专利名称：：苦丁茶总苷的应用及其制备方法苦丁茶总苷的应用及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及苦丁茶总苷，特别涉及其在制备药品和/或功能性食品中的新应用及其制备方法。
背景技术：
：苦丁茶为中国特有的资源物种，迄今为止，作为民间传统茶饮用已有2000多年的历史，是我国特有一类大宗的资源物种。如表所列，苦丁茶的原植物属5科5属IO种[云南植物研究1992;14(3):328336]。我国各地苦丁茶的原植物<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>迄今对苦丁茶进行了各种药理实验，发现苦丁茶具有很高的药用价值:对心脑血管的作用；2)抑制血栓形成、动脉硬化的作用；3)抑制血小板凝集；4)降血压作用；5)实验性血栓的抑制；6)降血脂的作用；7)抗氧化作用；8)降血糖作用；9)抗炎作用；10)增强免疫功能的作用；ll)拮抗支气管平滑肌的收缩作用。根据目前的资料显示，尚未检索到有关苦丁茶的抗脂肪肝和酒精肝活性的报道。苦丁茶总苷的制备方法一般采用大孔树脂吸附法。但当苦丁茶中的油脂、亲脂成分或者低极性成分与大孔树脂结合，树脂表面就会被涂上一层油脂层；再者大孔树脂的溶剂洗脱为水或亲水溶剂，因此当树脂与油脂结合时，就会大大降低大孔树脂的吸附载量。为此在应用大孔树脂纯化总苷时，一般会进行预处理除脂。除脂环节会给大生产中带来诸多问题i)有机溶剂残留；2)石油醚为易燃液体，会带来严重的安全问题；3)造成生产成本上升；4)延长生产时间等；但如不除脂，又会严重影响分离效果。
发明内容本发明的目的在于提出苦丁茶总苷的新应用，特别是苦丁茶总苷在制备预防和/或治疗脂肪肝及酒精肝药物和/或功能性食品中的应用。功能性食品包括保健品、营养辅助食品、营养剂、治疗用食品或健康食品。申请人研究发现，苦丁茶总苷可降低肝组织丙二醛(MDA)、甘油三酯(TG)含量，增加各剂量组肝组织还原型谷胱甘肽(GSH)含量；降低肝组织谷丙转胺酶(ALT)、谷草转胺酶(AST)含量，具有的抗酒精肝和脂肪肝活性；可将其应用于预防和/或治疗脂肪肝和酒精肝的药品和/或功能性食品中。苦丁茶总苷可以原植物序梗女贞ZigwWn/淤/aiMwcw/areRehd.、*，茎女贞丄.；wpwascewsY.C.Yang、日本毛女贞丄.乂a/7画'c,7Tz"w6var./MtescmsKoidz.、粗壮女贞丄.ra6wW画(Roxb.)Bl.、枸骨/kxcw2wtaLindl.exPaxt.、苦丁茶冬青/.h^/"c/w！C.J.Tseng、大叶冬青/./<3咖//"Thunb.、毛叶黄牛木Cratoqy/謂/"""^//謡(Kurz)Dyer、厚壳树E/re"a^yrai/7ora(S.etZ.)Nakai.、石楠i^orim'a化^rw/ataLindl.中的一种或多种作为原料提取。本发明的另一目的在于提供一种苦丁茶总苷的制备方法，包括如下步骤A、取苦丁茶粉碎、过5-30目筛，得原料；B、分别加入苦丁茶原料重量2-10倍量70-99%的乙醇回流提取1-4次，合并提取液；C、将所述提取液过滤，减压浓缩至相对密度为1.1~1.4,得到乙醇提取浸膏；D、在所述浸膏加入2-10倍量的水充分搅拌提取，静置，取上清夜，进行离心过滤，得离心液；E、将所述离心液减压浓缩至相对密度为1.05~1.2,得浓缩液；F、将所述浓缩液进行喷雾干燥，得干燥的苦丁茶总苷粉末。其中，步骤B:乙醇重量为所述苦丁茶粉末的3-8倍，浓度为80%;回流提取的温度为60。C;提取次数为2次，第一次提取时间为1-5小时、第二次提取时间为1-4小时。步骤C:浓缩至相对密度为1.1~1.2。步骤D:水的重量为所述浸膏的3-8倍，提取次数为l-4次。步骤E:浓缩至相对密度为1.05~1.10。步骤F:干燥的进风温度为175±5°C、出风温度为85土5。C。在苦丁茶总苷的制备方法中，本发明将现有技术中的大孔树脂吸附提纯环节替换为加水提纯环节。因苦丁茶总苷是大极性，亲水性的成分，以水加入提取物浸膏中，苷类物质很容易被水溶出，而低极性的水不溶部分就形成沉淀或油脂层，从而将水溶液部分与非水溶部分分离；水溶液部分再经浓缩干燥，即可得到纯度较高的苦丁茶总苷粉末。这样避免了有机溶剂除脂环节，省去了大孔树脂吸附提纯环节，大大降低了成本，缩短了时间，提高了功率。特别是在制备药品和/或功能性食品过程中，该制备方法更为安全、简便并易于质量控制。本发明还提供一种苦丁茶总苷制剂，它是由含有苦丁茶总苷为主要活性成分，加上药学和/或食品学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成，也可和其他具有抗脂肪肝和酒精肝活性的物质组合制备而成；所述的制剂是指胶嚢剂、片剂、丸剂、颗粒剂、注射剂、口服液剂。本发明相对于现有技术而言1、提出了苦丁茶总苷的新应用，特别是在制备预防和/或治疗抗脂肪肝及酒精肝药物和/或功能性食品时的应用；2、提出了一种苦丁茶总苷的制备方法，其生产工艺安全、节约成本、功效高并且更为简便，易于质量控制；3、提出了一种苦丁茶总苷制剂，具体指胶嚢剂、片剂、丸剂、颗粒剂、注射剂、口服液剂。图l苦丁茶总苷生产工艺简图具体实施方式下面结合实验来说明苦丁茶总芬对脂肪肝和酒精肝的作用。以四氯化碳和酒精肝为模型，研究苦丁茶总苷对小鼠肝组织丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、甘油三酯(TG)、谷丙转胺酶(ALT)和谷草转胺酶(AST)的作用。实施例1苦丁茶总苷对乙醇诱发昆明种小鼠酒精肝中MDA、GSH、TG水平的影响受试样品样品为苦丁茶总苦。剂量:设0.22、0.44、1.32g/kgBW三个剂量组，为人体推荐日服量的5、10、30倍，另设空白对照组、乙醇对照组。剂量分别为1)空白对照组0.00g/kgBW;2)乙醇对照组0.00g/kgBW;3)低剂量组0.22g/kgBW;4)中剂量组0.44g/kgBW;5)高剂量组1.32g/kgBW。受试物制备每日用纯净水稀释2.64g受试样品至40.0ml制成高剂量组受试物，然后用纯净水分别稀释5.0、10.0ml高剂量组受试物至30.0ml制成低、中剂量组受试物。给受试物途径各剂量组按每日一次，每次0.20ml/10gBW灌胃给予受试物，空白对照组和乙醇对照组按同等容量灌胃给予纯净水。试验动物SPF级昆明中小白鼠，雌性，6-8周龄，体重18-22g,由南方医科大学实验动物中心提供。试验方法试验动物在实验室条件下检疫三天后，随机分成空白对照组、乙醇对照组及低、中、高三个剂量组，每组12只小鼠。三个剂量组每天分别按不同剂量灌胃给予受试物，空白对照组和乙醇对照组按同等容量灌胃给予纯净水。动物每周称重，以调整受试样品剂量，共30天。试验结束时各剂量组和乙醇对照组以0.12ml/10gBW剂量一次灌胃给予50%乙醇，空白对照组灌胃给予相同剂量纯净水，各组动物禁食16小时后处死，取肝组织制成肝匀浆，测定丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、甘油三酯(TG),并取肝脏左叶冰冻切片，苏丹III染色，光镜下观察病理变化。结论1)受试样品降低各剂量组肝组织MDA、TG含量，实验结果阳性；2)受试样品增加各剂量组肝组织GSH含量，实验结果阳性；3)受试验品各剂量组肝细胞脂肪变性与乙醇对照组比较减轻，动物实验肝脏病理结果阳性。实验结果表明苦丁茶总苷具有抗酒精肝的活性。实施例2苦丁茶总苷对四氯化石友诱发昆明种小鼠脂肪肝中ALT、AST水平的影响受试样品样品为苦丁茶总苷。剂量设0.22、0.44、1.32g/kgBW三个剂量组，为人体推荐日服量的5、10、30倍，另设空白对照组、乙醇对照组。剂量分别为1)空白对照组0.00g/kgBW;2)乙醇对照组0.00g/kgBW;3)j氐剂量组0.22g/kgBW;4)中剂量组0.44g/kgBW;5)高剂量组1.32g/kgBW.受试物制备每日用纯净水稀释2.64g受试样品至40.0ml制成高剂量组受试物，然后用纯净水分别稀释5.0、10.0ml高剂量组受试物至30.0ml制成低、中剂量组受试物。给受试物途径各剂量组按每日一次，每次0.20ml/10gBW灌胃给予受试物，空白对照组和CCU对照组按同等容量灌胃给予纯净水。试-验动物SPF级昆明中小白鼠，雌性，6-8周龄，体重18-22g,由南方医科大学实验动物中心提供。试验方法..试验动物在实验室条件下检疫三天后，随机分成空白对照组、CCU对照组及低、中、高三个剂量组，每组ll只小鼠。三个剂量组每天分别按不同剂量灌胃给予受试物，空白对照组和CCU对照组按同等容量灌胃给予纯净水。动物每周称重，以调整受试样品剂量，共30天。试验结束前将各组动物隔夜禁食16小时，各剂量组和CCU对照组以0.1ml/10gBW剂量腹腔注射给予0.125%CCU，空白对照组注射给予相同剂量玉米油，各受试物剂量组继续给予受试样品至实验结束(与CCU腹腔注射间隔4小时以上)。24小时后摘眼球取血，分离血清测定谷丙转胺酶(ALT)、谷草转胺酶(AST)，并取肝脏用10%的中性福尔马林固定，常规制作病理切片，HE染色，光镜下观察病理变化。结论l)剂量组ALT、AST含量与CCU对照组比较轻，差异有非常显著性意义，ALT和AST结果阳性；2)剂量组肝脏病理改变与CCU对照组比较轻，差异有非常显著性意义，动物实-险肝脏病理结杲阳性。实验结果表明苦丁茶总苷具有抗脂肪肝的活性。下面结合苦丁茶总苷的制备方法。实施例3本发明苦丁茶总苷的制备方法，包括如下步骤A、将购买来的符合质量标准要求的苦丁茶称重、粉碎,过20目筛，得原料；B、分别用5倍量80%食用酒精在6(TC条件下回流提取两次，第一次提取2小时、第二次提取时间为1.5小时，合并两次提取液；C、将上述提取液过滤，进行减压浓缩，控制浓缩温度为60°C,浓缩压力为-0.085mPa,浓缩至相对密度为1.1~1.2的乙醇提取浸膏；D、所得的浓缩浸膏，加入5倍量的纯净水充分搅拌15分钟，静置45分钟后，倾出上清夜，如此进行两次，合并两次水溶液，并进行离心过滤，得到的离心液进行下一部浓缩。E、对上述所得的离心液进行减压浓缩，控制温度60°C、浓缩压力为-0.085mPa，浓缩至相对密度为1.05~1.10,得浓缩液。F、将所得的浓缩液进行喷雾干燥，控制进风温度为175±5°C、出风温度为85土5。C。得干燥的苦丁茶总苷粉末。其中，B步骤中提取设备为多功能提取罐，容积为4立方米；C步骤中使用单效浓缩器；D步骤中的是管式离心机，转鼓转速16000r/min,功率3000W,流速控制在300400KG/小时；F步骤中的设备为离心式喷雾干燥塔，上迷生产工艺中简便且易于质量控制，其中投料、提取、浓缩在一般生产区进行；提取、浓缩通过管道化操作，避免了人为和环境的污染；干燥在30万级洁净车间进行。下面结合实施方式说明苦丁茶总苷制剂的制备方法。实施例4力交嚢剂的制备称取苦丁茶总苷14~67g，食用纤维素3386g，以任意比例混合30分钟，直到混合均匀；填充胶嚢，胶嚢为0#胶嚢，填充规格为0.44克/粒；将填充好的胶嚢装入玻璃瓶中，每瓶60粒。其中，G步骤中混合使用EYH二维运动混合机，H步骤中的使用自动胶嚢填充机(型号NJP-800)进行填充，填充胶嚢以及胶嚢装瓶在30万级洁净车间进行。实施例5:片剂称取959克苦丁茶总苷、3080克微晶纤维素、1020克乳糖、1克硬脂酸镁。将苦丁茶总苷、食用纤维素、乳糖以任意比例混合均匀，按公知的片剂制作技术和装备制成片剂。产品规格为0.5克/片，每日服用三次，每次两片。实施例6:丸剂将苦丁茶总苷与微晶纤维素分别过100目筛，并称取苦丁茶1467克、微晶纤维素3386克，以任意比例混合均匀，往混合好的物料中添加一定比例的炼制蜂蜜，按公知的丸剂制作技术和装备制成丸剂。产品规格为0.25克/粒。实施例7:颗粒剂分别称取苦丁茶总苷14-67克，微晶纤维素3386克。部分苦丁茶总苷用水溶液溶解，剩余的苦丁茶总苷与微晶纤维素以任意比例混合均勻，使用喷雾千燥工艺进行制粒，喷雾干燥制粒工艺与上述所提到的苦丁茶总苷的喷雾干燥工艺一致。实施例8:注射剂苦丁茶总苷15~80克加注射用水制成1000ml,配制成每ml含15~80mg的溶液，过滤鸟澄明、罐封，高温瞬时灭菌即得。注射剂的溶液配制，滤过、罐封都在IO万级以上的车间完成。实施例9:口服液制剂称取苦丁茶总苷515克、蜂蜜10克，用纯化水配制成100ml的溶液，过滤、罐装，高温瞬时灭菌即得。上述苦丁茶总苷制剂中，苦丁茶总苷为主要活性成分，也可根据情况加入其他具有抗脂肪肝和酒精肝活性的物质如水飞蓟素、谷维素、桔梗皂苷等制成复方产品。本发明可用其他的不违背本发明的精神或主要特征的具体形式来概述。因此，无论从哪一点来看，本发明的上述实施方案都只能认为是对本发明的说明而不能限制本发明，权利要求书指出了本发明的范围，而上述的说明并未指出本发明的范围，因此，在与本发明的权利要求书相当的含义和范围内的任何改变，都应认为是包括在权利要求书的范围内。权利要求1.苦丁茶总苷在制备预防和/或治疗脂肪肝药物和/或功能性食品中的应用。2、苦丁茶总苷在制备预防和/或治疗酒精肝药物和/或功能性食品中的应用。3、根据权利要求1或2所述的苦丁茶总苷，其特征在于提取原料为序梗女贞；eow"cw/areRehd.、紫茎女贞pwr/wrascmsY.C.Yang、日本毛女贞Z.j'a/om'c謂J7mw6/w6esce"sKoidz.、粗壮女贞L.raZ)MWwm(Roxb.)Bl.、枸骨/tecLindl.exPaxt.、苦丁茶冬青/.Awd/wc/wC.J.Tseng、大叶冬青/./a^/b/z'aThunb.、毛叶黄牛木Cratoxy/ww/r麵yb/z.訓(Kurz)Dyer、厚壳树五/w^f/af/z戸i/7ora(S.etZ.)Nakai.、石楠P/w""/"sern^/atoLindl.中的至少一种。4、根据权利要求1或2所述的苦丁茶总苷的制备方法，其特征在于A、取苦丁茶粉碎、过5-30目筛，得原料；B、分别加入苦丁茶原料重量2-10倍量70-99%的乙醇回流提取1-4次，合并提取液；C、将所述提取液过滤，减压浓缩至相对密度为1.1~1.4,得到乙醇提取浸膏；D、在所述浸膏加入2-10倍量的水充分搅拌提取，静置，取上清夜，进行离心过滤，4寻离心液；E、将所述离心液减压浓缩至相对密度为1.05~1.2，得浓缩液；F、将所述浓缩液进行喷雾干燥，得干燥的苦丁茶总苷粉末。5、根据权利要求4所述的苦丁茶总普的制备方法，其特征在于所述步骤B:乙醇重量为所述苦丁茶粉末的3-8倍，浓度为80%;回流提取的温度为6(TC;提取次数为2次，第一次提取时间为1-5小时、第二次提取时间为1-4小时。6、根据权利要求4所述的苦丁茶总苷的制备方法，其特征在于所述步骤C:浓缩至相对密度为1.1~1.2。7、根据权利要求4所迷的苦丁茶总苷的制备方法，其特征在于所述步骤D:水的重量为所述浸膏的3-8倍，提取次数为l-4次。8、根据权利要求4所述的苦丁茶总苷的制备方法，其特征在于所述步骤E:浓缩至相对密度为1.05~1.10。所述步骤F:千燥的进风温度为175士5。C、出风温度为85士5。C。9、根据权利要求1或2所述的苦丁茶总苷制剂，其特征在于所述的制剂是胶嚢剂、片剂、丸剂、颗粒剂、注射剂、口服液剂。10、根据权利要求1或2所述的功能性食品，其特征在于所述功能性食品是保健品、营养辅助食品、营养剂、治疗用食品或健康食口o全文摘要本发明涉及苦丁茶总苷的应用及其制备方法。经研究发现，苦丁茶总苷可降低肝组织丙二醛(MDA)、甘油三酯(TG)含量，增加各剂量组肝组织还原型谷胱甘肽(GSH)含量；降低肝组织谷丙转胺酶(ALT)、谷草转胺酶(AST)含量，具有的抗酒精肝和脂肪肝活性。本发明相对于现有技术而言1.提出了苦丁茶总苷的新应用，特别是在制备预防和/或治疗脂肪肝和酒精肝药物和/或功能性食品中的应用；2.提出了一种苦丁茶总苷的制备方法，其生产工艺安全、节约成本、功效高并且更为简便，易于质量控制；3.提出了一种苦丁茶总苷制剂。文档编号A61K9/10GK101254222SQ20071007343公开日2008年9月3日申请日期2007年3月2日优先权日2007年3月2日发明者池银珠,贺震旦申请人:重生源生物科技(深圳)有限公司