专利名称：用于治疗全身性炎症和炎性肝炎的嘧啶核苷酸前体的制作方法
技术领域：
本发明一般涉及包括胞苷，尿苷和乳清酸之酰基化衍生物的嘧啶核苷酸前体且涉及这些化合物的预防和治疗用途。本发明还涉及将这些化合物单独或组合，与或不与其他试剂一起给动物用药。这些化合物能增强动物对细菌内毒素和其它炎性刺激物及炎性介质的抗性。
背景技术：
脓毒也称为脓毒综合征，它是细菌、真菌或病毒严重感染的结果。在美国每年的死亡人数中脓毒症占千分之十。它是引起手术特护病房中病人死亡的主要原因。
脓毒症是一种炎症性疾病，其中与诸如细菌内毒素(革兰氏阴性菌细胞壁成份)的炎性刺激物发生反应而产生或释放的内源性细胞因子和其他生物活性分子引起包括发热，嗜中性白细胞减少症，血液凝集疾病，低血压，休克，和器官损伤的各种症状。
脓毒症(或其更严重的形式，脓毒休克)是称为“全身性发炎反应症状”(SIRS)的一个广义类型的例子，它是对诸如内毒素(存在于无菌血症的血液中，例如，由于革兰氏阴性细菌的内毒素从感染部位或从肠道泄露进循环中)的炎症刺激物的一种生物体反应；SIRS也能由革兰氏阳性细菌，真菌，病毒引起，也可能是自身免疫疾病或施用治疗性炎性细胞因子的结果。
SIRS的一般治疗涉及循环和呼吸支持，但未直接致力于改善对诸如内毒素的炎症刺激物或炎性介质的组织抗性。
中和内毒素或介质的生理效应的单克隆抗体正在研制。然而，在内毒素中毒症状发作前，在易感病人中使用抗体作为预防剂很昂贵或不实用。而且，难以确定何种病人可能受益于抗体治疗，因为培养和鉴定传染性生物体所需的时间常超过完成有效治疗的时间限制。在使用象白细胞介素-1的特定炎性介质的受体拮抗剂的尝试中也碰到相似的问题。
内毒素毒性部分受巨噬细胞，Kupffer细胞(肝脏中的固着巨噬细胞)和与内毒素发生反应的其它细胞类型中释放的内源性细胞因子和其它生物活性分子的介导。在这些介质中最有意义的是肿瘤坏死因子(TNF)和白细胞介素-1(IL-1)。其它包括血小板激活因子(PAF)，白细胞介素-6和白细胞三烯及其它花生四烯酸衍生物。施用这些细胞因子或介质导致与至少一些由内毒素引发的症状相似的症状。不同于细菌内毒素的药物或病理情况能引起TNF或IL-1的生产或活性(或灵敏性)提高，导致组织损伤。这类情况包括革兰氏阳性菌，病毒或真菌感染或肝损伤。如果过量存在，炎性细胞因子能产生组织损伤，但当以合适量存在时，它们在对感染性生物体或病毒的防御中是重要的。例如，抗TNF的抗体能减少用药剂量的内毒素的毒性(经过阻断由内毒素引发的TNF的负效应)，但在一些细菌感染的情况下具有有害效应，将感染的亚致死状态转变成势不可挡的致死感染(Havell，免疫学杂志，1987，1394225-4231Echtenacher et al.，免疫学杂志，1990，1453762-3766)。因此，在用直接灭活炎性细菌因子的试剂治疗脓毒症或SIRS的方法中存在内在的问题。
肝脏是清除或解毒内毒素(Farrar and Corwin，Ann.N.Y.Acad.Sci.，1966，133668-684)和类似TNF的炎性蛋白的主要部位；因此，肝脏易于被内毒素及其介质损伤。由许多起因(例如，四氯化碳，胆碱缺陷，病毒感染，Reye’s综合症，乙醇)引起的肝脏损伤部分由细菌内毒素或即使当不存在全身性脓毒综合征时由内毒素引起的介质介导(Nolan，胃肠病学，1975，691346-1356；Nolan，血液学，1989，10887-891)。在有意识地注射对治疗癌症可能有效的内毒素的病人中肝脏毒性是剂量限制的(Engelhardt et al.，癌症研究，1991，512524-2530)。据报道在脓毒休克中肝脏是表现出病理变化的最主要的器官(Kang et al.，组织化学和细胞化学杂志，1988，36665-678)。而且，肝机能障碍在脓毒的早期发生并可能随后引发器官衰竭(Wang et al.，外科学报，1991，126219-224)。
肝脏在调节动物对内毒素的敏感性中是重要的。损害肝脏功能或代谢的各种治疗，如乙酸盐，环已亚胺，放线菌素D或半乳糖胺中毒可能增加动物对内毒素或TNF的敏感性，在有些情况下会增加几个数量级。
半乳糖胺引起的肝脏损伤的独特性在于在发生细胞死亡前的一段时间内它容易被逆转。半乳糖胺经过抑制肝脏尿嘧啶核苷进入使它们不能转变成游离核苷酸UDP-己糖胺通路而选择性地减少肝脏尿嘧啶核苷酸，如果尿嘧啶核苷酸的减少充分延长，由于RNA和蛋白质合成受损，这能导致肝脏损伤。由半乳糖胺引起的生化缺陷可经过施用尿嘧啶易于逆转，它补充了由半乳糖胺捕获的尿嘧啶核苷。因此，在施用半乳糖胺之前短时间内或施用半乳糖胺后施用尿嘧啶核苷可减小半乳糖胺引起的肝损伤，从而将对内毒素的敏感性恢复到正常值(Galanos et al.，PNAS，1979，765939-5943)。
同样，在故意用啮齿类肝毒剂TCDD处理的小鼠中内毒素过敏过经过施用尿嘧啶核苷部分逆转(Rosenthal et al.，毒理学，1989，56239-251)。
然而与其中尿嘧啶核苷部分逆转实验诱导的对内毒素的抗性的情况相反，已报道尿嘧啶核苷在用内毒素攻击的正常小鼠中无保护性效应(Markley et al.，哮喘杂志1970，10598-607)，即，它不导致比正常更大的对内毒素的抗性。
已试验了尿苷，胞苷和乳清酸在肝疾病和在实验模型中对肝功能影响的混合结果。Shafer和Isselbacher(胃肠病学，1961，40782-784)报道了给肝硬化病人每天静脉输注25至100毫克胞苷和尿苷3至7天后对临床症状无影响。以1％的浓度给大鼠饮食中加入乳清酸导致肝脏的脂肪浸润(Von Euler et al，J.Biol.Chem.，1963，2382464-2469)；经腹膜内注射施用乳清酸在用四氯化碳，二氯乙烷，DDT和9，10-二甲基-1，2-苯并蒽处理的大鼠中可减小肝损伤(Pates et al.，Farmakol Toksikol.，1968，31717-719)。赖氨酸-乳清酸增加蘑茹毒捕蝇蕈肝毒提取物的毒性；乳清酸钠和乳清酸对捕蝇蕈属提取物的毒性无影响(Halacheva et al.，Toticon，1988，26571-576)。乳清酸已临床施用给人类用于治疗新生儿高胆红素血症和用于促进心肌梗塞的恢复(O’Sullivan，Aust.N.Z.J.Med.，1973，3417-422)。口服用药后，乳清酸吸收不好，部分是由于可溶性差。
Hata等(美国专利4,027,017和4,058,601)公开了尿苷二磷酸和尿苷二磷酸葡糖醋酸减小血液乙醇浓度并在施用乙醇后抑制肝脏中性脂的积累。
涉及施用尿嘧啶的临床试验(例如，为了减小抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶的宿主毒性)由于尿苷本身的生物学特征而较复杂。口服用药后尿苷难以吸收；对人类而言腹泻限制了剂量(Van Groeningen等，Proceedings of the AACR，1987，28195)。尿嘧啶的肠胃外用药需要使用中央静脉导管(引起不舒适并有感染的危险)，因为当经过臂静脉导管施用尿嘧啶时在早期临床试验中静脉炎是一个问题(VanGroeningen et al.Cancer Treat Rep.1986，70745-50)。
施用易于从消化道吸收进血液并然后在循环中水解产生游离尿苷或胞苷的尿苷和胞苷酰基衍生物克服了游离核苷口服吸收困难的问题(美国专利申请系列号。438,493，115，929和903，107，此处引用以供参考)。
发明内容
本发明的主要目的是提供对提高存活率和防止全身性发炎反应综合征(包括脓毒症)损伤组织有效的治疗和预防试剂。
本发明的主要目的是提供能有效增强对全身性炎症之抗性的化合物族。在接触内毒素或其它炎性刺激物之前，期间或之后将这些化合物施用给动物以防止或治疗全身性发炎的影响。
本发明的另一个目的是提供用于治疗在其病原学上涉及炎性刺激物或炎性细胞因子的各类疾病的化合物族。
本发明的另一目的是提供在受到内毒素中毒或其他全身性发炎疾病的动物中提高存活率或改善生理功能的化合物族。
本发明的另一个目的是提供治疗或防止炎性肝炎的化合物族。
本发明的另一个目的是提供能经口服或肠胃外用药的化合物。
发明概述本发明的这些和其它目的经过可施用给动物(包括诸如人类的哺乳动物)的诸如乳清酸或其盐，尿苷，胞苷的嘧啶核苷酸前体或包括酰基衍生物或磷酸酯的这些试剂的前药(prodrug)衍生物来实现。这些化合物单独或结合用药在治疗或防止全身性炎症的后果中有用。全身性发炎由细菌，真菌或病毒，细菌，真菌或病毒的组成成份(例如，分别是内毒素，多糖或病毒蛋白)感染，炎性介质或作为自身免疫疾病的结果引起。
因此，本发明的化合物单独或结合在治疗和防止脓毒症或炎性细胞因子的毒性效应中有用，在有脓毒危险的病人，例如进行外科手术或患有严重烧伤或受伤或作为对癌症或其它疾病化疗的结果而免疫受损的病人中作为预防剂有用。
本发明的一个重要方面是发现了诸如乳清酸，尿苷或胞苷的嘧啶核苷酸前体和这些化合物的酰基衍生物具有意想不到的治疗特征。
本发明的一个实施方案涉及将本发明的化合物和组合物用于治疗和防止在诸如治疗癌症时治疗上施用炎性细胞因子期间出现的毒性。
本发明的一个实施方案涉及将本发明的化合物和组合物用于治疗和防止炎性肝炎。
发明的化合物在增强对炎性刺激物或炎性介质的抗性中有用的化合物具有下面结构除非另有说明在所有情况下，在本发明化合物的化学结构中字母和具有表示可变取代基的下标的字母仅适用于紧接该标记描述前的结构。
(1)具有下式的尿苷或尿苷酰基衍生物或其药用上可接受的盐 其中R1，R2，R3和R4相同或不同且各是氢或代谢物的酰基基团。
(2)具有下式的胞苷或胞苷酰基衍生物或其药用上可接受的盐
其中R1，R2，R3和R4相同或不同，且各是氢或代谢物的酰基基团。
(3)具有下式的尿苷酰基衍生物 其中R1，R2和R3相同或不同，且各是氢或下列物质的酰基基团a.具有5至22个碳原子的非分支脂肪酸，b.选自甘氨酸，L型丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，酪氨酸，脯氨酸，羟脯氨酸，丝氨酸，苏氨酸，胱氨酸，半胱氨酸，天冬氨酸，谷氨酸，精氨酸，赖氨酸，组氨酸，肉毒碱和鸟氨酸的氨基酸，c.具有3-22个碳原子的二羧酸，d.选自一个或多个羟基乙酸，丙酮酸，乳酸，烯醇式丙酮酸，硫辛酸，泛酸，乙酰乙酸，对-氨基苯甲酸，β-羟基丁酸，乳清酸和肌酸。
(4)具有下式的胞苷酰基衍生物
其中R1，R2，R3和R4相同或不同，各是氢或下列物质的酰基基团a.具有5至22个碳原子的非分支脂肪酸，b.选自甘氨酸，L型的苯丙氨酸，丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，酪氨酸，脯氨酸，羟脯氨酸，丝氨酸，苏氨酸，胱氨酸，半胱氨酸，天冬氨酸，谷氨酸，精氨酸，赖氨酸，组氨酸，肉毒碱和鸟氨酸的氨基酸，c.具有3-22个碳原子的二羧酸，d.选自一个或多个羟基乙酸，丙酮酸，乳酸，烯醇式丙酮酸，硫辛酸，泛酸，乙酰乙酸，对-氨基苯甲酸，β-羟基丁酸，乳清酸和肌酸的羧酸。
(5)具有下式的尿苷酰基衍生物 其中，R1，R2或R3中至少有一个是含2-26个碳原子的烃氧羰基部分，剩下的R取代基独立地是一个烃氧羰基或烃基羰基基团或H或磷酸。
(6)具有下式的胞苷酰基衍生物 其中R1，R2，R3或R4至少一个是含2-26个碳原子的烃氧羰基基团，剩余的R取代基独立地是烃氧羰基或烃基羰基或H或磷酸。
(7)乳清酸或其盐 乳清酸的药用上可接受的盐包括那些其中盐的阳离子成份是钠，钾，诸如精氨酸或赖氨酸的碱性氨基酸，甲基葡萄糖胺，胆碱或具有分子量不超过大约1000道尔顿的任何其它基本上无毒性的水溶性阳离子。
(8)醇取代的乳清酸衍生物
其中R1是以酯键连接到乳清酸上的含1至20个碳原子的醇基团。
本发明还包含上述化合物的药用上可接受的盐。
本发明的优势化合物是尿苷或胞苷的短链(2至6个碳原子)脂肪酸酯。特别有优势的化合物是三乙酰尿苷，三乙酰胞苷或乳清酸盐。
尿苷磷酸化酶抑制剂作为上述嘧啶核苷酸前体的替代或补充，下列化合物可用于本发明。这些试剂经过抑制内源性或外源性尿苷的分解代谢而提高组织尿苷核苷酸水平。尿苷磷酸化酶抑制剂与嘧啶核苷酸前体一起施用减少了为获得治疗效益所需的核苷酸前体的量。
尿苷磷酸化酶抑制剂的例子包括但不限于5-苄基巴比妥盐或5-亚苄基巴比妥盐衍生物，包括5-苄基巴比妥盐，5-苄氧基苄基巴比妥盐，5-苄氧基苄基-1-[(1-羟基-2-乙氧基)甲基]巴比妥盐，5-苄氧基苄基乙酰基-1-[(1-羟基-2-乙氧基)甲基]巴比妥盐，和5-甲氧基苄基乙酰基无环巴比妥盐，2，2’-脱水-5-乙基尿苷，无环尿苷化合物，特别是5-苄基取代的无环尿苷同类物，包括但不限于苄基无环尿苷，苄氧基-苄基无环尿苷，氨甲基-苄基无环尿苷，氨甲基苄氧基苄基无环尿苷，羟甲基-苄基无环尿苷和羟甲基-苄氧基苄基无环尿苷。也见WO 89/09603和WO 91/16315，本文引用以供参考。
发明详述本发明涉及包括胞苷，尿苷和乳清酸的酰基衍生物的嘧啶核苷酸前体以及这些化合物和/或尿苷磷酸化酶抑制剂在治疗或防止包括人类的动物中内毒素和其它炎性刺激物或介质的病理后果中的应用。
本文公开的本发明涉及增强动物对炎性刺激物和介质的抗性的方法。下面提供的实施例说明了对内毒素和其它炎性刺激物引起的毒性的预防和治疗。本发明的方法可用于与其它方法结合治疗和防止脓毒症和全身性发炎。
A.定义本文使用的术语“嘧啶核苷酸前体”指给动物用药后转变成嘧啶核苷酸的化合物。它特别地包括胞苷，尿苷或乳精酸或这些化合物的前药(包括酰基衍生物)。
本文使用的术语“酰基衍生物”指嘧啶核苷衍生物，其中来自羧酸的基本上无毒性的有机酰基取代物以酯键与氧嘌呤核苷之核糖部分的一个或多个的自由羟基连接和/或其中该取代物从酰胺键连接于胞苷嘌呤环的胺取代物上。该酰基取代物来自羧酸，它包括，但不限于选自由脂肪酸，氨基酸，烟酸，二羧酸，乳酸，对氨基苯甲酸和乳清酸的化合物。有优势的酰基取代物是正常情况下存在于体内(作为食物组份或中间代谢产物)的化合物。
本文使用的术语“药用上可接受的盐”指衍生物的具有药用上可接受的酸加成盐的盐，它包括但不限于硫酸，盐酸或磷酸。
术语“共同用药”指在一个时间段内施用至少2种本发明的化合物，其中各自的药学活性期限重叠。
本文使用的术语“氨基酸”包括但不限于甘氨酸，L型丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，苯丙氨酸，酪氨酸，脯氨酸，羟基脯氨酸，丝氨酸，苏氨酸，半胱氨酸，胱氨酸，甲硫氨酸，色氨酸，天冬氨酸，谷氨酸，精氨酸，赖氨酸，组氨酸，鸟氨酸，羟基赖氨酸，肉毒碱和其它天然存在的氨基酸。
本文使用的术语“脂肪酸”指具有2-22个碳原子的脂肪族羧酸。该脂肪酸可以是饱和的，部分饱和的或多聚不饱和的。
本文使用的术语“二羧酸”指具有第二个羧酸取代物的脂肪酸。
本文使用的术语“治疗上有效量”指对给定症状和用药方式提供治疗效力的量。
本文使用的术语“脓毒症”是全身性发炎疾病，其中内源性细胞因子和其它生物活性分子在对诸如细菌内毒素(革兰氏阴性菌细胞壁的一种成份)的炎性刺激物发生反应时被产生或释放，引起各种症状，包括发热，嗜中性白细胞减少症，血凝集疾病，低血压，休克和器官损伤。
本文使用的术语“炎性刺激物”指在动物中触发发炎反应的外源性试剂。炎性刺激物的例子包括细菌，真菌，病毒，细菌(如内毒素)，真菌或病毒的非活性片段或成份，或触发变态或过敏反应的试剂。在自身免疫疾病的情况下，为病人组织的内源性成份，例如特别是发挥炎性刺激物功能的细胞蛋白质。
本文使用的术语“介质”指典型地介导内毒素或诸如真菌多糖的其它炎性刺激物的生物学效应的内源性或外源性(例如重组多肽)生物活性化合物，蛋白质或多肽。这些试剂的例子包括但不限于肿瘤坏死因子(TNF)，白细胞介素-1(IL-1)，白细胞介素-6(IL-6)，血纤维蛋白溶酶原激活抑制剂(PAI)，白细胞三烯，补体级联成份，氧化氮，或血小板激活因子。
B.发明的化合物本发明的首要特征是意想不到地发现了尿苷和其它嘧啶核苷酸前体事实上保护另外的正常动物(例如，机体未接受象半乳糖胺或TCDD-样的与临床无关的肝毒致敏剂的动物模型)抵抗通过诱发内源性炎性介质产生组织损伤的细菌内毒素和其它炎性刺激物引起的毒性。
经过施用一些前体可提高组织尿苷核苷酸水平。尿苷和胞苷可经过在5’位磷酸化掺入细胞核苷酸库；胞苷和尿苷核苷酸可通过酶促氨基化和去氨基化反应互相转换。乳清酸是嘧啶核苷酸从头生物合成的关键中间体。乳清酸掺入核苷酸库需要细胞磷酸核糖焦磷酸(PRPP)。作为选择(或除了供应外源性核苷酸前体外)，经过施用抑制尿苷磷酸化酶(尿苷降解途径中的第一个酶)的化合物可增强组织对尿苷的获取。在增强对内毒素或炎性介质的抗性中有用的本发明的化合物包括尿苷，胞苷，乳清酸，这些嘧啶核苷酸前体的前药形式，特别是酰基衍生物和磷酸酯，以及尿苷磷酸化酶的抑制剂。本发明的化合物具有下面结构除非另有说明在所有情况下，在本发明的化合物的化学结构中的字母和具有表示可变取代基之下标的字母仅适用于紧接该标记前的描述的结构。
(1)具有下式的尿苷的酰基衍生物或其药用上可接受的盐
其中，R1，R2，R3和R4相同或不同，且分别是氢或代谢物的酰基基团，前提是至少一个所说的R取代基不是氢。
(2)具有下式的胞苷的酰基衍生物或其药用上可接受的盐 其中，R1，R2，R3和R4相同或不同，分别是氢或代谢物的酰基基团，前提是至少一个所说的R取代基不是氢。
在增强对内毒素的抗性中有用的本发明的化合物包括(3)具有下式的尿苷的酰基衍生物 其中R1，R2和R3相同或不同，分别是氢或下列物质的酰基基团a.具有5至22个碳原子的非分支的脂肪酸，b.选自甘氨酸，L型丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，酪氨酸，脯氨酸，羟基脯氨酸，丝氨酸，苏氨酸，胱氨酸，半胱氨酸，天冬氨酸，谷氨酸，精氨酸，赖氨酸，组氨酸，肉毒碱和鸟氨酸的氨基酸，c.具有3-22个碳原子的二羧酸，
d.选自一个或多个羟基乙酸，丙酮酸，乳酸，烯醇式丙酮酸，硫辛酸，泛酸，乙酰乙酸，对氨基苯甲酸，β羟基丁酸，乳清酸和肌酸的羧酸。
(4)具有下式的胞苷的酰基衍生物 其中，R1，R2，R3和R4相同或不同，且分别是氢或下列物质的酰基基团a.具有5至22个碳原子的非分支脂肪酸，b.选自甘氨酸，L型苯丙氨酸，丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，酪氨酸，脯氨酸，羟基脯氨酸，丝氨酸，苏氨酸，胱氨酸，半胱氨酸，天冬氨酸，谷氨酸，精氨酸，赖氨酸，组氨酸，肉毒碱和鸟氨酸的一个氨基酸，c.具有3-22个碳原子的二羧酸，d.选自一个或多个羟基乙酸，丙酮酸，乳酸，烯醇式丙酮酸，硫辛酸，泛酸，乙酰乙酸，对氨基苯甲酸，β-羟基丁酸，乳清酸和肌酸的羧酸。
(5)具有下式的尿苷的酰基衍生物
其中R1，R2，或R3中至少一个是含2-26个碳原子的烃氧基羰基基团且剩余的R取代基独立地是烃氧基羰基或烃基羰基部分或H或磷酸。
(6)具有下式的胞苷的酰基衍生物 其中，R1，R2，R3或R4中至少有一个是含2-26个碳原子的烃氧羰基部分，剩余的R取代基独立地是烃氧基羰基基团或烃基羰基部分或H或磷酸。
(7)乳清酸或其盐 乳清酸的药用上可接受的盐包括那些其中盐的阳离子成份是钠，钾，诸如精氨酸或赖氨酸的碱性氨基酸，甲基葡糖胺，胆碱，或具有分子量小于大约1000道尔顿的任何其它基本上无毒性的水溶性阳离子。
(8)醇取代的乳清酸衍生物
其中R1是经过酯键连接到乳清酸上的含1至20个碳原子的醇基团。
本发明还包括上述化合物的药用上可接受的盐。
本发明的具优势的化合物是尿苷或胞苷的短链(2至6个碳原子)脂肪酸酯。特别具优势的化合物是三乙酰尿苷或三乙酰胞苷。
尿苷磷酸化酶的抑制剂尿苷磷酸化酶抑制剂的例子包括但不限于5-苄基巴比妥盐或5-亚苄基巴比妥盐衍生物，包括5-苄基巳比妥盐，5-苄氧基苄基巴比妥盐，5-苄氧基苄基-1-[(1-羟基-2-乙氧基)甲基]巴比妥盐，5-苄氧基苄乙酰基-1-[(1-羟基-2-乙氧基)甲基]巴比妥盐，和5-甲氧基苄基乙酰基无环巴比妥盐，2，2’-脱水-5-乙基尿苷，5-乙基-2-脱氧尿苷和无环尿苷化合物，特别是5-苄基取代的无环尿苷同类物，包括但不限于苄基无环尿苷，苄氧基苄基无环尿苷，氨基甲基-苄基无环尿苷，氨甲基苄氧基苄基无环尿苷，羟甲基-苄基无环尿苷和羟甲基-苄氧基无环尿苷。也见WO 89/09603和WO91/16315，本文引用以供参考。
发明的组合物在本发明的一个实施方案中，新药用组合物包含作为活性剂的选自尿苷，胞苷或乳精酸或其盐的一个或多个嘧啶核苷酸前体，和这些嘧啶核苷酸前体的酰基衍生物，以及药用上可接受的载体。
组合物根据目的用途和用药途径以液体，悬液，片剂，胶囊，糖衣药丸，可注射溶液或栓剂(见下面配方的讨论)的形式生产。
在本发明的另一实施方案中，组合物包含至少一个嘧啶核苷酸前体和一种抑制尿苷降解的试剂，如尿苷磷酸化酶抑制剂。尿苷磷酸化酶抑制剂的例子包括但不限于5-苄基巴比妥盐或5-亚苄基巴比妥盐衍生物，包括5-苄基巴比妥盐，5-苄氧基苄基巳比妥盐，5-苄氧基苄基-1-[(1-羟基-2-乙氧基)甲基]巴比妥盐，5-苄氧基苄基乙酰基-1-[(1-羟基-2-乙氧基)甲基]巴比妥盐和5-甲氧基苄基乙酰基无环巴比妥盐，2，2’-脱水-5-乙基尿苷和无环尿苷化合物，特别是5-苄基取代的无环尿苷类似物(ongerers)，包括但不限于苄基无环尿苷，苄氧基苄基无环尿苷，氨甲基-苄基无环尿苷，氨甲基苄氧基苄基无环尿苷，羟甲基-苄基无环尿苷和羟甲基-苄氧基无环尿苷。也见US 5077280和WO 91/16315，本文引用以供参考。
而且，为了提高组织对内毒素或炎性介质的抗性而单独使用尿苷磷酸化酶抑制剂且不共同施用嘧啶核苷酸前体也在本发明的范围内。
在另一实施方案中，本发明的化合物包括除了本发明的一个或多个化合物外，至少还有一种在治疗内毒素毒性或脓毒中也有用的下列化合物结合内毒素，TNF或IL-1的抗体或其它蛋白质；结合到多聚体支持物基质上的多粘菌素B(为了减少多粘菌素B的毒性而利用其结合且灭活内毒素的能力)；IL-1或TNF受体拮抗剂；抗生素；花生四烯酸级联抑制剂；精氨酸或鸟氨酸；皮质甾类；葡萄糖；ATP；嘌呤核苷酸前体，包括肌苷，腺苷或其酰基衍生物；环AMP或其酰基衍生物。
在本发明的另一实施方案中，组合物包含至少一种本发明的化合物和一种抗细菌，抗真菌或抗病毒化合物。
发明的化合物和组合物的治疗应用本发明的化合物，组合物和方法在增强动物对内毒素或其它炎性刺激物或介质的抗性中有用。该化合物包括嘧啶核苷酸前体以及抑制尿苷酶促降解的化合物。
本发明的化合物和组合物在治疗包括人类的哺乳动物中有用；然而，本发明并不打算局限于此，施用本发明的活性化合物而实现有益效应的对所有动物的治疗也在本发明的构想内。
本发明的首要特征是发现了施用尿苷核苷酸前体导致对体内内毒素或其它炎性刺激物介质的毒性或致死效应的超正常抗性。
而且，本发明包含口服或全身性施用含有嘧啶核苷酸前体和/或抑制尿苷降解代谢之试剂的药用化合物或组合物以增强对内毒素，其它炎性刺激物或其介质的抗性。
SIRS，脓毒症和脓毒休克本发明的化合物，组合物和方法对于减少由于被细菌(革兰氏阳性和革兰氏阴性菌)，病毒，真菌或寄生(例如疟疾)生物触发的全身性发炎反应综合征(SIRS)(包括脓毒症)对组织的损伤有用。所有这些类型的感染性生物刺激内源性炎性介质的形成或释放并导致组织损伤。
本发明的化合物和组合物可施用给具有脓毒症状，例如发热，嗜中性白细胞减少症，低血压等的病人或预防具有脓毒症危险的病人，例如外科病人，具有各种烧伤或伤口的病人或带尿道插管的病人。
本发明的化合物可任选与在治疗脓毒中有用的其它试剂联合施用，它包括但不限于一种或多种下列物质结合内毒素，TNF或IL-1的抗体或其它蛋白质；与多聚体支持基质结合的多粘菌素B(为了减少多粘菌素B毒性而利用其结合和灭活内毒素的能力)；IL-1或TNF受体的拮抗剂；抗生素；花生四烯酸级联反应的抑制剂；白细胞三烯拮抗剂；精氨酸或鸟氨酸；皮质甾类；葡萄糖；ATP；肌苷；环AMP或其酰基衍生物。在动物或病人接触一种或多种这些其它试剂前，后或期间施用本发明的化合物。
为了治疗或防止因脓毒引起的组织损伤，根据治疗反应和病人的状态可施用的本发明的化合物的剂量范围为每天大约0.5到大约40克，优选每天3到30克。在具有严重脓毒症的病人中，本发明的化合物典型地经鼻胃管(nasogastric)，(特别是为了传送营养悬液或其它肠营养产物而已放置该导管时)以液体或悬液形式施用。具有不太严重的疾病的病人以液体形式或胶囊或片剂接受本发明的化合物。不能耐受口服施用本发明的化合物和组合物的病人(例如由于胃肠道损伤而全部依赖肠胃外营养的病人)经静脉内输注接受充分水溶的本发明的化合物，如尿苷本身。
经历一阵休克，创伤或脓毒症后，病人常进入持久的代谢亢进状态，这可能导致多个器官衰竭，通常以肝损伤开始。代谢亢进时期是由于内毒素或其介质对代谢调节的影响(Cerra et al.，脓毒休克的分子和细胞机制，265-277，Alan R.Liss，1989)。代谢亢进性器官衰竭是在外科特护病人中引起死亡的一个原因。正如在实施例中所证实的，本发明的化合物，组合物和方法在减小组织损伤并提高接受内毒素或其它脓毒诱导剂和器官衰竭的动物中的存活中有效。本发明的化合物，组合物和方法在治疗有代谢亢进性器官衰竭危险的病人中有用。
脓毒症的严重后果是倾向于凝血疾病，特别是传播性血管内凝血(DIC)。在DIC中，血凝结和血纤维蛋白溶解作用被激活，使血凝固因子迅速消耗并在循环中以凝血酶形式聚集。DIC可导致出血和/或血栓形成。肝脏是凝血因子合成及从循环中清除凝血酶微聚集体的主要部位。本发明的化合物，组合物和方法的保护性和治疗性效果减少了在血液凝固中的脓毒诱导的病变(见实施例11)。
治疗性细胞因子毒性的降低内毒素和其它炎性刺激物的许多生物学效应由从靶细胞，特别是巨噬细胞和Kupffer细胞(肝脏中的固着型巨噬细胞)释放内源性生物活性分子(介质)来介导。其证据是在小鼠C3H/HEJ品系中巨噬细胞对内毒素在遗传上无反应(关于与内毒素接触时释放细胞因子)，在该品系中内毒素相对无毒性。然而这些小鼠对正常情况下从巨噬细胞中释放的生物活性肽，例如肿瘤坏死因子(TNF)敏感，经过移植正常巨噬细胞LPS的毒性可恢复。一般认定TNF是内毒素毒性的主要介质，但白细胞介素-1(IL-1)和其它试剂也参与内毒素毒性和脓毒的表达。
因此，本发明的化合物，组合物和方法在修饰炎性细胞因子的生物学效应中有用，不管该细胞因子是内源性产生的(特别是来自巨噬细胞)还是从外部来源导入身体的(例如，由重组DNA和发酵技术产生的多肽)。
各种炎性细胞因子和甚至是内毒素本身具有潜在的治疗应用。肿瘤坏死因子顾名思义可破坏肿瘤且在抑制病毒感染中与干扰素α协同作用。因此，TNF和甚至是细菌内毒素本身(诱导内源性TNF释放)已被施用给病人用于治疗癌症。因具有治疗活性和毒性而限制其临床应用的炎性细胞因子类型包括TNF，白细胞介素，和干扰素。本发明的化合物，组合物和方法在防止或治疗在治疗性施用该细胞因子以及炎性刺激物期间产生的毒性中有用。
当内毒素经静脉内输注给癌症病人用药时，肝毒性限制了可施用的内毒素的剂量(Engelhardt R.et al.，癌症研究，1991 512524-30)。在非肝癌中，为了使其抗肿瘤效力达到最大，针对内毒素的肝脏保护允许施用更高剂量的内毒素。内毒素也具有免疫刺激特性。因此，本发明的化合物在改进内毒素，内毒素类似物或衍生物(例如，类脂A，类脂X，单磷脂酰脂A等)或其介质的治疗指标中有用。在肠道施用TNF给人类期间，肝毒性也是限制剂量的(Kimura et al.，癌症化疗药理学1987，20223-229)。酵母或真菌来源的炎性刺激物，如多糖类葡聚糖或蘑菇多糖也在治疗上用作治疗感染或癌症的免疫调节剂(Seljelid，Scand.J.Immunol.1989，29181-92；Bowerset al.，J.Surg.Res.1989；47183-8)。双键RNA，如多聚肌苷-多聚胞苷在作为治疗癌症或感染的炎性刺激物时也具有治疗活性。
介导一些内毒素作用的炎性肽白细胞介素-1(IL-1)同样具有重要治疗潜力(例如，由癌症化疗引起损伤后的造血恢复)，但其应用受到毒性副作用的限制，该毒性可利用本发明的化合物，组合物和方法来减小。
白细胞介素-2(IL-2)在临床上用于治疗各种癌症；在作为治疗各种感染和调节与疫苗的反应的免疫调节剂中也具有潜在的活性。在接受治疗剂量的IL-2以治疗癌症的病人中针对IL-2的肝毒性并非少见(Viens et al.，J.Immunother.1992 11218-24)。在施用伴刀豆球蛋白A给小鼠诱导的自身免疫性肝炎的实验模型中，据报道肝损伤与内源性IL-2产生增多相关(Tiegs et al.，J.Clin.Invest.199290196-203)；如实施例10所证实的，本发明的化合物，组合物和方法在减轻该模型肝损伤中有效。当与IL-2结合用药时，本发明的化合物，组合物和方法在减小副作用中有用；而且，本发明的化合物，组合物和方法在治疗自身免疫性肝炎中有用。
在改善血小板生成中有疗效的白细胞介素6诱导肝TNF受体，从而增强对TNF的组织敏感性。因此本发明的化合物，组合物和方法在与IL-6或影响对TNF的组织敏感性或TNF产生的相似试剂结合使用时有用(Van Bladet et al.，细胞因子，1991 3149-54)。
特定治疗性细胞因子和嘧啶核苷酸前体和/或尿苷磷酸化酶抑制剂联合用于治疗已知特定治疗性细胞因子对其有效的疾病。例如，白细胞介素2用于治疗直肠癌，结肠癌，黑色素瘤，淋巴癌，白血病和其它肿瘤症状。TNF对各种类型的癌具有抗肿瘤效力，但其治疗用途一直受其毒性限制(Kimura et al.，Cancer.Chemother.Pharmacol.1987；20223-9)。内毒素已显示出明显的抗肿瘤效力(Engelhardt.R et al.，癌症研究1991 512524-30)。
为了防止或治疗由于施用治疗性细胞因子而产生的毒性，根据细胞因子治疗的持续时间每天施用大约0.5到40克嘧啶核苷酸前体，持续1到7天。在施用治疗性细胞因子前，期间或之后施用嘧啶核苷酸前体。治疗性细胞因子按实验和临床治疗各类癌症已建立的特定剂量和方式用药，除了当施用本发明的嘧啶核苷酸前体时可耐受更高剂量的细胞因子，这可在对各细胞因子或炎性刺激物的简单剂量-逐步升级(dose-escalation)实验中测定。
炎性肝炎与内毒素或介质相关的肝疾病肝脏容易受内毒素或其介质的损伤，尤其是当肝脏功能受损时。由增强对内毒素的肝敏感性或抑制内毒素清除的许多起因(例如，胆碱缺陷，Reye氏综合症或醇)引起的肝损伤部分受细菌内毒素(正常情况下由于从肠道泄露少量进入血液而存在于门静脉循环中)或由内毒素诱导的介质介导(Nolan，胃肠病学，1975691346-1356；Nolan，肝病学1989 10887-91)。在治疗癌症可能有效的接受肠道注射内毒素的病人中，肝毒性限制了剂量(Engelhardt et al.，癌症研究，1991512524-2530)。
如在下面实施例中所证实的，本发明的化合物，组合物和本发明的方法明显减少由内毒素和其它炎性刺激物和介质诱导的肝损伤。本发明的化合物，组合物和方法在其病因学上涉及由内毒素或其它炎性刺激物或介质引起的肝毒性的许多症状(不管是否存在全身性脓毒综合症)中治疗，防止或减轻肝损伤有用。其中涉及内毒素或其介质(例如TNF)对肝的损伤的症状包括但不限于下列疾病状态A.Reye氏综合征Reye氏综合征的特征在于快速的肝功能衰竭，它作为一种流感和其它病毒性感染综合征在儿童中最常见，阿斯匹林可能是一种危险因子。据信Reye氏综合征的病因学涉及内毒素或炎性介质。在具有Reye氏综合征的大多数或全部病人中发现内毒素血症(endotoxemia)；Reye综合征的动物模型涉及用内毒素和阿斯匹林结合处理大鼠(Ki；patrioket al.，Metabolim，1989，3873-7)。
B.醇类肝损伤除了与损伤精神相关的问题和与乙醇中毒相关的身体控制外，过多地消费乙醇是人类肝损伤的明显病因。内毒素和TNF导致与乙醇接触相联系的肝疾病。(Nolan JP.肝病学1989 10887-91；AraiM.Nakano S.Okuno F.et al.肝病学1989；9846-851；McClain CJ and Cohen DA，肝病学1989；9349-351)。
C.暴发性肝炎在暴发性肝炎的病因学和进展中涉及肿瘤坏死因子，它能迅速导致肝衰竭和死亡(Aderka et al.，Med Hypotheses，1988 27193-6)。
D.病毒性肝炎在病毒性肝炎期间内毒素导致出现肝细胞损伤。病毒性肝炎减小了动物模型中内毒素的LD50，从实验动物排除内源性内毒素(经结肠切除术或经使用无菌啮齿动物)减小了由病毒性攻击引起的肝损伤(Gut et al.，传染病杂志，1984，149621)。在一些肝炎例子中，由T淋巴细胞或巨噬细胞介导的对肝病毒感染的免疫或发炎反应导致肝损伤。在每一种情况下，本发明的化合物，组合物和方法对于治疗与病毒性感染相关的肝损伤有用。实施例14证实了本发明的化合物和方法提高了病毒性肝炎动物模型的存活率。
在人类病毒性肝炎中免疫病理学导致肝损伤。乙肝和丙肝病毒未必直接损伤细胞。大量证据表明对感染细胞的免疫反应明显导致肝损伤。激活的细胞毒T淋巴细胞攻击携带抗原的感染细胞，但也释放细胞因子，如干扰素-γ，它接着补充并激活肝脏中的炎性白细胞并增强对象内毒素的巨噬细胞激活剂的肝敏感性(Ando et al.，实验医学杂志1781541-1554，1993)。在实施例10和12中，本发明的化合物，组合物和方法在模拟具有和不具有由内毒素引起的二级恶化的T细胞介导的肝发炎损伤的关键特征的实验模型中提供有益效果。这些实施例支持了本发明的化合物，组合物和方法在病毒性肝炎以及在自身免疫肝炎和细胞介导的肝移植排斥中的应用。
E.寄生虫感染在疟疾感染期间发生的肝损伤和发病部分由TNF介导(Clark etal.，美国病理学杂志1987，129192-9)。
F.在全部肠胃外营养期间的肝损伤在接受全部肠胃外营养(TPN)且无潜在的肝疾病的病人中常见肝并发症；在TPN期间也发生先存的肝损伤的恶化。Pappo et al.(J.Surg.Res，1991，51106-12)报道了来自肠革兰氏-阴性细菌过度生长的内毒素(LPS)负责TPN相关的肝脂肪变性，肠去污和多粘菌素B的特异性抗-LPS活性减少TPN期间肝脏的脂肪浸润。结合并灭活LPS的多粘菌素B在人体有毒性，但可用于证实在TPN期间观察到的肝病事实上部分由内毒素或TNF介导。因此，在TPN溶液中包含的有效量的本发明的化合物在减小TPN-诱导的肝损伤以及治疗潜在的炎性肝损伤中有用。本发明的化合物，特别是尿苷，胞苷，乳清酸或其水溶性盐和酯既可包含在TPN制剂中，又可单独用药，但与TPN输注并存。典型的TPN制剂含有以静脉内用药可接受形式的补充营养需要所需的基本营养成份。因此，以部分或完全消化的形式，例如氨基酸或糖提供象蛋白质或淀粉的大分子食谱成份。典型的TPN制剂不仅含有氨基酸和糖，而且还有其它所需营养成份，如维生素，矿物质和脂肪。与TPN制剂联合或作为其组成成份使用的本发明的化合物的优选剂量范围是每天1到40克(常用范围为每天2到20克)，既可作为大丸剂注射，又可作为持久性输注。
在本发明的该实施方案的内容中，为了获得本发明的化合物，组合物和方法的益处，病人不必经肠胃外途径接受其全部营养需要。然而，本发明的该实施方案在病人经静脉输注接受50％或更多的其营养需要时特别有优势。
铅中毒铅中毒可显著增加对内毒素的敏感性。铅对内毒素毒性的影响涉及铅诱导的对肝代谢的干扰(Taki et al.，Eur.Surg.Res.，1985，17140-9)。
H.部分肝切除部分肝切除后(例如，为了去掉癌组织)，肝功能衰竭引起的发病率和死亡率并不少见。在动物中部分肝切除后进行再生的肝组织对内毒素和介质的有害影响过敏(Shirai，et al.，Acta Pathol.Jpn.，1987，371127-1134)。
I.麻醉后肝炎吸入诸如卤烷的麻醉剂可诱导肝炎，特别是如果肝血流也受损时。在麻醉后肝炎的病因中涉及内毒素(Lomanto et al.，Anesth.Analg.，1972，51264-270)；因此，本发明的化合物对于施用给进行麻醉剂吸入的病人(预防上，治疗上或两者)以防止和治疗肝炎时有用。外伤本身可导致麻醉后肝炎。外伤常进一步诱导细菌和内毒素经血流从消化道转位到其它组织。外科手术病人是最易于内毒素中毒(由于感染)的群体。因此，用嘧啶核苷酸前体治疗手术病人(手术前，期间或后)明显改善其对内毒素中毒的抗性。
J.胆汁郁积型肝炎由于胆汁导管阻塞或肝内胆汁郁积引起的肝损伤部分由肠道产生的内毒素引起(Shlbayama Y.1989，J.Pathol.159335-9)。
K.肝移植在接受肝移植的病人中，外科手术前和在肝缺失末期存在高水平的内毒素或炎性介质与移植失败和高死亡率相关。其移植体开始无功能的病人典型地具有严重内毒素血症。内毒素血症是手术期间并发症和移植失败的原因而不是结果(Yokoyama et al，1989，TransplantProc.213833-41)。在临床情况下，动物(如人类)在移植后经肠道或肠胃外途径接受本发明的化合物，其剂量范围为每天大约1到大约40克，尽管典型地是2到20克，优选分成1到大约4个剂量或以连续的或间歇性的肠道或肠胃外输注用药。本发明的化合物也任选在用药前掺入肠道或肠胃外营养制剂中。病人在肝脏移植7天后常接受静脉内等渗(5％)葡萄糖作为获得更完全的肠胃外或肠道营养的一个选择。本发明的化合物，特别是尿苷或胞苷优选在1到10％葡萄糖的水溶液中配制。在优选的实施方案中，每天施用1到40克，优选2到20克嘧啶核苷酸前体。在肝脏疾病或在移植恢复中嘧啶核苷酸前体的第二个益处是增加外周葡萄糖的利用。
在移植进受体前或期间，供体肝脏也可用含本发明的化合物，优选尿苷，胞苷，乳清酸或其盐或酰基衍生物的溶液灌注。嘧啶核苷酸前体，特别是尿苷以10微摩尔到10毫摩尔的浓度范围包含于肝灌注液(也含有合适的离子和其它代谢物，如葡萄糖)中。
在其它肝疾病中也涉及内毒素和炎性介质；上面讨论的具体例子的多样性用于说明本发明的化合物，组合物和方法在治疗或防止大范围的肝疾病中有用。
为了治疗炎性肝炎，每天施用0.5到40克(优选3到30克)嘧啶核苷酸前体，有优势的是分成一到大约4个剂量。治疗方案的持续时间取决于临床症状的改善；急性炎性肝疾病比慢性变性症状典型地需要更短的疗程。
其它疾病
如在实施例2，4-6和9中所证实的，本发明的化合物保护非肝脏组织，例如肌肉，以在用内毒素或真菌炎性试剂酵母聚糖处理的动物中的血清肌酸磷酸激酶(CPK)水平表示。作为骨骼肌或心肌损伤的结果血清CPK活性升高。
恶病质是一种体重损失，组织消耗和不能利用营养的综合症，在具有癌症的病人中它是一种常见的并发症。恶病质状态的起动和维持涉及TNF和其它炎性细胞因子；“恶液质素”是TNF的异名。本发明的化合物，组合物和方法对治疗恶病质病人有用。
除了乙醇脱氢酶水平外，从循环清除乙醇是一种在很大程度上依赖于肝脏能量代谢和氧化还原平衡的过程。实施例13表明本发明的化合物改善了严重乙醇中毒的恢复。本发明的化合物和组合物在减轻因乙醇中毒的精神和身体损伤的严重性以及诸如肝损伤的慢性乙醇摄入的较长期健康后果中有用。本发明的化合物(例如，三乙酰尿苷，尿苷或胞苷)在乙醇摄入前，期间或后以每天0.5至40克的剂量，优选1到20克经口服用药。
兽医学应用在马和其它大型动物中，有一种称为蹄叶炎的常见综合症，它是内毒素从消化道进入循环系统的结果(常在动物过多地食用了碳水化合物丰富的食物后，改变了消化道中的细菌群)。由于它们减轻了由内毒素引起的组织损伤，本发明的化合物，组合物和方法在治疗或防止蹄叶炎和动物中内毒素中毒的其它影响时有用。
发明的化合物和组合物的用药和配制本发明的化合物和组合物根据所要治疗的症状和病人的状态经口服、肠胃外注射、静脉内或其它方式用药。
本发明的化合物和组合物可按需经慢性，间歇性或急性用药。在涉及内毒素毒性或全身性发炎综合症的事件的情况下，可在该事件前，期间或之后施用该化合物和组合物。
药物学活性化合物任选与包含赋形剂和利于活性化合物加工的辅助剂的合适的药用上可接受的载体联合。这些可作为片剂，糖衣药丸，胶囊和栓剂用药。该组合物可经过例如口服，直肠，阴道或通过口腔袋释放用药，可以液体形式经注射，口服或局部用药来使用。该组合物可含有从大约0.1到99％，优选从大约50到90％的活性化合物以及赋形剂。
为了经注射或静脉内输注进行肠胃外用药，将活性化合物悬浮于或溶解于诸如无菌水或盐溶液的含水介质中。可注射的溶液或悬液任选含有诸如聚氧乙烯山梨聚糖酯，山梨聚糖酯，聚氧乙烯醚的表面活性剂或象丙二醇或乙醇的溶解剂。该溶液典型地含有1至25％的活性化合物。在本发明的一个实施方案中，含水介质是在水或等渗盐水中的1至10％葡萄糖的溶液。在一些情况下，同时静脉施用葡萄糖和本发明的化合物，特别是尿苷具有优势。尿苷(和尿苷的酰基衍生物)增进葡萄糖的外周葡萄糖利用，胰岛素(对葡萄糖或其它碳水化合物或一些氨基酸作出反应，一般从胰腺释放)增强了细胞对核苷的吸收和利用。
为了与肠胃外营养联合使用，将本发明的化合物溶于或悬于肠胃外营养产品中，这可在该产品生产期间或在它们给病人施用前不久进行。在肠胃外营养制剂中调节嘧啶核苷酸前体的浓度使在肠胃外营养产品输注期间每天传递1到40克，一般2到20克。典型的肠胃外营养配方含有和传送适于静脉内用药的溶于无菌组合物中的氨基酸，碳水化合物，脂肪，维生素和矿物质的营养上足够的部分。
合适的赋形剂包括填充剂，如糖类，例如乳糖，蔗糖，甘露糖或山梨醇，纤维素制品和/或磷酸钙，例如磷酸三钙或磷酸氢钙，以及结合剂，如淀粉膏，例如使用玉米淀粉，小麦淀粉，稻米淀粉或马铃薯淀粉，明胶，黄蓍胶，甲基纤维素，羟丙甲基纤维素，羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮。
辅助剂包括流动调节剂和润滑剂，例如，硅胶，滑石，硬脂酸或其盐，如硬脂酸镁或硬脂酸钙和/或聚乙二醇。用合适的包膜提供糖衣药丸颗粒，如果需要，它对消化液有抗性。为达到该目的，使用浓缩的糖溶液，它任选含有阿拉伯胶，滑石，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙二醇和/或二氧化钛，紫胶漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。为了生产对消化液有抗性的包膜，使用合适的纤维素制品溶液，如乙酰基纤维素邻苯二甲酯或羟丙甲基纤维素邻苯二甲酯。任选向片剂或糖衣药丸包膜中加入染料或色素，例如用于鉴定或为了鉴定不同的化合物剂量。
本发明的药用制品以本身已知的方式生产，例如，借助于常规混合，颗粒形成，糖衣药丸制造，溶解或冻干过程。因此，口服用途的药用制品的获得可经过结合活性化合物与固体赋形剂，如果需要或必要，在加入合适的辅助剂后任选磨碎所得的混合物并加工颗粒混合物以获得片剂或糖衣药丸颗粒。
对口服传递有用的其它药用制品包括由明胶制成的适于推进的胶囊以及由明胶和诸如甘油或山梨醇的增塑剂制成的软封型胶囊。适于推进的胶囊含有颗粒形式的活性化合物，它任选与诸如乳糖的填充剂，诸如淀粉的结合剂和/或诸如滑石或硬脂酸镁的润滑剂和任选的稳定剂混合。在软胶囊中，活性化合物优选溶于或悬于诸如脂肪油，液体石蜡，或聚乙二醇的合适液体中。另外，任选加入稳定剂。其它口服用药的制剂包括溶液，悬液或乳剂。特别是适于经肠插管，例如鼻胃管用药的液体形式具有优势，特别是对于卧床不起或无意识的病人而言。
经直肠使用的药用制品包括例如，由活性化合物与栓剂基质联合组成的栓剂。合适的栓剂基质是，例如，天然或合成的甘油三酯，石蜡烃，聚乙二醇或高级烷醇。而且由活性化合物与基质联合组成的明胶直肠胶囊是有用的。例如，基质材料包括液体甘油三酯，聚乙二醇或石蜡烃。
肠胃外用药的合适制剂包括以水溶性形式，例如水溶性盐的活性化合物的水溶液。而且，活性化合物的悬液以合适的油状注射悬液用药。合适的亲脂溶剂或载体包括脂肪油，例如芝麻油，或合成脂肪酸酯，例如，乙基油酸或甘油三酯。含水注射悬液任选包括增强该悬液粘度的物质，例如，它包括羧甲基纤维素钠，山梨醇和/或葡聚糖。悬液任选含稳定剂。
本发明化合物的合成经过将嘧啶核苷或同类物与活化的羧酸反应合成嘧啶核苷的酰基衍生物。活化的羧酸是用合适的试剂处理以使其羧酸碳比原始羧酸更易受亲核攻击的羧酸。用于合成本发明的化合物的有用的活化羧酸的例子是酰氯，酸酐，n-羟基琥珀酰亚胺酯或用BOP-DC活化的羧酸。羧酸也用偶联剂象二环己基碳二亚胺(DCC)连接到嘧啶核苷酸或类似物上。
在制备本发明的酰基化合物的过程中，当所需酰基衍生物的酸源具有干扰酰基化反应的基团，例如羟基或氨基时，在制备酸酐前分别用诸如t-丁基二甲基甲硅烷基酯或t-BOC基团的保护性基团封闭这些基团。例如，乳酸用t-丁基二甲基氯甲硅烷转变成2-t-丁基二甲基硅丙酸，接着用含水碱水解所得的甲硅烷基酯。经过将保护性酸与DCC反应形成酐。对于氨基酸，使用标准技术制备N-t-BOC衍生物，然后它与DCC反应转变成酸酐。对于含超过一个羧酸基团的酸(例如琥珀酸，延胡索酸或己二酸)，所需的二羧酸的酸酐与嘧啶核苷在吡啶或吡啶加二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺中反应。
以标准方法，使用在合适溶剂中的DCC，特别是(i)二氯甲烷和(ii)二甲基乙酰胺或二甲基甲酰胺的混合物将氨基酸偶联到胞苷环外氨基上或偶联到嘧啶核苷或其类似物醛糖部分的羟基上。
在无水条件下在诸如吡啶或吡啶加二甲基甲酰胺的溶剂中将核苷酸与合适的氯甲酸羰基酯(Carbylchloroformate)反应制备非甲基化的嘧啶核苷的羧氧羰基衍生物。在真空中去掉溶剂并经柱色谱纯化残余物。
可使用其它的合成方法制备本发明的化合物，这对本领域的技术人员而言是显而易见的。
下面的实施例是说明性的，但不构成对本发明的方法和组合物的限制。对本领域的技术人员而言是显而易见的在临床治疗中正常遇到的各种条件和参数的其它合适的修饰和改动也在本发明的实质和范围内。
实施例实施例1三乙酰尿苷和尿苷提高用杀死的大肠杆菌处理的小鼠的存活率目的脓毒综合征可由革兰氏阴性细菌起动，即使细菌不是活的，因为首要的触发物是内毒素，即一种细菌细胞壁的成份。本实验的目的是测定口服三乙酰尿苷和肠胃外用尿苷对用致死剂量的杀死的大肠杆菌细菌处理的小鼠存活率的影响。
方法18只雌性Balb/C小鼠(8周龄)分成各6只动物的组。全部小鼠接受经超声处理悬浮于0.2ml盐水中的500微克大肠杆菌的丙酮粉末(血清型0111B4)。在施用大肠杆菌前2小时，一组小鼠经i.p.注射接受尿苷(2000mg/kg溶于0.2ml盐水)。另一组小鼠经口腔插管接受三乙酰尿苷(6000mg/kg溶于含2.5％Tween 80的1∶1玉米油/水载体中)。监测存活率一周。
A.n＝6大肠杆菌(对照)B.n＝6大肠杆菌(对照)+Urd i.p.
C.n ＝6大肠杆菌(对照)+TAU p.o.
结果对照组的动物似乎休克且在施用大肠杆菌粉末后18小时降温。处理组的动物活跃且保持体温，尽管在观察期间的前48小时其覆盖物单薄。存活48小时的动物完全恢复。所有仅用大肠杆菌处理的小鼠在48小时内死亡。所有用尿苷或三乙酰尿苷处理的小鼠在施用杀死作用的大肠杆菌后存活。
实施例2尿苷在保护组织抵抗内毒素损伤中的剂量反应研究目的本实验的目的是测定尿苷在防止内毒素(LPS)引起的炎性组织损伤中的剂量反应特征。
方法雌性Balb/C小鼠(8周龄)分成各6只动物的6组。一组动物未作处理以提供组织损伤血清化学指数的基值。剩余的5组小鼠经i.p.注射接受溶于0.2ml盐水中的100微克鼠伤寒沙门氏菌(SalmonellaTyphimurium)内毒素。在内毒素用药前2小时，5组小鼠分别以0，500，1000，2000和4000mg/kg i.p.(溶于0.2ml盐水)的剂量接受尿苷。内毒素用药18小时后，收集血样用于测定组织损伤指标的血清化学值。
结果尿苷对施用内毒素的损伤产生剂量依赖性组织保护。ALT，AST，和SDH是肝损伤的指标；CPK是肌肉损伤的指标；LDH从肝脏和肌肉中释放。在本实验的小鼠中最有效的尿苷剂量是2000mg/kg。
表1尿苷减轻内毒素诱导的组织损伤
*＝与对照(LPS i.p.)的差异，P＜.02ALT＝丙氨酸氨基转移酶AST＝天冬氨酸氨基转移酶LDH＝乳酸脱氢酶CPK＝肌苷磷酸激酶SDH＝山梨醇脱氢酶实施例3口服三乙酰尿苷提高用致死剂量的鼠伤寒沙门氏菌内毒素处理的小鼠的存活率目的由革兰氏阴性细菌引起的脓毒综合征主要通过内毒素，细菌细胞壁的一种脂多糖成份介导。本实验的目的是测定口服用药的尿苷前药(三乙酰尿苷；TAU)对用致死剂量的纯化的鼠伤寒沙门氏菌内毒素(LPS)处理的小鼠存活率的影响。
方法20只雌性Balb/C小鼠(8周龄)分成各10只动物的2组。所有小鼠经腹膜内注射接受溶于0.2ml盐水中的100微克鼠伤寒沙门氏菌内毒素。一组小鼠经口腔插管接受三乙酰尿苷(以6000mg/kg溶于含2.5％Tween 80的1∶1玉米油/水的载体中)。监测存活率一周。
结果仅接受内毒素的10只动物在48小时内全部死亡。接受口服TAU的10只小鼠中9只在7天观察期存活并似乎完全恢复。
实施例4口服三乙酰尿苷减轻由内毒素引起的组织损伤目的细菌内毒素引起肝脏和其它器官的损伤，这可经过测定酶和组织完整性和功能的其它标记物的血清水平进行评价和定量。本实验的目的是测定口服施用三乙酰尿苷(TAU)在减轻由内毒素引起的组织损伤中的剂量反应特征。
方法雌性Balb/C小鼠(8周龄)分成各5只动物的小组。一组动物未作处理以提供诱导组织损伤的血清化学指数的基值。在其它4组小鼠中经i.p.注射接受溶于0.2ml盐水中的100微克鼠伤寒沙门氏菌内毒素。3组内毒素处理的小鼠在内毒素处理前2小时经口腔插管接受在0.4ml体积中的2000，4000，和6000mg/kg的TAU。TAU在1％羧甲基纤维素水溶液中配成悬液。剩余组(对照)经口腔插管接受羧甲基纤维素载体。
结果口服TAU用药减小了组织损伤的血清化学指示剂水平。防止内毒素毒性诱导的器官损伤的有益效应是剂量依赖型的。
表2TAU减轻内毒素诱导的组织损伤
*＝与对照不同(LPS i.p.+载体p.o.)，P＜.02ALT＝丙氨酸氨基转移酶AST＝天冬氨酸氨基转移酶LDH＝乳酸脱氢酶CPK＝肌苷磷酸激酶SDH＝山梨醇脱氢酶实施例5尿苷减轻用角叉藻聚糖作为内毒素毒性增效剂处理的小鼠中的组织损伤角叉藻聚糖是来自海藻的调节巨噬细胞活性的多糖，它是对内毒素的全身性发炎反应的主要细胞介质。巨噬细胞释放炎性肽和其它化合物与内毒素发生反应。角叉藻聚糖预处理致敏巨噬细胞使诱发严重全身性发炎反应所需的内毒素比正常少得多。而且在角叉藻聚糖加内毒素的结合的毒性效应中比仅用内毒素相比涉及某种不同谱系的炎性介质(Franks et al.，感染和免疫，592609-2614 )。本实验的目的是测定尿苷对角叉藻聚糖和内毒素结合诱导的组织损伤的影响。
方法雌性Balb/C小鼠(8周龄)分成各6只动物的5组。一组动物未作处理以提供组织损伤的血清化学指数基础值。在其它4组中小鼠经i.p.注射接受溶于0.2ml盐水中的2mgλ角叉藻聚糖；其中3组在1小时后也以i.p.注射接受溶于0.2ml盐水中的2微克鼠伤寒沙门氏菌内毒素。其中接受过角叉藻聚糖和内毒素的组中的2组还接受尿苷(2000mg/kg i.p.，溶于0.2ml盐水中)；一组在施用内毒素后30分钟用尿苷处理，另一组在内毒素用药前24，6和2小时以2000mg/kg/剂i.p.接受3次尿苷预处理。施用内毒素18小时后，收集血样以测定组织损伤指标的血清化学值。
结果角叉藻聚糖与低剂量的内毒素(2mg)联合经血清化学指数评价时导致明显的组织损伤。在施用内毒素前或后用尿苷处理导致由角叉藻聚糖-内毒素联合引起的组织损伤明显减轻。数据如下所示。
表3尿苷减轻角叉藻聚糖致敏的小鼠中内毒素诱导的组织损伤
*＝与对照不同，P＜.05ALT＝丙氨酸氨基转移酶AST＝天冬氨酸氨基转移酶LDH＝乳酸脱氢酶CPK＝肌苷磷酸激酶SDH＝山梨醇脱氢酶实施例6尿苷提高经酵母聚糖处理的小鼠的存活率目的酵母聚糖是一种酵母成份，主要是多糖，它诱导全身性发炎和补体激活。在一般性真菌感染中(包括但不限于酵母感染)，该多糖参与脓毒反应的诱导。给啮齿类施用酵母聚糖据认为是多器官故障综合症的合适模型(Goris et al.(1986)Arch.Surg.121897-901；Steinberg et al.(1989)Arch.Surg.1241390-1395)。在最小致死剂量的酵母聚糖时的死亡率部分由于消化道损伤导致细菌和细菌毒素从消化道进入血流中(Deitch et al.，(1992)J.Trauma32141-147)。
方法雌性Balb/C小鼠(8周龄)分成各5只动物的小组1.酵母聚糖15mg2.酵母聚糖15mg+尿苷3.酵母聚糖20mg4.酵母聚糖20mg+尿苷5.基础酵母聚糖A以50mg/ml的浓度悬浮于矿物油中并经腹膜内注射用药。在施用酵母聚糖前2小时经腹膜内注射以0.2ml的体积施用尿苷(2000mg/kg)。
施用酵母聚糖18小时后，从2组接受20mg酵母聚糖的小鼠和从一基础(未处理)组收集血样用于随后测量组织损伤的血清化学指数。
结果
A.在48小时的存活率组别 存活率酵母聚糖15mg/kg 0/5酵母聚糖15mg/kg+尿苷 5/5酵母聚糖20mg/kg 0/5酵母聚糖20mg/kg+尿苷 3/5B.在14天时的在活率(完全恢复)酵母聚糖15mg/kg 0/5酵母聚糖15mg/kg+尿苷 4/5尿苷明显提高用酵母聚糖处理的小鼠的存活时间和长期幸存者的发生率。
C.组织损伤的血清化学指数表4尿苷减轻酵母聚糖诱导的组织损伤
ALT＝丙氨酸氨基转移酶AST＝天冬氨酸氨基转移酶LDH＝乳酸脱氢酶CPK＝肌苷磷酸激酶SDH＝山梨醇脱氢酶实施例7尿苷与精氨酸对内毒素处理的小鼠存活率的影响比较目的据报道氨基酸精氨酸在脓毒综合征中有有益效应(Leon et al.，J.Parenteral and Enteral Nutrition，1991，15503-508)。本实验的目的是比较尿苷与精氨酸(一种在脓毒综合征中支持肝功能并临床用于该目的的试剂)的效应。
方法重25克的雌性Balb/C小鼠分成各5只或6只动物的5组。在现存的5组中的小鼠经i.p.注射接受溶于0.2ml盐水中的125微克鼠伤寒沙门氏菌内毒素(LPS)。在施用内毒素前2小时，5组小鼠接受的注射液为1)盐水(对照)2)尿苷2000mg/kg3)精氨酸25mg/kg4)精氨酸250mg/kg5)精氨酸1250mg/kg所有药物在0.2ml盐水中经i.p.用药。在16，20和24小时测量各组中存活小鼠数。
结果用LPS处理16小时后仅一只对照动物存活，与此相反，大多数用尿苷或精氨酸处理的动物在该时间点存活。然而，到施用内毒素后24小时为止，仅在用尿苷处理的组中有存活动物。所有3种剂量的精氨酸确实提高存活时间(但不产生长期幸存者)，且最低剂量(25mg/kg)比最高剂量(1250mg/kg)更有效。在促进内毒素处理的动物的存活率中尿苷明显比精氨酸更有效。
表5尿苷与精氨酸对施用LPS后的存活率的影响
实施例8乳精酸提高用鼠伤寒沙门氏菌内毒素处理的小鼠的存活率目的由革兰氏阴性细菌引起的脓毒综合征主要通过内毒素(细菌细胞壁上的一种脂多糖成份)介导。本实验的目的是测定乳精酸对用致死剂量的纯化的鼠伤寒沙门氏菌内毒素处理的小鼠存活率的影响。
方法20只雌性Balb/C小鼠(8周龄)分成各10只动物的2组。一组小鼠接受4次赖氨酸乳清酸处理(200mg/kg/剂；在2个连续日的每个9AM和2PM用药)。赖氨酸乳清酸是乳清酸的一种水溶性盐；赖氨酸单独不提高内毒素处理的小鼠的存活率。对照动物在相同的处理程序中接受0.2ml无菌水。所有小鼠在最后一剂赖氨酸乳清酸后立即经腹膜内注射接受溶于0.2ml盐水中的100微克鼠伤寒沙门氏菌内毒素(LPS)。
监测存活率一周。
结果在对照组中的全部小鼠在48小时死亡。用赖氨酸乳清酸处理的10只小鼠中9只在全部72小时的观察期内存活且在施用LPS一周后仍存活而且似乎完全恢复。
表6乳清酸提高了内毒素处理的小鼠的存活率
实施例9乳清酸保护组织抵抗内毒素损伤目的本实验的目的是证实乳清酸在防止由内毒素引起的炎性组织损伤中的保护效应。
方法将雌性Balb/C小鼠(8周龄)分成各6只动物的3组。一组动物未作处理以提供组织损伤的血清化学指数的基础值。在剩余2组中的小鼠经i.p.注射接受溶于0.2ml盐水中的100微克鼠伤寒沙门氏菌内毒素(LPS)。施用内毒素前2小时，一组中的小鼠以相当于100mg/kg自由乳清酸的剂量接受赖氨酸乳清酸。施用内毒素后18小时，收集血液样品以测定组织损伤指标的血清化学浓度。
结果乳清酸保护组织抵抗施用内毒素引起的损伤。
表7乳清酸减轻内毒素诱导的组织损伤
*＝与对照不同(LPS i.p.)，P＜.02ALT＝丙氨酸氨基转移酶AST＝天冬氨酸氨基转移酶LDH＝乳酸脱氢酶CPK＝肌苷磷酸激酶SDH＝山梨醇脱氢酶实施例10尿苷和三乙酰尿苷减轻由伴刀豆球蛋白A引起的肝损伤目的白细胞介素-2(IL-2)在临床上用于治疗一些不同种类的癌症。与IL-2反应的肝毒性在接受治疗剂量的IL-2用于癌症治疗的病人中并不少见(Viens et al.，J.Immunother.1992 11218-24)。在由给小鼠施用伴刀豆球蛋白A(Con A)诱导的自身免疫肝炎实验模型中，据报道肝损伤与内源性IL-2生产提高相关(Tiegs et al.，J.Clin.Invest.1992 90196-203)。本实验的目的是证实本发明的化合物和方法在减轻由施用Con A起动的肝损伤中的用途。
方法雌性Balb/C小鼠(8周龄)分成各5只动物的4组。一组动物未作处理以提供组织损伤血清化学指数的基础值。在余下的三组小鼠中经静脉内(尾静脉)注射接受在0.2ml体积盐水中的10mg/kg伴刀豆球蛋白A。接受Con A前2小时，3组小鼠中的一组接受尿苷(2000mg/kgi.p.在0.2ml盐水中)，另一组接受三乙酰尿苷(口服6000mg/kg，溶于0.6ml含2.5％Tween 80的1∶1玉米油/水乳剂中)；剩下的Con A-处理组(对照)在用Con A前2小时经i.p.接受0.2ml盐水。施用Con A 20小时后，从所有小鼠中收集血样用于测定组织损伤或代谢障碍各种指数的血清水平。
结果以ALT，AST和SDH酶血清水平分析时，施用Con A导致明显损伤肝脏。Con A不能明显提高肌苷磷酸激酶(CK)的水平，该酶主要在肌肉中发现；在该模型中由Con A引起的组织损伤比由内毒素引起的损伤更特异性地定位于肝脏。尿苷和TAU都减轻由Con A用药产生的肝损伤，如在下面表8中所示。
表8尿苷和三乙酰尿苷减轻由伴刀豆球蛋白A引起的肝脏损伤
*＝与对照不同(LPS i.p.)，P＜.02ALT＝丙氨酸氨基转移酶AST＝天冬氨酸氨基转移酶LDH＝乳酸脱氢酶CPK＝肌苷磷酸激酶SDH＝山梨醇脱氢酶用于本实验的Con A模型中的肝损伤与IL-2水平升高相关，并通过T淋巴细胞介导。因此，本发明的化合物和方法在减轻由治疗性施用IL-2产生的副作用中有用，且本发明的方法在治疗自身免疫性肝炎中有用。
实施例11尿苷减轻血凝结病变诱导的脓毒症目的散布型血管内凝结(DIC)是脓毒症的严重后果，其中激活血凝结和血纤维蛋白溶解，使血液凝结因子迅速消耗。DIC可导致出血或血栓形成。肝脏是合成凝血因子和清除循环血栓小集体的主要部位。本实验的目的是测定嘧啶核苷酸前体对脓毒诱导的凝血疾病的影响。部分组织促凝血酶原激酶时间用作血液凝结系统状态的指标。
方法30只雌性Balb/C小鼠(8周龄)分成各10只动物的3组。一组小鼠未作处理，用于测定部分组织促凝血酶原激酶时间的基础值。2组小鼠接受30mg/kg杀死的大肠杆菌(菌株O111:B4)；在施用大肠杆菌前2小时，一组经腹膜内注射接受尿苷(2000mg/kg)。在大肠杆菌用药20小时后，从所有30只小鼠中收集血浆样品以测定部分组织促凝血酶原激酶时间(PTT)。从眼眶后血管丛收集0.27ml血放入含0.03ml3.5％柠檬酸钠pH 4的试管中。离心分离血浆，将100微升血浆转移到干净的1.5ml Eppendorf管中以便用商用试剂盒测定PTT。
结果施用杀死的大肠杆菌导致正常部分组织促凝血酶原激酶时间延长。尿苷减轻脓毒症诱导的凝血时间改变，如在表9中所示。
表9尿苷减轻脓毒诱导的部分组织促凝血酶原激酶时间的改变
*＝与对照(仅用大肠杆菌)值不同，P＜.05
实施例12由T细胞和内毒素引起组合肝损伤病毒性肝炎以及自身免疫肝炎的一些重要形式受攻击携带合适病毒或其它抗原的肝细胞的细胞毒性T细胞的起动。由于内毒素参与由许多象四氯化碳的其它试剂，胆碱缺陷，乙醇或胆汁郁积起动的肝损伤，为了确定由T细胞导致的肝损伤是否诱导对内毒素肝过敏而进行了一些研究。在该实验后，研究了TAU时由T淋巴细胞和内毒素引起的组合肝损伤的影响。
实施例12A伴刀豆球蛋白A增效内毒素诱导的组织损伤8周龄的雌性Balb/C小鼠组(n ＝6)接受伴刀豆球蛋白A(2.5mg/kgi.v.)，内毒素(Salmonella Typhimurium，0.5mg/kg)或Con A与内毒素的联合。在接受内毒素前24小时施用ConA。在注射内毒素后18小时取血样(或在未接受内毒素的小鼠组中接受其载体)。小鼠“基础”组仅接受载体(盐水)代替Con A或内毒素。
表I伴刀豆球蛋白A起动内毒素诱导的组织损伤
ALT＝丙氨酸氨基转移酶AST＝天冬氨酸氨基转移酶LDH＝乳酸脱氢酶CPK＝肌苷磷酸激酶SDH＝山梨醇脱氢酶以用于本实验的剂量的单独内毒素或Con A经血清酶水平(ALT，AST，LDH和SDH是肝损伤的标记；CPK是肌肉损伤的指标)测定对肝和肌肉产生最小损伤。然而，在用Con A和内毒素联合处理的小鼠中，观察到明显更大的损伤。据信在该模型中Con A的毒性与T淋巴细胞介导的肝损伤特别相关(Tregset al.，J.Clin.Invest.90196-203，1992)。因此，这些结果支持了肠道产生的内毒素参与细胞毒T淋巴细胞(即，病毒和自身免疫肝炎)引起的肝损伤(即，病毒性和自身免疫肝炎)这一观点，正如对由包括四氯化碳，胆碱缺陷，D-半乳糖胺和病毒感染的其它主要攻击起动的肝损伤所证实的。
实施例12BTAU减轻由CTL和内毒素引起的结合肝损伤经过静脉由施用伴刀豆球蛋白A(Con A)起动的实验性肝炎经过激活细胞毒T淋巳细胞介导。在该模型中的肝损伤导致对细菌内毒素毒性效应的灵敏性的显著增加。顺序施用Con A和内毒素导致比累加更大的肝损伤(见实施例12A)。在病毒和自身免疫肝炎中的肝损伤涉及相似的机制，具有由T细胞起动的和由肠道产生的内毒素和其它发炎过程加剧的损伤。
TAU保护实验动物的肝脏抵抗由内毒素或Con A起动的损伤。在本实验中，试验了TAU在受到顺序施用Con A和内毒素引起的结合肝损伤的小鼠中的肝保护效应。
方法雌性Balb/C小鼠(8周龄)分成各7只动物的3组。一组动物未受处理以提供组织损伤血清化学指数的基础值。剩余的2组小鼠经静脉内(尾静脉)注射接受溶于0.2ml盐水中的2mg/kg伴刀豆球蛋白A，24小时后接受鼠伤寒沙门氏菌内毒素(10微克i.p.)。其中一组小鼠在施用Con A前2小时和在施用内毒素前2小时口服接受溶于0.6ml0.5％甲基纤维素中的TAU(6000mg/kg)；剩余的Con A/内毒素处理的组(对照)仅接受载体(甲基纤维素)。施用内毒素后18小时，从所有小鼠收集血样品以测定组织损伤或代谢功能障碍各种指数的血清水平。
结果经肝损伤的血清化学指数分析顺序施用Con A和内毒素可导致明显的肝损伤。口服施用TAU显著减轻该联合的肝损伤。
口服TAU减轻由伴刀豆球蛋白A+LPS引起的肝损伤
*＝与对照不同(LPS i.p.)，P＜.02ALT＝丙氨酸氨基转移酶AST＝天冬氨酸氨基转移酶LDH＝乳酸脱氢酶CPK＝肌苷磷酸激酶SDH＝山梨醇脱氢酶实施例13口服三乙酰尿苷促进乙醇中毒的恢复乙醇中毒导致中央神经系统活性受抑制。恢复依赖于从系统中清除乙醇。从循环中清除乙醇主要发生在肝脏，受乙醇脱氢酶和氧化还原平衡及肝代谢状态的调节。
在这些实验中，用三乙酰尿苷(TAU)处理乙醇中毒的小鼠以确定通过给肝脏和其它组织提供尿苷的代谢支持是否影响乙醇中毒的恢复。
实验1禁食小鼠方法平均重22克的雌性Balb/C小鼠禁食24小时。9只小鼠接受口服TAU 2000mg/kg p.o.，8只接受载体(0.75％羟丙甲基纤维素水溶液)。
1小时后，所有动物接受5.7ml/kg乙醇(0.5ml 25％的水溶液p.o.)。
接受乙醇1小时后，小鼠接受另一剂量的TAU或载体。此时全部小鼠基本上昏迷。
从施用乙醇3小时后开始，以小时为间隔监测行为。行为测定的标准如下乙醇中毒后的行为恢复深度昏迷对刺激无反应。呼吸缓慢。
平卧小鼠平躺但不活动。眼险对用探针接触发生反应。呼吸迅速。
纠正反射当仰面放置时，动物尝试在5秒内翻正。该类别包括全部“活动型”动物和一些“平卧”型。
活动型动物能行走。
TAU加速禁食小鼠乙醇中毒的恢复。
对照n＝8只小鼠
TAUn ＝9小鼠
小鼠＝雌性Balb/C，22克，禁食24小时乙醇剂量＝5.7ml/kg p.o.在时间＝0小时(0.7ml 25％乙醇)在施用乙醇前1小时和后1小时施用TAU(2g/kg)或载体(对照组)。
实验2未禁食的小鼠平均重22克的雌性Balb/C小鼠在实验时前可自由获取食物。10只小鼠经p.o.接受口服 TAU 2000mg/kg，10只接受载体(0.75％HPMC)。
1小时后，所有动物接受8ml/kg乙醇(0.7ml 25％的水溶液p.o)。
施用乙醇1小时后，小鼠接受另一剂量的TAU或载体。
在乙醇用药后2，3，4和6小时的间隔时监测行为。行为分析的规则与上面禁食小鼠的试验相同。
TAU加速非禁食小鼠中乙醇中毒的恢复对照，n＝10小鼠
TAUn＝10小鼠
小鼠＝雌性Balb/C，22克，随时取食乙醇剂量＝8ml/kg p.o.，时间＝0小时(0.7ml 25％乙醇)。
施用乙醇前1小时和后1小时施用TAU(2g/kg)或载体(对照组)。
TAU清楚地促进受到严重乙醇中毒的小鼠中的行为恢复。未禁食的小鼠比禁食的动物接受更高剂量的乙醇(8ml/kg对5.7ml/kg)，但恢复更快。这一观察结果强调了在乙醇中毒恢复中能量代谢的重要性。TAU加速了在取食和禁食动物中乙醇中毒的恢复。
实施例14在小鼠病毒性肝炎中三乙酰尿苷减小死亡率蛙病毒3型(FV3)在小鼠中迅速诱导致死性肝炎，它受内源性内毒素引起的二级损伤的部分介导(Gut et al.，J.Infect.Disease.，1984，149621)。
在该模型中试验三乙酰尿苷(TAU)以证实该试剂和本发明的其它化合物在病毒性肝炎中具有有用的治疗效应。
方法冻干的FV3在磷酸盐缓冲盐水中重新配制成每ml 1×108噬菌斑形成单位(PFU)的密度。
重25克的雌性Balb/C小鼠经腹膜内或静脉(尾静脉)注射接受相应于大约LD50剂量的FV3病毒。在施用FV3前1小时或在次日下午和早晨经口服施用TAU(3000mg/kg)或载体(0.75羟丙甲基纤维素)。观察动物3天；未活过该观察期的动物全部在病毒用药后大约24-30小时死亡。
腹膜内施用FV3病毒FV3 4×107PFU/小鼠i.p.
存活率对照 6/10TAU 10/10静脉内施用FV3病毒FV3 2×107PFU/小鼠i.v.
存活率对照 5/10TAU 10/10上文试图对本发明进行说明而非限制。许多未偏离本发明实质和范围的改变和修饰可以是有效的。
权利要求
1.一种用于减轻乙醇中毒影响的方法，包括对需要治疗的哺乳动物给药尿苷，胞苷，乳清酸或尿苷，胞苷或乳清酸的酰基衍生物或其药用上可接受的盐。
2.一种治疗乙醇中毒的方法，包括对中毒的哺乳动物给药尿苷，胞苷，乳清酸或尿苷，胞苷或乳清酸的酰基衍生物或其药用上可接受的盐。
3.权利要求2的方法，其中所说的尿苷酰基衍生物是三乙酰尿苷。
4.权利要求2的方法，其中所述给药步骤包括给药尿苷或胞苷。
全文摘要
本发明公开了用于治疗全身性炎症和炎性肝炎的嘧啶核苷酸前体，包括胞苷，尿苷和乳清酸的酰基衍生物和尿苷磷酸化酶抑制剂的嘧啶核苷酸前体以及它们地增强对脓毒症或全身性炎症的抗性中的用途。
文档编号A61P39/02GK101066276SQ20061010555
公开日2007年11月7日 申请日期1995年6月30日 优先权日1994年7月1日
发明者R·W·冯博斯特尔, M·K·巴马特, B·M·希尔特布兰德 申请人:威尔斯塔特医疗公司