专利名称：一种治疗眼疾近视及视疲劳中药制剂的质量检测方法
技术领域：
本发明属中药成方制剂领域，具体来说是涉及一种治疗眼疾近视及视疲劳中药制剂的质量检测方法。
背景技术：
以枸杞子、女贞子、何首乌等制成的治疗眼疾近视及视疲劳中药制剂杞明系列药品具有补肝益肾，活血明目的功效。用于青少年肝肾阴虚所致的眼部酸困，眼眶疼痛等症。然而中药成份比较复杂，含有许多未知成份。目前既能有效控制治疗眼疾近视及视疲劳的中药制剂的产品质量，又能操作方便的检测方法，还没有报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能有效控制治疗眼疾近视及视疲劳的中药制剂质量，准确度高的质量检测方法。
本发明的一种治疗眼疾近视及视疲劳中药制剂的质量检测方法，将板蓝根、僵蚕粉碎成细粉，备用；将牡丹皮、何首乌、关黄柏、赤芍粉碎成细粉，其余枸杞子、菟丝子、女贞子、茺蔚子、山茱萸、淫羊藿、谷精草、木贼、决明子、川芎、丹参、地黄、红花、鸡血藤十四味，加水煎煮三次，第一次加水8倍量，浸泡30分钟，煎煮1小时，第二、三次各加水6倍量，煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至60℃时相对密度为1.30的稠膏，加入上述药材细粉，混合，60℃时干燥，粉碎成细粉，制成颗粒，干燥，冰片研细，加入上述颗粒中，混匀，装入胶囊，即得，其检测方法包括以下步骤(1)取本品内容物5g，研细，加乙醚50ml，低温回流提取30分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至10ml，作为供试品溶液；另取冰片对照品，加乙醚制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液2μl、对照品溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9∶1∶1的60-90℃石油醚-甲苯-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(2)取鉴别(1)项下的供试品溶液，自然挥干乙醚，残留物加丙酮1ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以3∶1环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(3)取本品内容物10g，研细，加正己烷30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至0.5ml，作为供试品溶液；另取决明子对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取大黄酚对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15∶5∶1的30-60℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为红色；(4)取本品内容物10g，研细，加甲醇40ml，置水浴中加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，再加盐酸2ml，置水浴上加热30分钟，立即冷却，用乙醚分两次提取，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取何首乌对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取大黄素、大黄素甲醚对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15∶5∶1的30-60℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为红色；(5)取本品内容物10g，研细，加乙酸乙酯30ml，温水浴上回流提取1小时，放冷，滤过，弃去乙酸乙酯液，残渣挥去溶剂，加乙醇30ml回流提取1小时，滤过，滤液浓缩至5ml，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三5∶1氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，100℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(6)取本品内容物5g，研细，加水15ml使溶解，加稀盐酸调节PH值至2，加乙酸乙酯30ml，振摇提取，提取液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参素钠对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以25∶10∶4三氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(7)取本品内容物10g，研细，置索氐提取器中，加70％乙醇回流提取至无色，提取液水浴蒸去乙醇，加热水15ml，混匀，趁热滤过，滤液移至分液漏斗中，加三氯甲烷振摇提取3次，第一次15ml，第二次10ml，第三次10ml，三氯甲烷液弃去，水液用水饱和的正丁醇振摇提取5次，分别为15、15、10、10、10ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤5次，每次15ml，继用正丁醇饱和的水25ml洗涤；分取正丁醇液，水浴蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以1.3∶1∶1乙酸丁酯-甲酸-水10℃以下放置的上层液为展开剂，预饱和15分钟，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铝乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在365nm紫外光灯下检视，显相同颜色的荧光斑点；(8)盐酸小檗碱含量测定
对照品溶液的制备取盐酸小檗碱对照品10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加100∶1的甲醇-盐酸溶液至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加100∶1的甲醇-盐酸溶液至刻度，摇匀，即得每1ml中含盐酸小檗碱0.01mg对照品溶液；供试品溶液的制备取本品装量差异项下的内容物，混匀，取约1.0g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入100∶1的甲醇-盐酸溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；照高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以50∶25∶25的乙腈-0.1mol/L的磷酸二氢钠-0.025mol/L的十二烷基磺酸钠为流动相；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算样品中盐酸小檗碱的含量。
本发明通过试验得出，每粒含关黄柏以盐酸小檗碱(C20H18ClNO4)计，不得少于0.20mg。
本发明的治疗眼疾近视及视疲劳中药制剂包括丸剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂常规剂型。
本发明质量标准提高的意义在于本发明提供了对丹皮酚、大黄酚、大黄素、大黄素甲醚、芍药苷、丹参素钠、淫羊藿苷的定性鉴别，制定出了最佳的供试品制备方法，找到了合适的展开剂，能对该制剂进行有效的定性鉴别。此外本发明提供了盐酸小檗碱的含量测定方法，因为盐酸小檗碱与其它组份分离度、重现性、精密度、回收率好，所以采用高效液相色谱法测定本品中盐酸小檗碱的含量，制定出了最佳的供试品制备方法和流动相配制方法，大大提高了盐酸小檗碱的含量检测准确度。本方法的建立，有利于市场上对治疗眼疾近视及视疲劳中药制剂的真伪优劣进行鉴别。
具体实施例方式
实验例将板蓝根、僵蚕粉碎成细粉，备用；将牡丹皮、何首乌、关黄柏、赤芍粉碎成细粉，其余枸杞子、菟丝子、女贞子、茺蔚子、山茱萸、淫羊藿、谷精草、木贼、决明子、川芎、丹参、地黄、红花、鸡血藤十四味，加水煎煮三次，第一次加水8倍量，浸泡30分钟，煎煮1小时，第二、三次各加水6倍量，煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至60℃时相对密度为1.30的稠膏，加入上述药材细粉，混合，60℃时干燥，粉碎成细粉，制成颗粒，干燥，冰片研细，加入上述颗粒中，混匀，装入胶囊，即得，其检测方法包括以下步骤(1)取本品内容物5g，研细，加乙醚50ml，低温回流提取30分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至10ml，作为供试品溶液；另取冰片对照品，加乙醚制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液2μl、对照品溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9∶1∶1的60-90℃石油醚-甲苯-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(2)取鉴别(1)项下的供试品溶液，自然挥干乙醚，残留物加丙酮1ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以3∶1环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(3)取本品内容物10g，研细，加正己烷30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至0.5ml，作为供试品溶液；另取决明子对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取大黄酚对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15∶5∶1的30-60℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为红色；(4)取本品内容物10g，研细，加甲醇40ml，置水浴中加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，再加盐酸2ml，置水浴上加热30分钟，立即冷却，用乙醚分两次提取，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取何首乌对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取大黄素、大黄素甲醚对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15∶5∶1的30-60℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为红色；(5)取本品内容物10g，研细，加乙酸乙酯30ml，温水浴上回流提取1小时，放冷，滤过，弃去乙酸乙酯液，残渣挥去溶剂，加乙醇30ml回流提取1小时，滤过，滤液浓缩至5ml，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三5∶1氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，100℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(6)取本品内容物5g，研细，加水15ml使溶解，加稀盐酸调节PH值至2，加乙酸乙酯30ml，振摇提取，提取液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参素钠对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以25∶10∶4三氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(7)取本品内容物10g，研细，置索氐提取器中，加70％乙醇回流提取至无色，提取液水浴蒸去乙醇，加热水15ml，混匀，趁热滤过，滤液移至分液漏斗中，加三氯甲烷振摇提取3次，第一次15ml，第二次10ml，第三次10ml，三氯甲烷液弃去，水液用水饱和的正丁醇振摇提取5次，分别为15、15、10、10、10ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤5次，每次15ml，继用正丁醇饱和的水25ml洗涤；分取正丁醇液，水浴蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以1.3∶1∶1乙酸丁酯-甲酸-水10℃以下放置的上层液为展开剂，预饱和15分钟，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铝乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在365nm紫外光灯下检视，显相同颜色的荧光斑点；(8)盐酸小檗碱含量测定对照品溶液的制备取盐酸小檗碱对照品10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加100∶1的甲醇-盐酸溶液至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加100∶1的甲醇-盐酸溶液至刻度，摇匀，即得每1ml中含盐酸小檗碱0.01mg对照品溶液；供试品溶液的制备取本品装量差异项下的内容物，混匀，取约1.0g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入100∶1的甲醇-盐酸溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；照高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以50∶25∶25的乙腈-0.1mol/L的磷酸二氢钠-0.025mol/L的十二烷基磺酸钠为流动相；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算样品中盐酸小檗碱的含量。
重复上述步骤一次，计算样品中盐酸小檗碱含量的平均值为0.28mg/粒。
用实施例所述质量检测方法反复试验9次，得出盐酸小檗碱含量(mg/粒)平均值，结果见下表
实验报告1、仪器与试药仪器Agilent1100型高效液相色谱仪，安捷伦科技有限公司。G1311A型四元梯度泵，G1314A型可编程紫外检测器，G2170AA化学工作站。
试药乙腈为色谱纯，水为超纯水，其它化学试剂均为分析纯。
对照品盐酸小檗碱，批号0714-9903供含量测定用，由中国药品生物制品检定所提供。
供试品杞明胶囊，规格每粒装0.4g；由本公司生产。
2、色谱条件色谱柱Kromasil 5u C18100A，250×4.6mm；
流动相乙腈-0.1mol/L的磷酸二氢钠-0.025mol/L的十二烷基磺酸钠(50∶25∶25)。
检测波长取盐酸小檗碱对照品溶液(C＝0.036mg/ml)，置紫外分光光度计中，从200～300nm进行连续波长扫描，结果表明，盐酸小檗碱对照品在265nm处有独立的吸收峰，故选用265nm作为本品的检测波长。
在上述分析条件下，盐酸小檗碱峰完全达到基线分离，其峰与相邻杂质峰的分离度大于1.7以上，理论板数按盐酸小檗碱峰计算大于3000。
3、提取条件选择与提取完全性考察提取溶剂的选择我们参考文献资料，选用甲醇和甲醇-盐酸(100∶1)超声处理30分钟，进行提取条件的比较。试验结果表明，采用甲醇-盐酸(100∶1)提取方法提取的杂质干扰少，提取效率高。甲醇提取的效率低，杂质干扰较多，且分离度不理想，故选择正文方法作为提取条件。
提取完全性考察 根据提取条件分析，正文样品溶液的制备过程，主要受超声处理的影响，因此，我们对其进行考察与比较。
超声处理时间对提取完全性的影响 取同一批样品(批号20030303)，约1.5g，精密称定，分别按20、30、40分钟不同时间进行超声处理，依法测定，试验结果请见表1。
表1超声处理试验及结果
试验结果表明，超声处理30分钟后的样品含量基本趋于不变，故选择30分钟为超声处理时间。
4、方法学考察线性关系及范围的考察 精密吸取浓度为0.036mg/ml的盐酸小檗碱对照品溶液2、4、8、12、16μl，分别注入液相色谱仪，依法测定，结果请见表2。
表2线性关系考察试验及结果
以进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，并进行直线回归，回归方程为Y＝3421.7X-28.54，r＝9991。试验结果表明，本方法进样量在0.072～0.576mg范围内，呈良好的线性关系。
精密度试验 精密吸取同一对照品溶液(C＝0.036mg/ml)10μl，连续重复进样5次，测定峰面积积分值，试验结果请见表3。
表3精密度试验及结果
试验结果表明，盐酸小檗碱对照品重复进样5次测得峰面积积分值的相对标准偏差RSD＜2.0％，故认为本方法具有良好的精密度。
阴性空白对照试验 取除去关黄柏的模拟处方，制成不含关黄柏的空白样品，按供试品溶液制法制成空白对照溶液。另取供试品溶液(批号20030303)及对照品溶液(C＝0.014mg/ml)，按正文方法注入液相色谱仪测定。试验结果表明，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的保留时间位置上，有一对应的单一色谱峰，而空白对照液色谱中，在该保留时间相应位置处无相对应的峰出现。说明阴性空白对其测定无干扰，其方法的专属性较好。
稳定性试验 精密吸取同一批(批号20030303)供试品溶液及对照品溶液(C＝0.014mg/ml)，按0、0.5、1、2、4小时时间间隔，分别注入液相色谱仪进行测定，试验结果请分别见表4。
表4稳定性考察试验与结果
试验结果表明，样品及对照品的盐酸小檗碱经本方法测定，在4小时内较为稳定，其相对标准偏差分别为RSD＝2.13％和RSD＝2.39％。
重复性试验 取同一批(批号20030303)样品5份，按正文方法重复进行处理测定，结果请见表5。
表5样品重复性试验及结果
试验结果表明，本方法5次重复测定的相对标准偏差RSD＝2.23％，说明其重现性较好。
回收率试验 采用加样回收试验法，精密称取同一批(批号20030303)已知含量(0.183mg/粒，折合0.4575mg/g)的样品各约1.0g，精密称定，分别精密加入盐酸小檗碱对照品各约0.28～0.36mg，依法测定，试验结果请见表6。
表6加样回收试验及结果
试验结果表明，本方法具有较高的回收率，其平均回收率为99.03％，相对标准偏差为RSD＝1.25％。
5、样品中盐酸小檗碱含量测定取2005年版实行后生产的8批样品，按正文方法进行盐酸小檗碱含量测定，结果请见表7。
表7八批样品含量测定结果(n＝2)
6、关黄柏药材中盐酸小檗碱的含量测定取不同来源的关黄柏药材，按正文方法进行含量测定，结果请见表8表8关黄柏药材含量测定结果(n＝2)
7、含量限度的确定八批样品中，盐酸小檗碱的实测结果，最高含量为0.483mg/粒，最低为0.201mg/粒，关黄柏药材中国药典2005年版一部规定限度为不得少于0.60％，实测三批不同来源药材的最高含量为1.08％，最低含量为0.63％，考虑到处方用量，工艺损耗与装量差异等因素影响，故本品每粒中含关黄柏以盐酸小檗碱(C20H18ClNO4)计，不得少于0.20mg。
权利要求
1.一种治疗眼疾近视及视疲劳中药制剂的质量检测方法，将板蓝根、僵蚕粉碎成细粉，备用；将牡丹皮、何首乌、关黄柏、赤芍粉碎成细粉，其余枸杞子、菟丝子、女贞子、茺蔚子、山茱萸、淫羊藿、谷精草、木贼、决明子、川芎、丹参、地黄、红花、鸡血藤十四味，加水煎煮三次，第一次加水8倍量，浸泡30分钟，煎煮1小时，第二、三次各加水6倍量，煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至60℃时相对密度为1.30的稠膏，加入上述药材细粉，混合，60℃时干燥，粉碎成细粉，制成颗粒，干燥，冰片研细，加入上述颗粒中，混匀，即得，其特征在于包括以下步骤(1)取本品5g，研细，加乙醚50ml，低温回流提取30分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至10ml，作为供试品溶液；另取冰片对照品，加乙醚制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液2μl、对照品溶液4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9∶1∶1的60-90℃石油醚-甲苯-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(2)取鉴别(1)项下的供试品溶液，自然挥干乙醚，残留物加丙酮1ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以3∶1环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(3)取本品10g，研细，加正己烷30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至0.5ml，作为供试品溶液；另取决明子对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取大黄酚对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15∶5∶1的30-60℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为红色；(4)取本品10g，研细，加甲醇40ml，置水浴中加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，再加盐酸2ml，置水浴上加热30分钟，立即冷却，用乙醚分两次提取，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取何首乌对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取大黄素、大黄素甲醚对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15∶5∶1的30-60℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为红色；(5)取本品10g，研细，加乙酸乙酯30ml，温水浴上回流提取1小时，放冷，滤过，弃去乙酸乙酯液，残渣挥去溶剂，加乙醇30ml回流提取1小时，滤过，滤液浓缩至5ml，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三5∶1氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，100℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(6)取本品5g，研细，加水15ml使溶解，加稀盐酸调节PH值至2，加乙酸乙酯30ml，振摇提取，提取液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参素钠对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以25∶10∶4三氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(7)取本品10g，研细，置索氐提取器中，加70％乙醇回流提取至无色，提取液水浴蒸去乙醇，加热水15ml，混匀，趁热滤过，滤液移至分液漏斗中，加三氯甲烷振摇提取3次，第一次15ml，第二次10ml，第三次10ml，三氯甲烷液弃去，水液用水饱和的正丁醇振摇提取5次，分别为15、15、10、10、10ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤5次，每次15ml，继用正丁醇饱和的水25ml洗涤；分取正丁醇液，水浴蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿苷对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以1.3∶1∶1乙酸丁酯-甲酸-水10℃以下放置的上层液为展开剂，预饱和15分钟，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铝乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在365nm紫外光灯下检视，显相同颜色的荧光斑点；(8)盐酸小檗碱含量测定对照品溶液的制备取盐酸小檗碱对照品10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加100∶1的甲醇-盐酸溶液至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加100∶1的甲醇-盐酸溶液至刻度，摇匀，即得每1ml中含盐酸小檗碱0.01mg对照品溶液；供试品溶液的制备取本品装量差异项下的内容物，混匀，取约1.0g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入100∶1的甲醇-盐酸溶液50ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；照高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以50∶25∶25的乙腈-0.1mol/L的磷酸二氢钠-0.025mol/L的十二烷基磺酸钠为流动相；检测波长为265nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算样品中盐酸小檗碱的含量。
2.如权利要求1所述的一种治疗眼疾近视及视疲劳中药制剂的质量检测方法，其特征在于所述的中药制剂每0.4g含关黄柏以盐酸小檗碱计，不得少于0.20mg。
3.如权利要求1或2所述的一种治疗眼疾近视及视疲劳中药制剂的质量检测方法，其特征在于所述中药制剂的剂型包括丸剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂常规剂型。
全文摘要
本发明属中药成方制剂领域，具体来说是涉及一种治疗眼疾近视及视疲劳中药制剂的质量检测方法。本发明提供了对丹皮酚、大黄酚、大黄素、大黄素甲醚、芍药苷、丹参素钠、淫羊藿苷的定性鉴别，制定出了最佳的供试品制备方法，找到了合适的展开剂，能对该制剂进行有效的定性鉴别。此外本发明提供了盐酸小檗碱的含量测定方法，因为盐酸小檗碱与其它组份分离度、重现性、精密度、回收率好，所以采用高效液相色谱法测定本品中盐酸小檗碱的含量，制定出了最佳的供试品制备方法和流动相配制方法，大大提高了盐酸小檗碱的含量检测准确度。本方法的建立，有利于市场上对治疗眼疾近视及视疲劳中药制剂的真伪优劣进行鉴别。
文档编号A61K9/20GK101028388SQ200710017619
公开日2007年9月5日 申请日期2007年4月4日 优先权日2007年4月4日
发明者黄小华, 付彬, 张 浩, 雒西萍 申请人:西安碑林药业股份有限公司