专利名称：应用聚乙烯泡沫封堵法建立Beagle犬心肌梗死模型的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种应用聚乙烯泡沫封堵法建立心肌梗死模型的方法。
技术背景冠心病已经成为了世界上的头号杀手。因此研究冠心病的发病机理也成为 研究热点。急性心肌梗死是冠心病发展的危重阶段。因此如何建立良好的，可 重复性的急性心肌梗死实验动物模型也成为研究冠心病的基础和前提。Beagle 犬作为一个品系具有品种固定且优良，遗传性能稳定的特点。 一般无遗传性神 经疾患，在研究工作中重复性好而稳定。且犬的许多特性和人比较接近。在以 犬作为实验动物的研究成果中，只有应用Beagle才能被国际公认。因此Beagle 犬一直是经典的实验动物。尤其适合药理、循环生理、眼科、毒理、外科学等 的研究。用Beagle犬来作为心肌梗死模型成为了一个比较理想的选择。同时，由于心肌梗死本身死亡率高的特点，决定了制作心肌梗死模型比较 困难。因此如何建立一个稳定的，可重复性好，操作简便可行，成功率高的心 肌梗死模型成了 一个很重要的课题。目前，已经报道了的多种动物心肌梗死模型。常用的方法是开胸结扎冠状 动脉前降支或回旋支远端，但是所需时间长，动物麻醉方式复杂，而且需要进行 气管插管和呼吸机辅助机械通气，具有死亡率高而创伤大、术后恢复较慢，难以 饲养，掌握本法时间长等多方面的缺点[1'2]。也有报道使用连续多次用微球注射 的方法栓塞冠状动脉，这种模型不需手术，但要反复多次注射，堵塞效果不明确 [3]。还有在猪模型上应用ameroid縮窄环产生冬眠心肌的报道，但这种方法也要 小切口开胸安置ameroid环，且完全堵塞后不能产生持久的异常室壁运动[4]。曾 有人报道使用应用PTCA球囊封堵冠状动脉90min来建立犬急性心肌梗死动物模 型的实验方法。这种方法堵塞冠脉不确切，手术时间比较长，容易增加动物的 死亡率[5]。目前随着冠脉介入技术的不断成熟，通过介入方法来直接堵塞冠脉，从而 造成心梗模型的也随之成为了可能[6]。采用动脉直视下穿刺的方法可以尽可能地 保护动脉，从而减少动物的致残率，为慢性试验提供足够的动脉通路，也为动 物的长期存活打下良好的基础。 参考文献 [1] Wang QD， Li XS， Lundberg JM， et al. Protective effects of non peptideendothelium receptor antagonist bosentan on myocardial ischemic andreperfusion injury in the pig. Cardiovasc Res, 1995,29:805-812. [2]李醒三,曾志羽,易忠,等.急性心梗逆行冠状静脉灌注猪动物模型制作.广西医科大学学报，1999,16:828-829. [3] Sabbah HN, Stein PD， Kono T， et al. A canine model of chronic heart failureproduced by multiple sequential coronary microembolizations. Am J Physiol,1991,260:1379-1384. [4] Harada K, GrossmanW， FriedmanM, et al. Basic fibroblast growth factorimproves myocardial function in chronically ischemic porcine hearts. J ClinInvest, 1994,94:623-630. [5]金艳，曹克将，王晖等.微创球囊堵闭法建立猪心肌梗死模型及其手术并发症的预防和处理.中国微循环，2006,10:62-65. 问 Reffelmann T， SensebatO， Birubaum Y， et al. A novel minimal invasive modelof chronic myocardial infarction in swine. Coron Artery Dis, 2004,15:7-12. 发明内容本发明的目的是提供一种稳定，可靠，实用性强的应用聚乙烯泡沬封堵法 建立心肌梗死模型的方法。包括如下步骤1) 犬术前禁食12 16小时，禁水4 6小时，采用3%戊巴比妥钠l 2ml/kg，腹腔注射全麻；2) 将犬头部，四肢固定于导管床上，胸部，四肢局部去毛，连接12导联 体表心电图，皮肤消毒、铺巾，切开皮肤，逐层分离，分离出颈总动脉；3) 通过穿刺针迅速送入导丝，沿导丝送入6F动脉鞘管，随即静脉注入肝 素800 1000U，用冠状动脉造影导管置于左主干开口进行左冠状动脉造影，得 到造影结果；4) 将冠状动脉指引导管置于左主干开口，经冠状动脉指引导管置入0.014 英寸的PTCA (经皮冠状动脉腔内成形术)导丝至左冠前降支远端，经PTCA导 丝置入2.5mm 3mm的球囊，以4 6个大气压打开球囊，每次球囊充盈50 60秒后放开以恢复血流，间隔2 3min重复充盈球囊，共预适应2 3次，根 据造影结果，评估血管直径，把已经消毒的聚乙烯泡沫剪成栓子，将其穿入PTCA 导丝上，应用球囊推送至预扩张处，即左冠状动脉前降支远端l/3 2/5处，心
电监护提示ST — T段抬高，直至形成单向曲线，再次造影，证实血管被完全闭塞后依次退出球囊、鞘管，用prolene线做荷包结扎血管止血，逐层缝合皮肤， 术中连续心电监护；术后特别注意保暖和动物的制动，注意保持犬的呼吸道通 畅，防止窒息意外的发生。所述的犬为Beagle犬。颈总动脉为右侧颈总动脉。本发明具有的有益效果1) 本发明使用的聚乙烯泡沬具有不透X光的特点，增加可操作性，提高造 模的成功率；2) 本发明建议使用的Beagle具有遗传性能稳定，实验重复性良好；3) 本发明提供的造心肌梗死模型的即刻存活率为83.3%,心肌梗死后两周内 的存活率为66.6%;4) 本发明建立心肌梗死模型封堵的血管是左冠状动脉前降支远端1/3 2/5 处，动物容易存活，造模型的成功率高。
图1是犬梗死前正常的12导联同步心电图； 图2是犬心肌梗死后12导联同步心电图； 图3是犬正常左冠状动脉造影；图4是球囊进入犬左冠状动脉远端进行缺血预适应； 图5是左冠状动脉被堵塞，造成心肌梗塞模型。
具体实施方式
应用聚乙烯泡沫封堵法建立心肌梗死模型的方法包括如下步骤1) Beagle犬，30只，雌雄各半，大小为10 13公斤，由浙江中医药大学 动物实验中心提供。犬术前禁食12 16小时，禁水4 6小时，采用3%戊巴比 妥钠1 2ml/kg，腹腔注射全麻，麻醉药给药途径也可以选择戊巴比妥钠静脉麻 醉。也可以使用其它类型的麻醉药物。主要要求是犬能够耐受，并安全、平稳 地度过手术关；所用的实验器材包括C型臂X光机H5000, PHILIPS公司；心电监护仪 器PruckaEnginerring公司的多导生理记录仪器；76%泛影葡氨稀释成50%的注射液。2) 将犬头部，四肢固定于导管床上，胸部，四肢局部去毛，连接12导联 体表心电图，皮肤消毒、铺巾，切开皮肤，逐层分离，分离出颈总动脉；3) 通过穿刺针迅速送入导丝，沿导丝送入6F动脉鞘管，使用的造影导管
大小是6F的，太粗或太细都不利于造影和封堵的进行。随即静脉注入肝素800 1000U，肝素太少容易血管堵塞，而肝素太多容易导致出血的发生。用冠状动脉 造影导管置于左主干开口进行左冠状动脉造影，得到造影结果；4)将冠状动脉指引导管置于左主干开口，经冠状动脉指引导管置入0.014 英寸的PTCA导丝至左冠前降支远端，经PTCA导丝置入2.5mm 3mm的球囊， 以4 6个大气压打开球囊，每次球囊充盈50 60秒后放开以恢复血流，间隔 2 3min重复充盈球囊，共预适应2 3次，根据造影结果，评估血管直径，把 已经消毒的聚乙烯泡沫剪成栓子，将其穿入PTCA导丝上，应用球囊推送至预 扩张处，即左冠状动脉前降支远端1/3 2/5处，心电监护提示ST—T段抬高， 直至形成单向曲线，再次造影，证实血管被完全闭塞后依次退出球囊、鞘管， 用prolene线做荷包结扎血管止血，逐层缝合皮肤，术中连续心电监护；术后特 别注意保暖和动物的制动，注意保持犬的呼吸道通畅，防止窒息意外的发生。手术成功率全部30头Beagle犬造影均成功，1只因为冠脉破裂，心包填 塞死亡，2只犬因为室速室颤死亡。2只出现ni度房室传导阻滞死亡。总的手 术成功率83.3%，术中死亡率为16.7%，术后两周内死亡ll只(36.7%)， 2周 的存活率为66.6%，其中术后24小时内死亡9只(30%)。术后第4天和第10 天分别有1条犬死亡。采用荷包缝合的方法没有一例出现颈部血肿，或出现因 为血肿导致的窒息。也没有一例出现创口感染。聚乙烯泡沬是临床上可用来作为先天性心脏病的封堵的材料。正是由于其 不透X光线的特性，使其可以直接在X光透视下看到其移动，有利于掌握堵塞 冠脉的准确的位置。材料可以根据冠脉直径的大小来自己制作，方便实用。本实验通过心脏导管的介入方法，将聚乙烯泡沫栓子送至左冠状动脉前降 支远端约l/3处，来制作心肌梗死模型。具有费时短，效果确切的优点，而且操 作方便。试验中采用了缺血预适应，提高犬对缺血的耐受性，降低制造心肌梗 死时的犬的死亡率。选择栓塞冠脉的位置以前降支远端约1/3 2/5处为好，梗死位置太高，容 易导致室速、室颤，增加死亡率，太低又不能达到实验需求的梗死面积。使用本方法建立心肌梗死模型后，Beagle犬可以存活2周以上，说明本方 法可以提供长期存活的缺血性心脏病的模型。从而为临床药理、毒理研究提供 了良好的研究平台。这项技术比起传统的开胸结扎冠状动脉来制作动物模型具 有更安全有效，更具可控性的优点。
权利要求
1.一种应用聚乙烯泡沫封堵法建立心肌梗死模型的方法，其特征在于包括如下步骤1)犬术前禁食12～16小时，禁水4～6小时，采用3％戊巴比妥钠1～2ml/kg，腹腔注射全麻；2)将犬头部，四肢固定于导管床上，胸部，四肢局部去毛，连接12导联体表心电图，皮肤消毒、铺巾，切开皮肤，逐层分离，分离出颈总动脉；3)通过穿刺针迅速送入导丝，沿导丝送入6F动脉鞘管，随即静脉注入肝素800～1000U，用冠状动脉造影导管置于左主干开口进行左冠状动脉造影，得到造影结果；4)将冠状动脉指引导管置于左主干开口，经冠状动脉指引导管置入0.014英寸的PTCA导丝至左冠前降支远端，经PTCA导丝置入2.5mm～3mm的球囊，以4～6个大气压打开球囊，每次球囊充盈50～60秒后放开以恢复血流，间隔2～3min重复充盈球囊，共预适应2～3次，根据造影结果，评估血管直径，把已经消毒的聚乙烯泡沫剪成栓子，将其穿入PTCA导丝上，应用球囊推送至预扩张处，即左冠状动脉前降支远端1/3～2/5处，心电监护提示ST-T段抬高，直至形成单向曲线，再次造影，证实血管被完全闭塞后依次退出球囊、鞘管，用prolene线做荷包结扎血管止血，逐层缝合皮肤，术中连续心电监护；术后特别注意保暖和动物的制动，注意保持犬的呼吸道通畅，防止窒息意外的发生。
2. 根据权利要求1所述的一种应用聚乙烯泡沬封堵法建立心肌梗死模型的 方法，其特征在于所述的犬为Beagle犬。
3. 根据权利要求1所述的一种应用聚乙烯泡沫封堵法建立心肌梗死模型的 方法，其特征在于所述的颈总动脉为右侧颈总动脉。
全文摘要
本发明公开了一种应用聚乙烯泡沫封堵法建立心肌梗死模型的方法。通过心导管技术用聚乙烯泡沫封堵法封堵Beagle犬的左冠状动脉，建立慢性心肌梗死的动物模型。30头10-12Kg的Beagle犬，全麻后经颈总动脉，先行缺血预适应后，用聚乙烯泡沫经导管栓塞左前降支远端约1/3处，造成心肌梗死模型。所有犬造影均成功，术中1只犬因为冠脉破裂，心包填塞死亡，2只犬术中室速室颤死亡。2只犬术中出现III度房室传导阻滞死亡。其余的犬均造模成功。手术即刻存活率为83.3％，术后两周内的存活率为66.6％。用不透X光的聚乙烯泡沫栓子封堵法制作心肌梗死模型效果明确，接近临床病理生理过程，可重复性好，比传统的开胸结扎冠状动脉更安全，可作为研究心肌缺血的实验平台。
文档编号A61B19/00GK101156805SQ200710156588
公开日2008年4月9日 申请日期2007年11月9日 优先权日2007年11月9日
发明者锋 凌, 沈法荣, 金红峰, 黄杼伟 申请人:浙江医院