专利名称：：纤维蛋白封闭剂及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种可以止血、可做培养基、可用于药物载体和替代皮肤、骨骼、软骨、神经等组织的纤维蛋白胶及其制备方法，更具体地涉及一种纤维蛋白封闭剂及其制备方法。
背景技术：
：纤维蛋白封闭剂(FibrinSealant，简称FS)，它的作用机制是模拟血液凝固的最后阶段，在凝血酶和钙离子的作用下使纤维蛋白原转化为纤维蛋白单体，进一步聚合转变为纤维蛋白网，并在第XIII因子的作用下，形成交联稳定的纤维蛋白网，从而发挥其止血功效。近几十年来，FS的用途已不再局限于止血、促进愈合、封闭缺损、防止粘连这四大功能，而是借助于FS的粘合性，可用于肌腱内缝合肌健损伤，借助于FS的可塑性，可用于骨质缺损的塑形修复。将FS作为缓释载体与某些镇痛药物、化疗药物等结合，可以显著延长药物的镇痛、抗癌作用时间。现今生产的纤维蛋白封闭剂主要含两种试剂，试剂I主要含高浓度的纤维蛋白、凝血因子XIII；试剂II主要含凝血酶和氯化钙。当试剂I和试剂II溶解混合后，凝血酶能水解纤维蛋白原，使之转化为纤维蛋白单体。单体由于负电荷减少，自发聚合成不稳定的可溶性纤维蛋白多聚体。同时，在Ca2+存在的条件下，凝血酶能激活因子XIII。因子XIII能催化某些肽链间的残基共价结合，最后形成稳定的不溶性纤维蛋白多聚体。多聚体形成后，通过以下机理发挥止血、封闭、粘合作用1、多聚体交织成网状，能网住红细胞及血小板，形成血凝块，发挥止血作用；2、不溶性纤维蛋白多聚体形成后，其机械强度显著增强，可粘合组织及封闭缺损，同时能刺激毛细血管内皮细胞及成纤维细胞生长，并以纤维蛋白网为支架形成肉芽组织，从而促进伤口愈合；3、在创面形成的膜状凝胶能防止坏死组织细胞内溶酶体酶向细胞外泄漏，避免周围组织进一步受损，同时因减少创面出血，减轻机化程度，能防止组织粘连。80年代初在欧洲国家出现了商业化产品。1998年正式收载进入欧州药典。制造商们通过严格的血浆筛选，采用多种病毒灭活方法如加热、UV照射、S/D灭活等处理，以提高其产品的安全性。1998年奥地利的ImmimoAG公司制造的纤维蛋白胶——Tisseel/Tissucol是第一个被美国FDA批准上市的生物胶产品。目前在国外已上市的纤维蛋白封闭剂产品还有BeriplastP；Hemaseel,Biocol,Quix2il等。国外生产纤维蛋白胶的制造商也有近十家，国内已有数家单位开始研制开发及申报生产。纤维蛋白胶这一新型外用止血剂已弓I起人们的广泛关注，在外科领域里的推广应用也受到广泛的关注。纤维蛋白封闭剂产品基本上在临用前要避免纤维蛋白原和凝血酶或凝血酶激活物过早反应，在临用时使纤维蛋白原在凝血酶和钙离子的作用下转化为纤维蛋白，再在第XIII因子的作用下，变为稳定的纤维蛋白网，从而发挥其止血功效。例如Tisseel/Tissucol使用前，分别用两个注射器抽取两种溶解液，溶解相应冻干组分，再分别将两种溶解后溶液用两只注射器抽出，并将两只注射器通过一个三通组装成双联注射器；使用时，将两种溶液同时等量混合喷涂到创面上，起到止血封闭创面的作用。参见公开号CN1911440A专利的一种纤维蛋白膜，使用时将纤维蛋白原和凝血酶即时混合，形成一层网络状致密的纤维蛋白膜。这类即时性凝胶首先要解冻或溶解，混合物要尽可能混勻，然后敷在出血的创口上。这一过程时间要掌握相当的准确，在纤维蛋白聚合前易被血液冲走，而如果聚合完成后才使用纤维蛋白胶，则不易粘合在创口上。这在临床上使用不方便，成本较高。目前，纤维蛋白封闭剂都是在凝血酶的作用下获得，凝血酶主要来源于牛、猪等哺乳动物，但哺乳动物凝血酶是一种强抗原，使用凝血酶后会在人体引起各种免疫反应，而且存在人和哺乳动物共患的疾病例如口蹄疫、疯牛病等传播的风险。虽然用人凝血酶可以解决部分问题，但利用人凝血酶病毒感染的可能性依然存在，而且来源少，成本高。利用人本身的凝血酶来制备纤维蛋白胶，操作复杂，时间较长可行性差。
发明内容针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种纤维蛋白封闭剂，其可用于止血、促进愈合、封闭缺损、防止粘连、肌腱内缝合肌健损伤、骨质缺损的塑形修复、皮肤组织再生、缓释载体等方面。本发明的纤维蛋白封闭剂为至少包含纤维蛋白聚合物和类凝血酶的凝胶，其中，所述类凝血酶与纤维蛋白聚合物之比为0.01100IUlmg。所述纤维蛋白聚合物是由纤维蛋白(或纤维蛋白原)在类凝血酶的作用下所形成，为纤维蛋白单体聚合成的可塑形的、可粘附的和可降解的凝胶。本发明与大多数纤维蛋白封闭剂显著不同。本发明的纤维蛋白封闭剂是先由类凝血酶充分作用于纤维蛋白原，使纤维蛋白原转化为纤维蛋白，形成纤维蛋白聚合物，然后将本发明的纤维蛋白封闭剂制备成各种制剂形式，例如纤维蛋白膜、纤维蛋白粉、纤维蛋白海绵等。这种形式的纤维蛋白封闭剂可以避免现有技术的即时性纤维蛋白胶的一些缺点，例如操作复杂，不易控制；纤维蛋白原容易变性，不易保存；凝血酶活性易失活等。本发明人经过大量的研究工作，确定了本发明的纤维蛋白封闭剂中类凝血酶与纤维蛋白聚合物的适当的比例范围。即，类凝血酶与纤维蛋白聚合物的比例范围应为0.01100IUImgo低于0.OlIUImg的比例时，无法形成胶体状态，而高于100IUImg时，成本太高，造成浪费。优选0.1IOIUlmg，在此比例中形成的胶体弹性和粘合力好，也易于制备各种剂型。在本发明的纤维蛋白封闭剂中，混合形成凝胶前，纤维蛋白原(或纤维蛋白)和类凝血酶可以分别为溶液形式，其中，纤维蛋白或纤维蛋白原浓度大于lmg/ml。低于lmg/ml时，胶体含水量过大，不易成型。优选10100mg/ml，在此范围胶体的弹性和粘合力好，易于制备各种剂型。类凝血酶浓度大于0.lIU/ml，低于0.lIU/ml时，成胶时间过长，胶体含水量过大，不易成型，优选201000IU/ml，在此范围，成胶时间适宜，胶体的弹性和粘合力好，易于制备各种剂型。本发明还提供一种凝胶，其是由纤维蛋白或纤维蛋白原、以及类凝血酶混合形成，即含纤维蛋白聚合物和类凝血酶，其中，所述类凝血酶与纤维蛋白聚合物之比为0.01100IUImg0该凝胶可用于制备蛋白封闭剂、药物载体、培养基、人造人体组织等。本发明还提供一种药物载体，其包含由纤维蛋白或纤维蛋白原、以及类凝血酶混合形成的凝胶，即含纤维蛋白聚合物和类凝血酶，其中，所述类凝血酶与纤维蛋白聚合物之比为0.01100IUImgo本发明还提供一种培养基，其包含由纤维蛋白或纤维蛋白原、以及类凝血酶混合形成的凝胶，即含纤维蛋白聚合物和类凝血酶，其中，所述类凝血酶与纤维蛋白聚合物之比为0.01100IUImgo纤维蛋白原在和类凝血酶接触后转变为一种纤维蛋白，因此纤维蛋白原和纤维蛋白均可应用于本发明。纤维蛋白指任何形式的纤维蛋白，包括但不限于纤维蛋白I、desBB血纤维蛋白和血纤维蛋白II。纤维蛋白I是指纤维蛋白原解离纤维蛋白肽A产生的纤维蛋白单体。desBB纤维蛋白是指纤维蛋白原解离纤维蛋白肽B的纤维蛋白单体。纤维蛋白II是指纤维蛋白原解离纤维蛋白肽A和B的纤维蛋白单体。纤维蛋白可以来源于人血或牛血、猪血、马血等动物血液。类凝血酶是一种具有凝血酶样活性的酶，主要来源于蛇毒，也可来源于具有类似类凝血酶功能的其它动物的酶类，优选蝮亚科(Viperidae)和蝰科(Crotalidae)蛇的蛇毒，该两亚科蛇毒的类凝血酶含量高。例如，巴曲酶于来源巴西矛头蝮蛇；降纤酶来源于长白山白眉蝮蛇；中国蕲蛇酶来源于尖吻蝮蛇蛇毒；gabonase酶来源于加蓬咝蝰等。类凝血酶可通过任何方式获得，包括天然提取、基因重组、细胞工程、蛋白质工程、组织培养等。类凝血酶(Thrombin-likeEnzyme)是与凝血酶有相似的功能一类蛋白酶。类凝血酶具有精氨酸酯酶活性，能够直接作用于纤维蛋白原，纤维蛋白原分子由两对α-链、β-链及Y-链组成，每3条肽链(α、β、Y)绞合成索状，形成两条索状肽链，在N末端有二硫键使纤维蛋白原分子得到稳定。α及β肽链的N-端分别有一段16个及14个氨基酸的小肽，称为纤维蛋白肽A(fibrinop印tideA，FPA)及B(FPB)。类凝血酶进行水解时有的仅使纤维蛋白原Aa链上裂解出纤维蛋白肽A，有的则只裂解出纤维蛋白肽B，或是裂解出纤维蛋白A和B肽，但速率不同。水解释放血纤肽，使纤维蛋白单体首尾聚合而凝固。在体外作为促凝剂引起血浆或纤维蛋白原凝集，但类凝血酶在体内不激活凝血因子XIII，由类凝血酶水解生成的纤维蛋白凝块不产生侧链交联，对纤溶酶的作用高度敏感，很容易被天然网状内皮系统或正常的纤溶作用清除。几乎所有的类凝血酶均为糖蛋白，但与凝血酶不同的是其寡糖链是与天冬酰氨连接，而不是丝氨酸。对纤维蛋白原的作用较凝血酶更专一，其活性不被抗凝血酶III肝素、水蛭素、大豆胰蛋白酶等抑制剂所抑制。大多数类凝血酶对热稳定，即使在低浓度时对热也稳定。类凝血酶形成的凝块不会引起收缩。本发明纤维蛋白封闭剂中除纤维蛋白聚合物和类凝血酶外，还可含有Ca2+，离子浓度在1200mmol；从血浆中得到的凝血因子XIII、纤维结合蛋白和其它血浆中的蛋白；具有抑菌或杀菌作用的成分例如庆大霉素、丁胺卡那霉素等；抑制蛋白分解的物质，例如抑肽酶；促进细胞生长的细胞生长因子等。本发明的一个显著特征是与大多数纤维蛋白封闭剂不同，本纤维蛋白封闭剂是先由类凝血酶充分作用于纤维蛋白原，使纤维蛋白原转化为纤维蛋白，形成非交联纤维蛋白聚合物。然后将本发明的纤维蛋白封闭剂制备成各种制剂形式，例如纤维蛋白膜、纤维蛋白粉、纤维蛋白海绵等。这种形式的纤维蛋白封闭剂可以避免即时性纤维蛋白胶的一些缺点，例如操作复杂，不易控制；纤维蛋白原容易变性，不易保存；凝血酶活性易失活等。本发明的纤维蛋白的存在方式包括两种一、固体形式，主要是指在类凝血酶的作用下，纤维蛋白原转化为纤维蛋白，形成凝胶后，利用任何除去水分的方式获得的干燥品。二、液体形式，可以通过现在或未来可能出现的技术增溶非交联纤维蛋白胶，获得液体状纤维蛋白。现在实施增溶的方式主要有利用PH值小于5的酸性缓冲液(例如乙酸、天冬氨酸、谷氨酸及其盐等)或尿素。目前，一种市售的纤维蛋白封闭剂“特可考”采用冻干胶原海绵为底层，用较复杂的生产工艺将纤维蛋白原、抑肽酶、凝血酶等组分粘附在胶原海绵上，然后成型。虽然使用上较方便，但由于生产过程中使用了有机溶剂，存在生产的安全隐患，而且降低了各组分的活性，增加了生产成本，延长了生产周期。与“特可考”相比较，本发明的纤维蛋白封闭剂，生产工艺简单，利用类凝血酶使纤维蛋白原转化为纤维蛋白，形成非交联凝胶，然后也可干燥制备各种剂型。“特可考”使用牛凝血酶，牛凝血酶是一种强抗原，使用牛凝血酶后会在人体引起各种免疫反应。牛凝血酶引发交叉免疫反应所产生的抗体，可能会因其削弱抗凝血酶IIIAT-III的正常抑制作用而导致血栓形成。目前市场上，牛凝血酶都混有牛凝血因子V，进入人体后可发生交叉免疫反应，所产生的免疫复合物经血循环被清除，由此可导致人凝血因子V的缺乏，并可能引起严重出血倾向。而类凝血酶(主要源于蛇类)，由于蛇与人类种属关系远并不携带人类能感染的病毒，减少了病毒感染的机会。类凝血酶与人和哺乳动物的凝血酶在结构上存在较大的差异，所以不会在体内引起交叉免疫反应。避免人体内凝血功能受损而引起出血症状。另外，类凝血酶在体内，由于形成的是非交联的纤维蛋白，导致血纤维蛋白凝块结构松散，易被纤溶系统清除，不会导致栓塞。“特可考”是用胶原纤维作盛载物质，上面敷上纤维蛋白胶成分，包括人纤维蛋白原、牛凝血酶、牛抑肽酶和作药面指示色的核黄素。使用时按压在伤口上3-5分钟使纤维蛋白原在凝血酶的作用下形成纤维蛋白网。本发明是已形成的内含有类凝血酶的非交联的纤维蛋白聚合物或另外加入类凝血酶，在与创口渗出血液的接触面上，在类凝血酶和人血中的凝血酶的作用下血液中的纤维蛋白原转化为纤维蛋白单体，再在XIII因子的作用下非交联纤维蛋白与血液中的纤维蛋白单体迅速交联，形成致密的交联纤维蛋白网，使纤维蛋白胶粘合在伤口上。这一过程在几十秒内完成。动物试验显示本发明非交联的纤维蛋白胶在止血时间和渗血量上均优于特可考。另外，本发明先形成凝胶，所以可直接制成所需的形状和大小，例如薄膜状、圆锥体、圆柱体等。这在临床上使用极为方便。由于类凝血酶对纤维蛋白原的作用较凝血酶更专一，其活性不被抗凝血酶III、肝素、水蛭素、大豆胰蛋白酶等抑制剂所抑制，所以类凝血酶发挥凝血作用时受干扰的因素少。类凝血酶对热稳定，即使在低浓度时对热也稳定，所以本发明的产品较易保存。类凝血酶形成的凝块不会引起收缩，所以利用本发明产品，伤口愈合好，疤痕小。本发明的纤维蛋白封闭剂的制备方法，可包括以下步骤将纤维蛋白原(或纤维蛋白)、以及类凝血酶按比例混合，然后形成凝胶。本发明可以制备各种制剂，例如纤维蛋白膜，将纤维蛋白原溶液加入模具，然后加入类凝血酶充分混勻，待反应完全形成凝胶后，冷冻干燥制成纤维蛋白膜；纤维蛋白海绵，将纤维蛋白原溶液加入模具，然后加入类凝血酶充分混勻，待反应完全形成凝胶后发泡，冷冻干燥制成纤维蛋白海绵；止血贴，可将纤维蛋白胶敷在止血贴上制备纤维蛋白胶止血贴，而且纤维蛋白胶中可添加抑菌或杀菌剂；栓剂，将纤维蛋白原溶液加入药栓模具，然后加入类凝血酶充分混勻，待反应完全形成凝胶后，冷冻干燥即得，在用于粘堵宫颈口时可阻止精子进入子宫，由于纤维蛋白在体内降解时间为3-6周，可与避孕药联合，制备长效避孕药；粉剂，将纤维蛋白原溶液与类凝血酶充分混勻，待反应完全形成凝胶后，冷冻干燥后粉碎成细粉，进一步可制成各种口服剂型，例如咀嚼片，胶囊、冲剂泡腾片等；本发明纤维蛋白胶还可与绷带结合制成纤维蛋白止血绷带。本发明可以制备液体剂型，由于本发明的非交联的纤维蛋白可以以液体形式存在，所以制备成无菌的液体，可以直接用于封闭创伤。本发明由于纤维蛋白可在体内被降解吸收，可以作为药物载体使用，例如将纤维蛋白胶与质子泵抑制剂，例如奥美拉唑、泮托拉唑、雷贝拉唑等或H2-受体拮抗剂西咪替丁、雷尼替丁、尼扎替丁等或粘膜保护剂替普瑞酮或抗酸剂铝碳酸镁相结合，来治疗消化性溃疡。将纤维蛋白胶与镇痛药物，例如酮洛芬、尼美舒利等结合制备缓释制剂，用于长效镇痛。本发明也可用于细胞培养，以非交联的纤维蛋白胶为载体添加各种氨基酸、细胞生长因子、细胞生长所需的无机离子等。本发明的培养基更适合哺乳动物的细胞生长，例如上皮细胞、表皮细胞、成纤维细胞等。本发明的纤维蛋白胶有良好的组织相容性，能介导细胞信号的传递和细胞之间的作用，可通过一些细胞因子的释放促进细胞的粘附和增殖以及组织再生，具有一定的力学强度和可塑性，所以可将表皮细胞、骨膜细胞、软骨细胞等复合于本发明的纤维蛋白胶上形成相应的皮肤、骨骼、软骨、神经等新的组织。为了更好地理解本发明的本质，下面通过对本发明较佳实施方式的描述，详细说明但不限制本发明。图1实施例1中类凝血酶制备的离子交换色谱图；图2实施例中类凝血酶制备的亲和层析色谱图。具体实施例方式本发明所用试验材料，如无特别说明，均为市售购买产品。纤维蛋白原和类凝血酶的制备实施例1A纤维蛋白原的制备及其缓冲液将猪全血浆于37°C融化冷却至10°C以下，以预冷_20°C的体积百分比50%乙醇缓慢加入不断搅拌至终浓度为10%乙醇，作12小时沉淀处理，5000转30分钟离心。再将沉淀溶于中性Tri/枸橼酸盐-赖氨酸缓冲液，蛋白终浓度约1.5%(重量百分比)。然后在4°C再用预冷50%乙醇作1012小时的第二次10%乙醇沉淀。5000转30分钟离心，溶解沉淀成40mg/ml，然后除菌过滤、分装每瓶5ml冻干。纤维蛋白原溶解液为含0.02MPH7.4柠檬酸钠缓冲液。B类凝血酶制备及其缓冲液方法1称取长白白眉蝮蛇毒(购自辽宁清源蝮蛇养殖厂)10g，用0.02mol/LpH7.2Tris-HCl缓冲液提取4小时，以4000rpm/min离心30分钟，取上清液。将沉淀同法再提取一次，合并上清液，加入硫酸铵至30%饱和度，离心去沉淀，再加硫酸铵至饱和度75%，离心去上清。将沉淀溶解在400mlpH7.2磷酸盐缓冲液中，加冷丙酮至40%，离心弃沉淀，在上清中加冷丙酮至65%，离心弃上清，沉淀在40°C真空干燥箱中烘干。即得类凝血酶干粉。类凝血酶溶解缓冲液为0.02MPH7.4缓冲液。方法2称取长白白眉蝮蛇毒(购自辽宁清源蝮蛇养殖厂)10g，用0.02mol/LpH7.2Tris-HCl缓冲液提取4小时，以4000rpm/min离心30分钟，取上清液。将沉淀同法再提取一次，合并上清液，调整PH至7.2，得提取液。将提取液上于平衡好的DEAE-Si^pharose层析柱，先用0.02mol/LpH7.2Tris-HCl缓冲液洗脱未吸附杂质，再用含有00.5mol/LNaCl的缓冲溶液进行梯度洗脱，收集类凝血酶活性峰，见图1。得活性组分收集液A。将上述活性组分收集液A上于平衡好的亲和层析柱，先用含0.5mol/LNaClO.05mol/LTris-HClpH7.0缓冲液洗脱未吸附杂质；然后用含0.lmol/L洗脱剂1.5mol/LNaCl0.05mol/LTris-HClpH7.0缓冲液洗脱收集活性组分，得到活性组分收集液B，见图2。取活性组分收集液B，用截留分子量10，000D的透析袋对聚乙二醇浓缩至20ml左右，即为浓缩液C。检测其凝血酶活性为10000国际单位/ml，过滤除菌，冻干得冻干粉。类凝血酶溶解缓冲液为0.02MPH7.4缓冲液。本发明纤维蛋白封闭剂的制备实施例2将制备的纤维蛋白原溶解成50mg/ml备用，制备类凝血酶，制成每毫升100国际单位。取2毫升纤维蛋白原溶液，注入模具中，加入含1%的甘油类凝血酶60国际单位充分混勻，使其反应完全，成胶体状，冷冻干燥。实施例3将纤维蛋白原和类凝血酶溶液按纤维蛋白原IOOmg加入10国际单位类凝血酶的比例混合，充分反应后冷冻干燥，粉碎成细粉，装入胶囊。实施例4将纤维蛋白原和类凝血酶溶液按纤维蛋白原IOOmg加入1000国际单位类凝血酶的比例混合，充分反应后冷冻干燥，粉碎成细粉，装入胶囊。实施例5将纤维蛋白原和类凝血酶溶液按纤维蛋白原IOOmg加入10000国际单位类凝血酶的比例混合，充分反应后冷冻干燥，粉碎成细粉，装入胶囊。实施例6将纤维蛋白原和类凝血酶溶液按纤维蛋白原IOOmg加入5000国际单位类凝血酶的比例混合，充分反应后冷冻干燥，粉碎成细粉，装入胶囊。实施例7取10升血浆加入40000IU类凝血酶，充分混勻，反应30分钟，4000转/分钟离心25分钟，弃上清，清洗2遍，加入400ml0.2M尿素溶解。将溶液加入透析袋中，对0.IMPH值为5.O的醋酸-醋酸钠缓冲液透析。将透析后的溶液用钴60照射。按每瓶Iml装如西林瓶中即得。实施例8在实施例2-7之一中，有选择地添加适当量的以下成分的一种或多种1.Ca2+，其离子浓度在1200mmol；2.从血浆中得到的凝血因子XIII、纤维结合蛋白和其它血浆中的蛋白；3.具有抑菌或杀菌作用的成分，例如庆大霉素、丁胺卡那霉素等；4.纤维蛋白原稳定增强因子，例如阳离子蛋白、聚阳离子化合物、多聚赖氨酸、碱性蛋白、亚甲蓝、链霉素等；5.抑制蛋白分解的物质，例如抑肽酶；6.促进组织生长的物质，例如成纤维生长因子、生长激素等；7.作为肿瘤栓塞时合并的抗肿瘤药物，例如顺钼等。本发明纤维蛋白封闭剂的效果实骑实施例9动物健康Wistar大鼠45只(180230g)，雌雄各半。随机分成3组空白组，对照组为特可考(市售)，实验组为类凝血酶纤维蛋白膜。股动脉切口模型大鼠腹腔注射戊巴比妥钠40mg/kg，麻醉后仰面固定于手术台上。腹股沟部去毛，剥离股动脉，用止血夹夹住近心端，将动脉横向剪开占直径1/3的切口。立即擦去喷出的血液，放包含类凝血酶的纤维蛋白胶膜(按1毫升含40mg纤维蛋白原加入40单位类凝血酶制备)或特可考于创口，打开止血夹，立即盖上纱布，或者直接盖上纱布，用150g重的砝码压lmin。除去砝码，继续观察30min；或不进行任何处理观察30min。记录止血时间和30min内的失血量。以移去砝码后3min不再出血为“止血”。结果见表2。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>以上对本发明较佳实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。权利要求一种纤维蛋白封闭剂，包含纤维蛋白聚合物和类凝血酶，其中，所述类凝血酶与纤维蛋白聚合物之比为0.01～100IU∶1mg。2.权利要求1所述的纤维蛋白封闭剂，其特征在于，所述类凝血酶和纤维蛋白聚合物之比为0.1IOIUImgo3.权利要求1所述的纤维蛋白封闭剂，其特征在于，所述类凝血酶为蛇毒来源的类凝血酶。4.权利要求3所述的纤维蛋白封闭剂，其特征在于，所述蛇毒为蝮亚科和/或蝰科蛇的蛇毒。5.权利要求1所述的纤维蛋白封闭剂，其特征在于，所述纤维蛋白聚合物为纤维蛋白原或纤维蛋白在类凝血酶的作用下所形成。6.权利要求5所述的纤维蛋白封闭剂，其特征在于，形成纤维蛋白聚合物前，所述纤维蛋白原或纤维蛋白为溶液形式，浓度大于lmg/ml。7.权利要求6所述的纤维蛋白封闭剂，其特征在于，所述纤维蛋白原或纤维蛋白的浓度为10100mg/ml。8.权利要求5所述的纤维蛋白封闭剂，其特征在于，形成纤维蛋白聚合物前，所述类凝血酶为溶液形式，浓度大于0.lIU/ml。9.权利要求8所述的纤维蛋白封闭剂，其特征在于，所述类凝血酶的浓度201000IU/ml。10.权利要求19之一所述的纤维蛋白封闭剂，其特征在于，所述纤维蛋白封闭剂还包括一种或多种以下组分1)Ca2+，离子浓度在1200mmol；2)从血浆中得到的凝血因子XIII、和/或纤维结合蛋白；3)具有抑菌或杀菌作用的成分；4)抑制蛋白分解的物质；5)促进细胞生长的细胞生长因子。11.权利要求19之一所述的纤维蛋白封闭剂，其特征在于，所述纤维蛋白封闭剂的剂型为凝胶、胶膜、粉末、止血贴、栓剂、或纤维蛋白海绵。12.权利要求1所述的纤维蛋白封闭剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤形成包含纤维蛋白聚合物和类凝血酶的凝胶。13.权利要求12所述的纤维蛋白封闭剂的制备方法，其特征在于，进一步包括以下步骤将所述凝胶制成用于止血的制剂。14.一种药物载体，包含纤维蛋白聚合物和类凝血酶，其中，所述类凝血酶与纤维蛋白聚合物之比为0.01100IUImgo14、一种培养基，包含纤维蛋白聚合物和类凝血酶，其中，所述类凝血酶与纤维蛋白聚合物之比为0.01100IUImgo15.一种凝胶，包含纤维蛋白聚合物和类凝血酶，其中，所述类凝血酶与纤维蛋白聚合物之比为0.01100IUImgo全文摘要本发明提供了一种纤维蛋白封闭剂，其包含纤维蛋白聚合物和类凝血酶，其中，所述类凝血酶与纤维蛋白聚合物之比为0.01～100IU∶1mg。该纤维蛋白封闭剂可用于止血、促进愈合、封闭缺损、防止粘连、肌腱内缝合肌健损伤、骨质缺损的塑形修复、皮肤组织再生、缓释载体等方面。文档编号A61P7/04GK101797377SQ20091007744公开日2010年8月11日申请日期2009年2月11日优先权日2009年2月11日发明者孔双泉,宋梦薇,王靖,马骉申请人:北京赛生药业有限公司