一种治疗胃脘痛的中药复方制剂的质量控制方法

专利名称：一种治疗胃脘痛的中药复方制剂的质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种中药复方制剂的质量控制方法，特别是涉及一种治疗胃脘痛的中药 复方制剂的质量控制方法。
技术背景中药复方制剂由于所含组分复杂，而且不同成分之间会互相影响，很难准确地对终 产品的质量进行控制，现有方法往往存在结果不稳定、不精确、灵敏度低等问题，进而 影响产品的质量。近年来由于延胡索临床用药量不断增加，国内外市场需求量持续加太,加之延胡索 本身产量不高，市场上有许多混杂品及伪劣品，如夏天无一一罂粟科植物伏生紫堇 Corydalis decumbens (Thunb. ) Pers.的干燥块茎；齿瓣延胡索——罂粟科植物齿瓣 延胡索C.turschaninovii Bess的干燥块茎等等，均含延胡索乙素，且显微特征接近， 但现有鉴别方法专属性不够强。肉桂甘温助阳以补虚，辛热散寒以止痛。由于肉桂俗名桂皮，使用中常见误将调味 用的桂库做肉桂药用，两者均含有桂皮醛，显微特征接近，且外观相近，极易混淆。肉 桂为樟嵙植物肉桂Cinnamom咖cassia Presl的干燥树皮；桂皮为同属植物天竺桂 C. japonicumSieb、阴香C. chingii Metc.等的树皮，不做药用，但现有鉴别方法专属性 不够强。因此有必要寻找专属性强、色谱特征明显、阴性对照无干扰、灵敏度高的可行 的鉴别方法。 发明内容本发明目的在于提供一种治疗胃脘痛的中药复方制剂的质量控制方法。 本发明目的是通过如下技术方案实现的。本发明所述的中药复方制剂是由如下重量份的原料药组成肉桂85-115重量份 延胡索65-85重量份牡蛎65-85重量份 小茴香30-45重量份砂仁20-30重量份 高良姜10-15重量份 白芍120-160重量份炙甘草85-115重量份。本发明中药复方制剂原料药优选如下重量份-肉桂100重量份 延胡索75重量份 牡蛎75重量份小茴香37. 5重量份 砂仁25重量份 髙良姜12. 5重量份白芍140重量份 炎甘草100重量份。取上述原料药，按常规工艺，加入常规辅料制备成临床可接受的任何一种剂型，如:散剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂、丸剂、或缓释制剂、控释制剂等。本发明中药复方片剂的制备方法为以上八味，白芍、炙甘草加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓縮 成稠膏；其余肉桂等六味粉碎成细粉，与上述稠膏混匀，干燥，粉碎成细粉，加入适量 辅料，混匀，制粒，压制成片剂。每片重0.3g、 0.6g。 口服， 一次1.2g，一日3次， 日服用剂量3. 6g。本发明中药复方不同制剂的日服用剂量或使用剂量是确定的，不同制剂的日服用剂 量或使用剂量中含相当生药材量相同。本发明质量控制方法即以日用剂量为单位来称取 检测制剂。本发明所述中药复方制剂的质量控制方法包括如下鉴别方法中的一种或几种-A. 取本发明中药复方制剂日用剂量的25/18，研细，加浓氨溶液2ml与乙醚30ml， 浸渍1小时，时时振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇lml使溶解，作为供试品溶液； 另取延胡索对照药材0.62g，同法制成对照药材溶液；再取延胡索乙素对照品，加乙醇制 成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典一部附录VI B)试验， 吸取供试品溶液、对照药材溶液各10ul、对照品溶液2ul，分别点于同一硅胶G薄层 板上，以体积比为2: 1.5—2的60 90。C石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干， 置碘蒸气中熏，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱 相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；B. 取本发明中药复方制剂日用剂量的25/18,研细，加60 9(TC石油醚30ml，冷浸 l小时，时时振摇，滤过，滤液蒸至lml，作为供试品溶液；另取肉桂对照药材0.85g， 同法制成对照药材溶液；再取桂皮醛对照品，加乙醇制成每lml含lul的溶液，作为对 照品溶液；照薄层色谱法(中国药典一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液、对照药材溶 液各10ul、对照品溶液5nl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15—20: 3 的60 9(TC石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液； 供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在于对照品色谱 相应的位置上，显相同的橙红色斑点；C. 取本发明中药复方制剂日用剂量的10/3，研细，加乙醚40ml，冷浸1小时，时 时振摇，滤过，药渣加甲醇30ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml 使溶解，用正丁醇振摇提取2次，每次20ml (必要时离心)，合并正丁醇液，蒸干，残渣加水10ml溶解，离心，取上清液置于已处理好的重量规格为360mg的SEP-PAKCw小柱上， 用水和甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，浓縮至lml,作为供试品溶液；另取甘草对照药材 0.5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典一部附录VI B)试验，吸取供 试品溶液10ul、对照药材溶液3ul，分别点于同一硅胶GF^薄层板上，以体积比为40 一50: 3—5: 12—20: 8 —12的正丁醇-浓氨水(即"浓氨溶液")-水-乙醇为展开剂，展 开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的 位置上，显相同颜色的斑点。上述A鉴别方法优选体积比为2: 1.7的60 9(TC石油醚-乙酸乙酯为展开剂；B鉴 别方法优选体积比为17: 3的60 90'C石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开时湿度优先控制 在45% 65%范围内；C鉴别方法优选体积比为50: 4: 16: 10的正丁醇-浓氨水-水-乙醇 为展开剂，展开时温度优选20—30。C。所述鉴别方法A或B中硅胶G薄层板是市售的常规硅胶薄层板或以硅胶G为固定相，以 0. 2 0. 5%羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂制成规格100X200咖，厚度0. 25 0. 30,的手 铺硅胶G薄层板；鉴别方法C中硅胶GF254薄层板是市售的常规硅胶薄层板或以硅胶G F254为固定相，以0.2 0.5X羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂制成规格100X200mm,厚度 0. 25 0. 30mm的手铺硅胶G F254薄层板。本发明所述中药复方制剂的质量控制方法还包括如下含量测定方法 照高效液相色谱法(中国药典一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验，用十八 垸基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为28: 72甲醇-水为流动相；检测波长为230nm; 理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500，芍药苷峰与相邻峰的分离度应符合要求(即符 合中国药典要求，分离度应不小于1.5);取8(TC干燥至恒重的芍药苷对照品10mg,精密 称定，置10ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取lml置50ml量瓶中， 加流动相至刻度，摇匀，即得对照品溶液；取本发明中药复方制剂日用剂量的5/3，研细， 取细粉约日用剂量的5/18，精密称定，置具塞锥形瓶中，加25X乙醇50ml，密塞，称定 重量，超声(功率160W，频率50Hz)处理30分钟，放至室温，称定重量，用25%乙醇 补足减失的重量，摇匀，离心，精密吸取上清液lml，加水10ml，置于已处理好的重量 规格为360mg的SEP-PAKCw小柱上，用10ml水洗脱，再用10%甲醇2ml洗脱，弃去上述 洗脱液，继用60%甲醇10ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用60%甲醇溶解并移至2ml量瓶 内，加60%甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液 各10nl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得；本发明中药复方制剂日服用剂量的1/6 含白芍按芍药苷(C23H280u)计，不得少于0.45mg。现有技术中延胡索乙素的鉴别采用三氯甲垸为提取溶剂，其毒性较大，而本发明用 乙醚作为提取溶剂浸渍1小时，以此代替三氯甲烷的提取，降低了毒性，实验结果表明 此前处理方法可行。现有技术中的展开剂为正己烷-三氯甲烷-甲醇(10: 6: 1),其中也使用了毒性较大的三氯甲烷。本发明采用石油醚(60 9(TC)-乙酸乙酯(2: 1.7)为展开 剂，用碘熏后在紫外光灯(365nm)下检视，实验结果供试品色谱中，在与对照药材及对 照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，色谱特征明显；阴性对照无干扰，灵敏度高，表明本发明方法可行。在甘草薄层色谱鉴别的质量研究中，由于本发明药材组分较多，对色谱干扰较大，所以将供试品溶液经d8预处理小柱净化处理，以此减少其他组分和辅料的干扰；将供试 品溶液点样于硅胶GF浏薄层板上，以正丁醇-浓氨水_水-乙醇(50: 4: 16: 10)为展开 剂，置紫外光灯(254nm)下检视，结果供试品色谱中斑点清晰，背景干扰小。实验结果 表明本发明方法可行。在本发明肉桂鉴别试验中，增加了肉桂对照药材，以增强鉴别的专属性。下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。 实验例1 延胡索中延胡索乙素的薄层鉴别1. 样品点样量的选择按说明书技术方案所述方法制备延胡索对照药材溶液，分别取此溶液1、 2、 3、 4、 5、 10、 15、 20、 25、 30!il，点于同一自制手铺硅胶G薄层板(固定相为硅胶G,青岛海洋 化工厂制造，批号20050124,黏合剂为0.2%羧甲基纤维素钠溶液，规格200X200咖，厚 度0. 25 0. 30mm)上，以石油醚(60 90'C)-乙酸乙酯(2: 1.7)为展开剂，展开，取出， 晾干，置碘蒸气中熏，置紫外光灯(365nm)下检视。结果在对照药材色谱中，点样量为 lOul时斑点清晰可见，故样品点样量确定为10yl。(见图l)2. 专属性试验根据说明书所载技术方案配制不含延胡索的阴性样品，取供试品5g、阴性样品4. 3g、 对照药材0.625g、对照品按说明书所述的方法分别配制成供试品溶液、阴性对照溶液、 对照药材溶液、对照品溶液。分别取供试品溶液、阴性对照溶液、对照药材溶液各10 u 1， 对照品溶液2ul，点于同一自制手铺硅胶G薄层板(固定相为硅胶G，青岛海洋化工厂 制造，批号20050124，黏合剂为0. 2%羧甲基纤维素钠溶液，规格100X200mm，厚度0. 25 0.30咖)上，以石油醚(60 90。C)-乙酸乙酯(2: 1.7)为展开剂，展开，取出，晾干， 置碘蒸气中熏，置紫外光灯(365nm)下检视。结果供试品色谱中，在与对照药材及对照 品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性对照品色谱在与对照药材及对照品色谱相应位置上无相应的斑点，说明阴性对照无干扰。(见图2)3. 检测灵敏度试验取延胡索乙素对照品，加乙醇稀释制成每lml含2. 5、 1. 5、 1. 0、 0. 5、 0. 25、 0. 05mg 的溶液，吸取上述专属性试验所述的各溶液2ul，分别点于同一自制手铺硅胶G薄层板 上(固定相为硅胶G，青岛海洋化工厂制造，批号20050124，黏合剂为0.2%羧甲基纤维 素钠溶液，规格100X200咖，厚度0. 25 0. 30ram),以石油醚(60 90。C)-乙酸乙酯(2: 1.7)为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏，置紫外光灯(365nrn)下检视。结果 在对照品色谱中，对照品浓度》0.5mg/nil斑点清晰。(见图3)4. 耐用性试验4.1薄层板选择采用自制手铺硅胶G薄层板(固定相为硅胶G,青岛海洋化工厂制 造，批号20050124，黏合剂为0.2%羧甲基纤维素钠溶液，规格100X200ram，厚度0. 25 0.30mm)、青岛海洋化工厂出品的预制硅胶G薄层板(规格100X200ram,厚度0. 20 0.25mm，批号060306)点样。结果自制手铺硅胶G薄层板优于预制硅胶G薄层板，斑 点分离度好。(见图2、 4)4.2展开温度的考察取三批供试品溶液、对照药材、延胡索乙素对照品、阴性对照 溶液点于自制手铺硅胶G薄层板(固定相为硅胶G，青岛海洋化工厂制造，批号20050124, 黏合剂为0.2%羧甲基纤维素钠溶液，规格100X200ram，厚度0. 25 0. 30mm)上，分置于 温度为4 10°C、室温条件下展开。结果表明在7 3(TC范围内试验，对鉴别无影响(室 温见图2、低温见图5)4.3展开湿度的考察取三批供试品溶液、对照药材、延胡索乙素对照品、阴性对照 溶液点于自制手铺硅胶G薄层板(固定相为硅胶G，青岛海洋化工厂制造，批号20050124， 黏合剂为0.296羧甲基纤维素钠溶液，规格100X200鹏，厚度0. 25 0. 30mm)，分置于湿 度为75%、 30%条件下展开。结果表明在相对湿度30 75%之间试验，对鉴别无明显影 响。(低湿见图6、高湿见图7) 实验例2 肉桂中桂皮醛的薄层鉴别1.专属性试验根据说明书所载技术方案配制不含肉桂的阴性样品，取阴性样品3.87g、对照药材 0.85g、供试品5g、对照品25ul，按说明书所载技术方案的方法分别配制成阴性对照溶 液、对照药材瀋液、供试品溶液、对照品溶液。分别取阴性对照溶液、对照药材溶液、 供试品溶液各lOy l,对照品溶液5n l，分别点于同一硅胶G薄层板上(规格100X200咖， 厚度0. 20 0. 25ran，批号051212,青岛海洋化工厂)，以石油醚(60 90t:)-乙酸乙酯(17:3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液。结果供试品色谱中，在与 对照药材及对照品色谱相应位置上，显相同的橙红色斑点；阴性对照品色谱在与对照药 材及对照品色谱相应位置上无相应的斑点，说明阴性对照无干扰。(见图8)2. 检测灵敏度试验取桂皮醛对照品，加乙醇稀释制成每lml含O. 1、 0.2、 0.6、 1.0、 1.4、 2ul的溶 液，吸取上述专属性试验中各溶液5 u 1 ，分别点于同一硅胶G薄层板上(规格100X 200mm, 厚度0. 20 0. 25mm，批号051212，青岛海洋化工厂)，以石油醚(60 9(TC)-乙酸乙酯(17: 3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液。结果在对照品色谱中，对 照品浓度》0.2ixl/ml斑点清晰。(见图9)3. 耐用性试验3.1薄层板选择采用青岛海洋化工厂出品的预制硅胶G薄层板(规格100X200rara， 厚度0. 20 0. 25咖，批号060306)、自制手铺硅胶G薄层板(固定相为硅胶G，青岛海洋 化工厂制造，批号20050124,黏合剂为0.2%羧甲基纤维素钠溶液，规格100X200mm，厚 度0. 25 0. 30mm)点样。结果两种硅胶G薄层板的供试品色谱中，在与对照品色谱相 应位置上，均显相同的橙红色斑点，但是自制板中未见除主斑点外的其它斑点，而预制 板中主斑点清晰，其它斑点亦可分辨，说明预制板的分离度好。(见图IO、 11)3.2展开温度的考察取三批供试品溶液、对照药材、桂皮醛对照品、阴性对照溶液 点于青岛海洋化工厂出品的预制硅胶G薄层板上(规格100X200mm，厚度0. 20 0. 25mm， 批号060306)，分置于温度为4 1(TC、室温条件下展开。结果在低温与室温的硅胶G 薄层板供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，均显相同的橙红色斑点，且主斑点 与其它斑点的分离度好，无拖尾，比移值也相当，所以温度对展开影响不大。(低温见图 11、室温见图12)3.3展开湿度的考察取三批供试品溶液、对照药材、桂皮醛对照品、阴性对照溶液 点于青岛海洋化工厂出品的预制硅胶G薄层板上(规格100X200mm，厚度0. 20 0. 25mm， 批号060306)，分置于湿度为75%、 20%条件下展开。结果RH20%、 75%条件下的供试品 色谱中，在与对照品色谱相应位置上，均显相同的橙红色斑点，低湿条件时主斑点稍有 拖尾，而高湿条件斑点拖尾严重，所以展开时应控制湿度在45% 65%范围内，不宜过低 过高。(低湿见图13、高湿见图14) 实验例3 甘草的鉴别1.专属性试验根据说明书所载技术方案配制不含甘草的阴性样品，取供试品12g、阴性样品9.3g、对照药材0.5g按说明书所载技术方案的方法分别配制成供试品溶液、阴性对照溶液、对 照药材溶液。分别取供试品溶液、阴性对照溶液各10ul、对照药材溶液3wl，分别点 于同一自制硅胶GF2S4薄层板上(规格100X200mm，厚度0. 25 0. 30mm，批号20031010， 青岛海洋化工厂)，以正丁醇-浓氨水-水-乙醇(50: 4: 16: 10)为展开剂，展开，取出， 晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。结果供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置 上，显相同颜色的斑点；阴性对照品色谱在与对照药材色谱相应的位置上无相应的斑点， 说明阴性对照无干扰。(见图16)2. 检测灵敏度取甘草对照药材O. 5g，按说明书技术方案所载.方法配制成对照药材溶液，分别取此 溶液0.2、 0.5、 1、 2.5、 5、 lOnl,分别点于同一自制硅胶GF浏薄层板上(规格100X 200咖，厚度0. 25 0. 30mra,批号20031010，青岛海洋化工厂)，以正丁醇-浓氨水-水-乙醇(50: 4: 16: 10)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254咖)下检视。 结果在对照药材色谱图中，点样量》0.5ul范围斑点可见，点样量》10ul范围斑点清 晰。(见图15)3. 耐用性试验3.1薄层板选择采用上海信谊华仪器厂出品的预制硅胶GF254薄层板(规格100X 200mm,厚度0. 20 0. 25mm，批号060221)、自制手铺硅胶GF254薄层板(固定相为硅胶 GF254，青岛海洋化工厂，批号20031010，黏合剂为0.2%羧甲基纤维素钠溶液，规格100 X200rara，厚度0. 25 0. 30mm)点样。结果两种硅胶GF254薄层板的供试品色谱中，在 与对照药材色谱相应位置上，均显相同颜色的斑点，但是自制板中斑点较预制板淸晰， 分离度好。(见图16、 17)3.2展开温度的考察取三批供试品溶液、对照药材、阴性对照溶液点于自制硅胶 GF加薄层板上(固定相为硅胶GF254,青岛海洋化工厂，批号20031010，黏合剂为0. 2%羧 甲基纤维素钠溶液，规格100X200mm，厚度0. 25 0. 30咖)，分置于温度为4 10卩、室 温条件下展开。结果在低温时供试品色谱的斑点模糊，分离度差，而室温时供试品色 谱斑点清晰，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，所以展开时温度控制 在20 30。C范围内。(低温见图18、室温见图16)3.3展开湿度的考察取三批供试品溶液、对照药材、阴性对照溶液点于自制硅胶 GF浏薄层板上(固定相为硅胶GF254,青岛海洋化工厂，批号20031010，黏合剂为0. 2%羧 甲基纤维素钠溶液，规格100X200咖，厚度0.25 0.30mm)，分置于湿度为75%、 20%条 件下展开。结果朋20%、 75%条件下的供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，均显相同颜色的斑点，分离度均较好，无拖尾。所以展开时湿度影响不大，在20%与75% 之间即可。(低湿见图19、高湿见图20) 实验例4 甘草鉴别方法的筛选实验1、 鉴别方法(薄层色谱法)取本品12g,研细，加乙醚40ml，冷浸1小时，时时振摇，滤过，药渣加甲醇30ml，加 热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用正丁醇振摇提取2次，每次 20ml (必要时离心)，合并正丁醇液，蒸干，残渣加水10ml溶解，离心，取上清液置于 已处理好的SEP-PAKCw(重量规格360mg)小柱上，用水和甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，浓 縮至lml,作为供试品溶液。另取甘草对照药材0. 5g，同法制成对照药材溶液。照薄层 色谱法(中国药典一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液10ul、对照药材溶液3yl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以正丁醇-浓氨水-水-乙醇(50: 4: 16: 10)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254rnn)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色 谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。2、 色谱条件的选择2.1、 参照《中国药典》2000年版一部甘草浸膏的薄层鉴别方法。取本品6g,研细，加水40ral溶解，用正丁醇振摇提取3次，每次20ml (必要时离 心)，合并正丁醇液，用水洗涤3次，每次20ml，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇 5ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草酸单铵盐对照品，加甲醇制成每lml含2mg的溶 液，作为对照品溶液；另取甘草对照药材0.5g,同法制成对照药材溶液。另取缺甘草的 阴性对照品、甘草原药材分别按上述方法配制成阴性对照溶液、甘草原药材溶液。照薄 层色谱法(中国药典一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液、阴性对照溶液各10iil，对 照药材溶液、甘草原药材溶液、对照品溶液各5pl，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制 备的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15: 1: 1: 2)为展开剂，展开， 取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105t:加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm) 下检视。结果在供试品色谱中，甘草酸单铵盐对照品可见非常淡的黄色荧光斑点，而且需 加热30min以上，甘草原药材及甘草对照药材可见淡淡的甘草酸单铵盐的黄色荧光斑点， 其他斑点均有拖尾，斑点不清楚；样品拖尾非常严重，未见甘草酸铵盐对照斑点；阴性 对照拖尾以至未见斑点，结果表明此方法不适用于本品。(见图21)2.2、 自拟方法将供试品溶液经C,s预处理小柱净化处理(具体方法见l中所述)，以正丁醇-浓氨水-水-乙醇(50: 4: 16: 10)为展开剂，点样于硅胶GF浏薄层板上，结果经Cw预处理小 柱净化处理后(具体方法见1中所述)，大大消除了处方中其它组分和辅料对甘草鉴别的 干扰，供试品色谱中斑点清晰，背景干扰小，所以选用此方法鉴别。(见图22) 3、甘草对照药材梯度试验(薄层斑点与药材量的关系)取按1所述方法配制的甘草对照药材溶液(0.5g/ml) 0.2、 0.5、 1.0、 2.5、 5、 10 ul ，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，进行梯度试验，以正丁醇-浓氨水-水-乙醇(50: 4: 16: 10)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，结果在色谱 图中，点样量》0.5iil，即甘草量大于0. 25mg时斑点清晰(见图23)。甘草对照点样量(Pl)0.20.51.02.5510甘草对照药材含量(mg)0. 100. 250. 501.252.55.0相当于片剂甘草药材含量(mg)0， 401. 02. 05. 01020结论在对照药材色谱图中，点样量》0.5nl (片剂甘草药材含量》 l.Omg)时可见斑点；点样量》10iil (片剂甘草药材含量》 20mg)斑点清晰。4、固相提取小拄的选择4. 1 SEP-PAKCw使用前后的比较取本品12g,按照1中所述方法操做至"合并正丁醇液，蒸干"，残渣加甲醇lml使 溶解，作为供试品溶液l;另取本品12g,按照1中所述方法制备供试品溶液、甘草对照 药材溶液。分取上述三种溶液点于同一硅胶GF254薄层板上(其中供试品溶液点2个点)， 展开。结果色谱图中，供试品溶液在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点； 供试品溶液l拖尾严重，未见斑点。表明使用SEP-PAKCw比不使用效果好。(见图24)4. 2固相提取小柱不同型号、品牌的比较取本品按照上述1中方法处理，但是固相提取小柱分别使用A: WATER S印-Pak Classic C18 (360mg，批号WAT051910)、 B: Agilent ZORBAX SPE C18 (100mg, lml)、 C: 津杨C18固相提取小柱(500mg， 3ml，批号730013)，得供试品溶液A、 B、 C。结果色谱 图中，供试品溶液A、 B在与对照药材色谱相应位置上，均显相同颜色的斑点，但是供试 品溶液A的斑点比供试品溶液B斑点颜色深，而供试品溶液C未见斑点。说明固相提取 小柱A比B提取效果好，固相提取小柱C提取效果最差，所以选择固相提取小柱A。(见 图25)5、 甘草酸单铵盐对照品、甘草对照药材在鉴别中的意义取甘草对照药材、甘草酸单铵盐对照品、样品、阴性对照品(缺甘草)9.3g加甘草 酸单铵盐2mg,按照1中所述方法制备成对照药材溶液、甘草酸单铵盐对照品溶液、样品 供试品溶液、阴性+甘草酸单铵盐对照溶液进行鉴别。结果在色谱图中，样品供试品溶液在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；对照药材溶液、样品供试品溶液、 阴性+甘草酸单铵盐对照溶液在与甘草酸单铵盐对照品色谱相应位置上，均显相同颜色的斑点，但是阴性+甘草酸单铵盐对照溶液斑点与对照药材的其他斑点没有对应，阴性+甘 草酸单铵盐对照溶液与样品供试品溶液的斑点不完全一致，说明本品鉴别试验中采用甘 草对照药材比甘草酸单铵盐对照品更具专属性；对药材鉴别有更现实的意义。说明本品 中含有甘草药材。(见图26)实验例5 延胡索薄层色谱鉴别1、 鉴别方法-取本品5g，研细，加浓氨试液2ml与乙醚30ml，浸渍1小时，时时振摇，滤过，滤 液蒸干，残渣加乙醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索对照药材0.625g，同法 制成对照药材溶液。再取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每lml含lrag的溶液，作为对 照品溶液。照薄层色谱法(中国药典一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液、对照药材溶 液各10yl、对照品溶液2iU，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60 90"C)-乙 酸乙酯(2: 1.7)为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏，置紫外光灯(365nm) 下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光 斑点。2、 不同色谱条件的选择2.1、 现有技术中延胡索的薄层色谱鉴别方法为取本品5g，研细，加浓氨试液2ml与三氯甲烷20ml，浸渍1小时，时时振摇，滤过， 滤液蒸干，残渣加乙醇3ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取延胡索乙素对照 品，加乙醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典一部附 录VI B)试验，吸取供试品溶液10!U、对照品溶液2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上， 以正己烷-三氯甲烷-甲醇(10: 6: l)为展开剂，展开，取出，晾千，置碘蒸气中熏，置 紫外光灯(365nm)下检视。结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的 黄色荧光斑点(因为边缘效应，供试品中延胡索乙素的斑点比对照品的斑点略高)。(见 图27)2.2、 自拟方法l取本品5g,研细，加浓氨试液2ml与乙醚30ml，浸渍1小时，时时振摇，滤过，滤 液蒸干，残渣加乙醇lral使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索对照药材0.625g,同法 制成对照药材濬液；再取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每lml含lmg的鄉液，作为对 照品溶液。照薄层色谱法(中国药典一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各10ixl、对照品溶液2iU，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60 90t:)-乙 酸乙酯(2: 1.7)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以碘化铋钾试液。结果供试品色谱 中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点，但是色谱中斑点 小，特征较少，所以也不宜使用。(见图28) 2.3、自拟方法2我们在2. 2方法的基础上进行改变，按1中的方法分别配制成供试品(5g)溶液(三 批)、延胡索乙素对照品溶液、对照药材(0.625g)溶液、阴性对照溶液[阴性样品(缺 元胡)4.3g]。分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60 90'C)-乙酸乙酯(2: 1.7) 为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏，置紫外光灯(365nm)下检视。结果供试 品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性对照 品色谱在与对照药材及对照品色谱相应位置上无相应的斑点，说明阴性对照无干扰。色 谱特征明显，灵敏度高，所以选用此方法来鉴别延胡索(见图29)3、延胡索乙素对照品、延胡索对照药材在鉴别中的意义取缺延胡索阴性对照品4. 3g与延胡索乙素lmg置同一具塞三角瓶中，按照1中所述 方法制备成阴性+延胡索乙素对照溶液进行鉴别。结果在色谱图中，样品供试品溶液、阴 性+延胡索乙素对照溶液在与延胡索乙素对照品色谱相应位置上，均显相同颜色的荧光斑 点；但是阴性+对照溶液与样品供试品溶液的色谱不完全一致，说明本品鉴别试验中采用 延胡索对照药材延胡索乙素对照品更具专属性；对药材鉴别有更现实的意义。说明本品 中含有延胡索药材。(见图30) 实验例6 肉桂薄层色谱鉴别1、 鉴别方法取本品5g,研细，加石油醚(60 9(TC)30ml，冷浸1小时，时时振摇，滤过，滤液 蒸至约lml，作为供试品溶液。另取肉桂对照药材0.85g,同法制成对照药材溶液。再取 桂皮醛对照品，加乙醇制成每lml含liil的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中 国药典一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各10w 1、对照品溶液5y 1， 分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60 9(TC)-乙酸乙酯(17: 3)为展开剂，展开， 取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置 上，显相同颜色的斑点；在于对照品色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点。2、 桂皮醛对照品、肉桂对照药材在鉴别中的意义2. 1取桂皮醛对照品、阴性(缺肉桂)对照品3.87g加桂皮醛对照品lu 1、供试品、 阴性对照品，按照1中所述方法制备并进行鉴别。结果在色谱图中，样品供试品溶液、阴性+对照溶液在与桂皮醛对照品色谱相应位置上，均显相同的橙红色斑点；但是阴性+ 对照溶液与样品供试品溶液的色谱不完全一致。(见图31)2. 2取肉桂对照药材0. 85g，肉桂药材0. 85g，桂皮对照药材0.85g，桂皮药材0. 85g， 桂枝药材0. 85g，桂皮醛对照品25 P 1，供试品5g分别按照1中所述方法制备成肉桂对 照药材溶液，肉桂药材溶液，桂皮对照药材溶液，桂皮药材溶液，桂皮醛对照品溶液， 供试品溶液，点样。结果在色谱图中，肉桂对照药材、桂皮对照药材在与桂皮醛对照品 色谱相应位置上，均显相同的橙红色斑点；而肉桂对照药材斑点数目多于桂皮醛对照品； 肉桂对照药材与桂皮对照药材斑点不尽相同，可以区分鉴别；说明本品鉴别试验中采用 肉桂对照药材较桂皮醛对照品更具专属性；对药材鉴别有更现实的意义。供试品中含有 肉桂药材(见图32)。


图1延胡索样品点样量选择图2.延胡索薄层鉴别专属性试验(自制板，室温) 图3延胡索薄层鉴别检测灵敏度试验(自制板) 图4延胡索薄层鉴别(预制板，室温) 图5延胡索薄层鉴别(自制板，低温) 图6延胡索薄层鉴别(自制板，低湿度) 图7延胡索薄层鉴别(自制板，高湿度) 图8肉桂薄层鉴别专属性试验(青岛板) 图9肉桂薄层鉴别检测灵敏度试验图10肉桂薄层鉴别(自制板，室温)图11肉桂薄层鉴别(预制板，室温)图l'2肉桂薄层鉴别(预制板，低温)图13肉桂薄层鉴别(预制板，低湿度)图14肉桂薄层鉴别(预制板，高湿度)图15甘草薄层鉴别检测灵敏度试验图16甘草薄层鉴别(自制板，室温)图17甘草薄层鉴别(预制板，室温)图18甘草薄层鉴别(自制板,低温)图19甘草薄层鉴别(自制板，低湿度)图20甘草薄层鉴别(自制板，高湿度)图21甘草薄层鉴别(色谱条件的选择)-图22甘草薄层鉴别(自拟方法)图23甘草对照药材梯度薄层色谱24甘草薄层鉴别(SEP-PAKU使用前后的比较)图2'5甘草薄层鉴别(固相提取小柱不同型号、品牌的比较)图26甘草薄层鉴别(甘草酸单铵盐对照品、甘草对照药材在鉴别中的意义)图27延胡索薄层鉴别(现有卫生部颁标准的方法)图28延胡索薄层鉴别(自拟方法1)图29延胡索薄层鉴别(自拟方法2)图30延胡索薄层鉴别(延胡索乙素对照品、延胡索对照药材在鉴别中的意义) 图31肉桂薄层鉴别(桂皮醛对照品、肉桂对照药材在鉴别中的意义) 图32肉桂薄层鉴别(肉桂对照药材、桂皮对照药材、桂皮醛对照品的比较) 下述实施例均能实现上述实验例的效果。 具体实聘方式实施例l: 本发明片剂(小片)肉桂U5g 延胡索70g 牡蛎80g 小茴香35g 砂仁28g 高良姜12g白芍145g炙甘草90g以上八味，白芍、炙甘草加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓縮 成稠裔；其余肉桂等六味粉碎成细粉，与上述稠膏混匀，干燥，粉碎成细粉，加入适量 辅料，混匀，制粒，压制成2000片，每片0.3g,即得。口服， 一次四片， 一日三次。 实施例2:本发明片剂(大片)肉桂100g延胡索75g砂仁25g小茴香37. 5g牡蛎75g高良姜12. 5g白芍140g甘草(炙)100g以上八味，白芍、炙甘草加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩 成稠膏；其余肉桂等六味粉碎成细粉，与上述稠膏混匀，干燥，粉碎成细粉，加入适量 辅料，混匀，制粒，压制成片，每片0.6g，即得。口服， 一次二片， 一日三次。 实施例3:本发明颗粒剂肉桂85Kg 延胡索85Kg牡蛎65Kg小茴香45Kg 砂仁20Kg 高良姜15Kg白芍120Kg炙甘草115Kg。 按常规工艺加入适量辅料制备成颗粒剂。服用方法及日服用剂量开水冲服，每袋1.2克， 一次一袋， 一日三次。 实施例4: 本发明丸剂肉桂U5Kg延胡索65Kg牡蛎85Kg 小茴香30Kg砂仁30Kg 高良姜10Kg 白芍160Kg炙甘草85Kg。 按常规工艺加入适量辅料制备成丸剂。服用方法及日服用剂量口服，每袋1.2克， 一次一袋， 一日三次。 实施例5: 本发明胶囊剂肉桂90 Kg 延胡索80 Kg 牡蛎70 Kg 小茴香40 Kg砂仁22 Kg 高良姜14 Kg 白芍130 Kg 炙甘草110Kg。 按常规工艺加入适量辅料制备成胶囊剂。服用方法及日服用剂量口服，每粒0.3克， 一次四粒， 一日三次。 实施例6': 本发明控释制剂肉桂110Kg 延胡索70Kg 牡蛎80Kg 小茴香35Kg 砂仁2服g 高良姜12Kg 白芍150Kg 炙甘草90Kg。 按常规工艺加入适量辅料制备成控释制剂。服用方法及日服用剂量口服， 一日一到二次。同普通制剂日剂量。 实施例7: 本发明片剂的质量控制方法鉴别A.取本发明片剂5g，研细，加浓氨溶液2ml与乙醚30ml，浸渍1小时，时时振摇， 滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索对照药材0.62g， 同法制成对照药材溶液。再取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每lml含lmg的溶液，作 为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液、对照药 材溶液各lOu 1、对照品溶液2u l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60 90'0-乙酸乙酯(2: 1.7)为展开剂，展开，取出，晾千，置碘蒸气中熏，置紫外光灯(365nm) 下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光 斑点。B. 取本发明片剂5g，研细，加石油醚(60 90'C)30ml，冷浸1小时，时时振摇，滤 过，滤液蒸至约lml，作为供试品溶液。另取肉桂对照药材0.85g,同法制成对照药材溶 液。再取桂皮醛对照品，加乙醇制成每lml含lul的溶液，作为对照品溶液。照薄层色 谱法(中国药典一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各10nl、对照品溶 液5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60 9(TC)-乙酸乙酯(17: 3)为展开 剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相 应的位軍上，显相同颜色的斑点；在于对照品色谱相应的位置上,显相同的橙红色斑点。C. 取本发明片剂12g，研细，加乙醚40ml，冷浸1小时，时时振摇，滤过，药渣加 甲醇30ml，加热回流l小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用正丁醇振摇提 取2次，每次20ral (必要时离心)，合并正丁醇液，蒸干，残渣加水10ml溶解，离心， 取上清液置于已处理好的SEP-PAKC,8(重量规格360mg)小柱上，用水和甲醇洗脱，收集甲 醇洗脱液，浓縮至lml，作为供试品溶液。另取甘草对照药材0. 5g，同法制成对照药材 溶液。照薄层色谱法(中国药典一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液10ul、对照药材 溶液3ul，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以正丁醇-浓氨水-水-乙醇(50: 4: 16: 10)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与 对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。含量测定照高效液相色谱法(中国药典一部附录VI D)测定。 色谱条件与系统适用性试验用十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水(28: 72)为 流动相；检测波长为230nm;理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500，芍药苷峰与相邻 峰的分离度应符合要求。对照品溶液的制备取80'C干燥至恒重的芍药苷对照品约10mg,精密称定，置10ml 量瓶中，'用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取lml置50ml量瓶中，加流动相至刻 度，摇匀，即得。供试品溶液的制备取本发明片剂10片(每片重0. 6克)或20片(每片重0. 3克)， 精密称定，研细，取细粉约lg,精密称定，置具塞锥形瓶中，加25M乙醇50ml，密塞， 称定重量，超声(功率160W，频率50Hz)处理30分钟，放至室温，称定重量，用25% 乙醇补足减失的重量，摇匀，离心，精密吸取上清液lml，加水10ml，置于已处理好的 SEP-PAKU (重量规格360mg)小柱上，用10ml水洗脱，再用10%甲醇2ml洗脱，弃去上 述洗脱液，继用60%甲醇10ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用60%甲醇錄解并移至2ml量 瓶内，加60%甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。本品每片含白芍按芍药苷(C23H2S0 )计，大片(每片重0.6克)不得少于 0.45mg;小片(每片重0.3克)不得少于0.22mg。 实施例8: 本发明颗粒剂的质量控制方法鉴别A. 取本发明颗粒剂日服用量的25/18，研细，加浓氨溶液2ral与乙醚30ml，浸渍1 小时，时时振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取延 胡索对照药材0.62g,同法制成对照药材溶液。再取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每 lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典一部附录VI B)试验，吸取 供试品溶液、对照药材溶液各10ul、对照品溶液2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上, 以石油醚(60 9(TC)-乙酸乙酯(2: 1.7)为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏， 置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的荧光斑点。B. 取本发明颗粒剂日服用量的26/18，研细，加石油醚(60 9(TC)30ml，冷浸1小 时，时时振摇，滤过，滤液蒸至约lml，作为供试品溶液。另取肉桂对照药材0.85g,同 法制成对照药材溶液。再取桂皮醛对照品，加乙醇制成每lml含lul的溶液，作为对照 品溶液。照薄层色谱法(中国药典一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液 各10ul、对照品溶液5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60 9(TC)-乙酸 乙酯(17; 3)为展开剂，展开，取出，晾千，喷以二硝基苯肼乙醇试液。供试品色谱中， 在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在于对照品色谱相应的位置上， 显相同的橙红色斑点。C. 取本发明颗粒剂日服用量的25/18，研细，加乙醚40ral，冷浸1小时，时时振摇， 滤过，药渣加甲醇30ml，加热回流l小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用 正丁醇振摇提取2次，每次20ml (必要时离心)，合并正丁醇液，蒸干，残渣加水10ml 溶解，离心，取上清液置于已处理好的SEP-PAKd8(重量规格360mg)小柱上，用水和甲醇 洗脱，收集甲醇洗脱液，浓縮至lml，作为供试品溶液。另取甘草对照药材0.5g，同法 制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液IO yl、对照药材溶液3yl，分别点于同一硅胶GF股薄层板上，以正丁醇-浓氨水-水-乙醇(50: 4: 16: 10)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。上述鉴别方法A和B中所述的硅胶G薄层板均采用以硅胶G为固定相，以0. 2%羧甲 基纤维素钠溶液为黏合剂制成的规格100X200mm,厚度0. 25 0. 30mm的手铺硅胶G薄层板。鉴别方法C中硅胶GF254薄层板是以硅胶G F254为固定相，以0. 4%羧甲基纤維素钠 溶液为黏合剂制成规格100X200mm，厚度0. 25 0. 30mm的手铺硅胶G F浏薄层板。 实施例9: 本发明丸剂的质量控制方法鉴别A. 取本发明丸剂日服用量的25/18，研细，加浓氨溶液2ml与乙醚30ral，浸渍1小 时，时时振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡 索对照药材0.62g，同法制成对照药材溶液。再取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每lml 含lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典一部附录VI B)试验，吸取供 试品溶液、对照药材溶液各10nl、对照品溶液2nl，分别点于同一硅胶G薄层板上， 以石油醚(60 9(TC)-乙酸乙酯(2: 1.7)为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏， 置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的荧光斑点。B. 取本发明丸剂日服用量的25/18，研细，加石油醚(60 90。C)30ni1,冷浸1小时， 时时振摇，滤过，滤液蒸至约lml，作为供试品溶液。另取肉桂对照药材0.85g，同法制 成对照药材溶液。再取桂皮醛对照品，加乙醇制成每lml含liil的溶液，作为对照品溶 液。照薄层色谱法(中国药典一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各IO wl、对照品溶液5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60 9(TC)-乙酸乙酯 (17: 3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液。供试品色谱中，在与 对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在于对照品色谱相应的位置上，显相 同的橙红色斑点。C. 取本发明丸剂日服用量的25/18，研细，加乙醚40ml，冷浸1小时，时时振摇， 滤过，药渣加甲醇30ml，加热回流l小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用 正丁醇振摇提取2次，每次20ml (必要时离心)，合并正丁醇液，蒸干，残渣加水10ml 溶解，离心，取上清液置于已处理好的SEP-PAKCw(重量规格360mg)小柱上，用水和甲醇 洗脱，收集甲醇洗脱液，浓縮至lml，作为供试品溶液。另取甘草对照药材0.5g，同法 制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液IO ul、对照药材溶液3ul，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以正丁醇-浓氨水-水-乙醇(50: 4: 16: 10)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254mti)下检视。供试 品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。含量测定照高效液相色谱法(中国药典一部附录VI D)测定。 色谱条件与系统适用性试验用十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水(28:72)为流动相；检测波长为230nm;理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500，芍药苷峰与 相邻峰的分离度应符合要求。对照品溶液的制备取8(TC干燥至恒重的芍药苷对照品约10mg，精密称定，置10ml 量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取lml置50ml量瓶中，加流动相至刻 度，摇匀，即得。供试品溶液的制备取取本发明中药复方丸剂日用剂量的5/3，研细，取细粉约曰用 剂量的5/18，精密称定，置具塞锥形瓶中，加25X乙醇50ml，密塞，称定重量，超声(功 率160W，频率50Hz)处理30分钟，放至室温，称定重量，用25%乙醇补足减失的重量， 摇匀，离心，精密吸取上清液lml，加水10ml，置于已处理好的SEP-PAKCw (重量规格 360mg)小柱上，用10ml水洗脱，再用1(m甲醇2ml洗脱，弃去上述洗脱液，继用60%甲 醇10ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用6096甲醇溶解并移至2ml量瓶内，加60%甲醇至刻 度，摇匀，作为供试品溶液。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10iil，注入液相色谱仪，测定， 计算，即得。本品每日服用剂量的l/6含白芍按芍药苷(C2晶80u)计，不得少于0.45mg。 实施例10: 本发明胶囊剂的质量控制方法鉴别A. 取本发明胶囊剂日服用量的25/18，研细，加浓氨溶液2ml与乙醚30ml，浸渍1 小时，时时振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取延 胡索对照药材0.62g，同法制成对照药材溶液。再取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每 lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典一部附录VI B)试验，吸取 供试品溶液、对照药材溶液各10nl、对照品溶液2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上， 以石油醚(60 90。C)-乙酸乙酯(2: 1.7)为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏， 置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的荧光斑点。B. 取本发明胶囊剂日服用量的25/18，研细，加石油醚(60 90t:)30m1,冷浸1小 时，时时振摇，滤过，滤液蒸至约lml，作为供试品溶液。另取肉桂对照药材0.85g,同 法制成对照药材溶液。再取桂皮醛对照品，加乙醇制成每lml含lul的溶液，作为对照 品溶液。照薄层色谱法(中国药典一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液 各10yl、对照品溶液5wl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60 90'C)-乙酸 乙酯(17:' 3)为展开剂，展开，湿度控制在45% 65%范围内，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相词颜色的斑点；在 于对照^色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点。C.取本发明胶囊剂日服用量的25/18，研细，加乙醚40ml，冷浸1小时，时时振摇， 滤过，药渣加甲醇30ml，加热回流l小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用 正丁醇振摇提取2次，每次20ml (必要时离心)，合并正丁醇液，蒸干，残渣加水10ml 溶解，离心，取上清液置于已处理好的SEP-PAKCw(重量规格360mg)小柱上，用水和甲醇 洗脱，收集甲醇洗脱液，浓縮至lml，作为供试品溶液。另取甘草对照药材0.5g，同法 制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液IO Pl、对照药材溶液3ul，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以正丁醇-浓氨水-水-乙醇 (50: 4: 16: IO)为展开剂,展开，展开温度为20—30。C，取出，晾干，置紫外光灯(254nm) 下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。含量测定照高效液相色谱法(中国药典一部附录VI D)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅垸键合硅胶为填充剂，以甲醇-水(28: 72)为流动相；检测波长为230nm;理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500，芍药苷峰与 相邻峰的分离度应符合要求。对照品溶液的制备取80'C干燥至恒重的芍药苷对照品约10mg，精密称定，置10ml 量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取lml置50ml量瓶中，加流动相至刻 度，摇匀，即得。供试品溶液的制备取取本发明中药复方胶囊制剂日用剂量的5/3，研细，取细粉约 日用剂量的5/18,精密称定，置具塞锥形瓶中，加25X乙醇50ml，密塞，称定重量，超 声(功率160W，频率50Hz)处理30分钟，放至室温，称定重量，用25%乙醇补足减失 的重量，.摇匀，离心，精密吸取上清液lml，加水10ml，置于已处理好的SEP-PAKC18 (重 量规格360mg)小柱上，用10ml水洗脱，再用10%甲醇2ml洗脱，弃去上述洗脱液，继 用60%甲醇10ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用60先甲醇溶解并移至2nd量瓶内，加60% 甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10yl，注入液相色谱仪，测定， 计算，即得。本品每日用剂量的l/6含白芍按芍药苷(C23H280u)计，不得少于0.45mg。
权利要求
1. 一种由肉桂85-115重量份、延胡索65-85重量份、牡蛎65-85重量份、小茴香30-45重量份、砂仁20-30重量份、高良姜10-15重量份、白芍120-160重量份、炙甘草85-115重量份组成的中药复方制剂的质量控制方法，其特征在于该方法包括如下鉴别中的一种或几种A.取所述中药复方制剂日用剂量的25/18，研细，加浓氨溶液2ml与乙醚30ml，浸渍1小时，时时振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索对照药材0.62g，同法制成对照药材溶液；再取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为2∶1.5-2的60～90℃石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；B.取所述中药复方制剂日用剂量的25/18，研细，加60～90℃石油醚30ml，冷浸1小时，时时振摇，滤过，滤液蒸至1ml，作为供试品溶液；另取肉桂对照药材0.85g，同法制成对照药材溶液；再取桂皮醛对照品，加乙醇制成每1ml含1μl的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15-20∶3的60～90℃石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在于对照品色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点；C.取所述中药复方制剂日用剂量的10/3，研细，加乙醚40ml，冷浸1小时，时时振摇，滤过，药渣加甲醇30ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加水10ml溶解，离心，取上清液置于已处理好的重量规格为360mg的SEP-PAKC18小柱上，用水和甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取甘草对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液3μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为40-50∶3-5∶12-20∶8-12的正丁醇-浓氨水-水-乙醇为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
2 、如权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于鉴别方法A釆用体积比为2: 1. 7 的60 9(TC石油醚-乙酸乙酯为展开剂；鉴别方法B采用体积比为17: 3的60 90'C石油醚-乙酸乙酯为展开剂；C鉴别方法采用体积比为50: 4: 16: 10的正丁醇-浓氨水-水-乙醇为展开剂。
3、 如权利要求1或2所述的质量控制方法，其特征在于鉴别方法B展开相对湿度 在45% 65%范围内；鉴别方法C展开温度为20—30。C。
4、 如权利要求1或2所述的质量控制方法，其特征在于所述鉴别方法A或B中硅 胶G薄层板是市售的常规硅胶薄层板或以硅胶G为固定相，以0. 2 0. 5%羧甲基纤维素钠 溶液为黏合剂制成规格100X200mm，厚度0. 25 0. 30mm的手铺硅胶G薄层板；鉴别方法 C中硅胶GF254薄层板是市售的常规硅胶薄层板或以硅胶G F254为固定相，以0. 2 0. 5% 羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂制成规格100X200咖，厚度0. 25 0. 30mm的手铺硅胶G F254薄层板。
5、 如权利要求3所述的质量控制方法，其特征在于所述鉴别方法A或B中硅胶G薄 层板是市售的常规硅胶薄层板或以硅胶G为固定相，以0. 2 0. 5%羧甲基纤维素钠溶液为 黏合剂制成规格100X200腿，厚度0. 25 0. 30mm的手铺硅胶G薄层板；鉴别方法C中硅 胶GF254薄层板是市售的常规硅胶薄层板或以硅胶G F254为固定相，以0.2~0.5%羧甲 基纤维素钠溶液为黏合剂制成规格100X200mra，厚度0. 25 0. 30mra的手铺硅胶G F254 薄层板。
6、 如权利要求l、 2或5所述的质量控制方法，其特征在于该方法还包括如下含量 测定照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为 填充剂，以体积比为28: 72甲醇-水为流动相；检测波长为230nm;理论板数按芍药苷峰 计算应不低于1500,芍药苷峰与相邻峰的分离度应符合要求；取80'C干燥至恒重的芍药 苷对照品10mg,精密称定，置10ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取 lml置50ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得对照品溶液；取所述中药复方制剂日 用剂量的5/3，精密称定，研细，取中药复方制剂细粉约日用剂量的5/18,精密称定， 置具塞锥形瓶中，加25X乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放至室温， 称定重章，用25%乙醇补足减失的重量，摇匀，离心，精密吸取上清液lml，加水10ml， 置于已处理好的重量规格为360mg的SEP-PAKCw小柱上，用10ml水洗脱，再用10%甲醇 2ml洗脱，弃去上述洗脱液，继用60%甲醇10ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用60%甲醇溶 解并移至2ml量瓶内，加60%甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10U1，注入液相色谱仪，测定，计算，即得；本发明中药复方制剂日服用剂量的1/6含白芍按芍药苷023仏80 计，不得少于0. 45mg。
7、 如权利要求3所述的质量控制方法，其特征在于该方法还包括如下含量测定方法: 照高效液相色谱法(中国药典一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验，用十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为28: 72甲醇-水为流动相；检测波长为 230nm;理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500，芍药苷峰与相邻峰的分离度应符合要求; 取80'C干燥至恒重的芍药苷对照品10mg，精密称定，置10ml量瓶中，用甲醇溶解并稀 释至刻度，摇匀，精密量取lml置50ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得对照品溶 液；取所述中药复方制剂日用剂量的5/3，研细，取细粉约日用剂量的5/18,精密称定， 置具塞锥形瓶中，加25X乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放至室温， 称定重量，用25%乙醇补足减失的重量，摇匀，离心，精密吸取上清液lml，加水10ml， 置于已处理好的重量规格为360mg的SEP-PAKU小柱上，用10ml水洗脱，再用10%甲醇 2ml洗脱，弃去上述洗脱液，继用60%甲醇10ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用60%甲醇溶 解并移至2ml量瓶内，加60%甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；分别精密吸取对照品 溶液与供试品溶液各10ixl,注入液相色谱仪，测定，计算，即得；本发明中药复方制剂日 服用剂量的1/6含白芍按芍药苷(:2晶80 计，不得少于0. 45rag。
8、 如权利要求4所述的质量控制方法，其特征在于该方法还包括如下含量测定 照高效液相色谱法(中国药典一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅垸键合硅胶为填充剂，以体积比为28: 72甲醇-水为流动相；检测波长为 230nm;理论板数按芍药苷峰计算应不低于1500，芍药苷峰与相邻峰的分离度应符合要求； 取80'C干燥至恒重的芍药苷对照品10mg，精密称定，置10ml量瓶中，用甲醇溶解并稀 释至刻度，摇匀，精密量取lml置50ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得对照品溶 液；取所述中药复方制剂日用剂量的5/3,研细，取细粉约日用剂量的5/18,精密称定， 置具塞锥形瓶中，加25X乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放至室温， 称定重量,用25%乙醇补足减失的重量，摇匀,离心,精密吸取上清液lml,加水10ml,置于 已处理好的重量规格为360mg的SEP-PAKC,8小柱上，用10ml水洗脱，再用10%甲醇2ml 洗脱，弃去上述洗脱液，继用60%甲醇10ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用60%甲醇溶解 并移至2ml量瓶内，加60%甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；分别精密吸取对照品溶 液与供试品溶液各10lU，注入液相色谱仪，测定，计算，即得；本发明中药复方制剂曰 服用剂M的1/6含白芍按芍药苷C23H2s0n计，不得少于0. 45mg。
9、 如权利要求1所述的中药复方片剂的质量控制方法，其特征在于该方法包括如下鉴别和/或含量测定 鉴别方法A. 取片剂5g，研细，加浓氨溶液2ml与乙醚30ml，浸渍1小时，时时振摇，滤过， 滤液蒸干，残渣加乙醇lml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索对照药材0.62g,同法 制成对照药材溶液；再取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每lml含lmg的溶液，作为对 照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各10ul、对照品溶液2 Pl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为2: 1. 7的60 90'C石油醚-乙酸乙酯为 展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中， 在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；B. 取片剂5g，研细，加60 90'C石油醚30ml，冷浸1小时，时时振摇，滤过，滤 液蒸至约lml，作为供试品溶液；另取肉桂对照药材0.85g，同法制成对照药材溶液；再 取桂皮醛对照品，加乙醇制成每lml含liil的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试 验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各10ul、对照品溶液5ul，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以体积比为17: 3的60 90。C石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干， 喷以二硝基苯肼乙醇试液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜 色的斑点；在于对照品色谱相应的位置上，显相同的橙红色斑点；C. 取片剂12g，研细，加乙醚40ml，冷浸1小时，时时振摇，滤过，药渣加甲醇30ml， 加热回流l小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用正丁醇振摇提取2次，每 次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加水10ml溶解，离心，取上清液置于已处理好的重 量规格360mg的SEP-PAKC,8小柱上，用水和甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，浓縮至lml， 作为供试品溶液；另取甘草对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验， 吸取供试品溶液10ul、对照药材溶液3nl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积 比为50: 4: 16: 10的正丁醇-浓氨水-水-乙醇为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm 紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；含量测定方法照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为 填充剂，以体积比为28: 72的甲醇-水为流动相；检测波长为230nm;理论板数按芍药苷 峰计算应不低于1500，芍药苷峰与相邻峰的分离度应符合要求；取80'C干燥至恒重的芍 药苷对照品约10mg，精密称定，置10ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密 量取lml置50ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得对照品溶液；取所述中药复方制 剂日用剂量的5/3,研细，取细粉约日用剂量的5/18，精密称定，置具塞锥形瓶中，加25X乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放至室温，称定重量，用25%乙 醇补足减失的重量，摇匀，离心，精密吸取上清液lml，加水10ml，置于已处理好的重 量规格360mg的SEP-PAKU小柱上，用10ml水洗脱，再用10%甲醇2ml洗脱，弃去上述 洗脱液，继用60%甲醇10ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用6(m甲醇溶解并移至2ml量瓶 内，加60%甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液 各10ul，注入液相色谱仪，测定，计算，即得；片剂每片含白芍按芍药苷(^280 计， 每片0. 6克不得少于0. 45mg;每片0. 3克不得少于0. 22mg。
10、如权利要求9所述的中药复方片剂的质量控制方法，其特征在于该中药复方片 剂是由如下方法制备的白芍、炙甘草加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过， 滤液浓縮成稠膏；其余肉桂等六味粉碎成细粉，与上述稠膏混匀，干燥，粉碎成细粉， 加入适量辅料，混匀，制粒，压制成片，每片0.3g或0.6g。
全文摘要
本发明公开了一种由肉桂、延胡索、牡蛎、小茴香、砂仁、高良姜、白芍等原料药组成的中药复方制剂的质量控制方法。该方法包括延胡索、肉桂、甘草的鉴别方法和白芍的含量测定方法。胡索鉴别方法以体积比为2∶1.7的60～90℃石油醚-乙酸乙酯为展开剂；肉桂鉴别方法以体积比为17∶3的60～90℃石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开时湿度优先控制在45％～65％范围内；甘草鉴别方法以体积比为50∶4∶16∶10的正丁醇-浓氨水-水-乙醇为展开剂，展开时温度优选20-30℃。该鉴别方法色谱特征明显；阴性对照无干扰，灵敏度高，专属性强。
文档编号A61K35/56GK101244230SQ200710063999
公开日2008年8月20日 申请日期2007年2月16日 优先权日2007年2月16日
发明者刘铁薇, 梁勇军, 谢锦桃, 琴 陆 申请人:深圳市中联制药有限公司