含基于聚肌苷酸-聚胞苷酸的佐剂的粘膜免疫物质的制作方法

专利名称：：含基于聚肌苷酸-聚胞苷酸的佐剂的粘膜免疫物质的制作方法
技术领域：
：本发明主要涉及免疫原组合物和其使用方法。本发明特别涉及一种免疫原组合物，其包含聚核苷酸佐剂以及一或多种抗原物质，用以促进宿主体内的疾病特异性粘膜免疫反应。
背景技术：
：免疫系统可以产生特异性和非特异性免疫。非特异性免疫包含多种细胞作用机制，例如巨噬细胞(macrophages)或粒细胞(granulocytes)的吞噬作用(phagocytosis)以吞噬外来颗粒或抗原，以及天然杀伤细胞(NK细胞)活性等。非特异性免疫力依赖具有较低进化优势的免疫机制，且不会展现出获得特异性和记忆的特性，该获得性特性是特异性免疫反应的典型特点。特异性和非特异性免疫之间的关键性差异是以B和T细胞的特异性反应为基础。这些细胞主要是在被特定抗原所活化后获得他们的反应性，而且在未来暴露于该特定抗原时展现出免疫记忆的机制。因此接种疫苗(涉及免疫特异性和记忆)是保护机体以对抗有害病原体的有效机制。一般而言，B和T淋巴细胞在他们的细胞表面上有针对特定抗原的特定受体，能产生特异性免疫。该特异性免疫系统会对各抗原以二种方式产生免疫反应1)体液免疫，涉及剌激B细胞产生抗体或免疫球蛋白及辅助性T细胞(主要为Th2)，以及2)细胞免疫，一般涉及包括细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)的T细胞，尽管其他细胞(例如抗原递呈细胞以及Thl细胞)也参与CTL反应的产生。免疫系统已发展出一种独特且专门的能力(repertoire)以对抗感染。人类的免疫系统可概略细分为二个交互作用的次系统。系统性免疫系统包含淋巴结、骨髓和脾脏，用以守护内脏和组织，而粘膜免疫系统包含粘膜表面相关淋巴组织和外分泌腺，以提供防御性障壁，以对抗免病原体经由呼吸、胃肠、感觉器官和泌尿生殖通道的上皮层进入体内。系统性和粘膜免疫系统的免疫反应已演化成为具有特定功能，而且在对抗病原休的防御机制上仍然颇有不同的系统。例如，粘膜免疫系统大致上的特征在于存在有特定种类的抗体，也就是免疫球蛋白A(IgA)抗体，主要是分泌型免疫球蛋白IgA(分泌型IgA)，以保护粘膜表面。分泌型IgA抗体在粘膜处中和尚未穿越粘膜屏障的病原体。一般而言，现今的免疫策略涉及通过肌肉内、皮下、腹腔内或皮内给予抗原，致使系统性免疫系统产生不同种类的抗休(例如免疫球蛋白G(IgG))，以在病原体进入体内之后中和病原体。通过注射给予的疫苗不引发实质的分泌型IgA反应。此外，系统性免疫反应不一定会抑制病原体通过粘膜表面进入体内。因此，仅仅诱导系统性免疫反应的接种疫苗策略会使得容易通过粘膜表面受到感染的个体只能在病原休进入体内循环系统后依靠体内免疫系统打击它。另一方面，粘膜给予能诱导粘膜免疫反应(局部，有时在给予位置远处)和系统性免疫反应。此外，传统注射免疫法已知具有许多缺点，许多个体有受感染和低耐受性的危险，而在注射位置发生硬化(组织硬化)、出血(流血)和/或坏死(局部组织死亡)等情形。但是，当佐剂能够促进系统性免疫反应时，仍无法断定该佐剂也一定能够促进粘膜免疫反应。一个典型的例子是氢氧化铝，它可以在肌肉内、皮下、腹腔或皮内给予时促进物质的系统免疫原性，但当通过注射或粘膜途径给予时无法有效促进粘膜免疫反应。近年来已针对新颖佐剂(包括促进粘膜免疫反应的佐剂)进行许多深入的研究。利用分泌型IgA在粘膜屏障处的保护作用的研究努力包括口部给予以及将分泌型IgA单克隆抗体直接施加在呼吸道表面，以提供保护避免病原体进入。但是，业界仍然需要一种能够在宿主体内促进有利的粘膜免疫反应的安全且有效的佐剂。本发明提供具有改善有效性和安全性状态的新的免疫原组合物，以及使用该组合物来促进粘膜免疫反应的方法。本发明免疫原组合物包含聚核苷酸佐剂和抗原。文献相关参考资料列示于下1曰本专利公开案第1093540A2号；2美国专利第4,124,702号；3美国专利第3，692,899号；4美国专利第3，906，092号；5美国专利第4，389，395号；6美国专利第4,349，538号；7美国专利第4,024,241号；8美国专利第3，952，097号；9Houstonetal.，InfectionandImmunity,14:318-9，1976C10WrightandAdler-Moore，BiochemicalandBiophysicalResearchCommunications,131:949-45，198511Lin，etal.,Anewimmunostimulatorycomplex(PICKCa)inexperimentalrabies:antiviralandadjuvanteffects,ArchVirol,131:307-19,199312ChinesePatent93105862.713GuptaR.K.etal.，Adjuvants-abalancebetweentoxicityandadjuvanticity，Vaccine,11:293-306，199314Anion,R.(Ed.)SyntheticVaccines1:83-92，CRCPress,Inc"BocaRaton,Fla.,198715Sela,M.,Science166:1365-1374(1969)16美国专利第6，008，200号；17Ellouzetal.,Biochem.&Biophy.Res.Comm.,59:1317，197418美国专利第4,094,971号；19美国专利第4,101,536号；20美国专利第4，153，684号；21美国专利第4,235，771号；22美国专利第4,323,559号；23美国专利第4,327,085号；24美国专利第4，185，089号；25美国专利第4,082,736号；26美国专利第4,369,178号；27美国专利第4，314，998号；28美国专利第4,082，735号；29美国专利第4，186，194号；30美国专利第6，468，558号；31NewTrendsandDevelopmentsinVaccines,editedbyVolleretal"UniversityParkPress,Baltimore,Md.，USA,197832Klein,J.，etal"Immunology(2nd),BlackwellScienceInc.,Boston(1997)33GupaR.K.andSiberG.R.，Adjuvantsforhumanvaccines-currentstatus,problemsandfUtureprospects,Vaccine,13(14):1263-1276,199534RichardTKenneyetal.MeetingReport-2ndmeetingonnoveladjuvantscurrentlyin/closetohumanclinicaltesting,Vaccine202155-2163,200235LaboratoryTechniquesinRabiesEditedbyFXMeslin，MMKaplan,HKoprowski4th，1996，EditionISBN92415441
发明内容大致而言，本发明涉及免疫原组合物，其包含聚肌苷酸-聚胞苷酸、卡那霉素和钙的复合佐剂，以及利用这些免疫原组合物来刺激疾病特异性粘膜免疫反应的方法。因此，本发明提供一种免疫原组合物，包含(a)聚核苷酸佐剂，该佐剂包含聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸(PIC)、至少一种抗生素以及至少一种正价离子；以及(b)至少一抗原；其中该组合物被配制成供粘膜给予之用。特别是，本发明涉及免疫原组合物的应用，该免疫原组合物包含作为佐剂能安全使用于人类或非人类动物的聚肌苷酸-聚胞苷酸、卡那霉素和钙的复合物，当该佐剂与抗原性和/或免疫调节性物质组合给予时促进特异性粘膜免疫反应，且在某些应用中促进特异性粘膜和系统性免疫反应。特别是，依据本发明的免疫原组合物可包含聚核苷酸佐剂组合物，该聚核苷酸佐剂组合物中的分子在分子量上是异质的，其中该分子量为至少66，000道尔顿。图l-以含有PIKA和/或灭活型完全SARS抗原的疫苗进行免疫之后，利用ELISA法检测肺脏上清液的特异性-分泌型IgA效价；图2-以含有PIKA和/或灭活型完全SARS抗原的疫苗进行免疫之后，利用ELISA法检测血清的特异性IgA效价；图3-以含有PIKA和/或灭活型完全SARS抗原的疫苗进行免疫之后，利用ELISA法检测血清的特异性IgG效价；图4-以含有PIKA和/或灭活裂解型流感抗原(inactivatedsplitinfluenzaantigen)的疫苗进行免疫之后，利用ELISA法检测肺脏上清液的特异性分泌型IgA效价；图5-以含有PIKA和/或灭活裂解型流感抗原的疫苗进行免疫之后，利用ELISA法检测肠上清液特异性分泌型IgA效价；图6-以含有PIKA和/或灭活裂解型流感抗原的疫苗进行免疫化之后，利用ELISA法检测血清特异性IgG效价；图7-以含有PIKA和/或灭活裂解型流感抗原的疫苗进行免疫之后，利用ELISA法检测血清特异性IgA效价；图8-以含有PIKA和/或灭活裂解型流感抗原的疫苗进行免疫之后，利用ELISP0T法来检测产生IL-2的小鼠脾细胞；图9-以含有PIKA或Al(OH)3和/或灭活裂解型流感抗原的疫苗进行免疫之后，利用ELISA法检测肺脏上清液(稀释32倍)的特异性分泌型IgA;图10-以含有PIKA或Al(OH)3和/或灭活裂解型流感抗原的疫苗进行免疫之后，利用ELISA法检测肠上清液内(稀释32倍)的特异性分泌型IgA;图ll-以含有PIKA或铝佐剂(alum)和/或灭活裂解型流感抗原的疫苗进行免疫之后，利用ELISPOT法来检测产生IFN-7的小鼠脾细胞；图12-以含有PIKA或铝佐剂(alum)和/或灭活裂解型流感抗原的疫苗进行免疫之后，利用ELISPOT法来检测产生IL-2的小鼠脾细胞。具体实施方式本发明可藉由后续对于木发明某些实施方案以及其中所包括的实施例的详细内容而更容易被了解。本申请在整篇内容中参照的公开文献，这些公开文献的内容被并入本申请中作为参考，以充分地叙述本发明所属
技术领域：
的水准。在进一步叙述本发明之前，应明了本发明不会被局限于所述特定实施方案中，因为这些实施方案必然是多样的。亦应明了本说明书中所使用的术语仅是为了阐述特定实施方案，而非作为限制，因为本发明的范围将会被界定在所附权利要求中。除非另行界定，本说明书中所使用的所有技术和科学术语均和本案所属
技术领域：
中技术人员所普遍明了的意义相同。现在就实施本发明的优选方法和材料加以叙述，但是和本说明书中所述方法和材料类似或等效的任何方法和材料均可用以实施或测试本发明。本说明书中所提到的所有公开文献均被并入于此作为参考，以揭示并说明所述公开文献中的方法及/或材料。应注意，如本案说明书和权利要求中所使用的用语，除非前后文意指明另有其他意义，否则单数形式用语"a"、"and"和"the"包括复数形式用语。因此，例如提及"免疫原组合物"即包括多种这样的组合物，提及"抗原"即包括提及一或多个抗原以及熟习于本领域的技术人员所知悉的等价物等等。此外应注意，权利要求可被撰写成排除任何可选择性成分。因此，此说明是要作为使用例如"仅有(solely)"、"只有(only)"等排除性用语在权利要求构成要件的相关叙述内容时或是使用"负向"限制("negative"limitation)时的在先引用基础(antecedentbasis)。名词定义在陈述本发明的详细内容之前，应当了解被使用于本说明书中的数个术语。使用于此处的术语"佐剂"是指增加或改变宿主对于抗原化合物的免疫反应的任何物质或物质混合物。特定地说1."PICKCa"此术语是一般性地指称由PolyI:C、卡那霉素和钙所构成的组合物，而和组合物的特定物理和免疫原性无关。2."Av-PICKCa"是指PICKCa在商业上被使用作为抗病毒药剂的形式。3."PIKA"是指本发明组合物，包含PolyI:C、抗生素(例如卡那霉素)以及正价离子(例如钙)，其中所述PIKA的特征在于物理特性(例如分子量、尺寸等)，以使得PIKA在给予后可展现出佐剂的特性，且具有相较于以PICKCa为例更低的副作用(例如毒性降低)以及相较于以Av-PICKCa为例更高的效力强度(例如刺激加强的免疫反应)。"PolyI:C"或"PIC"等术语是指含有聚核糖肌苷和聚核糖胞苷核酸的组合物，亦分别称作为聚肌苷酸-聚胞苷酸。"含PIC的分子"或"含PIC的化合斷，是非限制性地指称PIC，它可选择性地通过复合或组合以上所述含PIC的分子的组合物中的抗生素(例如卡那霉素)以及正价离子(例如钙)中的至少一者或二者。在一具体例中，在复合物中该含PIC的分子不包含聚-L-赖氨酸或其衍生物。在本发明佐剂组合物的前后文中所使用的"异质"此术语是指该组合物的成份(例如含PIC的分子)在分子量、尺寸或此二者的物理特性上不是均一的。当组合物被描述成对于给定物理特性呈异质，且进一步通过该物理特性的数值范围来描述时，即是将该组合物叙述成实质上包含以具有分布在所述范围内的物理特性为特征的分子。虽然该组合物可能不会含有代表所述范围的下及上限内的每一物理特性数值的分子，但该组合物通常会包含至少一个具有该上限数值或下限数值物理特性的分子。在某些具体例中，该组合物可包含位于用以描述该组合物的所述物理特性范围以外的分子。这些在组合物中位于所定范围以外的分子不会实质影响该组合物的基本和新颖特性。"粘膜"或"粘膜农面"等术语是指和外在环境直接或间接接触的表面、通道或腔穴，包括呼吸道、消化道、感觉和泌尿生殖系统的表面。"胃肠道的粘膜表面"此术语是指肠(包括小肠和大肠)、直肠、胃壁内衬层(stomach(gastric)lining)、口腔等的粘膜。"被配制成供粘膜给予使用"此术语是指适合给予粘膜(例如给予粘膜表面或粘膜)因而兼容于粘膜的组合物。在一些实施方案中，该组合物被配制成通过直肠、阴道、鼻、口、目艮(opthamalic)以外的途径给予粘膜(例如该组合物被配制成通过肺部给予而给予肺组织)。"个体"此术语在此和"宿主"、"主体"和"动斷，互换使用，包括人类及所有畜养(如家畜和宠物)和野生的动物及禽鸟，其非限制性地包括牛、马、乳牛、猪、绵羊、山羊、狗、猫、兔、鹿、貂、鸡、鸭、鹅、火鸡、斗鸡等。"抗体"此术语包括多克隆及单克隆抗体以及这些抗体的抗原化合物结合片段，包括Fab、F(ab')2、Fd、Fv片段，以及这些抗体和片段的单链衍生物。此外，"抗体"此术语包括天然发生的抗体以及非天然发生的抗体，包括例如嵌合型(chimeric)、双功能型(bifunctional)和人源化(humanized)抗体，以及相关的合成异构形式(isoforms)。"抗体"此术语可和"免疫球蛋白"互换使用。如木说明书中所使用，"抗原化合物"此术语是指可在适当情形下被免疫系统所辨识(例如结合至抗体或被加工，以诱导细胞免疫反应)的任何物质。"抗原"是指一种物质，包括呈现疫苗形式的组合物，其中该疫苗本身包含抗原化合物，且可以包含或可以不包含除了PIKA以外的佐剂，当通过适当途径(例如胃肠道外(parenterally))给予时，该抗原会引起例如形成抗体等特异性免疫反应，该抗体包括特定地结合至该抗原的抗体。抗原的两个特性在于它们的免疫原性以及它们的抗原性，免疫原性也就是它们在活体内引起特异性免疫反应的能力，抗原性也就是它们被抗原诱导产生的抗体选择性辨识的能力。如本说明书中所使用，"抗原"包括但不限于细胞、细胞提取物、蛋白质、脂蛋白、糖蛋白、核蛋白、多肽、肽、多糖、多糖结合物、多糖的肽模拟体、脂肪、糖脂质、碳水化合物、病毒、病毒提取物、细菌、细菌提取物、真菌、真菌提取物、多细胞生物例如寄生虫以及过敏原。抗原可为外源性(例如来自于被给予该抗原的个体以外的其他来源，例如来自于不同的物种)或是内源性(例如源自于宿主体内，例如身体的疾病因子、癌症抗原、病毒感染细胞所产生的抗原等等)。抗原可以是天然型(例如天然产生的)、合成型或重组型。抗原包含粗提取物、完整细胞和纯化抗原，其中"纯化"此术语是指该抗原呈现相较于抗原通常存在的环境和/或相较于粗提取物(例如抗原的培养形式)更为丰富的形式。本说明书中所使用的"免疫原组合物"此术语是指二或更多种物质(例如抗原和佐剂)的组合，当将这些物质给予宿主时会共同激发免疫反应。"多肽"、"肽""寡肽"和"蛋白质"等术语在本说明书中可互换使用，它们的意思是任何长度氨基酸聚合物形式，该聚合物形式可包括编码和非编码性氨基酸、经化学或生化修饰或衍生的氨基酸以及具有修饰肽主链的多肽。"抗原化合物有效量"是指抗原化合物的用量将会致使个体产生针对该抗原化合物的特异性免疫反应，该抗原化合物可选择性地和佐剂组合。"免疫反应"此术语是指脊椎动物个体的免疫系统对于抗原化合物或免疫原化合物的任何反应。典型的免疫反应包括但不限于局部及系统性细胞及体液免疫反应，例如包括抗原特异性诱导的008+CTLs在内的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应、包括T-细胞增殖反应和细胞因子释出作用在内的辅助T-细胞反应，以及包括抗体反应在内的B-细胞免疫反应。本说明书所使用的"引发免疫反应"("elicitinganimmuneresponse")此术语是一般性地包含免疫反应的诱导及/或增强inductionand/orpotentiation)。"诱导免疫反应"("inducinganimmuneresponse")此术语是指刺激、起始或诱导免疫反应。"增强免疫反应"("potentiatinganimmuneresponse")是指既存的免疫反应被改善、助长、补充、扩增、加强(enhanced)、增加或延长。"加强免疫反应"("enhancedimmuneresponse")此表达方式或类似表达方式的意思是，相较于先前的免疫反应状态，免疫反应被提高、改善或加强，而对宿主有利，所述先前的免疫反应状态是例如给予本发明的免疫原组合物之前的免疫反应状态。"粘膜免疫反应"和"粘膜免疫"等术语在本项技术中是为人所熟知的术语，这些术语是指该免疫反应至少部分的特征在于在胃肠道组织(包括直肠组织)、阴道组织和呼吸道组织等粘膜组织中产生分泌型IgA和/或刺激粘膜CTL反应。"体液免疫(humoralimmunity)"和"体、液免疫反应(humoralimmuneresponse)"等术语是指因应抗原刺激而产生抗体分子的免疫形式。"细胞免疫(cell-mediatedimmunity)"和"细胞免疫反应(cell-mediatedimmuneresponse)"等术语是指淋巴细胞所提供的免疫防御力，例如T淋巴细胞在靠近受害细胞时所提供的防御力。细胞免疫反应通常包括淋巴细胞的增殖。当测量到"淋巴细胞的增殖"时，会测量到淋巴细胞对特定抗原反应的增殖能力。淋巴细胞增殖是指B细胞、T-辅助细胞或CTL的细胞增殖。"免疫原量"此术语是指，相较于没有聚核苷酸佐剂时抗原所引发的免疫反应，加入本发明的免疫原组合物共同给予时足以刺激免疫反应抗原化合物用量。"免疫增强量(immunopotentiatingamount)"此术语是指，相较于没有聚核苷酸佐剂时所观察到的抗体效价及/或细胞免疫反应，当佐剂和本发明组合物内的抗原化合物共同给予时，致使抗体效价及/或细胞免疫反应增加所需的佐剂量。本说明书中所使用的"治疗"此术语是一般性地指称获得所需药理和/或生理效应。该效应从完全地和/或部分地防止疾病或其症状的角度来看可以是属于预防性质的，和/或该效应从完全地和/或部分地稳定或治愈疾病和/或疾病所导致的不利影响来看可以是属于治疗性质的。本说明书中所使用的"治疗"此术语涵盖对于个体(特别是哺乳动物个体，更特别是人类)的疾病的任何处理，且包括(a)预防可能有罹病倾向但尚未诊断出罹病的个体发生疾病或症状；(b)遏制疾病症状，例如阻止该疾病症状的发展；或是舒缓疾病症状，例如致使该疾病或症状消退；(c)降低疾病传染物质所产生的产物水平(例如毒素、抗原等)；(d)降低对于疾病传染物质的不利生理反应(例如发烧、组织水肿等)。如本说明书中所使用，"混合"此术语包括用以组合组合物的成份的任何方法；这些方法包括但不限于掺合、分配、溶解、乳化、凝集、悬浮或将组合物的组成份合理地(physically)加以组合的其他方法。化合物的"药学上可接受的盐"意指该盐是药用上可接受的，且拥有母化合物的所需药理活性。这些盐包括:(l)酸加成盐，例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸形成的盐；或是和例如乙酸、丙酸、已酸、环戊丙酸、羟乙酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1，2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、葡庚糖酸、4，4'-亚甲基双-(3-羟基-2-烯-1-羧酸)、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乳酸(tertiarybutylaceticacid)、月桂基硫酸、葡萄糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸、粘康酸等有机酸等共同形成盐；或是(2)当母化合物中所存在的酸性质子被如碱金属离子、碱土族金属离子或铝离子等金属离子所置换，或是配位有如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、胺基丁三醇(tromethamine)、葡甲胺(N-methylglucamine)等有机碱时，所形成的盐。本说明书中所使用的"单位剂型"此术语是指在实体上呈分离的单位，适合作为使用于人类和动物个体的单位剂量，各个单位含有预定量的本发明化合物，该预定量经计算后呈现足以和药学/生理上可接受的稀释剂、载剂或载体共同产生所需效应的用量。本发明的例示性实施方案本发明关于用在人类、非人类动物或细胞培养物中诱导和/或加强免疫反应的免疫原组合物和方法，该免疫反应可为粘膜和/或系统性、体液及/或细胞免疫反应。一般而言，依据本发明的免疫原组合物包含抗原("抗原组合物")和佐剂。该佐剂的存在会加强或改变对于该抗原的免疫反应。该佐剂可通过影响免疫球蛋白和/或趋化因子和/或细胞因子的亚型(异构型)的产生而改变免疫反应的品质。结果使得先天性免疫力、体液及/或细胞免疫反应因该佐剂的存在而更加有效。一个特别的优点在于PIKA佐剂和抗原物质相组合可有效地引起特异体液免疫反应，从而加强保护性免疫。另一个重要优点在于PIKA佐剂和抗原物质相组合可引起特异细胞免疫反应，而该特异细胞免疫反应是治疗用疫苗在限制和治疗细胞内病毒、细菌和寄生虫感染时所需要的。因此，本发明包括组合物，该组合物具有特殊的产物特性，使组合物特别适合使用作为疫苗，以给予动物及/或人类，以满足对引发有益免疫反应的安全佐剂的需求。因此，本发明提供可安全地使用于人类和动物的佐剂和免疫原组合物。因此，本发明提供免疫原组合物，其包含(a)聚核苷酸佐剂，该佐剂包含聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸(PIC)、至少一种抗生素以及至少一种正价离子；(b)至少一种抗原；其中该组合物被配制成供粘膜给予使用。.特别是，依据本发明的免疫原组合物可包含聚核苷酸佐剂组合物，该组合物中的分子在分子量上是异质的，其中该分子量为至少66,000道尔顿。具体上说，本发明提供PIKA佐剂组合物，其包含聚核苷酸、抗生素以及正价离子，其中该聚核苷酸可为聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸(PIC);该抗生素可为卡那霉素，以及该离子可为钙。在一个特别相关方面，本发明提供用以加强抗原化合物的抗原性的免疫原组合物，其包含可引发抗原特异性细胞免疫反应的聚核苷酸佐剂组合物。在一个特别相关方面，本发明提供用以加强抗原化合物的抗原性的免疫原组合物，其包含可引发抗原特异性体液免疫反应的聚核苷酸佐剂组合物。在一个特别相关方面，本发明提供用以增进抗原化合物的抗原性的免疫原组合物，其包含可引发细胞和体液结合的抗原特异性免疫反应的聚核苷酸佐剂组合物。在一个特别相关方面，本发明提供佐剂组合物或含有佐剂组合物的免疫原组合物，其中该佐剂组合物或免疫原组合物被冷冻干燥。在一个特别相关方面，本发明提供聚核苷酸佐剂组合物在制备用以加强宿主免疫原反应的药剂上的用途。聚核苷酸佐剂本发明免疫原组合物具有含PIC的聚核苷酸佐剂(例如PIKA组合物)通常包含聚核糖肌苷酸、聚核糖胞苷酸、抗生素(例如卡那霉素)，以及二价离子(例如钙)。请明了，本说明书以PIKA作为这种含PIC的佐剂的范例。相关含PIC的佐剂可利用在本领域中可得的方法来制造。含PIC的佐剂组合物可通过任何适当方法所制造。例如，聚核苷酸佐剂组合物可通过在一个具有pH6至pH8的pH值的氯化钠/磷酸钠缓冲液内，将聚肌苷酸、聚胞苷酸、抗生素和正价离子来源加以混合而制成。聚肌苷酸和聚胞苷酸的浓度通常为0.1至10mg/ml、0.5至5mg/ml或是0.5to2.5mg/ml。增色值(hyperchromicityvalue)应高于10%、高于15%、高于20%或高于50%。PIC的制备以及和抗生素(如卡那霉素)和正价离子(如钙)的组合通常是在符合于国际优良方法规范(GoodManufacturingProcess)的品质标准下进行。在本发明的某些实施方案中，该佐剂的抗生素组份是卡那霉素。当该抗生素是卡那霉素时，在一些实施方案中，聚核苷酸佐剂组合物内的卡那霉素可和一或多种抗生素共同使用或被一或多种抗生素所取代，这些抗生素选自于包括妥布拉霉素(tobramycin)、葸环类抗生素(anthracyclines)、硫酸丁酰苷菌素(butirosinsulfate)、庆大霉素、潮霉素、艾米康丝菌素(amikacin)、双去氧卡那霉素、暗霉素、美它酰胺(metrzamide)、新霉素、嘌呤霉素、链霉素和链脲霉素所构成的群组中。本发明聚核苷酸佐剂组合物内的抗生素(例如卡那霉素等)的浓度通常为约10单位/ml至100,000单位/ml，约100单位/ml至10,000单位/ml，或约500单位/ml至5,000单位/ml。在本发明的某些实施方案中，该聚核苷酸佐剂组合物进一步包含正价离子(阳离子)，通常是二价阳离子，且通常是一个碱金属的阳离子。在本发明的组合物内，该正价离子一般被用作为正价离子的来源，例如盐或复合物，例如有机或无机盐或复合物，且通常是无机盐或有机复合物。典型的正价离子包括但不必然限于钙、镉、锂、镁、铈、铯、铬、钴、氘、镓、碘、铁或锌。该正价离子可以呈任何适当的盐或有机复合物的形式，包括但不必然限于氯化物、氟化物、氢氧化物、磷酸盐或硫酸盐。例如，当该正价离子是钙时，则该离子可呈碳酸钙、氯化钙、氟化钙、氢氧化钙、磷酸钙或硫酸钙的形式。本发明的组合物内可配有正价离子(例如钙)，该正价离子的浓度位于约10Mmol至10mmol/ml的范围内，通常为约50jxmo1至5mmol/ml，且更常为约100nmol至lmmol/ml。本说明书中所使用的"Hmol"此术语意指微摩尔。当本发明佐剂组合物中的正价离子是钙时，则它可和其他正价离子相组合或被其他正价离子所取代，这些正价离子包括镉、锂、镁、铈、铯、铬、钴、氘、镓、碘、铁或锌，其中这些离子可呈无机盐或有机复合物的形式。所得的组合物是含PIC的佐剂，其进一步含有抗生素和正价离子。在特定实施方案中，当该抗生素是卡那霉素及该正价离子是争"5时，该产品可称为PICKCa。在相关实施方案中，PICKCa组合物可含有无不同物理特性限制的分子。PIKA佐剂组合物在特定的实施方案中，聚核苷酸佐剂是PIKA。PIKA可通过多种方式来制得，以从PICKCa来制得特别有利。PIKA可通过涉及分离和/或浓縮具有所限定分子大小和/或分子量的分子的额外方法，而从PICKCa制得。利用过滤、层析、热处理、离心分离、电泳和类似方法来分离和浓縮具有特定特性的聚核苷酸分子均为标准方法，且为本领域技术人员所知悉。该免疫原组合物可被制备成为干燥粉末、液态溶液、悬浮液或乳剂。所需免疫原组合物配方的制备被一般性地叙述在Vaccine4thEditionbyStanleyAPlotkinetal.，W.B.SaundersCompany;她edition2003。适当的配方亦被叙述在例如A.Gennaro(2000)"Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy,"20edition,Lippincott,Williams,&Wilkins;PharmaceuticalDosageFormsandDrugDeliverySysteins(1999)H.C.Anseletal"eds"7thed.，Lippincott,Williams,&Wilkins;以及HandbookofPharmaceuticalExcipients(2000)A.H.Kibbeetal.,eds.,3rded.Amer.PharmaceuticalAssoc.;MethodsinMolecularMedicine,Vol.87:VaccineProtocols,2ndedition(2003),HumanaPress;MucosalVaccines(1996)，Kiyonoetal.,eds"AcademicPress;以及VaccineAdjuvants:PreparationMethodsandResearchProtocols(2000)D.T.O'Hagan，HumanaPress。在特别相关的实施方案中，本发明的特点是被通称为PIKA的佐剂，其包含聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸(PIC)、抗生素(例如卡那霉素)以及正价离子(例如钙离子)，其中该组合物含有在分子量上为异质的佐剂分子，该分子的分子量为约66，000至1，200，000道尔顿。也就是说，该佐剂组合物包含重量分布于约66,000至1，200,000道尔顿的范围内的分子。在相关实施方案中，该组合物中的PIKA聚核苷酸佐剂组合物分子是异质的，也就是说这些佐剂分子的重量分布在某分子量范围内，其中该分子量为约300,000至1,200，000道尔顿，或是约66,000至660，000道尔顿，或是约300,000至660,000道尔顿，或是约300，000至2,000,000道尔顿，或是约66,000至约100,000道尔顿，100，000至200，000道尔顿，或是约300，000至约4,000,000道尔顿，或是约500,000至1,000，000道尔顿，或是约1，OOO，OOO至1，500，000道尔顿，或是约1,500,000至2，O00，000道尔顿，或是约2,000，000至2，500，000道尔顿，或是约2，500，000至3,000,000道尔顿，或是约3,000，000至3，500,000道尔顿，或是约3,500,000至4,000,000道尔顿，或是约4，000，000至4，500,000道尔顿，或是约4，500，000至5,000,000道尔顿。在相关实施方案中，该组合物中的PIKA聚核苷酸佐剂组合物分子具有平均分子量，该平均分子量等于或高于66，000道尔顿，或是等于或高于150，000道尔顿，或是等于或高于250,000道尔顿，或是等于或高于350，000道尔顿，或是等于或高于500，000道尔顿，或是等于或高于650,000道尔顿，或是等于或高于750，000道尔顿，或是等于或高于l，OOO，OOO道尔顿，或是等于或高于1,200，000道尔顿，或是等于或高于1，500，000道尔顿，或是等于或高于2,000,000道尔顿。在特别相关的实施方案中，本发明的特点是被通称为PIKA的佐剂，其包含聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸(PIC)、抗生素以及正价离子，其中该组合物含有在分子尺寸上呈异质的佐剂分子，也就是说这些佐剂分子的尺寸分布在某分子尺寸范围内，这些佐剂分子的沉降系数单位(Svedbergs)为约6.43S至24.03S。在相关实施方案中，该组合物中的PIKA聚核苷酸佐剂组合物分子是异质的，也就是说这些佐剂分子的尺寸分布在某分子尺寸范围内，其中该分子尺寸为约12.8S至24.03S，或是约3至12S,或是约6.43至18.31S,或是约12.8至18.31S,或是约12.8S至30.31S，或是约12.8S至41.54S，或是约13.5S至18.31S,或是约13.5S至24.03S，或是约16.14至22.12S,或是约22.12S至26.6S，或是约26.6S至30.31S，或是约30.31S至33.55S，或是约33.55S至36.45S，或是约36.45S至39.1S，或是约39.1S至41.54S，或是约41.54S至43.83S，或是约43.83S至45.95S。在其他相关实施方案中，该聚PIKA核苷酸佐剂组合物具有一平均沉降系数单位(Svedbergs)，该平均沉降系数高于9，或是高于12，或是高于13.5，或是高于15，或是高于16，或是高于17，或是高于18，或是高于19，或是高于20，或是高于21，或是高于22，或是高于25，或是高于30。免疫原性质包括有PIKA和抗原的免疫原组合物通常能够以至少二种方式来诱导抗原特异性免疫反应i)体液免疫反应，涉及刺激B细胞产生抗体或免疫球蛋白(其他细胞亦涉及产生抗体反应，例如抗原递呈细胞(包括巨噬细胞及辅助T细胞(Thl和Th2))，以及ii)细胞免疫反应，一般涉及T细胞、包括细胞毒T淋巴细胞和其他涉及细胞毒T淋巴细胞反应产生的细胞，例如Thl和/或Th2细胞以及抗原递呈细胞。此外，该聚核苷酸佐剂组合物可通过影响所产生的免疫球蛋白亚型(异构型)以及它们的亲和力，来改变免疫反应的性质。因此，本发明免疫原组合物所诱导的免疫原反应的程度和性质可通过测量由免疫系统的细胞所产生的细胞因子、趋化因子和抗体等分子的存在而进行评估。本发明提供包含PIKA佐剂的新颖免疫原物质，该免疫原物质通过诱导粘膜免疫反应来促进宿主体内免疫反应的整体水平。在某些实施方案中，木发明的免疫原组合物诱导粘膜免疫反应并加强免疫的系统水平。诱导粘膜免疫反应以及加强系统性免疫对于治疗通过粘膜表面进入体内的病原性有机体所起的传染病是非常重要的。本说明书所提供的实施例显示当经腹腔注射含有PIKA和SARS抗原的免疫原组合物时会诱导系统性免疫反应，其中特异性IgA和特异性IgG在血液中的表达量是系统性免疫活性的测量值。但是，当经腹腔注射含有PIKA和SARS抗原的相同免疫原组合物时没有诱导粘膜免疫反应，其中特异性分泌型IgA的表达量是粘膜免疫活性的测量值。令人意外地，从特异性分泌型IgA在粘膜表面的表达显示，当经粘膜给予含有PIKA和SARS抗原的相同免疫原组合物时可以诱导粘膜免疫反应。实施例1显示存在于经过腹腔注射给予的免疫原组合物中的PIKA佐剂不会诱导加强的特异性分泌型IgA在粘膜内的表达。但是，存在于通过粘膜给予的免疫原组合物中的PIKA佐剂能以剂量依赖形式诱导特异性分泌型IgA在粘膜内的表达(表A)。存在于通过腹腔注射给予的免疫原组合物中的PIKA佐剂会以剂量依赖形式增进IgA在血液内的存在量。此外，存在于通过粘膜给予的免疫原组合物中的PIKA佐剂也会以剂量依赖形式增进特异性IgA在血液内的水平(表B)。另外，存在于通过腹腔注射给予的免疫原组合物中的PIKA佐剂会以剂量依赖形式增进IgG在血液内的存在量。存在于通过粘膜给予的免疫原组合物中的PIKA佐剂也会以剂量依赖形式增进特异性IgG在血液内的水平(表C)。这些实施例的结果概要地显示在图1至3中。通过粘胰传输PIKA和SARS抗原的疫苗组合物在血液中所诱导产生的特异性IgG比腹腔给药所观察到的水平高70。/。(表B)。因此存在于通过粘膜给予的免疫原物质中的PIKA佐剂具有令人意想不到的其他好处，也就是在粘膜和系统性免疫次系统中都能够诱导免疫反应。实施例2显示PIKA的存在诱导粘膜和系统性免疫反应。此外，意外地发现通过粘膜给予含有PIKA的免疫原组合物能够在远端粘膜位置诱导粘膜免疫反应。此外，意外地发现通过粘膜给予含有PIKA的免疫原组合物能够诱导T细胞免疫反应。实施例2中所使用的流感抗原是来自于SanofiPasteur药厂且经过许可的人用流感疫苗VAXIGRIP，含有H1N1、H3N2病毒株和b/Shanghai5/361/2002病毒株。通过皮下注射单独给予流感抗原以及给予含有流感抗原和PIKA的组合物能诱导强烈的特异性系统体液免疫反应，但在肺脏和肠的粘膜表面所测得的分泌型IgA产生量显示其不能诱导显著的特异性粘膜免疫反应。在肺脏和肠的粘膜表面所测得的分泌型IgA产生量显示，通过鼻滴剂单独给予流感抗原以及给予流感抗原结合铝佐剂(一种经过许可的疫苗抗原)也不能诱导显著的特异性粘膜免疫反应(参见表E和F、图4和5)。相反地，测量分泌型IgA产生量显示存在于含有流感抗原的免疫原组合物中的PIKA能在肺粘膜表面诱导超乎预期地强烈的特异性粘膜位置(表E和图4)。此外，本案发明人观察到分泌型IgA的存在显示远端肠粘膜位置也发生强烈的特异性粘膜免疫反应(表F和图5)。此外，给予含有PIKA和流感抗原的免疫原组合物能诱导强烈的特异性系统反应，包括测量血清中的特异性IgA和特异性IgG所显示的体液免疫反应(参见表G和H、图6和7)以及测量脾细胞所产生的Il-2所显示的T细胞免疫反应(表I和图8)。实施例3进一步显示PIKA的存在不但加强了粘膜免疫反应，更特异性地增强了细胞免疫反应。相较之下，在相同的实验条件下使用铝佐剂不会加强粘膜免疫活性和细胞免疫反应的程度。其他特征在另一个实施方案中，本发明的免疫原组合物进一步通过PIKA佐剂和抗原的相对存在量来界定，其中该存在量是通过数量、浓度、体积、分子数目或其他被认可的度量中的一个或多个进行测量。在相关实施方案中，本发明的免疫原组合物包含聚核苷酸佐剂组合物和抗原，其中佐剂和抗原的存在量是通过分子的重量或数目来界定，而呈现下列比例低于1比1，000、低于1比900、低于1比800、低于1比700、低于1比500、低于1比400、低于1比300、低于1比200、低于l比IOO、低于1比50、低于I比IO、低于1比5、低于1比2、约l比l、高于2比1、高于5比1、高于10比1、高于50比1、高于100比1、高于200比1、高于300比1、高于400比1、高于500比1、高于600比1、高于700比1、高于800比1、高于卯0比1、高于1，000比1。在另一个相关实施方案中，本发明的免疫原组合物是通过剂量来界定，该剂量是指欲给予以便诱导最佳免疫反应的免疫原组合物用量，或是另外的给予剂量范围，其涵盖用以引起免疫反应所需要的最低剂量，至过量即会潜在性地诱导不良副作用因而在医学上无法证明可增加有利反应的最高剂量。在某些特别相关的实施方案中，该免疫原组合物包含聚核苷酸佐剂组合物和抗原，其中抗原的单位剂量是以数量来计算，该数量为高于0.lMg、高于0.5^g、高于0.001mg、高于0.005mg、高于O.Olmg、高于0.025mg、高于0.05mg、高于0.075mg、高于O.lmg、高于0.25mg、高于0.5mg、高于1.2mg、高于1.4mg、高于1.6mg、高于1.8mg、高于2.0mg、高于2.5mg、高于3mg、高于3.5mg、高于4mg、高于5mg、高于6mg、高于7mg、高于8mg、高于9mg、高于10mg、高于15mg、高于20mg、高于25mg或是高于50mg。抗原的最佳量和抗原相对于PIKA佐剂的最佳比例可通过观测宿主体内的抗体效价和其他免疫原反应等标准研究方法来确认。抗原在特别相关的实施方案中，本发明提供一种免疫原组合物，包含聚核苷酸佐剂组合物以及抗原或疫苗，其中该抗原的来源为人类抗原、非人类动物抗原、植物抗原、源自于病毒、细菌(包括分枝杆菌(Mycobacterium))、真菌或寄生虫中的任一种的感染物的一种或多种抗原、癌肿抗原、过敏性成分以及例如会导致自体免疫疾病的其他抗原。在某些实施方案中，该抗原可从粗制或纯化的天然来源衍生而来，并以它的原始存活形式来使用，或是于被杀死、灭活、截短、减毒或转形成为不可回复形式或是去毒或突变成为无毒性形式或被过滤或纯化后使用。在某些实施方案中，该抗原是被分离的微生物抗原，例如病毒抗原、细菌抗原、真菌抗原、过敏性成分抗原、癌肿抗原或自体免疫抗原。在其他实施方案中，抗原是完整的灭活抗原。使完整抗原灭活的方法为业界所熟知；任何习用方法均可使用以使抗原灭活，且可针对相关抗原种类而适当地选用。这些使抗原灭活的方法包括例如利用光反应性化合物；氧化剂；辐射线(例如UV射线；Y-射线)；核黄素和UV射线的组合；溶剂-去污剂处理(例如以有机溶剂三-N-丁基-磷酸酯和Tween80等去污剂来处理)；聚乙二醇处理；巴斯德灭菌法(热处理)以及低pH处理；以胃蛋白酶或胰蛋白酶进行温和酶处理；亚甲蓝(MB)光处理；以二甲基亚甲蓝(DMMB)和可见光进行处理；以S-59(一种补骨脂内酯衍生物)和UVA照射进行处理以及类似方法。在特别相关的实施方案中，抗原可通过固相合成法来合成，或是可通过重组遗传技术而获得，或是可被人为制造以模拟病原体的免疫原性质。抗原可为非细胞型、囊封型、感染性克隆(infectiousclone)、复帝仔(replicon)、具载体型(vectored)、微囊封型(microencapsulated)、单价、二价或多价的。在一些实施方案屮，本发明的免疫原组合物包含聚核苷酸佐剂以及至少二种不同的抗原，例如在一些实施方案中，本发明的免疫原组合物包含二种抗原、三种抗原、四种抗原、五种抗原或是超过五种抗原。多肽抗原可利用本领域所熟知标准蛋白纯化方法从天然来源分离，这些标准方法包括但不限于液相层析法(例如高效液相层析法、快速蛋白液相层析法等)、尺寸排阻层析法、凝胶电泳(包括一维凝胶电泳、二维凝胶电泳)、亲和层析法或其他纯化技术。可使用固相肽合成技术，这些技术是熟习于本领域技术人员所知悉的。请参见Jones，TheChemicalSynthesisofPeptides(ClarendonPress,Oxford)(1994)。一般而言，在这些方法中，肽是通过将活化单体单元顺序加入结合有增长肽链的固相来制造。建构完成的重组DNA技术可用以制造多肽，这些方法包括但不限于例如将表达构建体导入适当的宿主细胞中(例如在体外细胞培养基中生长成一单细胞实体的真核宿主细胞，例如酵母菌、昆虫细胞、哺乳动物细胞等，或原核细胞(例如在体外细胞培养基中生长的原核细胞)，该表达构建体含有编码多肽的核苷酸序列，而产生遗传基因改变的宿主细胞；在适当的培养条件下，蛋白质可被该遗传基因改变的宿主细胞所制得。在一些实施方案中，该抗原为纯化抗原，例如具有约25%至50%的纯度、约50%至约75°/。的纯度、约75%至约85%的纯度、约85%至约卯％的纯度、约卯％至约95%的纯度、约95%至约98%的纯度、约98°/。至约99%的纯度，或高于99%的纯度。抗原可为非细胞型、囊封型、感染性克隆(infectiousclone)、复帝lj子(replicon)、具载体型(vectored)、微囊封型(microencapsulated)、单价、二价或多价的。木发明的聚核苷酸佐剂组合物亦可用于促进免疫反应，该免疫反应是针对运用DNA疫苗和/或DNA表达蛋白所产生的抗原。这些疫苗中用以编码抗原的DNA序列可以是"裸露的"，或是被容纳在一个如脂质体的载体系统内。在一个特别相关方面，该新颖的疫苗组合物可通过选用抗原和PIKA佐剂相组合来界定。在一个特别相关的实施方案中，本发明提供聚核苷酸佐剂组合物和其使用方法，其中该聚核苷酸佐剂组合物包含PIKA佐剂以及抗原，其中典型的抗原包括但不限于表N所述通过粘膜表面进入宿主的传染病病原体所具有的抗原。因此，表N叙述可作为抗原来源的有机体以及该抗原感染粘膜而导致的疾病。表N<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>月巿病毒属(Pneumovirus)人类呼吸道合胞体病毒(Humanrespiratorysyncytialvims)人类呼吸道合胞体症(Humanrespiratorysyncytialdisease)巢病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒(Coronavirus)第二群物种(Group2species)人类冠状病毒(H画ancoronavirus)冠状病毒SARS冠状病毒(SARScoronavirus)SARS曲状病毒属(Torovirus)人类曲状病毒(Humantorovirus)曲状病毒病(Torovirusdisease)小RNA病毒科(Picornaviridae)口蹄疫病森屈(Aphthovims)A型马鼻炎病每(EquinerhinitisAvirus)LJ蹄疫病毒(Foot-and-mouthdiseasevirus)L」蹄疫病毒肠病布；(Enterovirus)A型人类肠病毒(H画anenterovirusA)人类柯萨奇病铜H画ancoxsackievirus)人类柯萨奇病毒人类肠病苟;(Humanenterovirus)人类肠病毒B型人类肠病毒(HumanenterovirusB)肠病毒(Enterovims)人类肠病毒人类柯萨奇病毒人类柯萨奇病毒人类埃可病毒(Humanechovirus)人类埃可病奇-c型人类肠病毒人类柯萨奇病毒人类柯萨奇病毒D型人类肠病毒人类肠病毒(Humanenteroviru)人类肠病毒脊髓灰白质炎病毒(poliovirus)人类脊髓灰白质炎病毒(Humanpoliovirus)脊髓灰白质炎人类肠病毒(Humanenterovirussp.)人类肠病毒未分类肠病毒(unclassifiedEnteroviruses)人类肠病毒(Humanenterovirussp.)人类肠病毒月干病毒属(Hepatovirus)甲型肝炎病毒甲型肝炎病毒副肠孤病毒属<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>34<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>在特别相关的实施方案中，本发明提供一种聚核苷酸佐剂组合物和其使用方法，其中该聚核苷酸佐剂组合物包含PIKA佐剂以及通过粘膜表面进入宿主的过敏成份抗原，其中该抗原是来自人类或动物过敏起源，该过敏起源包括植物、动物、真菌、昆虫食品、药物、灰尘和尘螨等。过敏原包括但不限于环境空气过敏原(aeroallergens);豕草/花粉热(ragweed/hayfever)等植物花粉；杂草花粉过敏原；牧草花粉过敏原；石茅高梁(Johnsongrass);树木花粉过敏原；黑麦草(ryegrass);屋尘螨(例如DerpI，DerfI等)等蜘蛛类过敏原储藏室粉螨过敏原;曰本柳杉花粉/干草热；霉菌孢子过敏原；动物过敏原(例如狗、天竺鼠、仓鼠、沙鼠、大鼠、小鼠等过敏原)；食物过敏原(例如甲壳类水产品过敏原；例如花生等坚果类；柑橘类水果)；昆虫过敏原；毒液(膜翅目昆虫(Hymenoptera)、胡蜂、蜜蜂、木胡蜂、黄蜂、火蚁)；来自于蟑螂、跳蚤、蚊子等其他环境昆虫的过敏原；链球菌抗原等细菌过敏原；蛔虫抗原等寄生虫过敏原；病毒抗原；真菌孢子；药物过敏原；抗生素；青霉素(penicillins)和相关化合物；其他抗生素；激素(胰岛素)、酶(链激酶(streptokinase))等完整蛋白；可作为不完全抗原或半抗原(haptens)的所有药物和它们的代谢物；可作为半抗原并作为过敏原的工业用化学品和它们的代谢物(例如酸酐(例如苯偏三甲酸酐)和异氰酸酯(例如甲苯二异氰酸酯))；面粉(例如导致面包师哮喘症(Baker'sasthma)的过敏原、蓖麻籽、咖啡豆和前述工业用化学品等职业过敏原；蚤过敏原；以及非人类动物中的人类蛋白。过敏原包括但不限于细胞、细胞提取物、蛋白质、多肽、肽、多糖、多糖结合物、多糖的肽或非肽模拟体以及其他分子、小分子、脂肪、糖脂质和碳水混合物。特定天然、动物和植物过敏原的范例包括但不限于下列属所特有的蛋白犬属(Canine)(家犬(Canisfamiliaris));表皮螨属(Dermatophagoides)(例如粉尘螨(Dennatophagoidesfarinae));猫属(Felis)(家猫(Felisdomesticus));豚草属(Ambrosia)(豚草(Ambrosiaartemiisfolia));黑麦草属(Lolium)(例如多年生黑麦草(Loliumpere皿e)或多花黑麦草(Lolhwnmultifloram));柳杉属(Ciyptomeria)(日本柳杉(Cryptomeriajaponica));链格孢属(Altemaria)(炼格孢菌(Altemariaalternate));桤木属(Alder);赤杨属(Almis)(Alnusgultinoasa);桦属(Be加la)(瘤皮桦(Betulaverrucosa));栎属(Quercus)(白橡(Quercusalba));木犀属(Olea)(油橄榄(Oleaeuropa));蒿属(Artemisia)(野艾(Artemisiavulgaris));车前草属(Plantago)(例如长叶车前苹(Plantagolanceolata));墙草属(Parietaria)(例如直墙草(Parietariaofficinalis)或犹大墙草(Parietariajudaica));小蠊属(Blattella)(例如德国小蠊(Blattellagermanica));蜜蜂属(Apis)(例如Apismultiflorum);柏木属(Cupressus)(例如丝柏(Cupressussempervirens)、亚利桑那柏(Cupressusarizonica)和大果柏(Cupressusmacrocarpa);圆柏属(Juniperus)(例如Juniperassabinoides、铅笔柏(Juniperusvirginiana)、杜松(Jimiperasconumiiiis)和Junipenssashei);侧柏属(Thuya)(例如东方側柏(Thuyaorientalis);扁柏属(Chamaecyparis)(例如日本扁柏(Chamaecyparisob加sa));大蠊属(Periplaiieta)(例如美洲大蠊(Periplanetaameric肌a));鹅观草属(Agropyron)(例如偃麦草(Agropyronrepens));黑麦属(Secale)(例如黑麦(Secalecereale));小麦属(Tritkum)(例如小麦(Triticumaestivum));鸭茅属(Dactylis)(例如鸭茅(Dactylisglomerate));狐茅属(Festuca)(例如草地狐茅(Festucaelatior));早熟禾属(Poa)(例如草地早熟未(Poapratensis)或加拿大早熟禾(Poacompressa));燕麦属(Avena)(例如燕麦(Avenasativa));绒毛草属(Holcus)(例如绒毛草(Holcuslanatus));黄花茅属(Anthoxanthum)(例如黄花茅(Anthoxanthumodoratum));燕麦草属(Arrhenatherum)(例如燕麦草(Arrhenatherumelatius));剪股颖属(Agrostis)(例如小糠草(Agrostisalba));梯牧草属(Phleum)(例如梯牧草(Phleumpretense));鹬草属(Phalaris)(例如鹬草(Phalarisarundinacea));雀稗属(Paspal咖)(例如百喜草(Paspalumnotatum));高梁属(Sorghum)(例如石茅高粱(Sorghumhakpensis));和雀麦属(Bromus)(例如无芒雀麦(Bromusinermis))在特别相关的实施方案中,本发明提供一种聚核苷酸佐剂组合物和其使用方法，其中该聚核苷酸佐剂组合物包含PIKA佐剂以及通过粘膜表面进入宿主的自体免疫抗原。其他成份在一些实施方案中，本发明的免疫原组合物除了聚核苷酸佐剂和抗原以外，另包含一或多种成份例如免疫调节剂、载剂等。在一个特别相关的实施方案中,本发明提供一种免疫原组合物和其使用方法，其中该免疫原组合物包含PIKA佐剂、抗原或疫苗，以及另外的种免疫调节物质(包含佐剂在内)，其中适合的免疫调节物质包括但不限于铝组合物例如氢氧化铝;含有免疫原物质的水包油乳剂组合物或是乳剂,包括完全弗氏佐剂(CompleteFreund，sAdjuvant);含有经干燥和热杀灭的结核分枝杆菌的水包油乳剂；不完全弗氏佐剂(IncompleteFreund'sAdjuvant);含有分枝杆菌细胞壁成份的乳剂;含有角鲨烯(squalene)的乳剂(MF-59);去毒化的内毒素;脂质A衍生物，包括微生物单磷脂酰脂质A(MPL);半抗原；硝化纤维素吸收性蛋白；皂甙，包含从皂质树QuillajaSaponoria皮分离而来的免疫调节剂颗粒，例如QS21;人类内源性免疫调节剂；从细菌衍生而来的包括去甲基化的CpG二聚核苷酸的佐剂；含有去甲基化的CpG二聚核苷酸的寡脱氧核苷酸(例如合成寡核苷酸)；脂质体(例如包括如磷脂等可生物降解性材料的脂质体)；(由如聚乳酸乙醇酸共聚物(PLGA)、聚膦腈(polyphosphazene)和聚酐等多种聚合物制成的聚合微球体)；介白素-2;卡介苗；粒性白细胞及单核细胞集落刺激因子(GmnulocyteMonocyte-ColonyStimulatingFactor);MontanideISA-51;钥孔虫戚血蓝蛋白(Keyholelimpethemocyanin);DNA;蛋白;囊封型抗原(encapsulatedantigens);免疫剌激复合物(1SCOM's);霍乱毒素和霍乱毒素衍生物；小带闭合毒素(zonulaoccludenstoxin);大肠杆菌不耐热肠毒素(Escherichiacoliheat-labileenterotoxin);不耐热性毒素和不耐热性毒素衍生物；百日咳毒素和百日咳毒素衍生物;胞壁酰二肽(muramyldipeptide)衍生物；赛比克药厂(Seppic)的montanide系列佐剂；聚-二(羧负离子基苯氧基)膦腈(poly-di(carboxylatophenoky)phosphazene)以及禾U甚曼原虫延长因子(leishmaniaelongationfactor)。当本发明的免疫原组合物和另一个佐剂共同给予时，聚核苷酸佐剂可在给予该另一个佐剂之前和/或之后和/或同时给予。例如，聚核苷酸佐剂可在初次给予抗原时并合给予，随后追加给予含有其中一种佐剂或所有二种佐剂的疫苗。选择性地，初次给予的疫苗可排除聚核苷酸佐剂，但后续给予病人含有该聚核苷酸佐剂的免疫原物质。在某些实施方案中，本发明的免疫原组合物可以和细胞因子或是IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL曙IO、IL-12、IL-15等其他辅助剌激分子共同给予。在相关实施方案中，本发明提供一种免疫原物质，包含PIKA佐剂、抗原物质或加有适当载剂的物质。该载剂可为例如油水乳剂、脂质载体或铝盐、脂质体巻(cochleates)、ISCOMs、脂质体、活细菌载体、活病毒载体、徵球体、核酸疫苗、聚合物、聚合物环、氟化钠、转基因植物、病毒小体(virosomes)、类病毒颗粒，以及其他习用传输载体。聚核苷酸佐剂可直接给予个体或是和传输复合物共同给予。该传输复合物是合并有靶标手段的物质，例如对于树突细胞(dendriticcell)等靶标细胞表面具有更高亲和力和/或增加被靶标细胞吸收的分子。传输复合物的范例包括但不限于并有下列物质的核酸传输复合物固醇(例如胆固醇)、脂肪(例如阳离子脂肪、病毒小体体或脂质体)或是靶标细胞特异性结合剂(例如能被靶标细胞特异性受体所辨识的配体)。优选的复合物在活体内是足够稳定以防止在被靶标细胞内化之前显著解偶联(uncoupling)。但是，该复合物在细胞内的适当条件下是可以裂解的。在一个相关实施方案中，含有PIKA佐剂的组合物不包含poly-L-赖氨酸或其衍生物。组合套装(Kits)在某些实施方案中，本发明提供包含本发明免疫原组合物的组合套装。在某些实施方案中，本发明提供组合套装，包含分别位在不同配方内的聚核苷酸佐剂和抗原。在相关实施方案中，本发明提供一种组合套装，包含聚核苷酸佐剂和免疫原化合物。在相关实施方案中，本发明提供一种组合套装，包含聚核苷酸佐剂和免疫原化合物，其中该免疫原物质是抗原。在一些实施方案中，本发明的组合套装包含配制于无菌液体(例如水性)配方内的本发明免疫原组合物，其中该配方是无菌的且盛装在无菌容器、无菌小管或无菌注射筒内。在一些实施方案中，本发明的组合套装包含被配制成注射用的本发明免疫原组合物。在一些实施方案中，本发明的组合套装包含配制于无菌液体配方内的本发明免疫原组合物，盛装在无菌注射筒内；还有针头。本发明的组合套装包含配制于无菌液体配方内且呈单位剂量(例如单次剂量)的本发明免疫原组合物，盛装在无菌注射筒内；还有针头。在一些实施方案中，本发明的组合套装包含被冷冻干燥且被盛装在无菌容器内的本发明免疫原组合物，以及含有用以复原冷冻干燥组合物的无菌液体的容器。在一些实施方案中，该组合套装另包含复原冷冻千燥组合物的无菌液体的指南。在一些实施方案中，本发明的组合套装包含免疫原组合物，该免疫原组合物被配制成通过直肠、阴道、鼻、口(包括经呼吸道吸入)、目艮(opthamalically)、局部、肺部、眼球或透皮来给予，以及一适当传输装置，例如吸入器、栓剂(suppository)、施用器等。在一些实施方案中，本发明的组合套装另包含例如有关给予剂量和给予频率的使用指南。在一些实施方案中，指南是被直接印刷在组合套装上。在其他的实施方案中，指南是被设置成为包装内容物的印刷品。指南亦可被设置在其他媒介物上，例如呈数字或类似形式的电子媒体上，例如录音匣、录音带、光盘、多功能数码光盘等。配方本发明的免疫原组合物可被配置在任一种配方中。例如，本发明的免疫原组合物可被制备成为一种可注射型、千燥粉末、液态溶液例如水性或生理食盐水溶液，或成为悬浮液、油膏、乳剂、片剂、丸剂、糖衣片、胶囊、凝胶、糖浆或浆液。在一些实施方案中，本发明免疫原组合物被配制成供粘膜传输之用，例如通过吸入来传输、通过呼吸道传输、口部传输、经直肠传输、经阴道传输等。所需免疫原组合物配方的制备被一般性地叙述在Vaccine4thEditionbyStanleyAPlotkinetW.B.SaundersCompany;4thedition2003。适当的酉己方亦被叙述在例如A.Gennaro(2000)"Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy,"20thedition,Lippincott，Williams,&Wilkins;PharmaceuticalDosageFormsandDrugDeliverySystems(1999)H.C.Anseletal.，eds.，7ned.，Lippincott,Williams,&Wilkins;以及HandbookofPharmaceuticalExcipients(2000)A.H.Kibbeetal"eds"3ed.Amer.PharmaceuticalAssoco本发明的免疫原组合物可被微囊封、并入脂质体巻(encochleated)、涂布在微型金质颗粒上、或是容纳于脂质体、气雾剂或以植入皮肤内的片剂，或是被干燥于尖锐物件上以刮擦进入皮肤内。在另一个实施方案中，本发明的免疫原物质可单独传输或与分散系统并合传输。在一些实施方案中，该悬浮液系统是选自于由例如大分子复合物、奈米胶囊、微球体、微珠粒和脂体基质系统所构成的群组中。脂体基质系统可选择性地含有水包油乳剂、微胞(micelles)、混合徼胞(mixedmicelles)或脂质体(liposomes)。在某些实施方案中，含有PIKA佐剂的本发明免疫原组合物是呈药学上可接受性溶液的形式，该溶液可例行性地含有药学上可接受浓度的盐、缓冲剂、防腐剂、兼容性载剂、佐剂和其他任择性治疗用组份。该组合物可含有例如崩解剂、粘合剂、包覆剂、膨胀剂、润滑剂、香料、甘味剂或助溶剂等添加剂。在某些实施方案中，含有PIKA佐剂的本发明免疫原组合物是以其原物形式或药学上可接受的盐形式来给予。在某些实施方案中，PIKA佐剂组合物以及包含PIKA佐剂和抗原化合物的免疫原组合物可被冷冻干燥，以呈固体形式长时稳定保存。冷冻干燥技术是本领域技术人员所知悉的。在一个特别相关方面，本发明提供佐剂组合物或免疫原组合物，其中该免疫原组合物，或是被包含在该免疫原组合物的佐剂组合物，呈现固体或液体形式或是位于溶液或悬浮液内。例如，对于以水溶液进行胃肠道外给予而言，该溶液在必要时应该被适当地缓冲化，且先以足量的生理食盐水或葡萄糖来稀释以使其呈现等张。这些特定的水性溶液特别适用于静脉、腹腔、皮下、肌肉、皮内、吸入、鼻腔、透皮、阴道和眼睛给予。关于这点，本领域技术人员将可参照本案揭示内容而知悉可供使用的无菌水性媒介物。可供木发明使用的典型注射媒介物包括含冇或不含有分散剂及/或防腐剂的缓冲液，以及食用油、矿物油、鱼肝油、角鲨烯(squalene)、一-、二-或三酸甘油酯，以及这些成份的混合物。在一些实施方案中，本发明的免疫原组合物将会被配制成适合经粘膜给予的特定形式。这些无菌和非无菌的形式包括例如胶囊、液态溶液、液滴、乳剂、悬浮液、酏剂(elixirs)、油膏、栓剂、凝胶、胶囊(包括软胶囊)、喷剂、吸入剂、气雾剂、粉末、片剂、包衣片、微胶囊、滴剂、丸剂、糖衣锭(dragees)、糖浆、浆液、灌肠剂(enemas)、颗粒或菱锭(lozenges)。可以运用任何惰性载剂，例如生理食盐水或磷酸盐缓冲化生理食盐水、稳定剂、驱动剂等任何惰性载剂，该惰性载剂被包封在用以帮助粘膜给予的明胶胶囊或是微胶囊或载体内，或是可以运用使得本发明方法所使用的化合物具有适用于本发明方法的溶解性质的任何载剂。本发明的免疫原组合物可凭借通过呼吸道吸入途径(经口腔、气管内、鼻内)的药用传输系统来给予个体。因此，本发明的免疫原组合物可被配制成适合吸入给予的形式。该药用传输系统适合于将本发明的细菌组合物局部给予至支气管的粘膜被覆层而进行吸入性治疗。为达成此一目的，可使用气雾剂或加压容器。因此在一些实施方案中，本发明的免疫原组合物被配制成可例如通过吸入而传输至呼吸组织中。在一些实施方案中,本发明的免疫原组合物被气雾化以产生气雾剂。本说明书所使用的"气雾剂"此术语是依据它的惯用意义来使用,意指被加压推进气体携载至施行治疗位置的极细微液态或固态颗粒。当药用气雾剂被运用于本发明时,该气雾剂含有免疫原组合物，而该免疫原组合物可被溶解、悬浮或乳化在由流体载剂和抛射剂所构成的混合物中。在一些实施方案中,本发明的免疫原组合物是与流体载剂和抛射剂共同配制而成。气雾剂可呈溶液、悬浮液、乳剂、粉末或半固体制剂的形式。本发明所使用的气雾剂是意图以细微固态颗粒或液态气雾的形式通过个体的呼吸道来给予。被木领域技术人员知悉的各种抛射剂均可被使用。适当抛射剂的范例包括但不限于碳氢化合物或其他适当气体。以加压气雾剂为例,其剂量单位可通过设置以传输经计算的用量的值来设定,。数个不同种类的呼吸道吸入方法可被使用于本发明。本发明的免疫原组合物基本上可被配制成三种不同种类的吸入用配方。第一，本发明的免疫原组合物可与低沸点抛射剂共同配制。这种配方通常通过习用定量吸入器(廳s)来给予。但是,可运用美国专利第5，404,871号和第5,542,410号中所论及的技术来测量个体的呼吸体积和流速，而将习用MDrs加以改装以获得重复给药的能力。选择性地，本发明的免疫原组合物可被配制在水性或酒精溶液中,并通过习用雾化器来传输。在一些实施方案中，这种溶液配方是利用例如美国专利第5,497,763号、第5,544,646号、第5，718^222号和第5，660,166号中所揭露的装置和系统来雾化。另外，本发明的免疫原组合物可被配制成干粉配方。这种配方的给予方式可透过产生该粉末的气雾之后再简单地吸入该干粉配方。这种给予方式的实施技术被叙述在美国专利第5，775，320号和美国专利第5，740,794号中。适合鼻内给予的配方包括鼻用喷剂、鼻用滴剂、气雾剂配方等。本发明提供一种用以将本发明的免疫原组合物传输至个体的气道或呼吸道内的套装(package)。一般而言，适合呼吸道传输的套装包含容纳适合传输至呼吸道(例如通过呼吸道吸入)的可流动配方的容器、如前所述的聚核苷酸佐剂和抗原。在一些实施方案中，该套装是计量给药吸入器，而且该聚核苷酸佐剂和抗原与抛射剂共同配制。在一些实施方案中，本发明的免疫原组合物被配制成持续释放配方(例如控制释放型配方)。例如,在一些实施方案中,本发明的免疫原组合物被配制成丸剂或柱体,并以贮释注射剂(depotinjections)或植入物的形式植入肌肉内或皮下。这种植入物通常会应用可生物降解性聚合物等习知惰性材料。可注射的贮释形式可通过在聚乳酸一聚甘醇酸(polylactid—yglycolide)等可生物降解性聚合物中形成本发明免疫原组合物的微胶囊基质(matrices)来制成。其他适用的可生物降解性聚合物的范例包括多正酯类(poiy(orthoe—)和聚酐(poly(anhydrides))o可注射的贮释配方亦可通过将组合物埋種在可与身体组织兼容的脂质体或微乳剂内来制成。传输释放系统亦包括下列范例以聚合物为基础的系统、徼胶囊、脂肪、水凝胶释放系统、硅橡胶系统(sylasticsystems)、肽系统、以肽为基础的系统、蟮质覆膜、压片、部分融合型植入物。其他形式的持续释放剂是本领域技术人员所知悉的。对于经口部传输而言，本发明的免疫原组合物在一些实施方案中含有肠溶性包衣材料。适合的肠溶性包衣材料包括醱酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(HPMCP)、醋酸纤维素邻苯二甲酸酯(CAP)、醱酸聚乙烯邻苯二甲酸酯(PVPA)、EudragftTM和虫胶(shellac)。如美国专利第6，346，269号所述,本发明的免疫原组合物和一或多种药用陚形剂共同配制并包覆肠溶性包衣,以作为适当口服配方的一个非限制性实施例。例如，将本发明的免疫原组合物和稳定剂涂覆在含有药学可接受性賦形剂的核心表面,以形成包覆有活性成分的核心；将次包覆层涂覆在该包覆有活性成分的核心，接着再包覆以肠溶性包衣层。该核心通常包括药用非活性成分,例如乳糖、淀粉、甘露醇、羧甲基纤维素钠、淀粉羟乙酸钠、氯化钠、氯化钾、色素、藻酸盐、滑石、二氧化钛、硬脂酸、硬脂酸盐、徼晶纤维素、甘油、聚乙二醇、柠檬酸三乙酯、柠檬酸三丁酯、三乙酸戊酯、磷酸氫钙、磷酸钠、硫酸钙、环糊精和蓖麻油。适合的溶剂包括水性溶剂。适合的稳定剂包括碱金属和碱土族金属、磷酸盐和有机酸盐和有机胺。次包覆层包括粘合剂、增塑剂和抗粘剂中的一或多者。适合的抗粘剂包括滑石、硬脂酸、硬脂酸盐、硬脂酰富马酸钠、二十二酸甘油酯(glycerylbehenate)、高岭土和纳米级二氧化硅(aerosil)。适合的粘合剂包括聚乙烯吡咯酮(PVP)、明胶、羟乙基纤維素(HEC)、羟丙基纤维素(HPC)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、乙酸乙烯酯(VA)、聚乙烯醇(PVA)、甲基纤维素(MC)、乙基纤维素(EC)、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(HPMCP)、醋酸纤维素邻苯二甲酸酯(CAP)、黄单胞菌胶(xaii1iimgum)、藻酸、藻酸盐、EudragitTM、甲基丙烯斷甲基异丁烯酸和醋酸聚乙烯邻苯二甲酸酯的共聚物(PVAP)o适合的增塑剂包括甘油、聚乙二醇、柠檬酸三乙酯、柠樣酸三丁酯、三乙酸戊酯和蓖麻油。适合的肠溶性包衣材料包括醋酸羟丙基甲基纤維素琥珀酸酯(HPMCAS)、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(HPMCP)、醋酸纤维素邻苯二甲酸酯(CAP)、醱酸聚乙烯邻苯二甲酸酯(PVPA)、EudragitTM和虫胶(shellac)。适合的口服配方亦包括以下列任何形式配制而成的本发明免疫原组合物徼型颗粒(参见例如美国专利第6，458,398号);可生物降解性大分子(参见例如美国专利第6,703，037号)，可生物降解性水胶(参见例如Grah咖andMcNeill(1989)历o加aten'o/s5:27-36);可生物降解性颗粒载体(参见例如美国专利第5,736,371号);可生物吸收性内酯聚合物(参见例如美国专利第5,631,015号)，缓慢释放型蛋白质聚合物(参见例如美国专利第6,699,504号;PdiasTechnologies,Inc.);聚乳酸共聚乙醇酸交酯/聚乙二醇嵌段共聚物(polylactide-cO"glycoUde/polyethyleneglycolblockcopolymer)(参见例如美国专利第6,630,155号；AMxLaboratories,Inc.);含有可生物兼容性聚合物和被分散在该聚合物中的金属阳离子稳定剂颗粒的组合物(参见例如美国专利第6,379，701号;AlkermesControlledTherapeutics,Inc.);以及微球体(参见例如美国专利第6,303，148号;Octoplus,B.V.)。组合物:载剂例如Emisphere(g)(EmisphereTechnologies,Inc.);TIMERx,一种将黄原胶(xanAan)和刺槐豆胶(locustbeangums)加以组合而成的亲水性基质，它在右旋糖的存在下会在水中形成一种强力粘胶(Penwest);GeminexTM(Penwest);Procise(GlaxoSmith幻ine);SAWT(MistralPharmaInc.);RingCap(A!幼Coip.);Smartrix(SmarfrixTechnologies,Inc.);SQZgel(MacroMed,Inc.);Geomatrix(SkyePharmaInc.);Oros⑧Tri-layer(AlzaCorporation)等。美国专利第6296，842号(AlkermesControlledTherapeutics,Inc.)和美国专利第6,187，330号(Scios，Inc.)等专利中所叙述的配方也适用于本发明。含有肠吸收促进剂的配方也适用于本发吸。适合的肠吸收促进剂包括但不限于钙螯合剂(例如柠檬酸盐、乙二胺四乙酸)；表面活性剂(例如十二烷基硫酸钠、胆盐、棕櫞酰肉碱(palmitoyl聽iti加)和脂肪酸钠盐)；毒素(例如小带闭合毒素(zonulaoccludenstoxin))等。在相关实施方案中，本发明免疫原组合物和一或多种能够抑制胃肠酶和/或酸所造成的降解作用的成分共同配制。在一些实施方案中，本发明免疫原组合物和一或多种能够保护组合物成分免于被胃肠酶和/或酸所降解的成分共同配制。在一些实施方案中,本发明免疫原组合物和一或多种能够促进粘膜组织吸收的成分共同配制。在一些实施方案中，本发明免疫原组合物被配制成供阴道传输使用，因而提供一种阴道传输系统。在一个典型的实施方案中,该阴道传输系统是一个含有本发明免疫原组合物的棉塞或棉塞类装置。药物传输用棉塞已为业界所熟知，且任何此类棉塞均可使用于本发明的药物传输系统中。药物传输用棉塞被叙述在例如美国专利第6,086,909号中。当使用棉塞或棉塞类装置时,有许多方法可以将本发明免疫原组合物纳入该装置中。例如，本发明免疫原组合物可被纳入位在该装置端点处的胶状生物粘着性贮存工具中。选择性地,本发明免疫原组合物可以呈现粉末材料的形式而被定位在棉塞端点处。本发明免疫原组合物也可以被棉塞端点处的纤维所吸收，例如通过将本发明免疫原组合物溶解在一药学上可接受的载剂内并使棉塞纤维吸收本发明免疫原组合物。本发明免疫原组合物也可以被溶解在包覆材料中,再将该包覆材料施加在棉塞端点上。选择性地，本发明免疫原组合物可以被纳入于嵌入型栓剂中，而该栓剂置于棉塞端点处。在其他的实施方案中，本发明免疫原组合物被配制成和阴道环合并使用，因而提供阴道环形式的阴道传输系统。阴道环通常由惰性弹性材料环所构成，该惰性弹性材料环涂覆有另一层含有本发明免疫原组合物的弹性材料。该环易于置入并留置一段所霈的时间(例如7天),而后由使用者取出。该环可选择性地包含未含有本发明免疫原组合物的第三种速率控制型弹性材料外层。本发明免疫原组合物可被纳入于聚乙二醇中,而该聚乙二酵遍布在整个硅胶弹性材料环以作为本发明兔疫原组合物的C:存工具。在其他的实施方案中,适当的阴道传输系统是一种阴道海绵。本发明免疫原组合物被纳入于一硅胶基质中，而该硅胶基质被涂覆在不含药物的圆柱形聚氨基甲酸酯阴道海棉上，如文献所述。可以使用于本发明的药物传输系统的其他例子是子宫套(pessaries)、片剂和栓剂。这些系统已被广泛地叙述在文献中。另一种系统是含有本发明免疫原组合物的容器(例如管)，该容器适合和施用器(例如直肠或阴道传输用施用器)共同使用。本发明免疫原组合物被纳入于可利用施用器施加于阴道内的油裔、洗剂、泡沬、糊剂、软啬和凝胶中。油裔、洗剂、泡沬、糊剂、软裔和凝胶形式的药物的制备方法可见于文献中。适用系统的例子是一种不含香精的标准洗剂配方，含有甘油、神经酰胺(ceramides)、矿物油、凡士林(petroktum)、对羟苯甲酸酯(parabens)、香精和水，例如以JERGENS为商标所贩售的产品(AndrewJergensCo"Cincinnati,Ohio)。对于熟习药用配方相关技术的人士来说,适合使用于本发明组合物中的无毒性药学上可接受系统是显而易见的，而且许多例子被叙述在Remington,sPharmaceuticalSciences,l她Edition,A.R.Gennaro,ed.，1995中。适当载剂的选择是依据所需特定阴道剂型的确切性质而定，例如活性成分是否会被配制成油裔、洗剂、泡沬、软裔、糊剂、溶液或凝胶,以及依据活性成分的同一性(identity)而定。其他适合的传输装置被叙述在美国专利第6，476,079号中。方法在一个特别相关方面，本发明提供用以刺激和/或促进对于抗原化合物的免疫反应的方法，包含将本发明的免疫原组合物给予宿主。在一些实施方案中，该宿主是人类。在其他实施方案中，该宿主是非人类动物，例如非人类晡乳动物、禽鸟物种等。另外，本发明提供一种通过将免疫原组合物给予宿主而用以促进对于抗原化合物的免疫反应的方法。该宿主是人类或非人类动物。给予方式是通过肌肉内、腹腔、静脉、皮下或皮内注射等胃肠道外注射方式来传输。在其他实施方案中,该免疫原组合物可以注射以外的方式(例如不以机械方式来破坏上皮细胞屏障的方式)经皮内传输。在其他实施方案中，该免疫原组合物可通过直肠、阴道、鼻、口(包括经呼吸道吸入)、眼、局部、肺部、眼球或透皮来传输。个体会透过环境接触而暴露于抗原中,因而会有发展出例如过敏反应、传染病、自体免疫疾病或癌症的危险。在其他实施方案中，个体因先前通过环境接触而暴露于抗原中，结果罹患传染病、自体免疫疾病、癌症或过敏症。在某些实施方案中,该佐剂和该抗原共同被给予。在其他实施方案中，该佐剂是在给予该抗原之前或之后被给予。本发明的免疫原组合物在一些实施方案中是通过粘膜给予的。粘膜给予方式包括例如通过呼吸道吸入而给予至呼吸组织、鼻滴剂、眼滴剂等；口服给予；或是例如利用栓剂通过肛门、阴道途径给予等。在一个特别相关方面，本发明提供一种用以增进对于抗原化合物的免疫反应的方法，包含将用以增进抗原化合物的抗原性的免疫原组合物给予宿主，该免疫原组合物包含聚核苷酸佐剂组合物。在这些实施方案中的某些实施方案中,宿主是人类。在其他实施方案中，该宿主是非人类动物(例如宿主是非人类灵长类动物、啮齿类动物或其他非人类晡乳动物、禽鸟物种等)。在某些实施方案中，该聚核苷佐剂组合物可被使用在疫苗内。该疫苗组成可选择性地含有其他佐剂。所涵盖的疫苗种类为抗传染性呼吸系统、消化系统、泌尿生殖系统或感觉系统的疾病、过敏和抗自体兔疫疾病。本发明的免疫原组合物是以有效量被给予，也就是说，本发明的免疫原组合物的用量在选定给予途径中可有效地引发、诱导或加强免疫反应。在一些实施方案中，免疫反应是被特定病原性微生物所产生的抗原所引发。口在一些实施方案中,本发明的p免疫原组合物的用量可状o例如，在一些实施方案中,将本发明的免疫原组合物给予个体可有效地治疗传染病，其中传染病的治疗包含下列一或多者降低病原体在个体内的数目(例如降低病毒负荷量(viralload)、细菌负荷量(bacterialtoad)、降低原虫数目、降低蟠虫数目)和/或降低传染病相关参数，该参数包括但不限于传染物质所产生的产物水平(例如毒素、抗原等);以及降低对于该传染物质的非所霈生理反应(例如发烧、组织水肿等)。本发明免疫原组合物用以诱导和减加强免疫反应(例如粘膜免疫反应)所霈的精确用量是随着个休不同,依据个体的物种、年龄、体重及一般状态，被治疗或预防的疾病、感染或病况的严重性,所使用的特定化合物及它的给予形式等而有所变化。本领域技术人员得知本说明书的展示内容后,可仅仅利用常规行实验而决定适当的用童。初次给予后,个体可再接受一或多次适当间隔的追加免疫。在一些实施方案中，一系列剂量的本发明免疫原组合物被给予。在这些实施方案中，第一剂本发明免疫原组合物是为了给予疫苗。第二剂本发明免疫原组合物是在个体因暴露于该第一剂而已经被兔疫致敏化(immunologicallyprimed)之后再给予该个体。加强免疫剂(booster)可在初次免疫化数曰、数周或数月之后给予,依据病人的反应和状况而定。例如，加强剂在给予第一剂约2日至约12个月后给予,例如在给予第一剂约2日至约7日、约1周至约2周、约2周至约4周、约4周至约8周、约8周至约6个月、或6个月至约12个月后给予。本发明亦可利用第三、四、五、六剂或后续剂量来进行第三、四、五、六次或后续加强免疫的应用。在某些实施方案中，给予手段可包含数个替代性途径的组合，例如在系统性给予剂量(例如腹腔、肌肉内、皮下或皮内给予)之后接续以粘膜传输剂量(例如经彝内吸入)，反之亦然。所给予的至少一剂中将会包含PIKA佐剂以作为完整流程的一部分。在某些实施方案中，聚核苷佐剂可以和给予病人的第一剂抗原或是和给予病人的任何后续配剂或是和给予病人的所有配剂合并给予。在某些实施方案中，所给予的免疫原组合物的组成可以在初次给予剂和加强剂之间和/或在数个加强免疫剂剂量之间具有变化。举例来说，所给予的初次配剂剂量可包含DNA疫苗，而加强免疫剂剂量是呈重组蛋白疫苗的形式。所给予的至少一剂中将会包含PIKA佐剂以作为完整流程的一部分。运用标准分析方法可容易地测定对于抗原的抗体反应是否已经在个体内被诱导或加强。例如，酶联免疫吸附分析(ELISA)、放射性免疫分析(RIA)、免疫沈降分析和蛋白印迹("Western"印迹)分析等免疫分析以及中和分析(例如体外或体内的病毒感染性中和分析可用以测定体液或其他生物样品(例如个体的血清、分泌物或其他流体)内对于微生物抗原具有特异性的抗体的存在。运用标准分析方法可容易地测定对于抗原的CD4免疫反应是否已经在个体内被诱导，例如萤光-活化细胞分类法(fluorescence-activatedcellsorting(FACS))(请参见例如Waldropetal.(1997)/C7/"./m^/1.99:1739-1750);细胞内细胞因子分析用以测定抗原刺激后细胞因子的产生(参见例如Sunietal.(1998)//顧歸/.212:89-98;Nomuraetal,(2000)Cytowefry40:60-68;Ghanekaretal.(2001)C7/".D/"gwo幼'c丄&./w附w"o/.8:628-631);MHC-肽多聚体染色分析，例如利用被可检测地标记(例如被萤光标记)的可溶性第II类MHC/肽多聚体(参见例如BillandKotzin(2002)Jrt/OT'ft's及饥4:261-265;Altmanetal.(1996)Science,274:94-96;以及Murali-Krishnaetal.(1998)Immunity8:177-187);酶连结免疫点(ELISPOT)分析(参见例如Hutchingsetal.(1989)J.Immunol.Methods120:1-8;以及Czerkinskyetal.(1983)J.Immunol.Methods65:109-121)等。作为细胞内细胞因子分析的一个非限制性实施例，全血被抗原和共刺激抗体(例如抗-CD28、抗-CD49d)剌激2小时或以上；加入布雷菲德菌素A(BrefeldinA)以抑制细胞因子分泌；以及处理细胞以利用针对CD4以及针对TNF-cuIFN-y和IL-2等细胞因子的萤光标记抗体进行FACS分析。运用数种习用分析方法可以测定对于抗原(例如病原体)的抗原特异性CD8(例如细胞毒T细胞；"CTL，，)反应是否被诱导，这些分析方法包括但不限于通过测量CTL对于细胞表面上表达抗原的耙标细胞所造成的特异性分解作用，其中靶标细胞已合并有可检测标记，该标记在靶标细胞分解后会释出且可利用例如510-释放分析、以镧萤光为基础的细胞分解分析等方法来测量。适合进行治疗的个体适合利用本发明诱导对于微生物病原体的免疫反应的方法以及治疗或预防微生物病原体感染的方法来进行治疗的个体，包括己被病原性微生物感染的个体;易被病原性微生物感染但尚未被感染的个体;以及具有被病原性微生物感染的危险性但尚未被感染的个体。适合的个体包括婴儿、幼童、青少年和成人。适合利用本发明诱导对于微生物病原体的免疫反应的方法以及治疗或限制微生物病原体感染的方法来进行治疗的个体包括小儿科目标族群，例如约1岁至约17岁之间的个体，包括婴儿(例如约l个月至约l岁)、幼童(例如约1岁至约12岁)和青少年(例如约13岁至约17岁)。适合利用本发明诱导对于微生物病原体的免疫反应的方法以及治疗或限制微生物病原体感染的方法来进行治疗的个体包括新生儿,例如1天至约14天龄的个体(例如人类新生儿)，例如约1天至约2天龄、约2天至约10天龄、或是约10天至约14天龄。在特定实施方案中，该个体是约10岁或更年少(例如约5岁或更年少)的人类儿童，且免疫原组合物在下列一或多个时间被给予出生后2周、l个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、IO个月、ll个月、12个月、15个月、18个月或21个月，或是在2岁、3岁、4岁、5岁、6岁、7岁、8岁、9岁或10岁时。在一些实施方案中，本发明的免疫原组合物被给予在约6个月至约6岁的年龄范围的个体，其中该个体在约6个月龄时接受第一剂，并在例如2岁、4岁和6岁时接受例如2-3剂的后续加强免疫剂。在特定实施方案中，该个体是约17岁至49岁的人类成人。在一些实施方案中，该个体是一位50至65岁、65岁至75岁、75至85岁或超过85岁的老年人类成人。在一些实施方案中，本发明的免疫原组合物是在个体与微生物病原体的实际或潜在来源(例如已知被微生物病原体所感染或怀疑被感染的个体)接触之后(例如在确认或怀疑接触之后)立即给予该个体。例如，在一些实施方案中，本发明的免疫原组合物是在个体和已知被微生物病原体所感染或怀疑被感染的个体接触之后约l小时内、约2小时内、约5小时内、约8小时内、约12小时内、约18小时内、约24小时内、约2日内、约4日内、约7日内、约2周内或1个月内给予该个体。在一些实施方案中，本发明的免疫原组合物被给予已知或怀疑是微生物病原体的携带者的个体，无论他们是否显现感染症状。适合利用本发明诱导对于微生物病原体的免疫反应的方法以及治疗或1艮制微生物病原体感染的方法来进行治疗的个体包括缺乏004+T细胞的个体("€04+-缺陷"个体),例如具有低于正常数目的功能性0)4+T淋巴细胞的个体。本说明书所使用的"正常个体"此术语的意思是，所具有的0)4+T淋巴细胞水平和功能是位在族群正常范围内的个体，就人类而言，通常每毫升血液中具有600至1500个004+T淋巴细胞。0)4+-缺陷个体包括罹患获得性免疫缺陷症或原发性免疫缺陷症的个体。获得性免疫缺陷症可能是因放射线治疗或化学治疗等所造成的暂时性0。4+缺乏。具有健康完整的免疫系统但具有转变成004+缺乏的危险性的个体("高危险"个体)亦适合以本发明的方法来治疗。高危险个体包括但不限于较一般族群具有更高可能性转变成€04+缺乏的个体。具有转变成004+缺乏的危险性的个体包括但不限于因为和被HIV感染的个体进行性活动而具有受HIV感染的危险性的个体；静脉药物使用者；可能被暴露于受HIV感染的血液、血液制品或其他受fflV所污染的体液的个体；通过受HIV感染个体的产道的婴儿；被fflV感染母亲所哺育的婴儿等。适合利用本发明用以治疗过敏的配方和方法来进行治疗的个体包括已被诊断出患有过敏的个体。可以接受本说明书所述方法和药剂来进行治疗的个体包括已知对于一或多种过敏原具有过敏反应(allergichypersensitivity)的个体。可以接受治疗的个体包括罹患前述任何一种过敏性疾病的个体。具有对于一或多种过敏原产生过敏反应的危险性的个体也可以接受治疗。接受一或多个治疗过敏性疾病的标准疗程但治疗失败的个体也适合利用本发明。适合接受治疗的个体包括居住在工业国家的个体；居住在开发中国家的个体；居住在乡村地区的个体；居住在较偏远隔离地区的个体等。本发明的免疫原组合物的目标族群是依据微生物病原体的不同而有所变化的。以上所述内容是一般性地叙述本发明。以下描述实施例将可协助了解本发明。这些实施例仅以例示说明为目的，而非意图对于本发明的范围加以限制。当情势所趋或为因时制宜时，当可思及本发明在形式上的变化和等效性取代。虽然本说明书使用特定的术语，但是这些术语是意图供说明之用，而不是以限制为目的。实施例实施例l:通过腹腔和粘膜给予PIKA和SARS抗原所诱导的系统性免疫反应这个实施例显示含有PIKA和SARS抗原的免疫原组合物当通过腹腔注射给予时能诱导强烈的系统性免疫反应，且当通过粘膜给予吋能在给予位置局部和远端粘膜引起强烈的免疫反应(例如粘膜和系统性两者的免疫反应)。6个各含3只balb/c小鼠的群组被接种以SARS抗原和PIKA(—种由主要位在约66kDa至l，200kDa的重量分布范围内的PIKA分子所构成的异质组合物)的组合物。抗原和佐剂的用量叙述在下表A至C。二周后给予重复接种，再过二周后另外给予加强免疫剂。在第六周，取血样并通过ELISA检测血清中的特异性IgA和特异性IgG的存在量。处死小鼠并摘取肺脏，加以切片并洗涤以取得上清液。检验所得粘膜提取液中的特异性分泌型IgA存在量。表A、B和C(以及图l、2和3)中所呈现的结果显示，依据特异性IgG在血液内的表达量呈现剂量依赖性增加的测量值来看，PIKA存在于该通过腹腔注射给予的免疫原组合物中能够加强系统性免疫反应。但是，依据特异性分泌型IgA在从肺脏取得的样品中的存在量测量值来看，没有观察到粘膜免疫活性受到任何冲击。依据特异性分泌型IgA在肺粘膜表面的表达量呈现剂量依赖性增加的测量值来看，PIKA佐剂存在于该通过粘膜给予的免疫原组合物中能够加强粘膜免疫反应。此外，依据特异性IgA和IgG在血清样品内的存在量的测量值来看，系统性免疫反应呈现剂量依赖性的加强情形。表A:以含有PIKA或铝佐剂和减灭活型完全SARS抗原的疫苗进行免疫之后，利用ELISA法检测小鼠肺脏上清液内(稀释6倍)的特异性IgA抗体效价<table>tableseeoriginaldocumentpage62</column></row><table>单位在405nm的平均光学密度吸光值表B:以含有PIKA或铝佐剂和/或灭活型完全SARS抗原的疫苗进行免疫之后，利用ELISA法检测小鼠血清内(稀释100倍)的特异性IgA抗体效价<table>tableseeoriginaldocumentpage62</column></row><table>单位在405iim的平均光学密度吸光值农C:以含有PIKA或铝佐剂和/或灭活型完全SARS抗原的疫苗进行免疫之后，利用ELISA法检测小鼠血清内(稀释1,000倍)的特异性IgG抗体效价<table>tableseeoriginaldocumentpage62</column></row><table>单位在405nm的平均光学密度吸光值实施例2:给予PIKA和流感抗原所诱导的粘膜和系统性免疫反应这个实施例显示一种含有PIKA和流感抗原的免疫原物质当通过粘膜给予时能在给予位置局部和远端(也就是在呼吸系统和肠粘膜处)弓I起强烈的粘膜免疫反应并弓I起系统性免疫反应。如表D所述，5个群组的balb/c小鼠在第0天和第20天时以表D中所述组合物接种疫苗。表D:疫苗组合物和给予途径<table>tableseeoriginaldocumentpage63</column></row><table>所使用的流感抗原是来自于SanofiPasteur药厂且经过许可供人体使用的灭活裂解型纯化流感抗原疫苗VAXIGRIP，该疫苗含有H1N1、H3N2病毒株和b/Shanghai5/361/2002病毒株。在第35天后收集血液样品并以ELISA法检验特异性体液免疫反应的存在情形。在第7周之后处死小鼠，并摘取肺脏和肠，加以切片并洗涤以取得」二清液。以ELISA法检验所得粘膜提取物中的特异性分泌型IgA存在表E中所呈现的结果显示，依据特异性分泌型IgA在肺粘膜表面的表达量测量值来看，PIKA佐剂存在于该通过粘膜给予的免疫原组合物中能够在肺脏中加强粘膜免疫反应。表E:以含有PIKA和/或灭活裂解型流感抗原的疫苗进行免疫之后，利用ELISA法检测小鼠肺脏上清液内的特异性分泌型IgA效价<table>tableseeoriginaldocumentpage64</column></row><table>单位在405nm的平均光学密度吸光值，NS:生理盐水溶液此外，表F(第5图)中所呈现的结果显示，依据特异性分泌型IgA在肠粘膜表面的表达量测量值来看，PIKA佐剂存在于该通过粘膜给予的免疫原组合物中能够在远端肠粘膜的位置加强粘膜免疫反应。表F-以含有PIKA和/或灭活裂解型流感抗原的疫苗进行免疫之后，利用ELISA法检测小鼠肠上清液内的特异性分泌型IgA效价<table>tableseeoriginaldocumentpage64</column></row><table>单位在405nm的平均光学密度吸光值此外，下列结果显示依据特异性IgG(表G，图6)和特异性IgA(表H，图7)在血液样品中的表达量测量值来看，PIKA佐剂存在于该通过粘膜给予的免疫原组合物中能够加强系统性免疫反应。表G-以含有PIKA和/或灭活裂解型流感抗原的疫苗进行免疫之后，利用ELISA法检测小鼠血清内的特异性IgG效价<table>tableseeoriginaldocumentpage64</column></row><table>单位在405nm的平均光学密度吸光值表H-以含有PIKA和/或灭活裂解型流感抗原的疫苗进行免疫之后，利用ELISA法检测小鼠血清内的特异性IgA效价<table>tableseeoriginaldocumentpage65</column></row><table>单位:在405nm的平均光学密度吸光值制备脾脏细胞的悬浮液，并将来自于各只小鼠的细胞悬浮液的样品置入ELISPOT培养板的6-12孔中并加以培养。该ELISPOT培养板的各孔容纳有200W的脾细胞悬浮液，等于每孔约有2.5xl()S个细胞。对于各只小鼠的脾细胞培养样品来说，半数含有脾细胞的孔是以培养基来培育，另外半数的孔是利用流感抗原进行刺激。培养板是在环境受控制的条件下于37。C培育20小时之后，再进行最后准备并利用标准型ELISPOT培养板读数机来读取数据。下表I(也请参见图7)的结果显示每个孔中产生IL-2的细胞数目。相较于单独给予PIKA或流感抗原，给予含有PIKA和流感抗原的免疫原物质所诱导的IL-2产生性细胞水平显著较高。这个结果指出抗原和PIKA能诱导T细胞免疫反应。表I-以含有PIKA和/或灭活裂解型流感抗原的疫苗进行免疫之后，利用ELISPOT法来检测产生IL-2的小鼠脾细胞<table>tableseeoriginaldocumentpage65</column></row><table>单位每2.5x105个脾细胞中产生正-2的细胞的平均数实施例3:给予PIKA和流感抗原所诱导的粘膜和系统性免疫反应这个实施例显示将一种含有PIKA和流感抗原的免疫原物质给予粘膜表面之后能诱导强烈的抗原特异性粘膜和系统性体液免疫反应以及T细胞免疫反应。5个balb/c小鼠的群组(每组各含3只)在第0天、第14天和第30天时被接种以下表所叙述的组合物。所使用的流感抗原是来自于SanofiPasteur药厂且经过许可供人体使用的灭活裂解型纯化流感抗原疫苗VAXIGRIP,该疫苗含有类H1N1、H3N2病毒株和b/Shanghai5/361/2002病毒株。在第三次免疫之后第14天收集血液样品并以ELISA法检验特异性血清IgG的存在量。在第三次免疫之后第14天处死小鼠，并摘取肺脏和肠，加以切片并洗涤以取得上清液。以ELISA法检验所得上清液中的特异性分泌型IgA存在量。表J(第9图)中所呈现的结果显示，依据特异性分泌型IgA在肺粘膜表面的表达量测量值来看，PIKA存在于该通过粘膜给予的免疫原组合物中能够在肺脏中加强粘膜免疫反应。以鼻内给予Al(OH)3和抗原来进行免疫无法诱导肺粘膜表面产生分泌型IgA。表J:以含有PIKA或Al(OH)3佐剂和/或灭活裂解型流感抗原的疫苗进行免疫之后，利用ELISA法检测肺脏上清液内(稀释32倍)的特异性分泌型IgA<table>tableseeoriginaldocumentpage66</column></row><table>单位平均光学密度数值表K(图IO)中所呈现的结果显示，依据特异性分泌型IgA在肠粘膜表面的表达量测量值来看，PIKA存在于该通过粘膜给予的免疫原组合物中能够在肠内加强粘膜免疫反应。以鼻内给予Al(OH)3和抗原来进行免疫无法诱导肠粘膜表面产生分泌型IgA。表K:以含有PIKA或Al(OH)3和/或灭活裂解型流感抗原的疫苗进行免疫之后，利用ELISA法检测肠上清液内(稀释32倍)的特异性分泌型IgA<table>tableseeoriginaldocumentpage67</column></row><table>单位平均光学密度数值制备脾脏细胞的悬浮液，并将来自于各只小鼠的细胞悬浮液的样品置入ELISPOT培养板的6孔中并加以培养。该ELISPOT培养板的各孔容纳有200jal的脾细胞悬浮液，等于每孔约有3.0x105个细胞。对于各只小鼠的脾细胞培养样品来说，半数含有脾细胞的孔是以培养基来培育，另外半数的孔是利用流感抗原进行刺激。培养板是在37。C、5%C02下培育20小时之后，再进行最后准备并利用标准型ELISPOT培养板读数机来读取数据。下表L(也请参见图ll)的结果显示每l.Ox106个脾细胞中产生IFN-Y的细胞数目。相较于单独给予PIKA或流感抗原，给予含有PIKA和流感抗原的免疫原物质所诱导的产生IFN-Y的细胞水平显著较高。表L—以含有PIKA和/或灭活裂解型流感抗原进行免疫之后，利用ELISPOT法来检测产生IFN-7的小鼠脾细胞<table>tableseeoriginaldocumentpage67</column></row><table>单位:每l.OX1(^个脾细胞中产生IFN，的细胞的平均数下表M(也请参见图12)的结果显示每l.Ox106个脾细胞中产生IL-2的细胞数目。相较于单独给予PIKA或流感抗原,给予含有PIKA和流感抗原的免疫原物质所诱导的产生DL-2的细胞水平显著较高。魏-以含有WKA和减灭活裂解型流感抗原进行免疫之后，利用ELISPO"m来检灘产生BL-2的小鼠脾细胞<table>tableseeoriginaldocumentpage68</column></row><table>单位:每l.OX〗06个脾细胞中产生化-2的细跑的平均数PIKA诱导脾细胞增加生产IFN-Y和IL-2的能力指出以彝内给予和葬内给予Al(OH)3和抗原来进行免^无法较单独给予抗原进一^促进T细胞反应。但是，当鼻内给予或皮下注射Al(OH)3和抗原时无法促进加强的T细胞免疫反应。权利要求1.一种免疫原组合物，其包含(a)聚核苷酸佐剂，该佐剂包含聚核糖肌苷-聚核糖胞苷酸(PIC)、至少一种抗生素以及至少一种正价离子；(b)至少一种抗原；其中该组合物被配制成供粘膜给予之用。2.如权利要求l所述的免疫原组合物，其中该组合物包含聚核苷酸佐剂组合物，该聚核苷酸佐剂组合物中的分子在分子量上是异质的，其中该分子量为至少66,000道尔顿。3.如权利要求1或2所述的免疫原组合物，其中该组合物包含聚核苷酸佐剂组合物，该聚核苷酸佐剂组合物中的分子在分子量上是异质的，其中该分子量为约66，000道尔顿至1，200,000道尔顿。4.如权利要求1至3中任一项所述的免疫原组合物，其中该组合物包含聚核苷酸佐剂组合物，该聚核苷酸佐剂组合物中的分子在分子量上是异质的，其中该分子量为至少150,000道尔顿。5.如权利要求1至4中任一项所述的免疫原组合物，其中该免疫原组合物进一步包含至少一种免疫调控剂。6.如权利要求1至5中任一项所述的免疫原组合物，其中该免疫原组合物进一步包含至少一种促进粘膜吸收的成分。7.如权利要求1至6中任一项所述的免疫原组合物，其中该免疫原组合物或是该免疫原组合物中所含有的佐剂是呈现液体、液态溶液、液滴、固体、胶囊、乳剂、悬浮液、酏剂、油膏、栓剂、凝胶、软胶囊、喷剂、吸入剂、气雾剂、片剂、包衣片、丸剂、糖衣锭、粉末、糖浆、浆液、微型胶囊、灌肠剂、颗粒或菱锭的形式。8.如权利要求1至7中任一项所述的免疫原组合物，其中该佐剂组合物或该免疫原组合物中的至少一者被冷冻干燥。9.如权利要求1至8中任一项所述的免疫原组合物，其中该免疫原组合物是通过吸入、直肠传输、阴道传输、鼻部传输、口部传输、肺部传输、眼部传输、局部传输、眼球传输或透皮传输来给予。10.如权利要求1至9中任一项所述的免疫原组合物，其用以加强宿主的粘膜免疫反应。11.—种如权利要求1至10，任一项所述的免疫原组，物或该免疫用途。12.如权利要求ll所述的用途，其中该药物是用以加强局部和远端位置的粘膜免疫反应。13.—种如权利要求1至10中任一项所述的免疫原组合物或该免疫原组合物中所含佐剂在制造用以诱导宿主的T细胞免疫反应的药物上的用途。14.如权利要求11至13中任一项所述的用途,其中该药物是通过吸入、直肠传输、阴道传输、葬部传输、口部传输、肺部传输、眼部传输、局部传输、目艮球传输或透皮传输来给予。15.如权利要求11至14中任一项所述的用，,其中该宿主罹患传染病原体。16.—种组合套装，其包含如权利要求1至10中任一项所述的免疫原组合物。17.—种传输系统，其包含如权利要求1至10中任一项所述的免疫原组合物，其中该传输系统促进该免疫原组合物传输至粘膜表面。18.—种用以加强粘膜免疫反应的方法，该方法包含将如权利要求1至10中任一项所述的免疫原组合物给予宿主。19.如权利要求18所述的方法，其中该宿主罹患传染病，并且给予该抗原化合物引发免疫反应以对抗引起该传染病的病原体。20.—种用以加强局部和远端位置的粘膜免疫反应的方法，包含将如权利要求1至10中任一项所述的免疫原组合物给予宿主。21.—种用以诱导T细胞免疫反应的方法，包含将如权利要求l至lO中任一项所述的免疫原组合物给予宿主。22.如权利要求11至15中任一项所述的用途或是如权利要求17至21中任一项所述的方法，其中该宿主是人类。23.如权利要求11至15中任一项所述的用途或是如权利要求17至21中{壬一项所述的方法，其中该宿主是非人类动物。全文摘要本发明提供一种聚核苷酸佐剂组合物以及引发免疫反应(特别是粘膜免疫反应)的使用方法。本发明亦提供一种免疫原组合物，包含该聚核苷酸佐剂组合物和抗原等其他免疫原组合物(例如此二种成份位于疫苗内)。本发明更涉及这些佐剂组合物的使用方法，特别是引发对于抗原化合物的免疫反应(特别是粘膜免疫反应)。文档编号A61K39/00GK101124014SQ200680001059公开日2008年2月13日申请日期2006年6月27日优先权日2006年1月13日发明者李烈涛,林海祥申请人:申益皮卡生物技术有限公司