2或3。
在一个实施方案中，A型矢车菊苷配基为表儿茶素-(4β→8；2β→O→7)-儿茶素(即A1二聚体)，或其药物可接受的盐或衍生物，具有下式 在另一个实施方案中，A型矢车菊苷配基为表儿茶素-(4β→8；2β→O→7)-表儿茶素(即A2二聚体)，具有下式 在又一个实施方案中，A型矢车菊苷配基为A型三聚体，具有下式 A型矢车菊苷配基可以是天然来源的或合成制备的。例如，A型矢车菊苷配基可从花生皮中分离，如实施例1所述，或描述于Lou etal.，Phytochemistry，51297-308(1999)，或Karchesy and Hemingway，J.Agric.Food Chem.，34966-970(1986)，各自的相关部分通过引用结合到本文中。成熟的红花生皮含有约17％重量的矢车菊苷配基，在二聚体矢车菊苷配基中表儿茶素-(4β→8；2β→O→7)-儿茶素占主要部分，有小部分的表儿茶素-(4β→8；2β→O→7)-表儿茶素存在。然而，除了具有(4→8；2→O→7)双重键的矢车菊苷配基外，也在花生皮中发现了具有(4→6；2→O→7)双重键的矢车菊苷配基。
上述化合物的其它来源为酸果蔓(cranberries)，例如描述于Foo etal.，J.Nat.Prod.，631225-1228，和Prior et al.，J.Agricultural FoodChem.，49(3)1270-76(2001)，各自的相关部分通过引用结合到本文中。其它来源包括乳藤(Ecdysanthera utilis)(Lie-Chwen et al.，J.Nat.Prod.，65505-8(2002))和七叶树(Aesculus hippocastanum)(美国专利第4,863,956号)，各自的相关部分通过引用结合到本文中。
A型化合物也可从B型矢车菊苷配基经使用1，1-二苯基-2-苦基苯肼(DPPH)残基在中性条件下氧化制得，如描述于Kondo et al.，Tetrahedron Lett.，41485(2000)，其相关部分通过引用结合到本文中。获得天然或合成的B型矢车菊苷配基的方法为本领域所熟知，例如描述于Romanczyk等的美国专利第6,670,390号，Romanczyk等的第6,207,842号，Romanczyk等的第6,420,572号；和Romanczyk等的第6,156,912号。
A型矢车菊苷配基可用于本文描述的组合物中，以包含A型矢车菊苷配基作为主要成分的抽提物形式给予(例如花生皮抽提物)。
A型矢车菊苷配基可以被分离和纯化，即它们与共同天然存在的化合物分离(假如A型矢车菊苷配基是天然来源的)，或它们由合成制备，在任一种情况中污染化合物(杂质)的水平不会显著提高或减弱A型矢车菊苷配基的功效。例如，可通过商业可获得的纯化和分离技术，从与A1二聚体共同天然存在的A2二聚体中将分离和纯化的A1二聚体分离到可用程度。该化合物可以是基本纯的，即它们具有通过可用纯化、分离和/或合成技术可达到的最高均匀性。本文使用的“基本纯的A1二聚体”与A2二聚体分离到科技和商业合理的程度，“基本纯的A型三聚体”与其它低聚物分离(到科技和商业合理的程度)，但可含有若干A型三聚体的混合物。换言之，短语“分离和纯化的三聚体”是主要指是一种三聚体，而“基本纯的三聚体”可包含三聚体的混合物。
在某些实施方案中，A型矢车菊苷配基为至少80％纯，优选至少85％纯、至少90％纯、至少95％纯、至少98％纯或至少99％纯。这种化合物特别适合于药物应用。
使用方法本申请中描述的任何化合物都可用于实施本文所述的方法。如实施例3所示，A型矢车菊苷配基影响了上皮细胞中的一氧化氮(NO)途径，有助于保存NO池。不限于理论，通过诱导NO合成和/或减少NO降解保存了NO池。该化合物也引起了收缩血管的舒张。它们也可用于抗血小板治疗，如实施例4所示。
因此，本发明涉及通过给予需要其的患者有效量的A型矢车菊苷配基低聚物或其药物可接受的盐或衍生物，治疗或预防NO反应性疾病或紊乱的方法，所述低聚物由n个下式的黄烷-3-醇单体单位组成 其中(i)单体单位通过4→6和/或4→8黄烷间键连接；(ii)至少两个单体单位另外通过A型黄烷间键(4→8；2→O→7)或(4→6；2→O→7)连接；(iii)n为2-12；并且其中患者为人或兽医动物。
A型矢车菊苷配基可以被分离和纯化，或基本纯的。在某些实施方案中，上述化合物可为至少约80％纯、至少约85％纯、至少约90％纯、至少95％纯或至少98％纯。用于上述方法的化合物实例包括以下化合物，其中整数n为3-12；4-12；5-12；4-10；或5-10。在某些实施方案中，n为2-4、或2-5，例如n为2或3。
本文使用的“NO反应性疾病或紊乱”是指对使用NO治疗应答的健康疾病。这种疾病的实例包括但不限于NO介导的或NO依赖的疾病或紊乱，其中疾病/紊乱的病理学由NO途径的异常功能引起。这些疾病优选包括高血压、心血管疾病、冠状动脉疾病和/或血管循环紊乱、心脏病发作、中风、充血性心力衰竭、肾衰竭和肾脏疾病。可单独或与另外的心血管治疗剂组合给予A型矢车菊苷配基。
因为高血压增加了心脏病发作、中风、充血性心力衰竭和肾衰竭的风险，可单独或与其它心血管保护剂组合使用引起血管舒张的A型矢车菊苷配基，以预防这些疾病。具体适合的患者包括患有高血压合并有糖尿病、肥胖症、高胆固醇水平和/或吸烟的患者，其中患者患心脏病发作和中风的风险增加了数倍。
本文使用的“治疗”是指例如通过减缓疾病发展、延长存活、降低死亡风险、和/或提供疾病参数的可测量改善，改善已有的医学疾病，如心血管疾病。
术语“预防”是指降低与发展疾病相关的风险，包括减少疾病的发病。
本文使用的术语“心血管保护或治疗剂”是指除A型矢车菊苷配基之外的有效治疗或保护心血管系统的药物。这种药物的实例为抗血小板治疗剂(例如COX抑制剂，如阿司匹林；B型矢车菊苷配基)；NO调节剂，胆固醇降低剂(例如甾醇、二氢睾酮)。
在某些实施方案中，本发明涉及下列方法一种通过给予需要其的患者有效量的下式表儿茶素-(4β→8；2β→O→7)-儿茶素(即A1二聚体)或其药物可接受的盐或衍生物，治疗或预防NO反应性疾病或紊乱的方法 其中患者为人或兽医动物。A1二聚体可以被分离和纯化。在某些实施方案中，上述化合物可为至少约90％纯、至少95％纯或至少98％纯。
一种通过给予需要其的患者有效量的下式表儿茶素-(4β→8；2β→O→7)-表儿茶素(即A2二聚体)或其药物可接受的盐或衍生物，治疗或预防NO反应性疾病或紊乱的方法 其中患者为人或兽医动物。A2二聚体可以被分离和纯化。在某些实施方案中，上述化合物可为至少约90％纯、至少95％纯或至少98％纯。
一种通过给予需要其的患者有效量的下式A型三聚体或其药物可接受的盐或衍生物，治疗或预防NO反应性疾病或紊乱的方法 其中患者为人或兽医动物。A型三聚体可以被分离和纯化，或基本纯的。在某些实施方案中，上述化合物可为至少约80％纯、至少约85％纯、至少约90％纯、至少95％纯或至少98％纯。
在某些实施方案中，本发明提供了以下示例性方法一种通过给予需要其的患者有效量的A型矢车菊苷配基或其药物可接受的盐或衍生物，治疗高血压的方法，所述A型矢车菊苷配基由n个下式的黄烷-3-醇单体单位组成 其中(i)单体单位通过4→6和/或4→8黄烷间键连接；(ii)至少两个单体单位另外通过A型黄烷间键(4→8；2→O→7)或(4→6；2→O→7)连接；(iii)n为2-12；其中该患者为人或兽医动物。
A型矢车菊苷配基可以是分离或纯化的，或基本纯的。在某些实施方案中，上述化合物可以是至少约80％纯、至少约85％纯、至少约90％纯、至少95％纯或至少98％纯。
用于上述方法的化合物实例包括以下化合物，其中整数n为3-12；4-12；5-12；4-10；或5-10。在某些实施方案中，n为2-4、或2-5，例如n为2或3。
在某些实施方案中，本发明包括以下示例性方法一种通过给予需要其的患者有效量的下式表儿茶素-(4β→8；2β→O→7)-儿茶素(即A1二聚体)或其药物可接受的盐或衍生物，治疗高血压的方法 其中患者为人或兽医动物。所述A1二聚体可以被分离和纯化。在某些实施方案中，上述化合物可为至少约90％纯、至少95％纯或至少98％纯。
一种通过给予需要其的患者有效量的下式表儿茶素-(4β→8；2β→O→7)-表儿茶素(即A2二聚体)或其药物可接受的盐或衍生物，治疗高血压的方法 其中患者为人或兽医动物。所述A2二聚体可以被分离和纯化。在某些实施方案中，上述化合物可为至少约90％纯、至少95％纯或至少98％纯。
一种通过给予需要其的患者有效量的下式A型三聚体或其药物可接受的盐或衍生物，治疗高血压的方法 其中患者为人或兽医动物。A型矢车菊苷配基三聚体可以被分离和纯化，或基本纯的。在某些实施方案中，上述化合物可为至少约80％纯、至少约85％纯、至少约90％纯、至少95％纯或至少98％纯。
本发明的范围内也包括了使用本文所述任何化合物，在需要其的患者中改善/治疗勃起机能障碍的方法。
使用本文提供的指导和本领域的一般知识，本领域的技术人员可测定用于上述方法中的有效量。例如，有效量可以例如达到哺乳动物体内(例如血液)中生理学相关的浓度。这种生理学相关的浓度可为至少约10纳摩尔(nM)，优选至少约20nM，或至少约100nM，更优选至少约500nM。在一个实施方案中，在哺乳动物如人的血液中达到至少约1毫摩尔。可给予本文定义的式An化合物，从约50mg/天至约1000mg/天、优选从约100-150mg/天至约900mg/天，最优选从约300mg/天至约500mg/天。然而，可使用高于上述的量。
可快速(acutely)给予该化合物，或作为用药制度持续治疗/预防给予，即持续有效时间周期，例如，每天、每月、隔月、每半年、每年或一些其它制度，需要时由熟练医学从业者确定这段时间。给药可至少持续显示治疗/预防效果所需的一段时间。优选每天给予化合物，更优选每天2或3次，例如，早上或晚上给予以维持哺乳动物体内有效化合物的水平。为了获得最佳的效果，可给予组合物至少约30或至少约60天。可周期性重复这些用药制度。
组合物和制剂可作为药物、食品、食品添加剂或食物补充剂给予本发明的化合物。
本文使用的“食品”为基本由蛋白、碳水化合物和/或脂肪组成的物质，其用于生物体的机体以维持生长、修复和生命过程并供给能量。食品也可含有补充物质，如矿物质、维生素和调味料。参见Merriam-Webster′s Collegiate Dictionary，第10版，1993年。术语食品包括适合人或动物消费的饮料。本文使用的“食品添加剂”如FDA于21 C.F.R.170.3(e)(1)所定义，包括直接或间接添加剂。本文使用的“药物”为医学药物。参见Merriam-Webster′s Collegiate Dictionary，第10版，1993年。药物也可以被称为是医药。本文使用的“食物补充剂”是为了添加到食物中而具有或含有一种或多种下列食用成分的产品维生素、矿物质、草药或其它植物、氨基酸、通过增加总日摄取量而由人补充到食物中的食用物质，或这些成分的浓缩物、代谢物、组成物、抽提物或组合。
含有本发明化合物的药物，任选与另外的心血管保护或治疗剂组合，可以各种方式给予，如经口、舌下、口颊(bucally)、经鼻、直肠、静脉内、胃肠外和局部给予。本领域的技术人员能确定合适的给药方式，以最大递送A型矢车菊苷配基，其任选与另外的心血管保护或治疗剂组合。因此，适合各种给药的剂型在本发明的范围内，包括固体、液体和半固体剂型，如片剂、胶囊剂、明胶胶囊(软胶囊)、散装或单位剂量的粉剂或颗粒剂、乳剂、悬浮剂、糊剂、乳膏剂、凝胶剂、泡沫剂、胶冻剂或注射剂型。缓释剂型也在本发明的范围内，可如美国专利5,024,843、5,091,190、5,082,668、4,612,008和4,327,725所述制备，其相关部分通过引用结合到本文中。合适的药物可接受载体、稀释剂或赋形剂通常为本领域已知，可以由本领域技术人员轻易确定。片剂，例如，可包含含有有效量的A型矢车菊苷配基的组合物和任选载体，如山梨醇、乳糖、纤维素或磷酸二钙。
使用本领域已知的方法，可制备含有A型矢车菊苷配基和任选的另外心血管保护或治疗剂的食物补充剂，其可包含，例如，营养素如磷酸二钙、硬脂酸镁、硝酸钙、维生素和矿物质。
还在本发明范围内的是制造物品，如包含本发明组合物(例如食品、食物补充剂、药物)和标签的包装产品，标签表明存在或含量增加的本发明化合物或指导使用用于本文所述方法的组合物。
也在本发明的范围内的是适合用于联合治疗的制造物品(如包装产品或药盒)，其包含至少一个容器和至少一种A型矢车菊苷配基或其药物可接受的盐或衍生物。制造物品还包含至少一种另外的药物、心血管保护或治疗剂(即A型矢车菊苷配基或其药物可接受的盐或衍生物之外的)，这种药物可在单独的容器中作为单独组合物提供，或与本发明的化合物混合。
如上所述，心血管保护或治疗剂有效治疗或保护心血管系统。这种药物的实例为抗血小板治疗剂(例如COX抑制剂，如阿司匹林)、NO调节剂、胆固醇降低剂(例如甾醇、二氢睾酮)。
在某些实施方案中，任选与A型矢车菊苷配基一起给予的心血管保护或治疗剂可以是B型矢车菊苷配基，例如下述可可黄烷醇和/或矢车菊苷配基。
用于本发明的B型多酚可以是天然来源的，例如，来源于可可豆或多酚的另外天然来源，或合成制备。例如，B型矢车菊苷配基和它们的衍生物描述于Romanczyk等的美国专利6,670,390，其相关部分通过引用结合到本文中。本领域的技术人员可基于可用性和价值选择天然或合成的多酚。多酚可以包含在含有可可多酚的可可成分形式的组合物中，例如，在巧克力中包括巧克力液体，或多酚可被独立添加入可可成分，例如，作为抽提物、抽提物部分、分离和纯化的个体化合物、混合的抽提物部分或合成制备的化合物。
术语“可可成分”是指来自无壳可可碎仁(cocoa nibs)的含可可固体物质，如巧克力液体、部分或完全脱脂的可可固体(例如饼或粉)。
B型矢车菊苷配基低聚物可含有2至约18、优选2至约12、最优选2至约10个单体单位。或者，低聚物可含有3-18、优选3-12、更优选3-10个单体单元；或5-18、优选5-12、更优选5-10个单体单位。例如，低聚物可以是二聚体、三聚体、四聚体、五聚体、六聚体、七聚体、八聚体、九聚体和十聚体。在该低聚物中，单体通过(4→6)和/或(4→8)黄烷间键连接。拥有唯一(4→8)键的低聚物是线性的，而存在至少一个(4→6)键导致形成支链低聚物。也在本发明的范围内的是包含至少一个(6→6)、(6→8)和(8→8)非天然键的低聚物。这种非天然存在的低聚物的合成描述于2000年10月19日作为WO00/61547公开的国际专利申请PCT/US00/08234，其相关部分通过引用结合到本文中。
B型矢车菊苷配基可通过从可可豆、可可碎仁或可可成分如巧克力液体、部分脱脂的可可固体、和/或完全脱脂的可可固体制备。抽提物优选从完全或部分脱脂的可可粉制备。可使用的可可豆来自Theobrofyza、Herrania 或其种间和种内杂交的任何种。抽提物可从发酵的、发酵不足的或未发酵的可可豆制备，发酵的豆具有最少量的可可多酚，未发酵的最多。可基于豆的发酵因子选择可可豆，例如可从具有约275或更少的发酵因子的豆制得抽提物。通过操作发酵程度，可优化可可成分和其抽提物中的多酚水平，描述于作为WO98/09533公开的国际专利申请号PCT/US97/15893，其相关部分通过引用结合到本文中。
可从可可成分中抽提可可多酚，可可成分使用传统的可可处理方法加工(例如描述于Industrial Chocolate Manufacture和Use，ed.Beckett，S.T.，Blackie Acad.& Professional，New York，1997，如在第1、5、和6章)，或使用描述于Kealey等的美国专利第6,015,913号中的改进方法加工，与传统方法相比这种改进的方法保存了可可组分中的多酚(通过阻止它们受到破坏)。这种改进的可可加工方法省略了传统的烘烤步骤。因此，可使用通过以下步骤获得的可可成分(a)加热可可豆一段时间，温度足以使可可壳松弛而不烘烤可可碎仁；(b)从可可壳中精选可可碎仁；(c)螺旋压榨可可碎仁；(d)回收可可脂和部分脱脂的可可固体，其含有保存水平的可可多酚。该方法比传统处理方法保留了更高水平的较高矢车菊苷配基低聚物。通过这种方法生产的可可固体每克脱脂固体可含有超过20,000μg的总黄烷醇和/或矢车菊苷配基；优选超过25,000μg/g，更优选超过28,000μg/g，最优选超过30,000μg/g。对于本发明的目的，如实施例2中的描述测定总黄烷醇和/或矢车菊苷配基的量。
可从上述来源或任何其它含有多酚或黄烷醇或矢车菊苷配基的来源抽提B型矢车菊苷配基，使用溶剂从中溶解多酚。合适的溶剂包括水或有机溶剂，如甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇和乙酸乙酯。也可使用溶剂混合物。当水用作溶剂时，其可轻微酸化，例如使用乙酸酸化。一些溶剂的实例为水和有机溶剂的混合物，例如甲醇、乙醇或丙酮的水溶液。有机溶剂的水溶液可含有，例如，约50％至约95％的有机溶剂。因此，可使用水中的约50％、约60％、约70％、约80％和约90％的有机溶剂。溶剂也可含有少量的酸如乙酸，例如以约0.5％至约1.0％的量。抽提物的组成，即矢车菊苷配基低聚物的表现(即低聚物性质)和量取决于所选择的溶剂。例如，水抽提物主要含有单体，乙酸乙酯抽提物含有单体和低级低聚物，主要为二聚体和三聚体，甲醇、乙醇、或丙酮水溶液的抽提物含有单体和一定范围的高级低聚物。一种抽提单体和高级低聚物的溶剂为约70％的丙酮。然而，任何含有多酚的抽提物在本发明中都是有用的。可可多酚的抽提方法为本领域已知，描述于例如Romanczyk的等美国专利第5,554,645号和作为WO97/36497公开的国际申请PCT/US97/05693。因此，在一个实施方案中，通过将可可豆分解至可可粉、对粉脱脂、抽提可可多酚和纯化抽提物，制备可可抽提物。通过将可可豆和果肉冻干、对冻干的可可豆去果肉和去壳、粉碎去壳的豆，可制备可可粉。
例如，可通过去除咖啡因和/或可可碱纯化B型可可多酚抽提物，并通过凝胶渗透层析和/或高压液相色谱(HPLC)进一步纯化。凝胶渗透层析(例如在Sephadex LH-20上)可用于富集高级矢车菊苷配基低聚物的抽提物。例如，可不收集含有单体或低级低聚物的洗脱液，直到选择的低聚物从柱上洗脱下来。这种抽提的实例为本领域已知，描述于作为WO97/36497公开的国际申请PCT/US97/05693的实施例5中，其相关部分通过引用结合到本文中。通过使用制备型HPLC，例如，正相HPLC，可将抽提物分成例如含有至少50％重量单体或特定低聚物的单体和低聚物级分。当具体级分含有单体或任何低级低聚物(例如二聚体、三聚体或四聚体级分)时，该级分含有约90-95％重量的具体低聚物部分。在分离之后可合并希望的级分，以获得所选择的低聚物组合，例如含有3-10或5-10的低聚物。考虑本说明书中的指导、本领域的一般知识，例如Romanczyk等的美国专利第5,554,645号和作为WO97/36497公开的国际申请PCT/US97/05693的技术，本领域的技术人员可操作色谱条件以获得希望的矢车菊苷配基性质。
单体级分典型地含有表儿茶素和儿茶素单体的混合物，低聚物级分典型地含有二聚体(在二聚体级分中)、三聚体(在三聚体级分中)、四聚体(在四聚体级分中)等的混合物。单体和低聚物的混合物存在于分离的级分，因为可可含有不止一种的各种单体、二聚体等。由于为矢车菊苷配基组成部件的表儿茶素和儿茶素两种单体，以及低聚物中连接单体的化学键的原因，存在低聚物的可变性。因此，可可二聚体主要为B2和B5，各自含有两个表儿茶素单体。使用反相HPLC，如使用C18柱，可获得单独的单体和低聚物。
B型可可多酚可作为可可抽提物用于本发明的组合物，例如溶剂衍生抽提物、可可级分、分离的化合物和含有有效量的可可黄烷醇和/或矢车菊苷配基的可可成分或巧克力的形式。可使用传统的可可加工方法制备可可成分，但优选使用描述于Kealey等的美国专利第6,015,913号的方法制备。或者，为了提高可可多酚的水平，可使用从发酵因子为约275或更低的可可豆制备的巧克力液体和可可固体。这些成分具有的可可多酚含量高于使用传统加工方法(例如烘烤)和完全发酵可可豆可获得的含量。可使用常规的技术从上述成分中制备巧克力，或使用改进的方法在巧克力的制造中保存可可多酚，如作为WO99/45788公开的国际申请PCT/US99/05414中所述，其相关部分通过引用结合到本文中。通过至少一种以下非传统方法制备的巧克力在本文中被认为是“具有保存量可可多酚的巧克力”(i)从发酵不全或未发酵的可可豆制备可可成分；(ii)在可可成分制造过程中保存可可多酚；(iii)在巧克力的制造过程中保存可可多酚。
也可使用合成的B型矢车菊苷配基，通过本领域已知的方法制备，例如描述于作为WO99/19319公开的国际申请PCT/US98/21392中，其相关部分通过引用结合到本文中。
黄烷醇和/或矢车菊苷配基也可以是有用的。这些包括单体和低聚物的酯如没食子酸酯(例如表儿茶素没食子酸酯和儿茶素没食子酸酯)；用糖部分如单糖或双糖部分(例如β-D-葡萄糖)衍生化的化合物、糖基化的单体和低聚物或其混合物；矢车菊苷配基单体和低聚物的代谢物如硫酸盐、葡萄糖醛酸盐、由结肠微生物群代谢产生的矢车菊苷配基酶裂解产物之外的甲基化形式。这些衍生物可以来自天然来源或合成制备的。
包含A型和/或B型矢车菊苷配基和任选的另外心血管保护/治疗剂的食品可适合于人或兽医用途，包括宠物食品。食品可以是甜食之外的，然而，优选的降胆固醇食品为甜食如统一标准(SOI)或非SOI的巧克力，如奶、甜和半甜的巧克力包括黑巧克力、低脂巧克力和糖果(该糖果可以是覆盖了巧克力的糖果)。其它实例包括烘烤产品(例如核仁巧克力、烤点心、小甜饼、饼干)、调味品、杂拌糕条、太妃糖咀嚼物(toffee chew)、代餐棒(meal replacement bar)、涂酱(spread)、糖浆、粉末饮料混合物、可可或巧克力风味的饮料、布丁、年糕(ricecake)、拌饭(rice mix)、开胃调料(savory sauc)等。假如需要，该食品可以是可可或巧克力风味的。食品可以是含有坚果例如花生、胡桃、杏仁和榛果的巧克力和糖果，如杂拌糕条。应当注意的是，添加到本文所述食品中的带皮坚果也可增加总多酚的含量，因为，例如，花生皮含有约17％黄烷醇和和矢车菊苷配基、杏仁皮含有约30％黄烷醇和矢车菊苷配基。也可向本发明的组合物添加磨碎花生皮。在一个实施方案中，将坚果皮如花生皮加到巧克力糖果的奶油杏仁中。
在某些实施方案中，非巧克力食品含有约至少5mg/g至约10mg/g，例如至少5mg/g食品，优选至少10mg/g、更优选至少100mg/g的黄烷醇和/或B型矢车菊苷配基和/或A型矢车菊苷配基。假如需要，非巧克力食品可含有的可可矢车菊苷配基水平高于下述巧克力食品中所发现的。
巧克力糖果可以是牛奶或黑巧克力。在某些实施方案中，基于产品中脱脂可可固体的总量，每克巧克力包含至少3,600mg、优选至少4,000mg、优选至少4,500mg、更优选至少5,000mg、最优选至少5,500mg的黄烷醇和/或B型矢车菊苷配基和/或A型矢车菊苷配基。在其它实施方案中，基于产品中脱脂可可固体的总量，每克巧克力含有至少6,000mg、优选至少6,500、更优选至少7,000mg、最优选至少8,000mg的黄烷醇和/或B型矢车菊苷配基和/或A型矢车菊苷配基，甚至更优选10,000mg/g。
基于牛奶巧克力产品中脱脂可可固体的总量，牛奶巧克力糖果中每克牛奶巧克力可含有至少1,000mg、优选至少1,250mg、更优选至少1,500mg、最优选至少2,000mg的黄烷醇和/或B型矢车菊苷配基和/或A型矢车菊苷配基。在优选的实施方案中，基于牛奶巧克力产品中脱脂可可固体的总量，每克牛奶巧克力含有至少2,500mg、优选至少3,000mg、更优选至少4,000mg、最优选至少5,000mg的黄烷醇和/或B型矢车菊苷配基和/或A型矢车菊苷配基。
可将L-精氨酸添加到食品中，量可以有所变化。典型地，每100g部分脱脂的可可固体含有1-1.1g的L-精氨酸。它的范围可在每100g可可0.8-1.5之间。在某些实施方案中，本发明的巧克力食品含有的L-精氨酸的量高于可可成分中天然存在的L-精氨酸量。知道用于食品的可可成分和L-精氨酸的量，本领域的技术人员可轻易确定终产物中L-精氨酸的总量。食品通常含有至少5mg/g、优选至少30mg/g或至少60mg/g、甚至更优选至少200mg/g食品。
可以以单份提供每日有效量的黄烷醇和/或A型和/或B型矢车菊苷配基。因此，每份糖果(例如巧克力)可含有至少约100mg/份(例如150-200、200-400mg/份)。
在下述非限制性实施例中进一步描述本发明。
实施例实施例1——A型矢车菊苷配基的抽提和分离抽提使用正己烷(2×2000mL)对细碎的花生皮(498g)脱脂。室温下通过3500rpm下离心5分钟除去正己烷，弃去。允许残留的正己烷蒸发过夜。第二天使用丙酮∶水∶乙酸(70∶29.5∶0.5 v/v/v)(2×2000mL)在室温下抽提脱脂的花生皮2小时。通过离心回收抽提物(室温，3500rpm下5分钟)。部分压力下通过旋转蒸发去除有机溶剂(40℃)。通过冷冻干燥去除抽提溶剂的水部分，获得棕红色的粗品固体(51.36g)。
花生皮抽提物粗品的凝胶渗透将上述获得的花生皮抽提物粗品(24g)溶于70％的甲醇(150mL)，冷却1小时，涡旋3秒钟，然后室温3500rpm下离心5分钟。将上清装载于含有预溶胀于甲醇中的Sephadex LH-20(400g)的大柱顶部。使用100％甲醇洗脱，流速为10mL/分钟。收集29份级分，每份250mL，依据NP-HPLC所测定的组成合并(Adamson et al.，J.Ag.Food Chem.，474184-4188，1999)，获得共8种级分(i-viii)。级分i含有单体表儿茶素和儿茶素、级分ii-vii含有二聚体、三聚体或其混合物。级分v(1.8g)和级分vii(2.7g)各自主要含有二聚体和三聚体，选择其进一步纯化。
A型二聚体和三聚体的纯化将级分v(1.8g)溶于20％甲醇中的0.1％乙酸中(40mg/mL)。注射体积为2mL。在Hypersil ODS(250×23mm)上梯度条件下进行分离。流动相由水中的0.1％乙酸(流动相A)和甲醇中的0.1％乙酸(流动相B)组成。梯度条件为0-10分钟，20％B等度；10-60分钟，20-40％B线性；60-65分钟，40-100％B线性。在280nm处监控分离。合并数次制备分离的具有相同保留时间的级分，40℃部分真空下旋转蒸发，冷冻干燥。获得5个级分(a-e)。级分d和e各自经LCMS鉴定为二聚体A1和A2。除了A1和A2，先前从花生皮中分离到了4种不同的二聚体(Lou et al.，Phytochemistry 51，297-308，1999)。
如上所述纯化级分vii，获得具有以上表示结构式的带A键的单一三聚体。
通过质谱确证纯化合物的结构，使用HPLC在UV 280nm处测定化合物的纯度。A1二聚体为95％纯，A2二聚体为91％纯，A三聚体为84％纯。
实施例2黄烷醇/矢车菊苷配基的测定如下定量矢车菊苷配基使用商业获得的(-)-表儿茶素、通过Hammerstone，J.F.et al.，J.Ag.Food Chem.；1999；47(10)490-496；Lazarus，S.A.et al.，J.Ag Food Chem.；1999；47(9)；3693-3701；和Adamson，G.E.et al.，J.Ag.Food Chem.；1999；47(10)4184-4188所述的方法以纯态获得的二聚体至十聚体制备组分标准。使用描述于先前引用的Adamson参考的正相HPLC方法，分析使用这些化合物的标准母液，分别在276nm激发波长和316nm发射波长下进行荧光检测。对峰进行分组，统计它们的面积以包括任何一种低聚物内所有同分异构体的贡献度，使用二次拟合产生标准曲线。单体和较小的低聚物具有几乎线性的图，该图与早先使用线性回归产生基于单体和基于二聚体的标准曲线一致。
然后将这些标准曲线用于计算如下制备的样品中的矢车菊苷配基水平首先，使用3份正己烷抽提液(每份45mL)对可可或巧克力样品(约8g)脱脂。接着，将1g脱脂材料用5mL丙酮/水/乙酸混合物(70∶29.5∶0.5v/v)抽提。然后通过将来自样品的HPLC数据与上述获得的标准曲线(使用纯化的低聚物)比对，测定脱脂材料中矢车菊苷配基的量。使用Association of Official Analytical Chemists (AOAC OfficialMethod 920.177)的标准方法测定样品的脂肪百分含量(使用1g样品量的巧克力或0.5g样品量的液体)。然后计算原始样品(有脂肪)中的总矢车菊苷配基水平的量。在每个样品上样之前进行校准，免除柱与柱变化的影响。
实施例3——A型矢车菊苷配基对NO产生和血管舒张的影响使用无血清人脐动脉上皮细胞(HUVEC)试管内培养系统和兔离体主动脉环模型，各自研究实施例1中所述化合物对一氧化氮(NO)产生和血管舒张的影响。由上皮细胞产生的NO和预收缩主动脉环的松弛是评估受试化合物心血管效果的两个主要标记。
试管内实验将来自单个供体的HUVEC培养于无血清、低蛋白(0.5g/l)、无抗生素的细胞培养基中，其中添加有必需的生长因子、营养素和矿物质。当生长至融合时，培养细胞表达内皮标记(血管性血友病因子，CD31抗原，Dil-Ac-LDL的摄取)，并展示出典型地“鹅卵石形态学”。使用脱铁转铁蛋白、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶取代细胞培养基，排除受试化合物的次级效应，包括它们自动氧化介导的过氧化氢形成。
评估受试化合物急性(2小时)和慢性(24小时周期内给予5次剂量)调节NO产生的潜力。在所有实验中包括阳性对照(乙酰胆碱和/或组胺)和阴性对照L-NNMA(NO合酶抑制剂)。细胞计数和总蛋白用于评估批内变化。也监控受试化合物潜在的毒性作用(测量MTT的减少)。
通过测量存在于细胞培养基中的所有主要一氧化氮终产物(NOx，包括硝酸盐、亚硝酸盐、亚硝酸硫醇)的总量评估NO产生。对于此目的，氯化钒(III)/盐酸在95℃下直接还原NOx产生NO。随后使用NO分析仪(Sievers Instruments，Inc.Boulder，CO)，通过测量臭氧和NO之间化学计算性反应期间发出的化学荧光，评估从培养基中释放的NO的量。
从三次实验中获得本文呈现的数据，表达为存在于培养基中的NO浓度(以μmol/l)(为NOx)+/-标准差(SD)。根据内在存在于完全补充细胞培养基中的NOx校正数据，根据从中取样的培养基体积进行标准化。使用Student′s t-检验分析数据，可信度95％。等于或小于0.005的P值定义为统计学显著的。
对于急性作用测试，37℃和5％CO2下使用100nM、1μM和10μM浓度的单剂量A2二聚体和A型三聚体孵育HUVEC 2和24小时。2小时后观察到对NO产生无任何效果。单剂量后24小时，1μM浓度下观察到无任何效果。两种测试化合物在10μM浓度下都比对照水平增加了NO的产生(两者都，A2更佳)，但都没有统计学显著的水平。基于MTT测定，受试化合物没有毒性作用。
对于慢性作用测试，使用受试化合物的5次后继剂量各自孵育HUVEC 24小时。每24小时处理后，置换培养基。测试了A2二聚体和A型三聚体。A型三聚体在NO产生中展示出统计学显著的增加(P＝0.041).
离体实验如先前由Karim et al.，J.Nutrl Suppl.，130(8S)2105S-2108S(2000)所述(其相关部分通过引用结合到本文中)，在离体实验中测试了A型矢车菊苷配基对内皮依赖性松弛的影响。使用这种方法的优点在于它评估了功能性心血管终点。该方法只能评估急性事件，不允许用于药物诱导的蛋白表达/活性的鉴定。
总之，从雄性新西兰白兔中获取兔主动脉环。随后分离，将环装于充氧的Kreb′s缓冲液，使用NE(10-6M)预收缩。当张力达到稳定态时，应用受试化合物的累积浓度(10-9至10-4M)。
本实验中包括阳性对照乙酰胆碱(10-6M)和阴性对照L-NAME。L-NAME为NO合酶(NOS)抑制剂，其使用允许区分内皮依赖性和非内皮依赖性松弛事件。主动脉环的剥去代表了相似对照。在添加各个受试化合物之前，往主动脉浴中加入400U/mL的过氧化氢酶，以保证观察到的效果不是由培养基中产生的过氧化氢(H2O2)引起的。将松弛反应测量为主动脉环显示张力降低对于时间的函数。获得的数据表达为去甲肾上腺素(NE)收缩环的松弛百分率。使用与如上所述相同的统计方法。通过对平均松弛百分率(+/-SE)对使用的浓度作图，获得剂量效应曲线。
离体筛选的结果证明A1和A2二聚体以及A型三聚体在10-4M浓度都诱导了血管舒张在此浓度A1二聚体诱导了93.20+/-3.46％的血管舒张，A2二聚体诱导了85.00+/-2.91％血管舒张，A型三聚体诱导56.5+/-16.56％的松弛。此外，A1和A2二聚体都是比阳性对照(乙酰胆碱)更有效的松弛剂，对A1二聚体在P＝0.005时差异是统计学显著的。
当裸露血管或使用L-NAME预处理血管时，弱化了松弛反应。乙酰胆碱典型地在10-7M浓度下产生了松弛反应，10-6M浓度下达到最大松弛。当使用载体单独处理血管时没有观察到任何效应。
图1A-C中表示由受试化合物介导的剂量依赖性松弛。
实施例4在全血中A1二聚体对血小板的影响使用血小板计数技术测量A1二聚体[A1D]的血小板聚集，通过流式细胞计量术测定血小板/单核细胞缀合物(P/M)和血小板/中性粒细胞缀合物(P/N)的形成。在随后的实验中，也测量了与白细胞(CD62P)有关的血小板的激活态，以及白细胞本身(CD11b)的激活态。
材料和方法将A1二聚体[A1D]溶于乙醇。一旦在溶液中，用盐水进一步稀释变得可能。从Novartis(Basel，Switzerland)获得水蛭素(RevascTM)，-20℃下存储在玻璃瓶中，为5mg/ml盐水溶液。胶原(Nycomed)来自Axis Shield Diagnostics(Dundee，UK)。使用由制造商提供的等渗葡萄糖缓冲液从母液(1mg/ml)制备浓缩液。阿司匹林(乙酰水杨酸-ASA)、二磷酸腺苷(ADP)、血小板活化因子(PAF)、花生四烯酸(AA)和肾上腺素来自Sigma。固定液由含有0.16％w/v甲醛的140mMNaCl、4.6mM Na2EDTA、4.5mM Na2HPO4和1.6mM KH2PO4组成，pH7.4。
使用由Medical Engineering Unit(诺丁汉大学)生产的多样搅拌器(MSA)研究血样。MSA用于维持血样在37℃，需要时在1000rpm搅拌速度下搅拌少量血样。
使用商业可获得的荧光标记抗体，在装备有5W激光(在15mW功率、488nm波长操作)的Facscan上(Becton Dickinson，UK)或在装备另外的Trigon激光器(在633nm波长操作)的LSRII流式细胞器(BectonDickinson，UK)上，进行流式细胞计量。
血液收集血液来自健康的志愿者，其否认前10天内摄入过任何阿司匹林或非甾体抗炎药。将这些血分装于含有水蛭素和少量待研究黄烷或乙醇(作为对照)的有刻度聚苯乙烯管中(终浓度50μg/ml)。血液中乙醇的终浓度始终为0.3％。在某些实验中，试管中也包括了作为对照的阿司匹林(ASA)或盐水。然后在进行实验之前，将这些试管封盖，倒置3次以保证适当混合，然后37℃下置于MSA中30分钟，在此期间血液保留原状。将另一份血样置于商业制备的含有K2EDTA抗凝血剂的真空采血管中(vacutainer tube)。
血小板聚集预孵育30分钟后，将血液(480μl)分装于小聚苯乙烯试管中，每管都含有搅拌子，在MSA中搅拌2分钟。2分钟后，将激动剂或载体对照溶液(20μl)加到试管中。然后在MSA中搅拌最多10分钟，此时通过将小子样与固定液以1∶2(v/v)的比例混合，固定血小板聚集物。使用UltraFlo-100全血血小板计数器测定固定样品中的血小板数。参照EDTA样品的血小板计数，作为单一血小板损失百分率计算血小板聚集。
血小板-白细胞缀合物形成在与用于测量血小板聚集的样品相同的搅拌样品中测量血小板-白细胞缀合物形成。加入激动剂后4分钟或10分钟取子样，并转入适当的抗体或抗体混合物中。然后在黑暗中室温孵育不低于20分钟。红细胞融解并洗涤处理后，将细胞悬液应用于FACScan或LSRII流式细胞器。通过线性放大获得的前向散射(细胞尺寸)和侧向散射(细胞粒度)性质的点图，由逻辑门鉴定白细胞。通过它们的前向散射-侧向散射性质和CD14(PE)阳性鉴定单核细胞，而以相同方式但CD14表达为阴性鉴定中性粒细胞。“pan”白细胞标记CD45(PerCP)也用于鉴定白细胞群。要求荧光参数用对数放大。将血小板单核细胞(P/M)和血小板中性粒细胞(P/N)缀合物定量为单核细胞(P/M mf)和中性粒细胞群(P/N mf)的CD42a(FITC)荧光中值。通过CD11b(AlexaFluor647)表达测量白细胞的活化(对单核细胞为CD11b-M，对中性粒细胞为CD11b-N)。通过与白细胞有关的血小板CD62P(PE)阳性，测量血小板活化(P-选择蛋白表达)(在P/M上为CD62P-M，在P/N上为CD62P-N)。
FACScan用于测量实验中的荧光探针，其中共使用3种颜色，但为了研究4种颜色需要LSRII。LSRII是比FACScan更敏感的仪器并产生更强的荧光值(mf)。FACScan上获得的结果不能直接与LSRII上获得结果比较。
结果A1二聚体对聚集、P/M和P/N的影响血液取自3名不同志愿者，测量应答胶原(0、0.125、0.25和0.5μg/ml)的血小板聚集和血小板/白细胞缀合物形成。在这些实验中，使用的阿司匹林浓度为100μM，使用的A1二聚体为0.3mM。在添加激动剂后4分钟和10分钟测量聚集，只在10分钟后测量血小板/白细胞缀合物形成。
来自不同志愿者的血液对胶原的绝对应答是变化的。这就意味着黄烷醇的相对抑制效果依赖于志愿者对使用的具体胶原浓度的反应性。由于此原因，为了比较，决定分析结果的合适方法是计算与使用的胶原浓度无关的A1二聚体平均值。结果显示于图2中。(在这些实验中，也测试了A型矢车菊苷配基之外的某些化合物，但因为它们与本文的讨论无关，就没有对它们进行鉴定)。因为对3个血样的每一个都使用了3种胶原浓度，结果各自为9个个别值的平均值(±sem)。
A1二聚体抑制了胶原诱导的血小板聚集。ASA对照也有效地抑制了聚集、P/M和P/N。
从这一点决定包括测量缀合物中血小板和白细胞两者活化的程度，该缀合物在胶原添加至血液后形成。在形成的缀合物中在与白细胞有关的血小板上测量P-选择蛋白(CD62P)。白细胞活化测量为表达的CD11b的量。使用4颜色分析。
黄烷醇对胶原诱导的聚集、P/M、P/N、CD62P-M、CD62P-N、CD11b-M和CD11b-N影响的比较血样取自3名不同志愿者，测量应答胶原(0、0.125、0.25和0.5μg/ml)血小板聚集(4分钟)和血小板/白细胞缀合物形成(10分钟)。同一时间通过与CD62P和CD11b抗体温育，测量缀合物中血小板和白细胞的活化。在这些实验中，使用的阿司匹林浓度为100μM，使用的A1二聚体为0.3mM。结果显示于图3。(在这些实验中也测试了A型矢车菊苷配基之外的某些化合物，但因为它们与本文的讨论无关，就没有对它们进行鉴定)。如上所述，通过包括3种胶原浓度的所有结果并计算平均值(±sem，n＝9)，进行分析。
A1二聚体抑制了胶原诱导的聚集。然而，值得注意的是，A1D并不抑制白细胞的活化(单核细胞和白细胞上的CD11b)。阿司匹林对CD11b也没有效果。
权利要求
1.一种治疗或预防NO反应性疾病或紊乱的方法，所述方法通过给予需要其的患者有效量的A型矢车菊苷配基或其药物可接受的盐或衍生物，所述A型矢车菊苷配基由n个下式的单体单位组成 其中(i)所述单体单位通过4→6和/或4→8黄烷间键连接；(ii)至少两个所述单体单位另外通过A型黄烷间键(4→8；2→O→7)或(4→6；2→O→7)连接；(iii)n为2-12；并且其中所述患者为人或兽医动物。
2.权利要求1的方法，其中所述A型矢车菊苷配基被分离和纯化。
3.权利要求1的方法，其中所述A型矢车菊苷配基为A1二聚体。
4.权利要求3的方法，其中所述A1二聚体被分离和纯化。
5.权利要求1的方法，其中所述A型矢车菊苷配基为A2二聚体。
6.权利要求5的方法，其中所述A2二聚体被分离和纯化。
7.权利要求1的方法，其中所述A型矢车菊苷配基为A型三聚体。
8.权利要求7的方法，其中所述A型三聚体是基本纯的。
9.权利要求1的方法，其中所述A型三聚体具有下式
10.权利要求1-9任一项的方法，其中所述NO反应性疾病或紊乱为高血压、心血管疾病、冠状动脉疾病、血管循环紊乱和/或肾脏疾病。
11.权利要求1-9任一项的方法，其中所述患者具有心脏病发作、中风、充血性心力衰竭和/或肾衰竭的风险。
12.权利要求1-9任一项的方法，其中所述患者患有高血压合并下列任何疾病糖尿病、肥胖症、高胆固醇水平和/或吸烟。
13.一种治疗高血压的方法，所述方法通过给予需要其的患者有效量的A型矢车菊苷配基或其药物可接受的盐或衍生物，所述A型矢车菊苷配基由n个下式的单体单位组成 其中(i)所述单体单位通过4→6和/或4→8黄烷间键连接；(ii)至少两个所述单体单位另外通过A型黄烷间键(4→8；2→O→7)或(4→6；2→O→7)连接；(iii)n为2-12；并且其中所述患者为人或兽医动物。
14.权利要求1的方法，其中所述A型矢车菊苷配基被分离和纯化。
15.权利要求1的方法，其中所述A型矢车菊苷配基为A1二聚体。
16.权利要求15的方法，其中所述A1二聚体被分离和纯化。
17.权利要求1的方法，其中所述A型矢车菊苷配基为A2二聚体。
18.权利要求17的方法，其中所述A2二聚体被分离和纯化。
19.权利要求1的方法，其中所述A型矢车菊苷配基为A型三聚体。
20.权利要求19的方法，其中所述A型三聚体是基本纯的。
21.权利要求19的方法，其中所述A型三聚体具有下式
22.权利要求13-21任一项的方法，其中所述患者患有任何下列疾病糖尿病、肥胖症、高胆固醇水平和/或吸烟。
23.一种包含分离和纯化的A1二聚体的药物组合物。
24.一种含有分离和纯化的A2二聚体的药物组合物。
全文摘要
本发明涉及含有A型矢车菊苷配基的组合物，如药物、食品、食品添加剂、食物补充剂，及其使用方法，用于人或兽医动物的预防或治疗，以治疗或预防反应性健康疾病，治疗高血压、心血管疾病、冠状动脉疾病和/或血管循环紊乱，预防或降低心脏病发作、中风、充血性心力衰竭和/或肾衰竭的风险，或改善血流量例如肾脏血流量。这种组合物可任选含有另外的NO调节剂和/或心血管保护或治疗剂，或可与这种药物组合给予。
文档编号A61K31/7048GK1938015SQ200580009421
公开日2007年3月28日 申请日期2005年1月28日 优先权日2004年1月28日
发明者H·H·施米茨, C·L·克维克－乌里贝, M·A·凯姆, J·F·小哈默斯通 申请人:马尔斯公司