决明属植物提取物及其提取方法

专利名称：：决明属植物提取物及其提取方法
技术领域：
：本发明涉及一种用于减肥的药物组合物及其制备方法，该组合物含有一种以上蒽醌类化合物，具体地说，本发明涉及含有蒽醌苷和蒽醌苷元的植物提取物，即豆科植物决明子有效部位提取物及其提取方法。所述提取物可以制成用于治疗肥胖的各种剂型的药物、食物补充剂、功能食品或饮料以及化妆品等。
背景技术：
：肥胖是当今世界上危害健康的重大问题之一，西方国家有20%的人口患有肥胖症。美囯成人中65%超重，减肥及与肥胖相关保健及药品的开支已达近千亿美元。欧洲国家肥胖问题也日趋严重，在英国，43%的男人和34%的妇女超重，其中22%的男人和23%妇女需要治疗。未成年人和发展中国家人口中肥胖病人也呈增长趋势。现有技术中，有关治疗肥胖的药物按其作用机理分类如下(1)通过其对脑的作用抑制能量(食物)摄取(或减少食欲)降低饥饿感；(2)通过脂肪末梢、胃肠作用机理抑制脂肪吸收，减低能量摄入；(3)经末梢机理增大能量消耗；(4)刺激脂肪末梢代谢作用，降低脂肪质量或减少甘油三酯合成。西布曲明(Sibutramine)和奥利司他(Orlistat)是美国食物药品管理局(FDA)批准治疗肥胖的两种药物，目前占世界减肥药物巿场份额最大。至于治疗肥胖症的天然产物，尽管杨氏等观察到决明子水提取物能抑制大鼠体重增加(中国临床康复杂志，2005，19:31),但其活性成分或组分未经鉴别。
发明内容本发明要解决的技术问题在于提供一种治疗肥胖症的决明属植物提取物及其提取方法本发明所述植物提取物，来源于一种豆科植物，按重量比含有i)至少1%的橙黄决明素(aurantio-obtusin)(高效液相测定)；ii)至少0.1%的钝叶素(obtusifolin)(髙效液相测定)；以及iii)至少25《总蒽醌(比色法测定)所述植物优选决明属的1、钝叶决明(Cassiaobtusifolia);或2、决明(Cassiatora)，以其种子为原料。所述提取物以橙黄决明素和钝叶素为对照品进行标定。提取物中游离的橙黄决明素含量应不少于1W高效液相测定)，如果进行了水解处理，可以测得游离型和结合型橙黄决明素总量，该总量应不少于2%，按1%递增的话，橙黄决明素的含量可以是3%，4%，最好是不少于5%或更高，如6%，7%，8%,9%并可髙达10%或更高。提取物中游离的钝叶素含量应不少于O.1%(高效液相测定)，如果进行了水解处理，可以测得游离型和结合型钝叶素总量，该总量应不少于0.2%,按0.1%递增的话，橙黄决明素的含量可以是0.3%,0.4%,最好是不少于0.5%或更高，如0.6%,0.7%，并可高达0.8%或更高。含量测定采用髙效液相法，有关测定方法将会详述。提取物中橙黄决明素和钝叶素两个对照品的含量应具有一定的比例。按重量计，通常二者的比例可以是5:1至30:1,较为优选的比例是5:1至16:1，更为优选的比例是8:1和16:1,最优选的比例是8:1。这些比例有可能与实例1中从乙醇浸裔中分离对照品时所得到的化合物比例有差异.分离对照品时将浸裔分成了A、B两个部分，分别从A部分得到橙黄决明素，从B部分得到钝叶素。而本发明只采用含有一定比例橙黄决明素和钝叶素的一个部分提取物。本发明所述提取物中总蒽醌的含量应不少于25%(重量比)，较为优选的方案是不少于30%,如35%，40%，45%，50%或更髙(比色法测定)。所述提取物须经过精制，提取物不超过原料重量的10%，比较优选的得率是不超过4%至2%，最优选的得率是不超过1%.该提取物可以制成各种剂型的药物、保健食品或化妆品。本专利发明人经解决如下问题后获得本发明所述的独特提取物。1建立系统的原材料的质量控制方法；2探索出新的提取纯化工艺；3确定提取物的质量标准；4建立原料和提取物中对照品的测定方法；5建立指紋图谱；6制备对照品；7确定活性部位及其特性；8活性及制剂研究9毒理学研究所述剂型可以是散剂、冲剂、颗粒剂、溶液剂、悬浮液、片剂、胶囊、喷鼻剂、滴眼剂、注射剂，其中胶囊剂最为优选。本品提取物干燥粉末的日服用量可以是50-5000迈g,最佳剂量为每日500mg。所用原料为决明属植物钝叶决明和决明。本专利发明人发现湖北产钝叶决明为最优原料，其中橙黄决明素的含量高于其他地区产品，达到0.08%。湖北周边地区如陕西、安徽等地产钝叶决明也可以作为原料。最佳药用部位是种子。最佳提取方法是乙醇回流提取，然后用离心或熔剂如石油醚、氯仿等祛除油脂和树脂或髙浓度乙醇祛除水溶性胶质.优选树脂吸附分离法对提取物进行精制。采用天津农药厂生产的D101型树脂。技术资料详述项已明确最佳制备工艺条件，包括以下工序1.50-8054乙醇为溶剂提取；2.回流提取方法筛选；3.纯化树脂床的预处理；4.树脂床参数筛选，如树脂床径髙比为l:5-1:50;5.洗脱除杂条件筛选，如体积/浓度/速度。先用2倍树脂床体积的蒸馏水洗，继以1-8倍树脂床体积的20%乙醇洗，速度为1-5倍树脂床体积/小时。6.蒽醌类成分分离条件控制，即用1-10倍树脂床体积的70%乙醇洗脱，速度为l-5倍树脂床体积/小时。本发明提取物可进一步应用于药品、食品和化妆品生产，其中优选的制剂是提取物粉末直接装入胶囊。本发明进一步说明该豆科植物提取物在制备减肥药剂、化妆品和保健品等产品方面的应用。本专利发明人对决明子进行了以下系统研究1、资源调查和生药学研究；2、有效成分分离鉴定及活性测试；3、药理和毒理研究；4、药学研究；5、质量标准研究；6、制剂研究，确证了中国产决明子在治疗肥胖症方面的有效性。图1是从决明子中分离对照品橙黄决明素(aurantio-obtusin)和钝叶素(obtusifolin)的流程图；图2是对照品高效液相图；图3是本发明的一种提取工艺流程图；图4是提取物高效液相图；'图5是提取物薄层层析图(365nm)，其中l橙黄决明素，2钝叶素，3样品1，4样品2，5样品3，6样品4，7橙黄决明素，8钝叶素；图6是提取物薄层层析图(254nm)，其中l橙黄决明素，2钝叶素，3样品1,4样品2，5样品3，6样品4，7橙黄决明素，8钝叶素。具体实施方式以下结合附图对有关的实施例作进一步详述。1.0药材原料1.1背景资料决明子(包括钝叶决明和决明)含蒽醌、内酯、氨基酸和微量元素。主要有效成分是蒽醌类，含有0.8-1.6%蒽醌苷和0.06-0.2%的苷元。决明子通常指钝叶决明(Cassiaobtusifolia)和决明(Cassiatora)的成熟种子，资源丰富。望江南.(Cassiaoccidentalis)的种子在南方个别地区作为决明子药用。通常决明分布于南方，野生为主。决明在长江以北没有分布，即使有也不会开花结果。钝叶决明全国都有分布，南、北方都有种植。文献记载上述3个品种古时候都作决明子用。早期决明子化学成分研究都是曰本科学家做的，采用日本产决明子为原料。从曰本决明子中分离到的一些主要成分，如大黄酸(rhein)，芦荟大黄素(aloe-emodin)，在中国产决明子中未能检出。除少数测定决明子中大黄蒽醌类成分含量研究外，至今对中国产决明子化学成分分离和鉴别的研究还很少。包括中国药典和当前新药研究中有关决明子药材和制剂的质量控制指标都停留在测定大黄酚和总蒽醌这个层面，没有特径性和专一性。本专利发明人对决明子化学成分进行了系统研究，发现决明子主要含有大黄酚(chrysophanol)、大黄素甲醚(physcion)、钝叶素(obtusifolin)、大黄素(eraodin)、橙黄决明素(aruantio-obtusin)等成分。其中钝叶素和橙黄决明素这两种成分是中囯产决明子的特径成分，而橙黄决明素是主要成分，并且具有很好的减肥作用。1.2药材选择本专利发明人研究发现，钝叶决明中有效成分比决明中的有效成分含量高，所以选择钝叶决明作为研究用药材。不同地区产决明子有效成分橙黄决明素及总蒽醌含量差异很大。选择广西、安徽和湖北产决明子做比较研究，筛选药材产区。结果如表3所示。表3不同产地决明子有效成分含量测定结果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>如表3所示，不同产地原料中有效成分有差异，湖北产决明子有效成分含量较高。2.0化合物所用对照品i)橙黄决明素<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>OHnOCH3化学文摘登记号码(RegistryNumber):67979-25-3ii)钝叶素化学文摘登记号码(RegistryNumber):477-85-03.0提取3.1橙黄决明素和钝叶素的提取分离参照图l,取lkg决明子用乙醇提取，过滤，回收乙醇，得浸贵(190g)。继以氯仿萃取，得氯仿萃取物A和母液B。A(20g)以硅胶柱层析，氯仿甲醇梯度洗脱，甲醇结晶，得O.lg钝叶素。B经大孔树脂吸附，乙酵洗脱，洗出物进一步硅胶柱层析，氯仿曱醇梯度洗脱，甲醇结晶，得0.8g橙黄决明素。3.1.1定量分析3.1.2仪器试剂安捷伦1100型髙效液相仪(HPLCAgilent1100),二极管阵列检测器(DAD)。甲醇、乙氟(色谱纯)，去离子水、.磷酸(分析纯)。3.1.3方法与结果梯度洗脱，见表4。表4流动相梯度<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>色谱柱碳18键合相层析柱(lunarC18)柱温25°C运行时间25mins.3.1.4对照品溶液制备精密称取橙黄决明素和钝叶素，分别置于10ml容量瓶中，加甲醇至刻度并溶解,即得。钝叶素保留时间为14.51分，橙黄决明素保留时间为11.48分(图2)。表5对照品线性范围考察化合物线性关系相关系数范围(fig)橙黄决明素Y=93.3885334x-15.3283630.999990.092-1.580钝叶素Y=123.192564x-3.48917020.999950.008~0.5803.2提取物制备(最佳工艺)参照图3本发明提取物的制备方法，包括如下步骤3.2.1决明子(25Kg)粉碎成粗粉；3.2.2用4-20倍50-80%乙醇回流提取0.5-3小时；3.2.3重复2-4次；3.2.4过滤,减压回收乙醇，得粗提取物；3.2.5离心，除去杂质和上层油脂；3.2.6加蒸馏水调节浓度至1:1-1:10(药材溶液)；3.2.7上D101大孔树脂柱，树脂柱径高比为1:2-20;3.2.8上样量不超过l-4倍树脂床体积，流速为l-2倍树脂床体积/小时；3.2.9先用1-8倍树脂床体积蒸馏水洗脱，然后以20%乙醇洗脱，流速均为1-5倍树脂床体积；3.2.10最后以l-10倍树脂床体积的70%乙醇洗脱，流速为l-5倍树脂床体积；3.2.11收集70%乙醇洗脱液，减压回收乙醇，千燥；3.2.12将所得干浸裔用95%乙醇溶解，过滤，回收乙醇至稠裔状；3.2.13真空千燥，粉碎，即得精致提取物。所得提取物为深棕褐色粉末，味苦。溶于水、乙醇、甲醇。该最佳工艺是经以下筛选实验研究而得出的。3.3.乙醉浓度选择试验按10%梯度用0%-80%乙醇提取，筛选最佳条件。方法称取50g决明子粗粉分别加300ml试验浓度的乙醇，回流提取1.5小时,重复3次，过滤，调节体积为1000ml。测定测定橙黄决明素、总蒽醌的含量和浸贵重量。结果见表6。表6.乙醇浓度对决明子提取效率的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表6结果显示，随着乙酵浓度增加，橙黄决明素和总蒽醌含量增加，浸贵重量降低。综合最佳条件为60%乙醇。3.4乙醇提取方法筛选对常用3种乙醇提取方法，即滲漉法、冷浸法和回流法进行比较^f究。渗漉法称取50g决明子粗粉，加100ml60%乙醇，放置12小时，以500ml乙醇渗漉，收集乙醇滲漉液，用乙醇调节至1000ml。冷浸法称取50g决明子粗粉，加100ml60%乙醇，放置12小时，过滤；再以500ml乙醇分两次浸泡，每次12小时，过滤，合并所有滤液，用乙醇调节至1000ml。回流法称取50g决明子粗粉，加300ml60%乙醇，回流提取1.5小时，过滤，残渣再用300ml60%乙醇，回流提取l小时，过滤，合并两次滤液，用乙醇调节至1000ml。结果见表7。表7不同提取方法对决明子提取效率的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>可见，回流提取法所得浸有及有效成分含量均高于其他提取法。3.5溶剂用量、回流时间和提取次数分析经正交试验研究，只有提取次数对提取效率有显著影响。最佳提取工艺是用8倍量乙醇，回流1小时，提取3次。3.6纯化除去油脂后，粗浸裔用下述方法纯化3.6.1用D101型大孔树脂柱对粗浸裔进行分离纯化；3.6.2树脂柱径高比为1:20;3.6.3以l倍树脂床体积/小时的速度加入1.4倍树脂床体积的提取液，动态吸附；3.6.4先用2倍树脂床体积(2BV)的蒸馏水洗脱，继以4倍树脂床体积20%乙醇以2倍树脂床体积/小时的速度洗脱。(除去水溶性胶质)；3.6.5以4倍树脂床体积(4BV)70%乙醇以2倍树脂床体积/小时的速度洗脱，收集7(W乙醇洗脱液；3.6.6回收乙醇并将残余物真空干燥；3.6.7所得干浸裔以95%乙醇溶解，过滤，减压回收乙醇；3.6.860°C条件下真空干燥，粉碎成适当大小的颗粒。详细的工艺参数筛选研究资料如下3.7树脂选择比较几种树脂在动态和静态条件下的吸附能力，以吸附和解吸附效率为考察指标。3.7.1树脂前处理洗净树脂以祛除树脂中的残留物。先加1/2树脂体积量的95W乙醇于层析柱中，然后加入大孔树脂，调节乙醇量至高出树脂顶端O.3米，浸泡24小时。用2BV(BV，即BEDVOLUME的缩写，树脂床体积，下同)95。/。乙醇以2BV/h速度冲洗树脂，然后再用95%乙醇浸泡树脂4-5小时，95y。乙醇以2BV/h速度冲洗，直至洗出液用5倍量水稀释时不变浑浊为止。继以蒸馏水洗至洗出液无醇味。再用2BV5%HC1以4-6BV/h冲洗，放置2-4小时后，用蒸馆水冲洗至中性。再用2BV2%NaOHHC1以4-6BV/h冲洗，放置2-4小时后，用蒸馏水冲洗至中性。3.7.2静态吸附试验方法将所选择的实验用5种树脂进行处理并除去表面水分。称取一定量的树脂于具塞烧瓶中，加入过量试验溶液，充分振摇24小时，使蒽醌类成分在树脂上充分吸附。过滤，得滤液1。加80ml95y。乙醇，充分振摇24小时使之解吸附，然后过滤，得滤液2。测定滤液1和滤液2中蒽醌的含量，计算吸附率和解吸附率。结果见表8。表8.树脂对蒽醌的静态吸附和解吸附试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>表8结果显示，静态吸附试验中D101树脂具有最佳吸附能力和解吸附性能。3.7.3动态吸附试验方法树脂柱洗脱液以HPLC方法检测。将试验液加入树脂柱至流出液检出橙黄决明素为止。纪录加入试验液的体积。先用蒸馏水洗脱至洗出液颜色浅，收集洗出液；继以95%乙醇洗脱至洗出液颜色浅，收集乙醇洗脱液。测定以上两种洗脱液中蒽醌类成分的含量，分别计算吸附率和解吸附率。结果见表9。表9树脂对蒽醌的动态吸附和解吸附试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>表9结果显示，动态吸附试验中D101树脂具有最佳吸附能力和解吸附性能。动态和静态试验结果均表明D101型大孔吸附树脂比其他树脂具有更好的吸附和解吸附性能，适合用于分离纯化初提取物,，3.8柱分离纯化技术参数筛选上柱样品溶液浓度于装有50g处理好的树脂柱中加入不同浓度的样品溶液(药材溶液)使其进行动态吸附，测定吸附蒽醌的量。结果见表IO。表10不同样品溶液浓度DIOI大孔树脂对决明子蒽靦吸附作用的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>上表结果表明随着浓度比例增加树脂吸附率提高，当浓度比达l:5(药材溶液)时吸附率不再增加。3.9.1流速的影响将样品溶液分别以l，2，3BV/h的速度通过装有50g处理好的D101树脂柱，进行动态吸附。以蒸馏水洗脱后继以95%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液并测定蒽醌的含量，结果见表11。表11.流速对DIOI大孔树脂吸附决明慈醌效率的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>结果显示速度越慢吸附率越高。选择1BV速度。3.9.2泄漏曲线测定同动态吸附条件，将样品溶液加入装有50g处理好的D101大孔树脂柱，以10ml/组分量收集洗出液，共收鱼10份，用0.2,薄膜过滤，用HPLC方法测定橙黄决明素的含量，结果见表12。表12.决明子提取物在DIOI大孔树脂吸附过程中的泄漏曲线<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>从上表结果可知，当加入样品溶液超过1.4BV时开始出现泄漏。3.10洗脱液浓度筛选同动态吸附条件，将样品溶液加入装有50g处理好的4根D101大孔树脂柱，先以蒸馏水分别洗脱至颜色浅，继分别以30%，50%，70%和90%洗脱至颜色浅，收集乙醇洗脱液，测定蒽靦含量。结果见表13。表13不同乙醇浓度对蒽醌的洗脱效果<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>结果显示75%乙醇最佳。3.11洗脱速度筛选在装有50g处理好的3根树脂柱中动态吸附样品溶液，然后用70%乙醇分别以1、2、3BV/h速度洗脱，测定洗脱液中蒽醌的量。结果见表14。表14.不同洗脱速度对蒽醌洗脱效率的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>上表结果显示，洗脱速度越慢洗脱效率越髙，但lBV/小时和2BV/小时速度的洗脱效率差异不大，从生产实际需要考虑，2BV/小时为最佳洗脱速度。3.12解吸附曲线以上述优选条件，将样品溶液加入到装有50g处理好的D101树脂柱中，水洗后，乙醇洗脱。收集乙醇洗脱液，每份10m，第15份之后，每份20ml。用HPLC方法测定橙黄决明素的含量，结果见表15。表15决明子提取物中橙黄决明素在DIOI大孔树脂上界吸附曲线测定<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>上表可知，第18组分洗脱液中橙黄决明素的含量已经很低，所以确定18号(200ml)为洗脱终点，即用4BV7094乙醇洗脱。3.13pH对葸醌收率的影响将试验溶液分别调节pH4，5，and6(初提取液为pH5),考察PH对蒽醌含量的影响，结果见表16。表16pH对蒽醌收率的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>从上表可知pH4和5产生效果没有明显差别，都比pH6效果更好，因此，不需要调节pH。3.14树脂床径高比对蒽醌收率的影响基于上述吸附和洗脱条件，取3根柱分别装载17ml、34ml、50ml处理好的大孔树脂使径高比分别为1:5、1:10、1:20。分别加入1.4BV样品溶液，照以上选择的方法洗脱和测定，结果见表17。-表17.树脂床径高比对蒽醌收率的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>结果显示径高比达l:20时蒽醌收率高。3.15再纯化决明子含有水溶性胶质。这些胶质可以用水或20%乙醇预先冲洗吸附了提取液的树脂床而除去，蒽醌类成分在这种条件下得以保留。此外，用95%乙醇复溶浸奢可以除去残余的水溶性胶质。3.16中试提取试验基于上述条件进行3批中试实验，考察所选参数及规模化生产的适应性。结果见表18。表18决明子提取物中试试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>以上工艺条件可以生产出含总蒽醌大于45%和橙黄决明素含量髙于4.5%的提取物。详细的质量技术指标如以下4.0项所述。4.0质量标准本品是钝叶决明种子提取物，制备方法如上所述，含橙黄决明素不少于4.5%,钝叶素不少于0.25%,总蒽醌不少于50%。中试产品显示其中总蒽醌达50%,橙黄决明素含量达5.2%,钝叶素含量达O.6%。.本品可依据3.1.1—3.1.4所述HPLC方法鉴别。称取10mg样品，加20ml甲醇和1()ml5仰Cl，回流30分钟，以30ml乙醚萃取，挥干乙醚，残渣以甲醇溶解，定溶至25ral，0.22pm膜过滤。注入20nl样品溶液于HPLC仪，测定峰面积，计算，结果如下(mg/g)。表19提取物含量测定结果样品号.橙黄决明素钝叶素157.5996.785245.1785.231352.4336.189平均51.7376.068HPLC图谱见图4.亦可用TLC鉴别.方法4批样品，各取10mg加10ml甲酵超声60分钟溶解，过滤，得样品溶液。取橙黄决明素和钝叶素各适量，用甲醇溶解，得对照品溶液。将样品溶液和对照品溶液各lnl点于同一薄层板上，以石油醚(30。C-60。C):正己烷甲酸乙酯甲酸(1:3:1.5:0.01)为展开剂展开，取出，晾干，分别于紫外光365nm和254nm下检示。更详细的技术指标如下1.外观深棕褐色粉末，味苦2.橙黄决明素含量>5%(HPLC)3.钝叶素含量>0.5%(HPLC)4.干燥失重<9.0%(lg，105。C，2h)5.重金属检查17(1)重金属(2)砷6.细菌总数7.霉菌8.致病菌9.组分<10ppm<1ppm<3xl03cfu/g<1xl03cfu/g未检出100%钝叶决明子提取物本品为干浸奢粉，可直接用于填充胶囊。每粒胶囊含250mg提取物，每曰服用500mg，便于服用。，动物试验结果显示本品具有减肥作用。5.0药效试验(减肥)材料与方法样品样品按以上所述制备方法制备，为深棕褐色粉末.实验动物和饲料SD大鼠75只，雄性，体重140g士10g。由华西实验动物中心提供。实验环境为温度22-，相对湿度65-70%。两种饲料i)基础饲料大麦粉20%、脱水蔬菜10%、豆粉20%、酵母1%、骨粉1%、玉米粉15%、麸皮16%、鱼粉10%、食盐2%。ii)高脂高营养伺料在100g基础饲料中再加入；奶粉10g、猪油10g、鸡蛋1只、浓鱼肝油10滴、新鲜黄豆芽50g。剂量选择根据人体推荐摄入剂量0.5-0.6g/人/日的5倍、15倍和30倍设三剂量组即0.05g/kg.bw/d(即克/公斤体重/天，下同)组、0.15g/kg.bw/d组和0.30g/kg.bw/d组。主要仪器与试剂电子天平(赛多利斯，BL610)实验方法随机将大鼠分成5组1、正常对照组；2、高脂饲料组；和3、3个试验组。试验组分别给予0.05g/kg.bw/d,0.15g/kg.bw/d和0.30g/kg.bw/d的提取物。正常组给于基础伺料；其他组给于髙脂高营养饲料。各组动物均自由进食和饮水。试验组每天灌胃给药l次，其他组灌胃给水l次，持续36天，然后处死动物。观察指标体重、体内脂肪重量(睾丸及肾周围脂肪垫)、体脂/体重比和副作用。数据分析采用《中国医学百科全书-医学统计学》统计软件包。进行方差分析。结果对体重的影响见表20。表20对大鼠体重的影响(X+SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>与正常对照组比具有显著性差异，"P〈0.01;*:P<0.05。与肥胖对照组比具有显著性差异，:P<0.01;:P<0.05。从表20可见，实验中期以后，喂饲髙脂肪高营养饲料的大鼠，其体重显著髙于正常对照组(P<0.01或P<0.05)，说明肥胖动力模型成功；各实验组灌胃不同剂量的受试物36天后，0.05g/kg.bw/d和0.15g/kg.bw/d两个剂量组动物体重和体重增加量显著低于肥胖对照组(P<0.05)。未见腹泻、脱毛等副作用，说明该受试物可降低动物的体重。对大鼠物理脂标的影响见表21。表21对大鼠物理指标的影响(X+SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>与正常对照组比具有显著性差异，**:P<0.01。与肥胖对照组比具有显著性差异，:P<0.01;P<0.05。表21可见，试验结束后，肥胖对照组的体脂重量和体脂/体重比显著高于正常对照组(P〈0.01),说明肥胖动物模型成功；试验结果结東后，0.05g/kg.bw/d和0.15g/kg.bw/d两个剂量组动物的体脂重量和三个剂量组动物的体脂/体重比显著低于肥胖对照组(P<0.01或P<0.05)。说明该受试物可降低动物的体脂重量。结论肥胖对照组动物的体重、体脂重和体脂/体重比均显著高于正常对照组(P<0.01或P<0.05);0.05g/kg.bw/d和0.15g/kg.bw/d两个试验组动物的体重和体脂重、三个试验组动物的体脂/体重比均显著低于肥胖对照组(P〈0.01或P〈0.05),说明本品在动物实验中具有减肥作用。6.0毒理学研究6.1急性毒性试验小鼠灌胃提取物每次最大耐受量为16.50g/kg，两次灌胃(间隔4小时)LD50为20.84g/kg,相当于2511临床剂量(公斤/体重)。因此，成人每天服用0.5g提取物是安全的。6.2长期毒性试验大鼠灌胃提取物26周，并分别于第4、16、26周药后处死部分试验鼠进行生化、器官指数和病理学检查。结果显示试验鼠与正常鼠之间各项组织病理学检查结果没有差异。权利要求1.一种决明属植物提取物，其特征是按重量比含有i)至少1％的橙黄决明素；ii)至少0.05％的钝叶素；和iii)至少10％的总蒽醌。全文摘要本发明涉及一种用于治疗肥胖的决明属植物提取物及其提取方法，该提取物由一种或多种蒽醌组成，按重量比含有i)至少1％橙黄决明素；ii)至少0.05％钝叶素；和iii)至少10％总蒽醌)。此外，本发明还公开了从决明属植物中提取药用活性组分的方法。本发明的提取物是一种天然的减肥组合物，可制成各种剂型的药物、食物补充剂、功能食品或饮料以及化妆品等，具有很好的减肥作用。文档编号A61K36/482GK101224233SQ20071007289公开日2008年7月23日申请日期2007年1月19日优先权日2007年1月19日发明者陈南明,黄本东申请人:重庆生态药物研究所