用于获得植物提取物和级分的方法、药物组合物及其用图
【专利说明】用于获得植物提取物和级分的方法、药物组合物及其用途 发明领域
[0001] 本发明描述一种用于获得提取物和植物级分的方法。更具体地，来自红葱 (Eleutherine plicata)的乙醇提取物中的富含萘醌的二氯甲焼级分^本发明包括这种级 分的获得方法以及一种萘醌的鉴定。分析所述萘醌并且它展示抗疟原虫活性、特别地对抗 耐氯喹的恶性疱原虫（Plasmodium falciparum)(克隆W2) 〇 现有技术
[0002] 红葱（E. Plicata)是美洲（包括巴西亚马逊的干旱田野）热带天然植物，俗称 玛鲁巴兹诺（marupazinho)、玛鲁巴利（marupari)、巴姆梅林亚（palmeirinha)、扣奎因 纽（coquinho)、玛鲁派伊（marupai)、玛鲁博（marupaii)、玛鲁巴比兰戈（marupdi-piranga) 和丽鲁福里阿德巴姆梅拉（lirio-folha-de-palmeira) D沿途植物调查在美里河口 县（PA，巴西）通过半结构化采访进行并证实红葱（marupazinho)的用途D来自这 个地区的人使用由其鳞茎制成的茶治疗腹泻、阿米巴病、肠道感染、肝病、出血和贫 血(PINTO, L. N. Plantas medicinais utilizadas em comunidades do municlpio de Igarape-Miri/PA:etnofarmacia do Municlpio de Igarape-Miri/PA. 2008. 98f. Master thesis-Programa de Pos- graduagSo em Ciencias Farmaceuticasj Universidade Federal do Pardi，Par02008(PINT0，LN.在 Igarap6_Miri/PA 用于市政社区的药用植物： etnofarmdicia城市Igarap6，Miri/PA. 2008. 98f.硕士论文-医药科学研究生项目，帕拉州 联邦大学，帕拉州2008年））。
[0003] 从红葱属（Eleutherine)诸物种分离萘醌，其中来自这个类别的物质已经展 示抗疟活性。有效抗疟原虫的活性萘醌的例子是阿托伐醌（atovacona)，结构上与黄 钟花醌（一种在黄钟木属（Tabebuia)(包括ipgs的属，南美洲存在的树）诸物种中常 见的异戊烯基萘醌）相关的合成萘醌（MIRAGLIA，M.C.M. Estudo quimico de Tabebuia serratifolia(Vahl.) Nichols (Bignoniaceae) e slntese de piranonaftoquinonas, fura nonaftoquinonas e antraquinonas.1991.326p. (MIRAGLIA，M.C.M.尼科尔斯（紫葳科） 的Tabebuia serratifolia(Vahl.)的化学研究以及吡喃萘醌、咲喃萘醌和蒽醌的合成 1991 第 326 页）Tese (Doutorado. Departamento de Quimica), Universidade Federal de Minas Gerais，Minas Gerais.，1991(博士论文，化学系，米纳斯吉拉斯州联邦大学，巴西， 1991))。阿托伐醌抑制在寄生虫中催化尿苷单磷酸合成的二氢乳酸脱氢酶（diidroorotate desidrogenase)〇
[0004] 值得注意的是许多萘醌，例如从红葱分离的一种萘醌，尚未在恶性疟原虫中评 价D已经从红葱分离红葱甲素（eleuterol)和红葱丙素（isoeleutherine) (MALHEIR0S，L C. S. Isoeleutherol and Isoeleutherine:oeleuteroI e IsoeIeuterina:Potenciais marcadores qulmicos da tintura de Eleutherine plicata Herb. (Iridaceae) e atividades microbiologica e antioxidante Master thesis-Programa de Pos- gradua^So em Ciencias Farmaceuticasj Universidade Federal do Pardi，Par02008(MALHEIR0S，L.C.S·异艾植脑和红葱丙素：对红葱 Eleutherine plicata Herb.浸提物（鸢尾科）潜在的化学指标以及微生物活性和抗氧化活性硕士论文-医药科 学的研宄生项目，帕拉州联邦大学，2008年帕拉））。然而，乙醇提取物和其级分的抗疟原虫 活性首次由Edinilza Borges的硕士论文评价，并且它非常有前景。
[0005] 从红葱鳞茎获得的乙醇提取物及其级分通过HRP-II技术（N0EDL等人，2002)接 受抗疟原虫活性检验。在琼脂上的扩散分析中，浓度500 μ g/mL的乙醇提取物和二氯甲 烷级分及乙酸乙酯级分在金黄色葡萄球菌（S. aureus)中有活性。在另一方面，甲醇级分 在任何细菌（金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa)和大肠杆菌 (Escherichia coli))以及真菌（白假丝酵母（Candida albicans))中没有活性。活性提 取物和级分接受微量稀释检验，乙醇提取物的抑制浓度（MIC)是500 μ g/ml，乙酸乙酯级分 的MIC是250 μ g/ml并且二氯甲烷级分的MIC是125 μ g/ml。因此，分级改善抗微生物活 性，二氯甲烷级分是最有有活性的级分并富含萘醌。为了评估潜在杀细菌剂，提取物和级分 接受微量稀释检验，随后进行传代培养，其中最低杀细菌浓度（MBC)高于1000 μ g/ml，显示 其抗微生物活性属于抑菌类型。
[0006] 从红葱鳞茎获得的乙醇提取物接受卤虫（A. salina)毒性测定法，计数活动物和 死动物。在24小时后，Probitos分析法用来获得LD5tl值及其置信区间（MEYER等人，1982)， 产生以下结果（1000 μ g/mL>LD5(l)，这表明这种提取物在卤虫中具有低毒性。卤虫中的毒性 检验是一项广泛使用的生物检验，因为它快速、可靠、成本低并且显示与多种生物活性的良 好相关性（MEYER等人，1982)。
[0007] 专利申请 JP20080020163 20080131 (A61K31/708 ;国际分类：A61P35/00 ; C07H1704 ;A61K36/18)描述了分离红葱狗尾草（Eleutherine palmifolia)(鸾尾科 (Iridaceae))的甲醇提取物的刺五加苷A。该化合物可用于治疗癌症。
[0008] 专利申请 CN20051119690 20051128(国际分类：A61K36/28 ;A61K36/748 ; A61P19/00 ;A61P29/00 ;C12G3/02)描述了红葱对类风湿性关节炎、风湿性关节炎、风湿性 休眠 （rheumatic dormancy)和肌痛、软组织挫伤和创伤损伤的活性。
[0009] 专利申请 JP20050153747 20050526(国际分类：A23L1/30 ;A61K36/00 ; A61K36/18 ;A61K36/81 ;A61P25/00 ;A61P3/02)提供一种新的疲劳恢复剂，其特征在于 存在至少一个红葱属植物物种（鸾尾科（Iridaceae))、前属（Solanum)植物物种（前 科（Solanaceae))、桉属（Eucalyptus)植物物种（桃金娘科（Myrtaceae))、黄钟木属 (Tabebuia)植物物种（紫葳科（Bignoniaceae))和/或该植物的提取物作为有效成分。
[0010] 专利申请 JP20040071888 20040315/ 申请 TO 2005JP04415 20050314(国际分 类：A23L1/30 ;A61K36/00 ;A61K36/185 ;A61K36/47 ;A61K36/48 ;A61K36/53 ;A61K36/77 ; A61K36/85 ；A61K36/88 ；A61P13/08 ；A61P43/00 ；C12N9/99 ； (IPC1-7) ：A23Ll/30 ； A61K35/78 ;A61P13/08 ;A61P43/00 ;C12N9/99 以及欧洲分类：A23L1/30B ;A61K36/185 ; A61K36/47 ;A61K36/48 ;A61K36/53 ;A61K36/77 ;A61K36/85 ;A61K36/88)意在提供一种新 的睾酮5-α -还原酶抑制剂和一种用于抑制前列腺肥大的组合物。这种产品必须含有一 种或多种属于以下属的植物：异木患属（Allophylus)、猴耳环属（Archidendron)、紫矿属 (Butea)、山菅属（Dianella)、红葱属、风吹楠属（Horsfieldia)、泡花树属（Meliosma)、鸡 脚参属（Orthosiphon)、叶下珠属（Phyllanthus)、五层龙属（Salacia)和牡荆属（Vitex)。
[0011] 专利申请 JP20020266273 20020912(国际分类：A23L1/30 ;A23L2/38 ;A23L2/52 ; A61K36/00 ；A61K36/02 ；A61K36/18 ；A61K36/81 ；A61P3/04 ； (IPC1-7) ：A23Ll/30 ； A23L2/38 ;A23L2/52 ;A61K35/78 ;A61K35/80 ;A61P3/04)旨在提供一种用于减少植物脂肪 的有效预防和治疗肥胖症和相关疾病的食品和饮料。这种食品由藻类、植物或提取物（黄 钟木属、红葱属、茄属、桃金娘科和桉属）组成。
[0012] 除这些文献之外，还值得提到的是，红葱位列国家公共卫生体系（巴西）药用植物 名录中，但是不存在常规用于疟疾和发热疾病的主张。
[0013] 来自现有技术的问题
[0014] 恶性疟原虫已经迅速获得针对可用药物的抗性。氯喹广泛用于治疗恶性疟疾并且 使用氯喹的理由是：该药物具有低毒性并且是经济可行的。
[0015] 归因于寄生体对氯喹的抗性日益增长，必需引入新药物，如青蒿