专利名称：抗原虫剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种抗原虫剂。
背景技术：
对于采用化学疗法的方式治疗由原虫引起的传染性疾病而言，存在的最严重的问题是原虫会产生耐药性。例如，一个典型的例子就是恶性疟的耐药性。迄今为止，虽然研制了一些治疗药物，但是对这些药物产生了耐药性的原虫也出现了。因此，原虫传染性疾病在世界范围内蔓延。这种原虫传染疾病之一为利什曼病。
利什曼病是一种由利什曼原虫所引起、在包括南美洲在内的热带地区特有的寄生虫疾病。这种疾病是世界卫生组织WHO所指定的六种热带疾病之一。在非洲、中东、中南美以及亚洲总计有大约12,000,000的患者。此外，每年有400,000人感染这种疾病。吸血昆虫白蛉是疾病的传播途径。当白蛉吸血时，吸血白蛉体内的利什曼原虫会通过伤口侵入，造成感染。原虫寄生在巨噬细胞上，导致内脏、皮肤以及粘膜皮肤的利什曼病的病理状况。内脏利什曼病的病理状况尤其危险，严重的会导致死亡。
利什曼原虫分为以下四类(种团(complex))杜氏利什曼原虫、热带利什曼原虫、墨西哥利什曼原虫和巴西利什曼原虫。每一类引起不同的病理状况。基本上来说，这些状况都是由于原虫寄生在特定器官和局部巨噬细胞上所产生的。内脏利什曼病是由杜氏利什曼原虫寄生在肝、脾脏、骨髓等的巨噬细胞和网状内皮细胞上所产生的，它的主要症状包括肝脾肿大、贫血、白细胞减少、发烧和淋巴结病。皮肤利什曼病分为以下两类旧大陆型利什曼病和新大陆型利什曼病。旧大陆型皮肤利什曼病是由热带利什曼原虫引起的，而新大陆型皮肤利什曼病是由墨西哥利什曼原虫引起的，每种原虫都寄生在皮肤巨噬细胞上而造成皮肤溃疡。巴西利什曼原虫会引起粘膜皮肤利什曼病，这种病造成粘膜和皮肤的损伤，然而它偶而也引起皮肤利什曼病。
如上所述，利什曼原虫的类型非常多。而且，从免疫学的观点来看，即便在类似的病理状况下，在抗原性上还是存在着地域差别，这使得疫苗的研发较为困难。因此，非常需要化学疗法来解决这方面的问题。
近来，五价锑(商品名Pantostam和Glucantime)已经作为治疗利什曼病的一线用药。在上述药物无效时，就会使用喷他脒及两性霉素B等。然而，这些药物可能会引起强烈的副作用，因此，医生在使用它们的时候必须十分小心。另外，锑高昂的成本也是问题。
作为其它治疗剂，专利文献1公开了吉玛烷内酯型或者愈创内酯型倍半萜类化合物以及包含它们的药物。专利文献2公开了一个对治疗利什曼病有效的三唑衍生物。
然而，研发廉价、副作用小的治疗药物是十分值得期待的。
“紫云膏”是一种汉方软膏剂，它是由江户时代的外科医生华冈青洲研制的。已知该软膏剂具有抗炎、止痛、止血、抗菌、生肌以及其它作用。它对一些外科疾病，如烧伤、切伤、擦伤、痔疮(包括由痔疮引起的疼痛、肛裂、出血以及脱肛)、褥疮、瘭疽等是有效的。该软膏剂有效的皮肤病包括湿疹、主妇湿疹、异位性皮炎、牛皮癣、角皮病、皮肤皲裂以及干燥(嘴唇、手、脚、脚跟和肘)、脚癣、鸡眼、胼胝、疣、痱子、皮肤刺激、丘疹、斑、脓疱、疖、色素斑、水疱、冻疮、糜烂、溃疡以及虫咬。由于这种软膏用于防止水疱的形成，已证明这种软膏剂在治疗烧伤方面特别有效。但是，到目前为止还没有关于紫云膏治疗热带传染性皮肤病的报道。
紫云膏由紫草、当归、芝麻油、猪油和蜂蜡组成，紫草是紫草或新藏假紫草(新疆紫草)的根，这两种植物都是紫草科植物。由前者得来的产品称为″硬紫草″，由后者得来的产品称为″软紫草″。据文献报道，其成分是萘醌染料，如紫草宁、β，β-二甲基丙烯酰基紫草宁、乙酰基紫草宁、异丁酰基紫草宁、异戊酰基紫草宁、三丙烯酰基紫草宁、去氧紫草宁和脱水紫草素。这里用到的当归是东当归或北海当归。文献报道它的成分是亚丁基苯并呋喃酮、黄樟素、瑟丹酮酸、邻戊酰苯甲酸、镰叶芹二醇(falcarindiol)、镰叶芹醇(falcarinol)和镰叶芹酮(falcarinolone)等。
日本特开2001-226369号公报[专利文献2]日本特开2003-146877号公报发明内容本发明的目的在于提供一个廉价、副反应少的抗原虫剂，它是一个非常有效的抗利什曼病药。
本发明包含以下内容(1)一种抗原虫剂，其含有式(I)所示的化合物、其盐或它们的溶剂合物作为活性成分 式中，R表示-H或酰基。
(2)如(1)所述的抗原虫剂，其中式(I)所示化合物是式(II)或式(III)所示的化合物 式中，R1表示-H、-C(＝O)CH3、-C(＝O)CH(CH3)2、-C(＝O)CH2C(CH3)2OH、-C(＝O)CH2CH(CH3)2、-C(＝O)CH(CH3)CH2CH3或-C(＝O)CH＝C(CH3)2，
(3)一种抗原虫剂，其含有来自紫草的、显示抗原虫活性的物质作为有效成分。
(4)一种抗原虫剂，其含有紫草提取物或其处理物作为有效成分。
(5)如(3)或(4)所述的抗原虫剂，其含有当归的提取物或其处理物作为有效成分。
(6)一种抗原虫剂，其含有紫云膏作为有效成分。
(7)如(1)～(6)任一项所述的抗原虫剂，该抗原虫剂是抗利什曼病药。
(8)权利要求7所述的抗原虫剂，该抗原虫剂用于治疗利什曼病。
本发明提供一种抗原虫剂，这种抗原虫剂对治疗利什曼病特别有效。
本发明提供的抗原虫剂含有天然物质作为活性成分，副作用的问题很少。
本说明书包括作为本申请优先权基础的日本特许申请2004-223485号说明书和/或附图
中记载的内容。
具体实施例方式
本发明人发现式(I) 式中，R表示-H或酰基，
所示的化合物具有很强的抗原虫作用。式(I)所示的化合物具有不对称碳原子。本化合物可以是旋光性物质或外消旋体。式(I)所示的化合物还可以是盐的形式。另外，式(I)所示的化合物或其盐还可以是溶剂合物的形态。当作为抗原虫剂使用时，上述盐或溶剂化物必须可药用。
当式(I)中的R是酰基时，可以是脂族酰基或者芳族酰基。酰基的碳原子数通常为2-24个。
脂族酰基的典型例子可以举出碳原子数为1～23、优选1～10、更优选1～8、进一步优选1～6、最优选1～4的直链或支链烷基，碳原子数为2～23、优选2～10、更优选2～8、进一步优选2～6、最优选2～4的直链或支链烯基，或者末端上结合有羰基的碳原子数为2～23、优选2～10、更优选2～8、进一步优选2～6、最优选2～4的直链或支链炔基。上述的脂族酰基还可以被适当的取代基取代，例如羟基、碳原子数1～6的烷氧基、巯基、或者碳原子数1～6的烷硫基等。脂族酰基特别优选为-C(＝O)CH3、-C(＝O)CH(CH3)2、-C(＝O)CH2C(CH3)2OH、-C(＝O)CH2CH(CH3)2、-C(＝O)CH(CH3)CH2CH3或-C(＝O)CH＝C(CH3)2。
芳族酰基的典型例子可以举出末端上结合有羰基或者通过从上述脂族酰基中除去1个氢原子而衍生的基团、并且可被羟基、碳原子数1～6的烷氧基、巯基、碳原子数1～6的烷硫基等适当取代基取代的碳原子数5～12的芳基，例如苯甲酰基、1-萘基羰基、2-萘基羰基等。
在上述化合物中，特别优选的化合物是下述已知化合物，即式(II)或式(III)所示的化合物 式中，R1表示-H(紫草宁)、-C(＝O)CH3(乙酰基紫草宁)、-C(＝O)CH(CH3)2(异丁酰基紫草宁)、-C(＝O)CH2C(CH3)2OH(β-羟基异戊酰基紫草宁)、-C(＝O)CH2CH(CH3)2(异戊酰基紫草宁)、-C(＝O)CH(CH3)CH2CH3(α-甲基正丁酰基紫草宁)或-C(＝O)CH＝C(CH3)2(β，β-二甲基丙烯酰基紫草宁)] (紫草素)也可以优选使用两种或多种上述化合物的混合物。
这些已知化合物可以是化学合成的，也可以是从天然产物中分离得到的。另外，还可以使用市售的产品。例如，基于式(II)的7种化合物可以从紫草中分离后使用。式(III)所示的化合物可以使用从欧紫草(Alkanna tinctoria)、昭苏滇紫草(Onosma echoides)、田紫草等中(Lithospermum arvense)分离后使用。另外，式(I)的化合物可以由天然物质衍生获得。例如，该化合物可以根据Bioorganic & MedicinalChemistry Letters(生物有机及药物化学快报)，12(10)，1375-1378，2002和日本特开昭61-151151号公报(
公开日1986年7月9日)中记载的方法从紫草宁中获得。
本发明还涉及一种抗原虫剂，该抗原虫剂含有来源于紫草、显示抗原虫活性的物质作为有效成分。本发明的抗原虫剂优选还含有当归的提取物或其处理物作为有效成分。
对本发明中使用的紫草或当归的产地及品种没有特别限定。紫草或当归可以通过破碎、粉碎等制成粉末后使用。优选作为提取物或其处理物使用。
提取溶剂优选己烷。还可以使用甲醇、乙醇、丁醇、异丙醇、乙酸乙酯、丙酮、苯、环己烷、氯仿、二氯甲烷等。通常，每1kg紫草或当归使用3～10L提取溶剂。
对于提取温度没有特别限定。提取温度处于溶剂的熔点和沸点之间。还可以实施超临界提取。另外，提取通常在大气压力下进行，也可以在加压或减压下进行。提取时间根据提取温度等而不同。通常为6～24小时。
通过使用布、不锈钢过滤器、滤纸等过滤如上获得的提取液，以将杂质等除去，因此可以获得所需提取液。另外，过滤后的提取液还可以实施喷雾干燥处理、冷冻干燥处理、超临界处理等。
如上获得的提取物可以直接作为本发明抗原虫剂的有效成分使用。另外，通过离子交换色谱、凝胶过滤色谱、透析等各种纯化方法处理该提取物，还可以作为活性提高的处理物使用。
另外，本发明的抗原虫剂可以通过将上述化合物或其盐或它们的溶剂合物、紫草或当归的提取物或处理物与公知的药用载体组合，制成制剂。给药形式没有特别的限制，可以根据需要进行选择。通常来说，作为片剂、胶囊剂、颗粒剂、微粒剂、散剂、液体剂、糖浆剂、混悬剂、乳剂、酏剂等口服制剂；注射剂、点滴剂、栓剂、吸入剂、经皮吸收剂、经粘膜吸收剂、贴敷剂、软膏剂等非口服剂使用。
本发明的抗原虫剂的给药剂量因患者的年龄和体重、病情的严重程度以及给药途径的不同而不同。以口服给药时，作为紫草的己烷提取物干燥粉末，给药剂量通常是每天10～3000mg；给药次数通常为每天1～3次。
本发明的口服制剂是使用淀粉、乳糖、蔗糖、甘露醇、羧甲基纤维素、玉米淀粉和无机盐等赋形剂根据常规方法制造的。
在这种制剂中，除了上述的赋形剂之外，还可以使用粘合剂、崩解剂、表面活性剂、润滑剂、助流剂、矫味剂、着色剂、香料等。
作为粘合剂的具体例子，可以举出微晶纤维素、微晶纤维素羧甲纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基纤维素、低取代羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、羟丙基甲基纤维素琥珀酸醋酸酯、羧甲纤维素钠、乙基纤维素、羧甲基乙基纤维素、羟乙基纤维素、小麦淀粉、米淀粉、玉米淀粉、马铃薯淀粉、糊精、预胶化淀粉、部分预胶化淀粉、羟丙基淀粉、支链淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、氨基烷基甲基丙烯酸酯共聚物E、氨基烷基甲基丙烯酸酯共聚物RS、甲基丙烯酸酯共聚物L、甲基丙烯酸酯共聚物、聚乙烯缩醛二乙氨基醋酸酯、聚乙烯醇、阿拉伯胶、阿拉伯胶粉末、琼脂、明胶、白色虫胶、胺黄树胶、精制白糖和聚乙二醇。
作为崩解剂的具体例子，可以举出微晶纤维素、甲基纤维素、低取代羟丙基纤维素、羧甲纤维素、羧甲纤维素钙、羧甲纤维素钠、交联羧甲纤维素钠、小麦淀粉、米淀粉、玉米淀粉、马铃薯淀粉、部分预胶化淀粉、羟丙基淀粉、羧甲基淀粉钠和胺黄树胶。
作为表面活性剂的具体例子，可以举出大豆卵磷脂、蔗糖脂肪酸酯、聚氧乙烯硬脂酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚氧乙烯聚氧丙烯二醇、倍半油酸山梨坦、三油酸山梨坦、单硬脂山梨坦、单棕榈山梨坦、单月桂山梨坦、聚山梨酯、单硬脂酸甘油酯、月桂基硫酸钠和聚桂醇。
作为润滑剂的具体例子，可以举出小麦淀粉、米淀粉、玉米淀粉、硬脂酸、硬脂酸钙、硬脂酸镁、含水二氧化硅、轻质硅酸酐、合成硅酸铝、干燥氢氧化铝凝胶、滑石、硅酸铝镁、磷酸氢钙、无水磷酸氢钙、蔗糖脂肪酸酯、蜡、氢化植物油和聚乙二醇。
作为助流剂的具体例子，可以举出含水二氧化硅、轻质硅酸酐、干燥氢氧化铝凝胶、合成硅酸铝和硅酸镁。
另外，本发明中使用的抗原虫剂在以液体剂、糖浆剂、混悬剂、乳剂和酏剂给药时，可以含有矫味剂和着色剂。
本发明的抗原虫剂在添加到食品、口香糖、饮料等中时，可作为所谓的特殊保健食品(如抗利什曼病食品)等。
含有来自于紫草和当归的成分的现有汉方药紫云膏作为本发明的抗原虫剂也优选。由于已知紫云膏是对皮肤外伤非常有效的软膏剂，因此其可用于治疗利什曼病相关的疾病，特别是皮肤型或粘膜皮肤型利什曼病。紫云膏可以使用由Tsumura&Co、MaruishiPharmaceutical Co.，Ltd、KaneboPharmaceutical Co.，Ltd和MatsuuraKanpo Co.，Ltd提供的市售品。另外，紫云膏还可以根据如下叙述的方法制作。首先，加热芝麻油，加入蜂蜡使之融化。之后，加入猪油使得所有的成分充分地融化。再在其中加入当归，当当归的表面颜色变成焦糖色时，实现了充分的提取后取出当归，然后加入紫草。充分提取后取出紫草。过滤除去剩余的残渣，放置一段时间使其凝固。采用软膏板将凝固的产物充分地混炼以使得它们可以使用。
以下根据实施例更加具体地说明本发明，但本发明的范围并不限定于实施例。
实施例[实施例1]测定紫草的己烷提取物(采用参考例1的方法得到)、紫草·当归混合物的己烷提取物(采用参考例2方法得到)、紫草宁(NagaraScience)、乙酰基紫草宁(Nagara Science)、β，β-二甲基丙烯酰基紫草宁(Nagara Science)、异丁酰基紫草宁(Nagara Science)、α-甲基正丁酰基紫草宁(Nagara Science)、异戊酰基紫草宁(Nagara Science)、β-羟基异戊酰基紫草宁(Nagara Science)和紫草素(Wako PureChemical Industries，Ltd.)的抗利什曼原虫活性。
首先，将1～5mg各样品溶解在二甲基亚砜(DMSO)中，制作DMSO溶液(10mg/ml)。然后，利用Medium 199培养基稀释该溶液(800μg/ml)，并使其通过滤膜。将样品溶液调整为9个浓度，在微量滴定板中接种50μl的各浓度样品溶液和50μl最终浓度调制为2×105/ml的利什曼原虫培养液，使培养液的总量为100μl。在27℃、5％CO2下培养48小时后，添加10μl Tetracolor ONE试剂，培养6小时后，通过微量培养板读数器测定OD值(450～630nm)。测定是对各样品的各浓度(3个孔)进行的。求出平均值制图，求出IC50值。结果示于表1中。
如表1所示，紫草的己烷提取物、紫草·当归混合物的己烷提取物和紫草宁相关化合物均显示很强的抗利什曼原虫活性。
(参考例1)紫草的己烷提取物的制备将利用研磨机粉碎的干燥紫草放入茄形烧瓶内，加入30倍量的己烷，在45℃下提取5小时。之后，进行过滤将滤液浓缩干燥，得到提取物。
(参考例2)紫草·当归混合物的己烷提取物的制备分别称取等量的利用研磨机粉碎的干燥紫草和干燥当归，放入茄形烧瓶内，加入紫草和当归混合物30倍量的己烷，在45℃下提取5小时。之后，进行过滤将滤液浓缩干燥，得到提取物。
实施例2对患有皮肤利什曼病的患者给与紫云膏，确认在活体内的治疗效果。
所用紫云膏是Matsuura Kanpo Co.，Ltd.生产的紫云膏。1g该紫云膏的制剂如下得到将0.08g当归、0.30g蜂蜡、0.12g紫草、0.03g猪油、1.0g芝麻油作为原料混合，使生药(当归、紫草)的有效成分转移到油相(即进行萃取)中，除去生药的残存物(提取残渣)，从而得到。
作为受试者的皮肤利什曼病患者为26名，年龄、性别的构成如下所示。
表2受试者的年龄性别构成
指导上述26名受试者每日两次适量涂膜紫云膏，共计4周，每周由临床试验的处置医生诊断。
在开始处置前、处置期间、处置完成后，进行病变部位大小(mm)和状态(干燥或湿润)的临床外观观察，将对处置的反应分为4级进行评价。
26名受试者中14名(53.48％)可以得到最终的追踪调查结果。结果示于表3中。确认紫云膏对于皮肤利什曼病的治疗有效。
表3
本说明书中引用的所有出版物、专利和专利申请完整地作为参考引入到本说明书中。
权利要求
1.一种抗原虫剂，其含有式(I)所示的化合物、其盐或它们的溶剂合物作为活性成分 式中，R表示-H或酰基。
2.权利要求1所述的抗原虫剂，其中式(I)所示的化合物是式(II)或式(III)所示的化合物 式中，R1表示-H、-C(＝O)CH3、-C(＝O)CH(CH3)2、-C(＝O)CH2C(CH3)2OH、-C(＝O)CH2CH(CH3)2、-C(＝O)CH(CH3)CH2CH3或-C(＝O)CH＝C(CH3)2，
3.一种抗原虫剂，其含有来自紫草(Lithospermi Radix)的、显示抗原虫活性的物质作为有效成分。
4.一种抗原虫剂，其含有紫草提取物或其处理物作为有效成分。
5.权利要求3或4所述的抗原虫剂，其含有当归(Angelicae Radix)的提取物或其处理物作为有效成分。
6.一种抗原虫剂，其含有紫云膏作为有效成分。
7.权利要求1、2、3、4或6所述的抗原虫剂，该抗原虫剂是抗利什曼病药。
8.权利要求7所述的抗原虫剂，该抗原虫剂用于治疗利什曼病。
全文摘要
本发明的目的在于提供作为抗利什曼病药特别有效的抗原虫剂。所述抗原虫剂含有式[I]所示的化合物或其盐或者它们的溶剂合物作为有效成分。上式中，R表示－H或酰基。
文档编号A61K36/30GK101048154SQ20058003266
公开日2007年10月3日 申请日期2005年7月20日 优先权日2004年7月30日
发明者渕野裕之, 关田节子, 高桥真理衣, 佐竹元吉 申请人:财团法人日本健康科学振兴财团