一种含有克林霉素的复方凝胶剂的制作方法

专利名称：：一种含有克林霉素的复方凝胶剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种含有克林霉素或其可药用盐或酯的复方凝胶剂，具体涉及含有克林霉素或其可药用盐或酯、维A酸和含纤维素类衍生物的凝胶剂基质的复方凝胶剂及其制备方法和分析检测方法。
背景技术：
：-痤疮是一种常见的疾病，90%以上的青少年都患有痤疮；甚至在40岁左右大约还有5%的女性和1%的男性都患有此病。痤疮好发于人们的面部，不但给患者的身体带来痛苦，还影响患者外貌，从而给患者带来精神压力。所以治疗痤疮的药物市场前景良好，估计市场规模为5亿一20亿美元。目前痤疮药物品种繁多，市场竞争也越来越激烈，因此，研制具有更有特点的新药有着重要的意义。痤疫的发病原因很多，一般认为其主要因素有二一是青春期雄性激素分泌增多，引起皮脂腺肿大，皮脂腺分泌增多，同时使毛囊、皮脂腺导管角化栓塞，皮脂淤积于毛囊形成脂栓，即粉刺。二是在厌氧环境下，痤疮丙酸杆菌等厌氧菌大量增生繁殖，产生溶脂酶，分解皮脂产生游离酸，刺激毛囊引起炎症；致使毛囊壁损伤破裂，淤积的皮脂进入真皮内，从而引起毛囊周围程度不等的炎症反应。目前用于治疗痤疮的药物主要就是针对以上两种发病机理的一类是维A酸类化合物，如维A酸、异维A酸等。异维A酸(Isotretinoin)是维A酸(Tretinoin)的异构体，是众多维A酸类化合物中疗效高、耐受性好的治疗痤疮的药物。近年来，异维A酸已被国内外皮肤科医生广泛用于临床治疗各种皮肤病，如痤疮、酒糟鼻、皮脂溢出症、脂溢性皮炎等。异维A酸具有抑制角化细胞增生、防止角质栓塞，抑制皮质腺分泌及皮脂生成、抑制蛋白产生，使痤疮皮损消退等作用，对治疗痤疮有显著疗效，特别是用于重型痤疮，已经成为治疗重型痤疮的首选药物，被收载入2005版中国药典。异维A酸可以口服给药，也可以局部给药。由于维A酸类似物有一定胚胎毒性和致畸作用，使得口服异维A酸类药物的应用受到限制。局部用维A酸类似物低浓度时即具有治疗作用，具有较高的皮肤浓度，向系统扩散，系统负载量低或难以测出；局部使用用维A酸类药物的药代动力学明显优于口服维甲酸，它们能定向作用于耙位，系统毒性大为降低。英国施泰福药厂(Stiefel)生产的含异维A酸为0.05X的爱素思凝胶(lS0TREXGel)已有上市，适应症为局部寻常性粉剌的治疗。在大鼠身上进行的生殖试验结果显示局部应用量为人的60倍的爱素思凝胶(0.05X的异维A酸凝胶)时，对鼠胎没有任何损害。另一类常用于痤疮的药物是抗生素类药，如红霉素、克林霉素、甲硝唑、氯霉素、氯洁霉素等等，其主要机理为杀灭导致局部炎症的痤疮丙酸杆菌。痤疮的发生与多种因素有关。当雄激素分泌过度，刺激皮脂分泌增加，助长了细菌的繁殖。细菌(主要是痤疮棒状杆菌)在脂酶的作用下，可产生较多的游离脂肪酸，使毛囊及毛囊周围发生炎症反应，进而刺激毛囊角化，阻塞毛囊管引起炎症而形成痤疮。克林霉素磷酸酯通过对细菌蛋白质早期合成的抑制作用，抑制了痤疮棒状杆菌，消除了炎症，从而达到治疗痤疮的目的。克林霉素是一种常见的抗生素，主要的盐和衍生物为盐酸克林霉素、磷酸克林霉素、克林霉素磷酸酯等。克林霉素磷酸酯为脂溶性及渗透性比克林霉素单体好，可水解成克林霉素发挥抗菌作用，尤对痤疮丙酸杆菌具有较好的抗菌活性。维A酸(Tretinoin)又称维甲酸，它可抑制表皮细胞角化过度、细胞增殖，具有抗肿瘤的作用；还能抑制皮脂腺分泌，减少或清除皮肤表面与痤疮有关的致病菌，以减少痤疮的炎症反应；可抗皮肤老化，使皮肤柔嫩，皱纹减少，减退过度沉着的色素；可抑制表皮增生，调节免疫功能。用于治疗痤疮、黄褐斑、银屑病、角化异常性皮肤病、光老化性皮肤病、皮肤肿瘤等疾病。维A酸系体内维生素A(维甲醇)的代谢中间产物，作用机理在于主要影响骨的生长和上皮代谢，可能具有促进上皮细胞增生分化、角质溶解等作用，由于桥粒细胞(细胞间桥小体)脱落、张力丝降低、角化细胞fl体溶解增加和糖原的细胞内沉淀而使囊状角质细胞不易粘着。1986年首次报道了本品可治疗光照损伤性皮肤病，并进一步为临床学和组织学两方面试验所证实。适用于寻常性痤疮、扁平苔藓(包括口腔扁平苔藓)、白斑、毛发红糠疹和面部单纯糠疹等。亦可用于治疗多发性寻常疣以及角化异常类的各种皮肤病如鱼鳞病、毛囊角化症等。本品常作为外用制剂。其主要作用为降低导致微小粉剌形成的角化(即痤疮的最初损害)。综上所述，采用和维A酸类药物制成的复方制剂，综合两类药物的作用机理，用于治疗伴有局部感染的座疮，具有明显的效果。克林霉素抗生素或其可药用盐或酯和维A酸的重量比在]:0.1-0.001(W/W)之间(以克林霉素单体计)。凝胶剂系指药物与能形成凝胶的辅料制成均一、混悬或乳状液型的稠厚液体或半固体制剂。凝胶剂限局部用于皮肤及体腔如鼻腔、阴道和直肠。乳状液型凝胶剂又称乳胶剂。由天然高分子基质如西黄蓍胶制成的凝胶剂，也可称为胶浆齐'j。小分子无机药物(如氢氧化铝)凝胶剂是由分散系统的药物胶体小粒子以网状结构存在于液体中，属两相分散系统，也称混悬型凝胶剂。混悬型凝胶剂可有触变性，静止时形成半固体而搅拌或振摇时成为液体。凝胶剂基质属单相分散系统，有水性与油性之分。水性凝胶基质一般由水、甘油或丙二醇与纤维素衍生物、卡波姆和海藻酸盐、西黄蓍胶、明胶、淀粉等构成；油性凝胶基质由液状石蜡与聚乙烯或脂肪油与胶体硅或铝皂、锌皂构成。因临床应用较多的是以水性凝胶为基质的凝胶剂，故一般提及凝胶均是水凝胶剂。制备凝胶选用的基质和辅料在本领域一般是已知的，典型实例包括卡波姆、泊洛沙姆、纤维素衍生物，另外还包括抗氧剂如二丁基羟基甲苯，辅助抗氧剂柠檬酸和抑菌防腐剂等。专利W02006089070公开了一种含有克林霉素磷酸酯和维甲酸痤疮的复方凝胶的制备方法，将含有卡泊姆、丙二醇和水作为第一相，将含有维A酸、聚乙二醇单十二醚、尼泊金甲酯等的混合物作为第二相，将含有克林霉素磷酸酯和枸橼酸、氨基丁三醇的水溶液作为第三相，将第二相加入到第一相中得到混合物，再将第三相加入混合物中，置于真空中搅拌，冷却，此过程需要通氮气保护，以排除氧气。WO03092621公开了一种用于治疗痤疮和其他一些皮肤病的脂质体，该脂质体含有克林霉素磷酸酯和维甲酸，发明的内容是将维甲酸类药物分散于脂质相中后在分散于分散含有抗生素克林霉素磷酸酯凝胶相中，其凝胶基质为卡泊姆。该方法制备方案较烦琐，步骤长达15步，且由于用到C18C20的长链脂肪族化合物，其在水相中的稳定性欠佳，且并不属于凝胶体系。CN1217913,公开了维甲酸与盐酸氯林可霉素(即盐酸克林霉素)的软膏制剂，使用了氮酮作为表皮促渗剂，采用用了长链脂肪族化合物为基质。CN200610038624本发明公开了一种由卡波姆，甘油，丙二醇，吐温，三乙醇胺，克林霉素磷酸酯(按克林霉素计)，维甲酸，EDTA及蒸馏水等原料制成的凝胶剂，其制备方法是将卡波姆撒于适量蒸馏水中加入甘油、丙二醇少量，充分溶胀，先加三乙醇铵少量搅拌使成透明凝胶基质；取克林霉素磷酸酯用水溶解，维甲酸用丙二醇、吐温溶解；将上述药液依次加入到基质中，慢加快搅，加EDTA、丙二醇、补足蒸馏水至1000g，继续搅匀，得淡黄色透明的复方维甲酸凝胶剂。由于采用了卡波姆、甘油、丙二醇、三乙醇胺、吐温等辅料，通过实验发现，由这些辅料组成的基质会对克林霉素的检测产生干扰，从而不能对凝胶的质量进行有效的控制和评价。而且辅料应用种类较多，步骤较复杂烦琐，因卡泊姆需要较长时间溶胀，因此生产过程耗时太长，成本增高。EP0479518公开了一种治疗痤疮的复方维甲酸凝胶制剂和制备方法，其制备方法是将先将克林霉素磷酸酯溶于水、丙二醇和一定量工业级甲醇中，然后卡波姆撒入，使之溶胀完全，制得水性胶体。将维甲酸和没食子酸丙酯溶于剩余的工业级甲醇中，加入乙二胺，溶解后制得醇溶液。将醇溶液缓慢加入到水性胶体中，制得凝胶。该发明同样使用了卡波姆等辅料为凝胶基质，因此生产过程耗时太长，而且还使用了药品和化妆品中禁止使用的工业级甲醇。上面几个专利提及的凝胶的基质和制备方法均不完善。它们或有质量分析问题，或制备方法烦琐，或含有有毒有害物质，本发明人在研究治疗痤疮的含有克林霉素或其可药用盐或酯的复方凝胶剂时，意外的发现釆用纤维素衍生物作为凝胶基质，采用在乙醇中分散制备的方法解决了上述缺陷。由于克林霉素及其可药用盐或酯是从微生物发酵液中提取制得的，所以杂质很复杂，若制备凝胶剂所选用的高分子物质不当，尤其是卡波姆会遇到测定干扰的问题。而且，由于克林霉素及其可药用盐或酯是水溶性较强的物质，而维a酸却不溶于水，在检测时必须采用不同的条件，这也增加了凝胶检测的难度。高分子材料还会因为其较黏稠的性质，造成凝胶分散不均、堵塞分析用色谱柱等问题。目前未发现解决这些问题的方法，本发明采用了一种特别的检测方法可解决这些问题。
发明内容本发明的目的之一提供了一种含有克林霉素或其可药用盐或酯的复方凝胶剂，该凝胶剂包含有效量的克林霉素或其可药用盐或酯、维a酸和凝胶基质，其特征在于凝胶基质为纤维素类衍生物。所述的克林霉素或其可药用盐或酯包括以下物质中的至少一种克林霉素、磷酸克林霉素、盐酸克林霉素、克林霉素磷酸酯，优选克林霉素磷酸酯。克林霉素抗生素或其可药用盐或酯和维a酸的重量比在i:o.l-o.ooi之间，优选i:o.05-o.oi(w/w，以克林霉素单体计)。上述本发明的凝胶剂，所述的纤维素类衍生物包括以下物质中的至少一种甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟乙基纤维素、羟乙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素，优选甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟乙基甲基纤维或乙基纤维素，其用量根据粘度的不同，纤维素类衍生物高分子材料在凝胶剂中的用量可在0.5%-50%(w/w)，优选1.0%-20%(w/w)之间。上述本发明的凝胶剂还包括抗氧剂和溶剂，所说的抗氧剂包括脂溶性抗氧剂和水溶性抗氧剂，脂溶性抗氧剂包括二丁基羟基甲苯及其衍生物、叔丁基对羟基茴香醚及其衍生物、生育酚及其衍生物，如醋酸生育酚、没食子酸或没食子酸衍生物，如没食子酸乙酯、丙酯，优选二丁基羟基甲苯或叔丁基对羟基茴香醚，水溶性抗氧剂包括但不限于亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钾、维生素c、半胱氨酸、甘氨酸、谷胱甘肽、硫代甘油、酒石酸、琥珀酸、苹果酸、枸橼酸、枸橼酸钠、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸钠，优选枸橼酸或其钠±卜血。所说的溶剂为醇和水，醇选自下列物质中的至少一种乙醇、丙醇、丙二醇、丙三醇、异丙醇、丁醇、聚乙二醇200和聚乙二醇400，优选乙醇、丙醇、丙二醇、丙三醇或聚乙二醇400。本发明的凝胶剂克服了卡波姆凝胶基质对克林霉素测定的干扰、有利于产品的检测和质量控制，同时制备更简单、成本低、更适合工业化生产。本发明的另一目的是提供了一种制备含有克林霉素或其可药用盐或酯的复方凝胶剂的方法，该方法以下过程(a)将纤维素类衍生物高分子材料加入到溶有维A酸、脂溶性抗氧剂的醇中，搅拌使之分散，得到混悬液；(b)将克林霉素磷酸酯、水溶性抗氧剂或/和辅助性抗氧剂溶于水，得到水溶液；(c)将(b)步骤的水溶液缓慢加入(a)歩骤的混悬液中，边加边搅拌，制得凝胶。t述制备方法和目前已知的制备方法相比，制备过程明显简化，且不含工业甲醇等有害物质。由于是将纤维素类衍生物高分子材料先加入到醇中搅拌分散，形成纤维素类衍生物高分子微小颗粒，再加入水溶液溶胀，所以溶胀过程明显缩短，起到了节约制备时间的效果。上述的制备方法尤其适用于本发明的凝胶剂的制备。纤维素类衍生物高分子材料可以避免用卡波姆所遇到的克林霉素磷酸酯、维A酸测定干扰的问题，影响产品质量的控制。其原理在于一是纤维素类衍生物高分子材料在液相色谱中保留时间适中，离克林霉素磷酸酯、维A酸的主药峰较远，可以避开大多数的杂质。而卡波姆在3分钟到5分钟会有色谱峰，在20分钟左右还会出峰，前者会对克林霉素的杂质检测产生干扰，后者会对克林霉素主药产生干扰，造成的干扰问题并不能通过简单的改变色谱流动相体系的方法来解决问题；二是可以通过沉淀纤维素类衍生物高分子的方法来除去纤维素类衍生物高分子，从而降低干扰。根据粘度的不同，纤维素类衍生物高分子材料在凝胶剂中的用量可在O.5%-50%(W/W)，优选1.0%-20%(W/W)之间。上述本发明的制备方法，脂溶性抗氧剂包括二丁基羟基甲苯及其衍生物、叔丁基对羟基茴香醚及其衍生物、生育酚及其衍生物，如醋酸生育酚、没食子酸或没食子酸衍生物，如没食子酸乙酯、丙酯，优选二丁基羟基甲苯或叔丁基对羟基茴香醚，水溶性抗氧剂包括但不限于亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钾、维生素C、半胱氨酸、甘氨酸、谷胱甘肽、硫代甘油、酒石酸、琥珀酸、苹果酸、枸橼酸、枸橼酸钠、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸钠，优选枸橼酸或其钠盐。上述本发明的制备方法，所说的醇选自下列物质中的至少一种乙醇、丙醇、丙二醇、丙三醇、异丙醇、丁醇、聚乙二醇200和聚乙二醇400，优选乙醇、丙醇、丙二醇、丙三醇或聚乙二醇400。所述的醇的用量在10%—50%(W/W)，优选25-35%(W/W)。本发明的再一目的提供了一种含有克林霉素或其可药用盐或酯的复方凝胶剂的检测方法，其特征在于先在凝胶中加入一种足以使纤维素类衍生物沉淀的试剂，待纤维素类衍生物沉淀后再使用高效液相色谱法检测。这里所说复方凝胶剂主要是指本发明的凝胶剂，即其特征在于凝胶基质为纤维素类衍生物的含有克林霉素或其可药用盐或酯的复方凝胶剂。上述本发明的检测方法，其中，所说的足以使纤维素类衍生物沉淀的试剂选自以下物质中的至少一种加酸、加碱、加有机试剂、加盐、加重金属离子，优选加硫酸镁、氯化汞、硼酸氯化钾缓冲液或它们的混合物；其中，所述的高效液相色谱法，其特征在于检测克林霉素磷酸酯时，在进样后的最初至少15分钟内，水相占流动相的比例不得低于80%(V/V)，其中所述的水相含有磷酸盐的缓冲液。本发明的制备方法还可以适用于其它各类活性组分的凝胶剂的制备，如任何已知的细胞生长抑制剂、软化角蛋白剂、抗生素和抗微生物剂、非甾体抗炎药、局部麻醉药、皮质甾体类药、皮肤治疗药等。细胞生长抑制剂包括烷基化剂、酶抑制剂、增生抑制剂、DNA合成抑制剂、溶解剂、DNA嵌入剂、代谢拮抗剂等等。作为例证的试剂包括类固醇、紫衫醇、伊屋诺霉素(ionomycin)、鬼臼乙又甙、亚硝基脲例如亚稍脲氮芥(BCNU)、柔红霉素(c)aunoxubicin)、放线菌素D、meclorethamine、白消安、CCNU、Me-CCNU、苯丁酸氮芥、放线菌素C(cactinomycin)、嗜癌素、6-氯嘌啉、硫嘌啉、氟尿嘧啶、羟基脲、thioquanine、campothecin、丝裂霉素、环己亚硝脉(CCNU)、甲基环己亚硝脉(Me-CCNU)、斑鳌素、喜树碱、卡铂、蓖麻毒、假单胞菌属外毒素、干扰素、白细胞介素、肿瘤坏死因子、长春花新碱、米托坦美法仑、methchlorethamine、普卡霉素、二胺硝口丫啶、氨甲喋吟、诺加霉素、链黑菌素、链脲霉素、替加氟、吡咯垸甲基四环素(tetramin)，睾内酯脱羰秋水仙碱和放线菌素。可使用的其它化合物包括环孢菌素、安口丫啶、卡莫司他甲磺酸盐、喜树碱、依诺他滨、鬼臼乙叉甙、柔红霉素、表柔比星盐酸盐、氟达拉滨、氟他胺、福莫司汀、去甲氧柔红霉素盐酸盐、伊屋诺霉素、米托蒽醌盐酸盐、尼鲁米特、紫衫醇、枸橼酸托瑞米芬、长春瑞滨。合适的软化角蛋白剂包括水杨酸，水杨酸的衍生物，例如5—辛酰水杨酸；类视黄醇，例如维生素A酸和它们的衍生物(例如，顺式和反式)、维生素A醇、维生素A醛、乙酸视黄醛、棕搁酸视黄醛或其混合物；水杨酸和其衍生物;含硫的氨基酸与其衍生物和盐；含硫的D和L氨基酸与其衍生物和盐，具体地说N—乙酸基衍生物，例如N—乙酰基一L一半胱氨酸、硫辛酸、硫醇、羟基乙酸。抗生素和抗微生物剂例如过氧化苯甲酰、壬二酸、苯氧基乙醇、苯氧基丙醇、苯氧基异丙醇、四环素、青霉素、头霉素、克林霉素、红霉素、两性霉素、环吡酮胺、联苯苄唑、莫匹罗星、制霉菌素、灰黄霉素、克霉唑、咪康唑、酮康唑、益康唑、氟康唑、特比萘芬、阿巴芬净、甲硝唑、替硝唑、青蒿素、青蒿琥酯、二氢青蒿素、类黄酮、蒽醌类、萜类的盐和其衍生物。在本发明中可使用的非甾体抗炎药的例子包括水杨酸类衍生物、苯胺类衍生物、芳基丙酸类衍生物、吲哚类衍生物、灭酸类衍生物、杂环芳基乙酸类衍生物、昔康类化合物，包括乙酰水杨酸、水杨酸钠、对乙酰氨基酚、布洛芬、萘普生、非诺洛芬、芬布芬、酮洛芬、吲哚洛芬、吡咯洛芬、卡洛芬、奥沙普秦、普拉洛芬、硫嗯洛芬、舒洛芬、阿明洛芬、泰普芬酸、氟洛芬、布氯酸、吲哚美辛、舒林酸、依托度酸、甲芬那酸、甲氯芬那酸、托美汀、双氯芬酸、氧昔康、吡罗昔康、替诺昔康、保泰松、萘丁美酮。在本发明中可使用的局部麻醉药的例子包括苯佐卡因、利多卡因、丁哌卡因、氯普鲁卡因、依替卡因、卡波卡因、丁卡因、达克罗宁、海克卡因、普鲁卡因、古柯碱、氯胺酮、普拉莫星、罗哌卡因，和其可药用盐。在本发明局部用制剂中可使用的皮质甾体类包括卤化皮质甾类通常是已知的，且有市售。例子包括可的松，氢化可的松和其衍生物包括去氧可的松，醋酸氟氢可的松，氟氢縮松丙酮化合物，甲羟孕酮；强的松，氢化泼尼松和其衍生物包括安西法尔，倍他米松的苯甲酸酯、戊酸酯和二丙酸酯，氯强的松乙酸酯，地西龙(descinalone)丙酮化合物，环索奈德，地塞米松，二氯松乙酸酯，地氟孕甾丁酯，氟氯奈德，二氟美松，氟尼縮松乙酸酯，氟轻松，氟轻松醋酸酯，氟可龙，氟甲脱氧泼尼松龙，氟泼尼松龙戊酸酯，甲泼尼松，甲基脱氢皮质甾醇，泼拉米松乙酸酯，氢化泼尼松的乙酸酯、丁基乙酸醋和磷酸酯钠盐，氟羟脱氢皮醇丙酮化合物，己曲安奈德，双乙酸盐或酯，氢化可的松丁酸酯，二氟美松特戊酸盐，halcininide和丙酸氯氟美松。在本发明中可使用的皮肤治疗药的例子包括卡泊三醇、克罗米通、雷琐辛、尿囊素、甲氧沙林、煤焦油。本发明的凝胶剂所用的凝胶基质为纤维素衍生物，包括但不限于甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟乙基纤维素、羟乙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素中的至少一种，将纤维素衍生物在搅拌的情况下，以小微粒的形式较均匀的分散在无水乙醇中，在加入水后，溶胀成均匀的凝胶。本发明的实施例方案分别以羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟乙基甲基纤维素为凝胶基质。本发明的凝胶，在其制备过程中，本发明人发现醇的用量较为重要，因为克林霉素磷酸酯为半合成抗生素，本身杂质较多，为了尽可能减低辅料对其检测的干扰，就要求所用辅料数量较少，如果加入抑菌剂如尼泊金类，会对分析造成干扰，所以，醇在此处一方面做溶解、分散维A酸和纤维素衍生物的基质，另一方面则用作抑菌剂。醇的含量的选择较重要，醇含量低于10%(W/W)抑菌效果不理想，高于50%(W/W)则由于系统亲水性改变，凝胶不能成型，因此，醇的含量为20%-50%(W/W)较合适，优选25-35%，更优选30%(W/W)。本发明的凝胶剂或制备方法，还包括脂溶性抗氧剂/辅助抗氧剂和水溶性抗氧剂/辅助抗氧剂。本发明所述的脂溶性抗氧剂包括二丁基羟基甲苯及其衍生物、叔丁基对羟基茴香醚及其衍生物、生育酚及其衍生物，如醋酸生育酚、没食子酸、没食子酸衍生物，如没食子酸乙酯、丙酯。优选二丁基羟基甲苯和叔丁基对羟基茴香醚，主要由于二丁基羟基甲苯和叔丁基对羟基茴香醚抗氧化能力适中，且对分析测定无干扰。本发明所述的水溶性抗氧剂或/和辅助性抗氧剂包括亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钾、维生素C、半胱氨酸、甘氨酸、谷胱甘肽、硫代甘油、酒石酸、琥珀酸、苹果酸、枸櫞酸、枸橼酸钠、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸钠。本发明的实施方案中，优选的抗氧剂为二叔丁羟基甲苯酚(BHT)和枸橼酸。本发明的凝胶剂还包括在不影响检测的条件下可以加入一些赋形剂；如香料，例如薄荷醇；遮光剂例如氧化锌，硅酸铝镁和二氧化钛；软化剂；着色剂；渗透增强剂等等。渗透增强剂可将其解释为一种提高皮肤对于一或多种活性剂的渗透性以便可以经皮施用药物活性剂的物质。用于提高皮肤渗透性的各种化合物在本领域是已知的。例如，二甲亚砜(DMS0)，二甲基甲醚胺(DMF)和N，N—二甲基乙酸胺(DMA)，癸基甲基亚矾，肉豆蔻酸异丙酯、油酸、聚乙二醇单月桂酸醋和l一取代的氮杂环庚烷一2酮。本发明还提及了本发明的凝胶剂的制备方法，所说的凝胶剂包含有效量的克林霉素或其可药用盐或酯、维A酸、包括纤维素类衍生物的凝胶基质、抗氧剂、醇和水，该制备方法包括以下过程(a)将纤维素类衍生物加入到溶有维A酸、脂溶性抗氧剂的醇中，搅拌使之分散，得到混悬液；(b)将克林霉素磷酸酯、水溶性抗氧剂或/和辅助性抗氧剂溶于水，得到水溶液；(c)将步骤(b)的水溶液缓慢加入步骤(a)的混悬液中，边加边搅拌，制得凝胶。本发明所述的方法与现有方法得到的凝胶剂相比，优点在于制备方法简单、易于工业化生产，克服了凝胶基质需要长时间溶胀的缺点。步骤(c)中所述的"缓慢加入"，并没有特别的限定，只要不因(b)的加入导致液体溅出即可。上述本发明的制备方法，脂溶性抗氧剂包括二丁基羟基甲苯及其衍生物、叔丁基对羟基茴香醚及其衍生物、生育酚及其衍生物，如醋酸生育酚、没食子酸或没食子酸衍生物，如没食子酸乙酯、丙酯，优选二丁基羟基甲苯或叔丁基对羟基茴香醚，水溶性抗氧剂包括但不限于亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钾、维生素C、半胱氨酸、甘氨酸、谷胱甘肽、硫代甘油、酒石酸、琥珀酸、苹果酸、枸橼酸、枸橼酸钠、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸钠，优选枸橼酸或其钠盐。上述本发明的制备方法，所说的醇选自下列物质中的至少一种乙醇、丙醇、丙二醇、丙三醇、异丙醇、丁醇、聚乙二醇200和聚乙二醇400，优选乙醇、丙醇、丙二醇、丙三醇或聚乙二醇400。所述的醇的用量在10%—50%(W/W)，优选25-35%(W/W)。本发明还涉及含有克林霉素磷酸酯和维A酸的凝胶剂的检测方法，采用带紫外检测器的高效液检测，流动相为水相-有机相混合体系。水相为含有磷酸盐的缓冲液，可以从磷酸钠、磷酸钾、磷酸氢钠、磷酸氢钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾等试剂中选择，有机相可从乙腈、甲醇、乙醇、四氢呋喃等试剂中选择。克林霉素或其可药用盐或酯是天然抗生素或是半合成抗生素，成分复杂，在采用了纤维素衍生物为凝胶基质后，会极大减少基质对克林霉素或其可药用盐或酯检测的干扰。在实验中，本发明人发现只要适当对流动相进行调整就可以完全消除干扰的影响，本发明中的克林霉素磷酸酯和维A酸分别为水溶性和脂溶性成分，紫外吸收波长分别为210mii和356nm差距较大，且每克中两组分含量差距也较远，用同一系统双波长梯度洗脱不能达到有效分离，不能准确的对本品中克林霉素磷酸酯及维A酸的含量及有关物质进行测定，所以采用不同的样品处理方法及色谱条件对本品进行测定。由于凝胶基质的选取和流动相调整之间的关系并不为本专业一般技术人员所能推测，而需要通过大量实验才能确定。克林霉素磷酸酯测定的方法一克林霉素磷酸酯根据部颁试行标准(WS1-(X-020)-2003Z)中对克林霉素磷酸酯有关物质的检测方法对其进行检测，将样品溶液注入液相色谱仪器，采用以下(表l)梯度洗脱。表1时间(分钟)0.005mol/LKH2P04缓冲液乙腈077.522.54077.522.54320805320805677.522.56077.522.5结论对比空白辅料、克林霉素原料药及样品溶液的色谱图，可见采用此配比不能将样品溶液中的克林霉素磷酸酯杂质与辅料完全分离。克林霉素磷酸酯测定的方法二采用以下(表2)梯度洗脱，在方法一的基础上增加缓冲液起始百分比，使克林霉素磷酸酯的杂质峰出峰时间延长。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>结论对比空白辅料及样品溶液色谱图，可见样品溶液中的杂质与辅料完全分离，考虑主峰出峰过晚(23.295min)，有关物质检测时间将延长，故作进一步调整比例。克林霉素磷酸酯测定的方法四在方法三的基础上进行配比调整，采用以下(表4)梯度洗脱.表4<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>结论样品溶液中杂质峰与辅料峰完全分离，克林霉素磷酸酯主峰于17.780min洗脱，考察了空白辅料及克林霉素磷酸酯阴性对照在此色谱系统下的色谱图，均不干扰测定，并进行了方法学研究，确定了此色谱条件对本品中克林霉素磷酸酯有关物质的测定方法是可行的。综上所述，在用高效液相检测克林霉素磷酸酯时，在进样后的最初至少15分钟内，水相不得低于80%(V/V)。在一个实施方案中，凝胶的检测采用了以下方案-克林霉素磷酸酯的检测取制备的凝胶适量，加适量O.005mol/LKH2P04缓冲液，振摇使分散、稀释，并离心，取上清液作为供试品溶液。AgilentllOO型高效液相，检测波长210nm,色谱柱为ZorbaxC8(250mmX4.6mm，5nm)，流动相流速为1.Oml/min，进样量50ul，以下列梯度洗脱<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>样品溶液中克林霉素磷酸酯的杂质峰与辅料峰完全分离，克林霉素磷酸酯于18分钟左右洗脱，考察了空白辅料及克林霉素磷酸酯阴性对照在此色谱系统下的色谱图，均不干扰测定，并进行了方法学研究，确定了此色谱条件对本品中克林霉素磷酸酯有关物质的测定方法是可行的。凝胶基质为高分子化合物，易堵塞色谱柱，本发明人在查阅相关资料时，未发现有对其样品处理的相关记载。维A酸为脂溶性成分，在凝胶剂中，维A酸分子或/和晶体、颗粒被亲水性高分子材料分子包围、缠裹，在这种情况下，不能像处理克林霉素磷酸酯那样直接用流动相稀释分散，必须先将凝胶分散、亲水高分子沉淀后才能用合适的溶剂将维A酸较完全的提取出来。凝胶分散的化学实质在于剥夺亲水性高分子结合的水使其溶解度减小，从而沉淀、变性，方法有加热、加酸、加碱、加有机试剂、加盐、加重金属离子等。由于亲水性高分子材料和水分子结合紧密，所以单纯的加热和加酸、加碱对亲水性高分子材料的变性作用不大。有机试剂包含烷烃类及其衍生物、芳烃类及其衍生物、杂环类及其衍生物、醇类及其衍生物等。常用的盐类包括钠盐、钾盐、硫酸盐、盐酸盐、溴盐、硼酸盐等。常用的重金属离子包括铜离子、铅离子、锌离子、铁离子、钴离子、锰离子、镉离子、汞离子、鹤离子、银离子等。-般将加入有机试剂、加入盐类、加入重金属离子、加酸、加碱这几种方法中的两种或多种相结合使用。令人惊奇的是采用加硫酸镁、氯化汞、和/或硼酸氯化钾缓冲液等方法对凝胶基质沉淀完全，且对克林霉素或其可药用盐或酯和维A酸含量和测定无影响。维A酸处理提取方法一避光操作，取凝胶适量(约相当于维A酸0.25mg)，精密称定，置50ml具塞磨口锥形瓶中，加2ml氯仿，振摇使凝胶分散，加甲醇分次洗涤至25ml容量瓶中。结论试验中发现，加入甲醇后样品成团，故维A酸不能完全提取。此法不能用于样品溶液的配制。维A酸处理提取方法二避光操作，取凝胶适量(约相当于维A酸0.25mg)，精密称定，置50ml具塞磨口锥形瓶中，加5。/。的硫酸镁溶液2ml，振摇使凝胶分散，加约15ml甲醇分次洗涤至25ml容量瓶中，摇匀，超声5分钟后加甲醇稀释至刻度，作为供试品溶液。取供试品溶液20yl注入色谱系统，记录色谱图。结论考察了空白辅料及维A酸阴性对照采用此样品溶液处理方法所得图谱，发现辅料有一定程度的降解，但均不干扰测定，并按维A酸处方量的80%、100%、120%进行了含量回收试验及相关方法学研究，确定了此样品处理方法在此色谱条件对维A酸有关物质的测定方法是可行的。维A酸处理提取方法三避光操作，取凝胶适量(约相当于维A酸0.25mg)，精密称定，置50ml具塞磨口锥形瓶中，加饱和氯化汞溶液2ml，振摇使凝胶分散，加约15ml甲醇分次洗涤至25ml容量瓶中，摇匀，超声5分钟后加甲醇稀释至刻度，作为供试品溶液。取供试品溶液20yl注入色谱系统，记录色谱图。结论考察了空白辅料及维A酸阴性对照采用此样品溶液处理方法所得图谱，发现辅料有一定程度的降解，但均不干扰测定，并按维A酸处方量的80%、100%、120%进行了含量回收试验及相关方法学研究，确定了此样品处理方法在此色谱条件对维A酸有关物质的测定方法是可行的。维A酸处理提取方法四避光操作，取凝胶适量(约相当于维A酸O.25mg)，精密称定，置50ml具塞磨口锥形瓶中，加硼酸氯化钾缓冲液(pH9.0)3.0ml，充分振摇使凝胶分散，加氯仿2.0ml，振摇混匀，用约15ml甲醇分次洗涤至25ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。取供试品溶液20iU注入色谱系统，记录色谱图。结论考察了空白辅料及维A酸阴性对照采用此样品溶液处理方法所得图谱，均不干扰测定，并按维A酸处方量的809&、100%、120%进行了含量回收试验及相关方法学研究，确定了此样品处理方法在此色谱条件对维A酸有关物质的测定方法是可行的。在本发明的一个实施方案中，维A酸的检测避光操作，取凝胶适量加硼酸氯化钾缓冲液，充分振摇使凝胶分散，加氯仿适量，振摇混匀，用甲醇分次洗涤、稀释，可见有沉淀物，过滤除去。取滤液作为供试品溶液。取供试品溶液20yl注入色谱系统，色谱系统AgilentllOO型高效液相，色谱柱为ZORBAXExtend-C18(250mmX4.6咖，5um)，流动相为乙腈-0.1%冰醋酸=80:20(V/V)，检测波长为356nm，柱温为20。C，流速为l.Oml/min，进样量为50ul。考察了空白辅料及维A酸阴性对照采用此样品溶液处理方法所得图谱，均不干扰测定，并按维A酸处方量的80%、100%、120%进行了含量回收试验及相关方法学研究，确定了此样品处理方法在此色谱条件对维A酸有关物质的测定方法是可行的。具体实施例方式下述实施例用于进一步说明本发明，但不限制本发明的范围。实施例1:第一歩，先将0.8克的二丁基羟基甲苯、0.2克维A酸溶于240克无水乙醇中，然后将16.0克羧甲基纤维素钠加入，120rpm搅拌使之分散均匀，制得a组分；第二步，将9.6克的克林霉素磷酸酯、0.4克枸橼酸溶入533克的蒸馏水，制得b组分；第三步，将b组分缓慢加入到a组分中，边搅拌边加入，制得凝胶。取制备的凝胶适量(约相当于克林霉素磷酸酯18mg)，精密称定，置50ml具塞磨口锥形瓶中，加约5ml流动相，振摇使分散，用流动相分次洗涤至25ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，置15ml离心管中，以每1分钟4000转离心约25分钟，取上清液作为供试品溶液。Agilent11OO型高效液相，检测波长210nm，色谱柱为ZorbaxC8(250mmx4.6mm，5pm)，流动相流速为1.0ml/min，进样量5(^1，以下列梯度洗脱时间(分钟)0.005mol/LKH2PO4缓冲液乙腈08515207525407525432080532080568515608515结论样品溶液中杂质峰与辅料峰完全分离，克林霉素磷酸酯于18分钟洗脱，考察了空白辅料及克林霉素磷酸酯阴性对照在此色谱系统下的色谱图，均不干扰测定，并进行了方法学研究，确定了此色谱条件对本品中克林霉素磷酸酯有关物质的测定方法是可行的。维A酸处理检测避光操作，取凝胶适量(约相当于维A酸0.25mg)，精密称定，置50ml具塞磨口锥形瓶中，加硼酸氯化钾缓冲液(pH9.0)3.0ml，充分振摇使凝胶分散，加氯仿2.0ml，振摇混匀，用约15ml甲醇分次洗涤至25ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。取供试品溶液20pl注入色谱系统，色谱系统AgilentllOO型高效液相，色谱柱为ZORBAXExtend-C18(250mmx4.6mm，5nm)，流动相为乙腈-0.1%冰醋酸=80:20(V/V)，检测波长为356nm，柱温为20。C，流速为1.0ml/min，进样量为50pl。考察了空白辅料及维A酸阴性对照采用此样品溶液处理方法所得图谱，均不干扰测定，并按维A酸处方量的80n/。、100%、120%进行了含量回收试验及相关方法学研究，确定了此样品处理方法在此色谱条件对维A酸有关物质的测定方法是可行的。实施例2:第一步，先将0.8克的二丁基羟基甲苯、0.2克维A酸溶于80克无水乙醇中，然后将16.0克羧甲基纤维素钠加入，120rpm搅拌使之分散均匀，制得a组分；第二步，将9.6克的克林霉素磷酸酯、0.4克枸橼酸溶入693克的蒸馏水，制得b组分；第三步，将b组分缓慢加入到a组分中，边搅拌边加入，制得凝胶。克林霉素磷酸酯和维A酸的检测方法同实施例1。实施例3:第一步，先将0.8克的二丁基羟基甲苯、0.2克维A酸溶于400克无水乙醇中，然后将16.0克羧甲基纤维素钠加入，120ipm搅拌使之分散均匀，制得a组分；第二步，将9.6克的克林霉素磷酸酯、0.4克枸橼酸溶入373克的蒸馏水，制得b组分；第三步，将b组分缓慢加入到a组分中，边搅拌边加入，制得凝胶。克林霉素磷酸酯和维A酸的检测方法同实施例1。实施例4:第一步，先将0.8克的二丁基羟基甲苯、0.2克维A酸溶于240克丙二醇中，然后将16.0克羧甲基纤维素钠加入，120rpm搅拌使之分散均匀，制得a组分；第二步，将9.6克的克林霉素磷酸酯、0.4克枸橼酸溶入533克的蒸馏水，制得b组分；第三歩，将b组分缓慢加入到a组分中，边搅拌边加入，制得凝胶。克林霉素磷酸酯和维A酸的检测方法同实施例1。实施例5:第一步，先将0.8克的二丁基羟基甲苯、0.2克维A酸溶于240克丙三醇中，然后将16.0克羧甲基纤维素钠加入，120rpm搅拌使之分散均匀，制得a组分；第二步，将9.6克的克林霉素磷酸酯、0.4克枸橼酸溶入533克的蒸馏水，制得b组分；第三歩，将b组分缓慢加入到a组分中，边搅拌边加入，制得凝胶。克林霉素磷酸酯和维A酸的检测方法同实施例1。实施例6:第-一步，先将0.8克的二丁基羟基甲苯、0.2克维A酸溶于240克聚乙二醇400中，然后将16.0克羧甲基纤维素钠加入，120rpm搅拌使之分散均匀，制得a组分；第二步，将9.6克的克林霉素磷酸酯、0.4克枸橼酸溶入533克的蒸馏水，制得b组分；第三步，将b组分缓慢加入到a组分中，边搅拌边加入，制得凝胶。克林霉素磷酸酯和维A酸的检测方法同实施例1。实施例7:第一步，先将0.8克的二丁基羟基甲苯、0.4克维A酸溶于240克无水乙醇中，然后将16.0克羧甲基纤维素钠加入，120rpm搅拌使之分散均匀，制得a组分；第二步，将9.6克的克林霉素磷酸酯、0.4克枸橼酸溶入533克的蒸馏水，制得b组分；第三步，将b组分缓慢加入到a组分中，边搅拌边加入，制得凝胶。克林霉素磷酸酯和维A酸的检测方法同实施例1。实施例8:第一步，先将0.8克的二丁基羟基甲苯、O.OS克维A酸溶于240克无水乙醇中，然后将16.0克羧甲基纤维素钠加入，120rpm搅拌使之分散均匀，制得a组分；第二步，将9.6克的克林霉素磷酸酯、0.4克枸橼酸溶入533克的蒸馏水，制得b组分；第三步，将b组分缓慢加入到a组分中，边搅拌边加入，制得凝胶。克林霉素磷酸酯和维A酸的检测方法同实施例1.实施例9:第一歩，首先将0.8克的二丁基羟基甲苯、0.2克维A酸溶于240克无水乙醇中，然后将64.0克甲基纤维素撒入，120rpm搅拌使之分散均匀，制得a组分；第二步，将9.6克的克林霉素磷酸酯、0.4克枸橼酸溶入485克的蒸馏水，制得b组分；第二步，将b组分缓慢加入到a组分中，边搅拌边加入，制得凝胶。克林霉素磷酸酯和维A酸的检测方法同实施例l.实施例10:第-歩，首先将0.8克的二丁基羟基甲苯、0.2克维A酸溶于240克无水乙醇中，然后将120.0克羟乙基甲基纤维撒入，120rpm搅拌使之分散均匀，制得a组分；第二步，将9.6克的克林霉素磷酸酯、0.4克枸橼酸溶入429克的蒸馏水，制得b组分；第三步，将b组分缓慢加入到a组分中，边搅拌边加入，制得凝胶。克林霉素磷酸酯和维A酸的检测方法同实施例1。权利要求1.一种含有克林霉素的复方凝胶剂，包含有效量的克林霉素或其可药用盐或酯、维A酸和凝胶基质，其特征在于凝胶基质为纤维素类衍生物。2.根据权利要求l的凝胶剂，所述的克林霉素或其可药用盐或酯包括以下物质中的至少--种克林霉素、磷酸克林霉素、盐酸克林霉素、克林霉素磷酸酯，优选克林霉素磷酸酯。3.根据权利要求l的凝胶剂，所述的纤维素类衍生物包括以下物质中的至少一种甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟乙基纤维素、羟乙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素。4.根据权利要求1一3所述的任一凝胶剂，还包括抗氧剂和溶剂。5.根据权利要求4的凝胶剂，所说的溶剂为醇和水。6.—种含有克林霉素或其可药用盐或酯的复方凝胶剂的制备方法，该方法特征包括以下过程(a)将纤维素类衍生物高分子材料加入到溶有维A酸、脂溶性抗氧剂的醇中，搅拌使之分散，得到混悬液；(b)将克林霉素磷酸酯、水溶性抗氧剂或/和辅助性抗氧剂溶于水，得到水溶液；(c)将(b)歩骤的水溶液缓慢加入(a)步骤的混悬液中，边加边搅拌，制得凝胶。7.根据权利要求6的制备方法，其中所述的脂溶性抗氧剂包括二丁基羟基甲苯、叔丁基对羟基茴香醚、生育酚、醋酸生育酚、没食子酸、没食子酸乙酯或没食子酸丙酯，优选二丁基羟基甲苯或叔丁基对羟基茴香醚。8.根据权利要求4的凝胶剂或权利要求6的制备方法，所说的醇选自下列物质中的至少一种乙醇、丙醇、丙二醇、丙三醇、异丙醇、丁醇、聚乙二醇200、聚乙二醇400。9.根据权利要求8的凝胶剂或制备方法，其中所述的醇的用量在10。/。一50。/。(W/W),优选30%(W/W)。10.—种含有克林霉素或其可药用盐或酯的复方凝胶剂的检测方法，其特征在于先在凝胶中加入一种足以使纤维素类衍生物沉淀的试剂，待纤维素类衍生物沉淀后再使用高效液相色谱法检测。11.根据权利要求io的检测方法，所说的足以使纤维素类衍生物沉淀的试剂选自以下物质中的至少一种加酸、加碱、加有机试剂、加盐、加重金属离子，优选加硫酸镁、氯化汞、硼酸氯化钾缓冲液或它们的混合物。12.根据权利要求10的检测方法，其中所述的高效液相色谱法，其特征在于检测克林霉素磷酸酯时，在进样后的最初至少15分钟内，水相占流动相的比例不得低于80%(V/V)。13.根据权利要求12的方法，其中所述的水相，其特征在于含有磷酸盐的缓冲液。全文摘要本发明涉及一种含有克林霉素的复方凝胶剂，包含有效量的克林霉素或其可药用盐或酯、维A酸和凝胶基质，其特征在于凝胶基质为纤维素类衍生物，同时还涉及该凝胶剂的制备方法和分析检测方法。本发明的凝胶剂，质量易控，且其制备方法工艺简单、适合工业化生产。文档编号A61P17/00GK101292991SQ20081006985公开日2008年10月29日申请日期2008年6月20日优先权日2008年6月20日发明者娟万,涛张,林佳亮,斌樊,杰邓申请人:重庆医药工业研究院有限责任公司