专利名称：一种小牛血去蛋白组分脑靶向纳米粒及其制备方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，具体涉及治疗脑痴呆、脑中风药小牛血去蛋白提取物的-种 纳米制剂的制备方法。
背景技术：
中枢神经系统(Central nervous system , CNS)发病率已经高于癌症和心血管疾病的总和， 如脑肿瘤、老年痴呆、帕金森综合征、病毒感染等。因为脑是人体中枢神经活动的中心，也 是神经系统最复杂的部分。但大部分活性药物不能透过血-脑屏障(blood-brain barrier, BBB),致使诸多脑内疾病的诊断和治疗存在困难等。因此，解决通过BBB的药物传递 问题已成为脑部疾病药物治疗的关键。小牛血去蛋白提取物注射液用于治疗脑中风等疾病， --般一天/1次静脉注射，很麻烦，若制成纳米制剂可提高其疗效。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是以聚氰基丙烯酸正丁酯(PBCA)为小牛血去蛋白组分载
体材料，提供一种能穿过血脑屏障的纳米制剂，以提高治疗脑内疾病的疗效。
本发明解决其技术问题采用以下的技术方案
本发明提供的小牛血去蛋白组分脑靶向纳米粒，按重量份计，其成分包括5 30份右
旋糖酐，5 30份pluronic F-68， 50 100份小牛血去蛋白提取物注射液，5 30份聚氰基丙 烯酸正丁酯，5 30份吐温80。
本发明提供的小牛血去蛋白组分脑靶向纳米粒，其制备采用以下步骤的方法
歩骤l:按重量份计，将5 30份右旋糖酐溶于蒸馏水中，同时用蒸馏水溶解5 30份 pluronicF-68，两者混合，摇匀，加入50~100份小牛血去蛋白提取物注射液，摇匀，定容；
歩骤2:调pH值至l 4，在搅拌下按重量份计缓缓加入5 30份的聚氰基丙烯酸正丁酯， 搅拌小iH后，调pH值至6~S，继续搅拌0.5 4小时，得小牛血去蛋白组分纳米粒胶体溶 液，过滤，冷冻干燥，得小牛血去蛋白组分纳米粒冻干粉；
步骤3:将小牛血去蛋白组分纳米粒冻干粉溶解，再按重量份计加入5 30份吐温80，经 搅拌0.5~3小时，即得小牛血去蛋白组分脑耙向纳米粒。
本发明与现有技术相比具有以下的主要优点
1. 可用于对抗脑部疾病药物的开发利用。
2. 与目前市面上用于脑部疾病的药物具有以下优势 易贮存，到达脑部时间短、血液清除速度快。
3. 制备方法简单不需要特殊设备，用常规设备和工艺就能够生产。易于实施。
4. 试验比较采用静脉注射动物(豚鼠)。取其心、肝、脾、肺、肾、脑，测定市场上所售药物与本发明制备的小牛血去蛋白组分脑耙向纳米粒在各个组织中的分布，得出小牛血去 蛋白组分脑靶向纳米粒比市场上所售小牛血去蛋白提取物在脑部分布多。从而推出小牛血去 蛋白组分脑靶向纳米粒具有脑靶向性。
图1为小牛血去蛋白组分脑靶向纳米粒体外释放曲线。
图2为小牛血去蛋白组分脑靶向纳米粒及小牛血去蛋白提取物注射液在体内的分布。
具体实施例方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步说明，本发明所涉及的内容并非仅限于这三个
实例中。
实施例1.小牛血去蛋白组分脑耙向纳米粒
按重量份计，其成分包括5份右旋糖酐，30份pluronic F-68， 75份小牛血去蛋白提 取物注射液，30份聚氰基丙烯酸正丁酯，5份吐温80。 实施例2.小牛血去蛋白组分脑耙向纳米粒
按重量份计，其成分包括30份右旋糖酐，5份pluronic F-68， 100份小牛血去蛋白 提取物注射液，5份聚氰基丙烯酸正丁酯，30份吐温80。 实施例3.小牛血去蛋白组分脑耙向纳米粒
按重量份计，其成分包括18份右旋糖酐，18份plurom'cF-68， 50份小牛血去蛋白提 取物注射液，18份聚氰基丙烯酸正丁酯，18份吐温80。 实施例4.
按重量份计，将5份稳定剂右旋糖苷溶于适量蒸馏水中，同时用适量蒸馏水溶解5份 pluromcF-68，两者混合，摇匀，加入50份小牛血去蛋白提取物注射液，摇匀，定容。调pH 值至l，在速度为200转速下磁力搅拌，缓缓加入5份的聚氰基丙烯酸正丁酯。搅拌l小时 后，调pH值至6，继续搅拌l小时，得小牛血去蛋白组分纳米粒胶体溶液，过滤，冷冻干燥。 取小牛血去蛋白组分纳米粒冻干粉溶解后，加入5份吐温80，搅拌0. 1小时，即得小牛血去 蛋白组分脑靶向纳米粒。
实施例5.
按重量份计，将30份稳定剂右旋糖苷溶于适量蒸馏水中，同时用适量蒸馏水溶解30份 pluronic F-68,两者混合，摇匀，加入100份小牛血去蛋白提取物注射液，摇匀，定容。调 pH值至4，在速度为800转速下磁力搅拌，缓缓加入30份的聚氰基丙烯酸正丁酯。搅拌6 小时后，调pH值至8，继续搅拌4小时，得小牛血去蛋白组分纳米粒胶体溶液，过滤，冷冻 干燥。取小牛血去蛋白组分纳米粒冻干份溶解后，加入30份吐温80，经搅拌3小吋，即得 小牛血去蛋白组分脑靶向纳米粒。
实施例6.
按重量份计，将IO份稳定剂右旋糖苷溶于适量蒸馏水中，同时用适量蒸馏水溶解10份 pluronic F-68，两者混合，摇匀，加入75份小牛血去蛋白提取物注射液，摇匀，定容。调pH值至2，在速度为600转速下磁力搅拌，缓缓加入15份的聚氰基丙烯酸正丁酯。搅拌4小时 后，调pH值至7，继续搅拌2小时，得小牛血去蛋白组分纳米粒胶体溶液，过滤，冷冻干燥。 取小牛血去蛋白组分纳米粒冻干份溶解后，加入10份吐温80，经搅拌1小时，即得小牛血 去蛋白组分脑靶向纳米粒。 实施例7.
按重量份计，将20份稳定剂右旋糖苷溶于适量蒸馏水中，同时用适量蒸馏水溶解20份 pluronicF-68，两者混合，摇匀，加入75份小牛血去蛋白提取物注射液，摇匀，定容。调pH 值至3，在速度为750转速下磁力搅拌，缓缓加入20份的聚氰基丙烯酸正丁酯。搅拌4小时 后，调pH值至7，继续搅拌2小时，得小牛血去蛋白组分纳米粒胶体溶液，过滤，冷冻干燥。 取小牛血去蛋白组分纳米粒冻干份溶解后，加入20份吐温80，经搅拌2小时，即得小牛血 去蛋白组分脑靶向纳米粒。
实施例8.
按重量份计，将IO份稳定剂右旋糖苷溶于适量蒸馏水中，同时用适量蒸馏水溶解10份 pkironicF-68，两者混合，摇匀，加入62份小牛血去蛋白提取物注射液，摇匀，定容。调pH 值至2，在速度为600转速下磁力搅拌，缓缓加入10份的聚氰基丙烯酸正丁酯。搅拌2小时 后，调pH值至6.5，继续搅拌l小时，得小牛血去蛋白组分纳米粒胶体溶液，过滤，冷冻干 燥。取小牛血去蛋白组分纳米粒冻干份溶解后，加入10份吐温80,经搅拌1小时，即得小 牛血去蛋白组分脑靶向纳米粒。
实施例9.
按重量份计，将15份稳定剂右旋糖苷溶于适量蒸馏水中，同时用适量蒸馏水溶解15份 pluronicF-68，两者混合，摇匀，加入82份小牛血去蛋O提取物注射液，摇匀，定容。调pH 值至1.5，在速度为700转速下磁力搅拌，缓缓加入15份的聚氰基丙烯酸正丁酯。搅拌3小 时后，调pH值至7.4，继续搅拌3小时，得小牛血去蛋白组分纳米粒胶体溶液，过滤，冷冻 干燥。取小牛血去蛋白组分纳米粒冻干份溶解后，加入15份吐温80，经搅拌1.5小时，即 得小牛血去蛋白组分脑耙向纳米粒。
实施例10.
按重量份计，将25份稳定剂右旋糖苷溶于适量蒸馏水中，同时用适量蒸馏水溶解25份 pluronicF-68，两者混合，摇匀，加入92份小牛血去蛋白提取物注射液，摇匀，定容。调pH 值至2.5，在速度为720转速下磁力搅拌，缓缓加入25份的聚氰基丙烯酸正丁酯。搅拌5小 时后，调pH值至7.8，继续搅拌2.5小时，得小牛血去蛋白组分纳米粒胶体溶液，过滤，冷 冻千燥。取小牛血去蛋白组分纳米粒冻干份溶解后，加入25份吐温80，经搅拌2. 5小时， 即得小牛血去蛋白组分脑耙向纳米粒。
上述实施例4一10提供的胶体溶液，经检测，均可作为小牛血去蛋白组分脑靶向纳米粒 的制备方法，其中实施例6效果比较好，且选用右旋糖酐70的粒径较小，载药量和包封率都 较高。以上实施例中的右旋糖酐是指右旋糖苷20、右旋糖酐40或右旋糖酐70。上述实施例4一 10提供的胶体溶液，可以采用以下方法检测
1. 激光粒度分析仪测定粒径大小及分布
取上述小牛血去蛋白组分脑蛋白纳米粒适量，加注射用水使分散，置纳米粒粒径测定仪 测定粒径，平均粒径为73. 56nm±2. 38nm.
2. 透射电镜下观察纳米粒形态
小牛血去蛋白组分脑蛋白纳米粒外观呈淡黄色胶状液体，取1 2滴溶液置于铜网上，用 1.5%磷钨酸负染，室温晾干，在透射电镜下观察形态，纳米粒呈圆或类圆形，大小较为均匀， 无明显聚集。
3. 高效液相色谱法测定包封率和载药量-
取小牛血去蛋白组分脑蛋白纳米粒适量，于4。C下8000r/min，离心，上清液经孔径0. 22陶 膜过滤后，分别进样20W测定。
药物的包封率、载药量按以下公式计算-
<formula>formula see original document page 7</formula> 其中-药物的包封率(Entrapment Efficiency);
W。,。,一系统中的总药量；『^一介质中未包封的游离药物量； 人一系统中总的药物的峰面积；^一未包封得药物的峰面积；
式中Z)Z为载药量(Drug Loading)，『￡为纳米粒中包裹的药物量，为纳米粒的
投料总重量。
得平均包封率范围为20 80%，载药量范围为25 90%。
4. 小牛血去蛋白组分脑靶向纳米粒的体外释放试验
取小牛血去蛋白组分脑靶向纳米粒适量，转入透析袋中，扎紧两端悬置于盛有适量释放 介质的具塞锥形瓶中，37'C水浴恒温振荡，定时取样2ml，同时补加等量介质。将所取样品 进行高效液相分析，计算浓度，并计算累积释药分数Q，测得相应释药曲线，见图l (图中A 为小牛血去蛋白提取物注射液，B为小牛血去蛋白组分脑靶向纳米粒)。
结果可见小牛血去蛋白提取物注射液很快释放，而小牛血去蛋白组分脑耙向纳米粒前期 有个突释阶段，而后维持较平缓的释药节奏，整体呈现一定的缓释效果。
5. 稳定性试验
将制备好的小牛血去蛋白组分脑靶向纳米粒经离心、高温下放置分别测定包封率和载药 量，结果见表l。
6. 动物试验研究
为了进一歩验证纳米制剂的脑靶向作用，我们进行了动物实验，采用高效液相色谱法 (HPLC)测定鼠脑内药物浓度，动物为6-8周龄健康鼠，于不同时间给药测定，结果证明 见图2 (图中A为小牛血去蛋白提取物注射液，B为小牛去蛋白组分脑靶向纳米粒，图中1为心、2为肺、3为肝、4为脾、5为肾、6为脑)，本发明所制备的小牛血去蛋白组分脑靶向纳 米粒在脑内浓度远高于市售小牛血去蛋白提取物注射液。
经过上述方法的检测，本发明所制备的小牛血去蛋白组分脑靶向纳米粒具有制备方法简 单，生产成本低，易贮存，到达脑部时间短、血液清除速度快等优点，对于脑部疾病治疗有 明显优势。 附表
表1 小牛血去蛋白组分脑靶向纳米粒稳定性试验结果
检查项目 条件包封率(％)平均粒径(nm)
刚制备时的纳米粒85. 42100. 28±2. 08
5000转/分钟30分钟85. 48100. 25±2. 32
5000转/分钟60分钟85. 06100. 34±1. 89
6(TC下放置10天84. 75100. 39±0. 96
4(TC下放置30天83. 62100. 65±1. 3权利要求
1.一种小牛血去蛋白组分脑靶向纳米粒，其特征在于按重量份计，其成分包括5～30份右旋糖酐，5～30份pluronic F-68，50～100份小牛血去蛋白提取物注射液，5～30份聚氰基丙烯酸正丁酯，5～30份吐温80。
2. --种小牛血去蛋白组分脑耙向纳米粒的制备方法，其特征在于采用以下歩骤方法 歩骤l:按重量份计，将5 30份右旋糖酐溶于蒸馏水中，同时用蒸馏水溶解5 30份pluromcF-68,两者混合，摇匀，加入50 100份小牛血去蛋白提取物注射液，摇匀，定容； 歩骤2:调pH值至l 4，在搅拌下按重量份计缓缓加入5 30份的聚氰基丙烯酸正丁酯，搅拌1 6小时后，调pH值至6-8，继续搅拌0.5 4小时，得小牛血去蛋白组分纳米粒胶体溶液，过滤，冷冻千燥，得小牛血去蛋白组分纳米粒冻干粉；歩骤3:溶解小牛血去蛋白组分纳米粒冻干粉，再按重量份计加入5 30份吐温80，搅拌0.1 3小时，即得小牛血去蛋白组分脑靶向纳米粒。
3. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于采用以下步骤方法歩骤l:按重量份计，将5份右旋糖酐溶于蒸馏水中，同时用蒸馏水溶解5份pluromc F-68，两者混合，摇匀，加入50份小牛血去蛋白提取物注射液，摇匀，定容；歩骤2:调pH值至1，在搅拌下按重量份计缓缓加入5份的聚氰基丙烯酸正丁酯， 搅拌1小时后，调pH值至6，继续搅拌0.5小时，得小牛血去蛋白组分纳米粒胶体溶液， 过滤，冷冻干燥，得小牛血去蛋白组分纳米粒冻干粉；歩骤3:溶解小牛血去蛋白组分纳米粒冻千粉，再按重量份计加入5份吐温80，搅拌 0.1小时，即得小牛血去蛋白组分脑耙向纳米粒。
4. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于采用以下步骤方法步骤1:按重量份计，将30份右旋糖酐溶于蒸馏水中，同时用蒸馏水溶解30份phironic F-68，两者混合，摇匀，加入100份小牛血去蛋白提取物注射液，摇匀，定容；步骤2:调pH值至4，在搅拌下按重量份计缓缓加入30份的聚氰基丙烯酸正丁酯， 搅拌6小时后，调pH值至8，继续搅拌4小时，得小牛血去蛋白组分纳米粒胶体溶液， 过滤，冷冻干燥，得小牛血去蛋白组分纳米粒冻干粉；歩骤3:将小牛血去蛋白组分纳米粒冻干粉溶解，再按重量份计加入30份吐温80， 搅拌3小时，即得小牛血去蛋白组分脑靶向纳米粒。
5. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于采用以下步骤方法歩骤1:按重量份计，将20份右旋糖酐溶于蒸馏水中，同时用蒸馏水溶解20份pluronic F-68,两者混合，摇匀，加入75份小牛血去蛋白提取物注射液，摇匀，定容；歩骤2:调pH值至3，在搅拌下按重量份计缓缓加入20份的聚氰基丙烯酸正丁酯， 搅拌4小时后，调pH值至7，继续搅拌2小时，得小牛血去蛋白组分纳米粒胶体溶液， 过滤，冷冻干燥，得小牛血去蛋白组分纳米粒冻干粉；歩骤3:将小牛血去蛋白组分纳米粒冻干粉溶解，再按重量份计加入20份吐温80， 搅拌2小时，即得小牛血去蛋白组分脑靶向纳米粒。
6. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于采用以下步骤方法歩骤1:按重量份计，将10份右旋糖酐溶于蒸馏水中，同时用蒸馏水溶解10份pluronic F-68，两者混合，摇匀，加入62份小牛血去蛋白提取物注射液，摇匀，定容；歩骤2:调pH值至2，在搅拌下按重量份计缓缓加入10份的聚氰基丙烯酸正丁酯， 搅拌2小时后，调pH值至6.5，继续搅拌1小时，得小牛血去蛋白组分纳米粒胶体溶液， 过滤，冷冻干燥，得小牛血去蛋白组分纳米粒冻干粉；歩骤3:将小牛血去蛋白组分纳米粒冻干粉溶解，再按重量份计加入IO份吐温80， 搅拌1小时，即得小牛血去蛋白组分脑靶向纳米粒。
7. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于采用以下步骤方法歩骤l:按重量份计，将15份右旋糖酐溶于蒸馏水中，同时用蒸馏水溶解15份pluronic F-68，两者混合，摇匀，加入82份小牛血去蛋白提取物注射液，摇匀，定容；歩骤2:调pH值至1.5，在搅拌下按重量份计缓缓加入15份的聚氰基丙烯酸jH丁酯， 搅拌3小时后，调pH值至7.4，继续搅拌3小时，得小牛血去蛋白组分纳米粒胶体溶液， 过滤，冷冻干燥，得小牛血去蛋白组分纳米粒冻干粉；步骤3:将小牛血去蛋白组分纳米粒冻干粉溶解，再按重量份计加入15份吐温80， 搅拌1.5小时，即得小牛血去蛋白组分脑耙向纳米粒。
8. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于采用以下步骤方法歩骤1:按重量份计，将25份右旋糖酐溶于蒸馏水中，同时用蒸馏水溶解25份pluronic F-68，两者混合，摇匀，加入92份小牛血去蛋白提取物注射液，摇匀，定容；歩骤2:调pH值至2.5，在搅拌下按重量份计缓缓加入25份的聚氰基丙烯酸正丁酯， 搅拌5小时后，调pH值至7.8，继续搅拌2.5小时，得小牛血去蛋白组分纳米粒胶体溶液， 过滤，冷冻干燥，得小牛血去蛋白组分纳米粒冻千粉；歩骤3:将小牛血去蛋白组分纳米粒冻干粉溶解，再按重量份计加入25份吐温80， 搅拌2.5小时，即得小牛血去蛋白组分脑靶向纳米粒。
9. 根据权利要求2至8中任一权利要求所述的制备方法，其特征在于右旋糖苷为 右旋糖酐20、右旋糖酐40或右旋糖酐70。
10. 根据权利要求2至8中任一权利要求所述的制备方法，其特征在于歩骤2和歩 骤3所述的搅拌是在速度为200 800转/分钟下磁力搅拌。
全文摘要
本发明是一种小牛血去蛋白组分脑靶向纳米粒的制备方法，具体是按重量份计，将5～30份稳定剂溶于蒸馏水中，同时用蒸馏水溶解5～30份pluronic F-68，两者混合，摇匀，加入50～100份小牛血去蛋白提取物注射液，摇匀，定容；调pH值至1～4，在搅拌下缓缓加入5～30份的聚氰基丙烯酸正丁酯；搅拌1～6小时后，调pH值至6～8，继续搅拌1～4小时，得小牛血去蛋白组分纳米粒胶体溶液，过滤，冷冻干燥；将小牛血去蛋白组分纳米粒冻干粉溶解，再加入5～30份吐温80搅拌0.5～3小时，即得小牛血去蛋白组分脑靶向纳米粒。本发明具有制备方法简单，生产成本低，易贮存，到达脑部时间短、血液清除速度快等优点。
文档编号A61K9/08GK101579356SQ200910062460
公开日2009年11月18日 申请日期2009年6月5日 优先权日2009年6月5日
发明者园 周, 辉 易, 楼一层, 阮班昭, 芬 黄 申请人:武汉理工大学