专利名称：生物纤维蛋白胶指纹图谱的建立方法及标准指纹图谱的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物制品的质量控制方法，具体涉及生物纤维蛋白胶高效液相色谱(HPLC)指纹图谱的构建方法和得到的标准指纹图谱。
背景技术：
现代外科手术中，创口止血和愈合是一个需要能有效解决的问题，传统的方法一般使用结扎、缝合和电凝进行止血。传统缝合易导致针眼感染和渗漏，脆性较大的组织撕拉极易造成组织破坏；电凝会增加组织破坏，造成组织坏死。因此，长期以来科学家们致力于寻找一种既能快速有效止血，又能促进组织愈合的新型止血材料。纤维蛋白封闭剂(FS)应运而生，它的出现正好满足了这种外科手术的需求。
纤维蛋白封闭剂是一种从血液中提取的新型生物止血材料。其作用机制是模拟了人体自身凝血反应最后阶段，由纤维蛋白单体聚合形成具有三维立体网状结构的膜，能够有效的网络住红细胞和创面渗液，起到止血防渗、促进愈合的作用。并且因为是生物材料制品，具有良好的组织相容性，安全无毒副作用；在人体自身酶作用下，术后两周可自动降解吸收，大大縮短了住院时间，减轻病患痛苦。
目前，国外同类产品以人血为原料，本申请人首创开发出以猪血为原料的产品，避免了人血制品所带来的艾滋病、肝炎等血液传染病传播的危险。同时猪血资源丰富，猪的基因序列同人的基因序列极为相似，而携带人类的传染性疾病传播风险极小，极大的降低了成本，使产品具有很强的市场竞争力。但生物纤维蛋白胶为蛋白质、多肽及无机盐组成，而该类产品目前质量控制在蛋白含量及纯度等技术指标方面水平较低，产品的蛋白含量多为以总氮量测定来反映总蛋白含量，对具体蛋白的分子数量及各分子的相对含量均不清楚，产品缺乏较为准确的量化数据。
有关生物纤维蛋白胶的质量研究报导不多，特别是能从高效液相色谱的整体特征面貌上把握生物纤维蛋白胶的品种和质量情况未见报导。
发明内容
为了有效地控制生物纤维蛋白胶质量，本发明的目的是提供一种生物纤维蛋白胶指纹图谱的建立方法及标准指纹图谱，为生物纤维蛋白胶质量控制和产品真伪鉴别提供一种全新的方法。
本发明的目的是这样实现的 一种生物纤维蛋白胶指纹图谱的建立方法，包括下列步骤
供试品溶液的制备A、主体胶供试品溶液的制备取主体胶适量，精密称重，置量瓶中，加水或流动相溶解并定容，摇匀，过滤，取续滤液作为主体胶供试品溶液；或B、催化剂供试品溶液的制备取生物纤维蛋白胶催化剂适量，精密称定，置量瓶中，加水或流动相溶解并定容，摇匀，过滤，取续滤液作为催化剂供试品溶液。
主体胶参照物溶液的制备取猪血纤维蛋白对照品适量，用水或流动相稀释，制成主体胶参照物溶液，理论塔板数以猪血纤维蛋白峰计算并作为主体胶参照物；催化剂参照物溶液的制备取猪血白蛋白对照品适量，用水或流动相稀释，制成催化剂参照物溶液，理论塔板数以猪血白蛋白峰计算并作为催化剂参照物；
测定精密吸取各供试品溶液及参照物溶液，分别注入液相色谱仪，照高效液相色谱
法测定，色谱条件色谱柱采用Protein-PakTM300SW分子排阻色谱柱；流动相为20mmol/L磷酸钠的水溶液；紫外光190-280nm带二极管阵列检测器检测；并以面积归一化法计算各峰的相对峰面积，分别得到生物纤维蛋白胶主体胶指纹图谱及生物纤维蛋白胶催化剂指纹图谱。
所述生物纤维蛋白胶主体胶指纹图谱中，共有峰有5个，其中超过总峰面积10%的指纹峰有3个，以猪血纤维蛋白原的色谱峰的相对保留时间为1计算其它色谱峰的相对保留时间并计算相对峰面积，上述3个指纹峰分别是1号峰猪血纤维蛋白原即参照峰的RT为1.000， 相对峰面积范围为38.86%~51.64%; 2号峰的平均RT为1.456，相对峰面积范围为12.27%~15.49%; 5号峰的平均RT为2.258,相对峰面积范围为34.51%~44.64% ;所述生物纤维蛋白胶催化剂指纹图谱中，共有峰有7个，其中超过总峰面积3%的指纹峰有3个，以猪血白蛋白的色谱峰的相对保留时间为1计算其它色谱峰的相对保留时间并计算相对峰面积，上述3个指纹峰分别是4号峰的平均RT为0.865，相对峰面积范围为3.45%~11.06%; 5号峰猪血白蛋白即参照峰的RT 1.000,相对峰面积范围为61.34% 89.40%; 7号峰的平均RT 1.501，相对峰面积范围为3.01% 5.06%。
所述的方法，在制备供试品溶液A时加水或流动相的量不少于10倍主体胶重量，；在制备供试品溶液B时，加水或流动相的加入量不少于10倍催化剂重量；流动相为20mmol/L磷酸钠的水溶液，流动相的流速为0.3ml/min-0.8ml/min;参照物浓度为每lml含0.1 2.0mg。
所述的标准指纹图谱是通过比较10批生物纤维蛋白胶主体胶指纹图谱及生物纤维蛋白胶催化剂指纹图谱色谱图，由其共有特征峰构成的生物纤维蛋白胶主体胶标准指纹图谱及生物纤维蛋白胶催化剂标准指纹图谱。
所述的生物纤维蛋白胶主体胶标准指纹图谱，5个共有峰的相对保留时间的相对标准偏差RSD均小于3X， 1号峰猪血纤维蛋白即参照峰的RT为1.000， RSD为0.00%,相对峰面积范围为38.86%~51.64%; 2号峰的平均RT为1.456， RSD为0.62%,相对峰面积范围为12.27%~15.49%; 3号峰的平均RT为1.998， RSD为0.63%,相对峰面积范围为0.18% 0.48%; 4号峰的平均RT为2.135, RSD为0.61%,相对峰面积范围为0.22%~0.84%; 5号峰的平均RT为2.258， RSD为2.94%,相对峰面积范围为34.51% 44.64%。生物纤维蛋白胶催化剂标准指纹图谱，7个共有峰的相对保留时间的相对标准偏差RSD均小于2%， 1号峰的平均RT为0.669， RSD为0.23%,相对峰面积范围为0.77% 1.84%; 2号峰的平均RT为0.731， RSD为0.25%,相对峰面积范围为1.06%~2.52%; 3号峰的平均RT为0.799， RSD为0.43%,相对峰面积范围为0.32%~2.58%; 4号峰的平均RT为0.865，RSD为0.55%,相对峰面积范围为3.45%~11.06%; 5号峰猪血白蛋白即参照峰的RT为1.000， RSD为0.00%,相对峰面积范围为61.34% 89.40%; 6号峰的平均RT为1.409, RSD为0.64%，相对峰面积范围为0.36%~25.70%;7号峰的平均！1丁为1.501, RSD为0.18%,相对峰面积范围为3.01%~5.06%。
本发明的原理是根据生物纤维蛋白胶的主要组成部分一主体胶与催化剂中的主要化学组成成分为蛋白质或多肽类成分，用分子排阻色谱将蛋白质或多肽类成分按分子量的大小分离，建立起生物纤维蛋白胶主体胶及催化剂的HPLC指纹图谱，从色谱的整体面貌特征上把握生物纤维蛋白胶的品种和质量情况。
本发明的优点如下
(1) 以生物纤维蛋白胶建立起来的HPLC指纹图谱，代表着生物纤维蛋白胶大部分蛋白质或多肽类成分的组成及活性，能有效地表征生物纤维蛋白胶的质量。对生物纤维蛋白胶的主要化学成分进行检测，既可以表征出生物纤维蛋白胶活性成分的组成数量，又可以表征出生物纤维蛋白胶活性成分的相对含量。故用生物纤维蛋白胶建立起来的HPLC指纹图谱作为监控指标具有代表性。
(2) 以生物纤维蛋白胶整个指纹图形作为一个整体看待，注重各个构成指纹特征峰的前后顺序和相互关系，注重整体面貌特征，既避免了因只测定总蛋白成分而判定生物纤维蛋白胶整体质量的片面性，又减少了为质量达标而人为处理的可能性。本发明为完整、准确评价生物纤维蛋白胶的质量提供了新的对照标准，将为提高生物纤维蛋白胶制剂的质量及疗效做出贡献。(3沐发明具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好、易于掌握的特点。能从色谱的整体特征面貌上把生物纤维蛋白胶的品种和质量情况，为生物纤维蛋白胶质量控制和真伪鉴别提供了一种全新的方法。
图1是猪纤维蛋白原对照品制成的参照物溶液图谱；图2是10批生物纤维蛋白胶主体胶0-60分钟的指纹图谱；图3是猪血白蛋白对照品制成的参照物溶液图谱；图4是10批生物纤维蛋白胶催化剂0-60分钟的指纹图谱；图5是生物纤维蛋白胶主体胶0-60分钟的标准指纹图谱。图6是生物纤维蛋白胶催化剂0-60分钟的标准指纹图谱；图7是生物纤维蛋白胶主体胶0-60分钟的DAD检测三维图谱；图8是生物纤维蛋白胶催化剂0-60分钟的DAD检测三维图谱。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明，下述实施例仅用于说明本发明而并非对本发明的限制。
实施例1 (生物纤维蛋白胶主体胶HPLC标准指纹图谱的建立方法)
U义器与试药
惠普1100高效液相色谱仪(美国)；紫外光带DAD (二极管阵列)检测器(美国)；
美国奥泰色谱之星工作站。猪纤维蛋白原对照品(广州倍绣生物技术有限公司制备提供)，
纯度大于98%;蒸馏水(自制)，磷酸钠(分析纯，广东光华化学厂有限公司)；生物纤维
蛋白胶主体胶，编号080901、 080902、 080903、 081008， 081010、 081101、 081102， 081103、081104、 081115，广州倍绣生物技术有限公司制备提供。
2. 色谱条件
色谱柱Protein-PakTM300SW色谱柱，7.5X300鹏；流动相为20mmol/L磷酸钠的水溶液；紫外光220nm及二极管阵列检测器检测器(190nm-400nm)检测；流速0.4ml/min;柱温25'C;理论塔板数以猪纤维蛋白原峰计算，应不低于2000。
3. 指纹图谱测定
3.1生物纤维蛋白胶主体胶指纹图谱制备
参照物溶液的制备选用猪纤维蛋白原为参照物，取猪纤维蛋白原对照品适量，用流动相稀释，制成每lml中含猪纤维蛋白原1.05mg的溶液，作为参照物溶液。生物纤维蛋白胶主体胶供试品溶液制备取生物纤维蛋白胶主体胶20.4mg，置10ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为生物纤维蛋白胶主体胶供试品溶液。
分别取参照物溶液及生物纤维蛋白胶主体胶供试品溶液各20ul进样，照高效液相色谱法测定，记录60分钟的色谱图，见附图1-2。以猪纤维蛋白原的色谱峰(S峰)的相对保留时间和相对峰面积为1计算其它色谱峰的相对保留时间和相对峰面积。3.2共有峰确定
通过10批生物纤维蛋白胶主体胶指纹图谱测定，比较其色谱图，确定共有峰为5个，其中超过总峰面积10%的指纹峰为1号峰(猪血纤维蛋白即参照峰的RT为1.000); 2号峰(平均RT为1.456); 5号峰(平均RT为2.258)。 10批生物纤维蛋白胶主体胶共有峰相对峰面积及相对保留时间统计结果见表l、表2、表3。
表1 10批生物纤维蛋白胶主体胶样品相对保留时间统计
峰号样1样2样3样4样5样6样7样8样9样10均值RSD%
1l扁l細I細l扁l細l細l細l細l扁l細l働0.00
21.4461.4651.4591.4631.4481.4641.4631.4471.4411.4601.4560.62
31.9852.0112.0052.0071.9862.0092駕l駕1.9762.0031.9980.63
42.1202.1512.1452.1442.1242.1492.1422.1252.1132.1412.1350.64
52.2302.2422.2542.2472.2232.2482.4452.2332.2242.2382.2582.94
表2 IO批生物纤维蛋白胶主体胶样品的相对峰面积值(％)
峰号样l样2样3样4样5样6样7样8样9样io
148.5238.8651.6451.4450.2848.1743.2451,2350.5650.27
214.4915.4912.2713.0213.3212.7413.4013.5014.0112.42
30.270.480.360.370.180,420.470.230.200.26
40.390.490.430.670.220.730.840.220.220.78
535.7844.6435.1634,5135.9937.9041.9534.8234.7636.27
表3生物纤维蛋白胶主体胶样品的特征峰相对保留时间及相对峰面积范围特征峰 相对保留时间 相对峰面积范围(％)
3.3指纹图谱重现性试验
以生物纤维蛋白胶主体胶080901批为供试品(N^5),按照指纹图谱重现性规定方法操
8
l細 38.86~51.64
1,456 12.27~15.49
l駕 0.18~0.48
2.135 0.22~0.84
2.258 34.51~44.64
1 2 3 4 5
峰条峰峰峰作，分别对共有峰相对保留时间及共有峰的相对峰面积(所有峰占总峰面积百分比％)进行
统计，RSDX未超过3X，结果见表4。
_表4重现性实验结果__(n-5)
特征峰~相对保留时间OO RSD(%) 相对峰面积 RSD(%)
3.4指纹图谱精密度试验
按照指纹图谱精密度规定方法操作，以生物纤维蛋白胶主体胶01批为供试品，取1份，连续进样5次，分别对共有峰相对保留时间及共有峰的相对峰面积进行统计，RSD%未超过3%。
3.5指纹图谱稳定性试验
按照指纹图谱稳定性测定方法操作，以生物纤维蛋白胶主体胶01批为供试品，考察24小时溶液稳定性，分别对共有峰相对保留时间及共有峰的相对峰面积进行统计，8小时内RSDX不超过3%。供试品8小时稳定。
以上试验显示，该测定方法稳定可靠，指纹图谱相对稳定。实施例2 (生物纤维蛋白胶催化剂HPLC标准指纹图谱的建立方法)
1. 仪器与试药
惠普1100高效液相色谱仪(美国)；紫外光带DAD (二极管阵列)检测器(美国)；
美国奥泰色谱之星工作站。猪血白蛋白对照品(广州倍绣生物技术有限公司制备提供)，
纯度大于98%;蒸馏水(自制)，磷酸钠(分析纯，广东光华化学厂有限公司)；生物纤维蛋白胶催化剂，编号080901、 080902、 080903、 081008， 081010、 081101、 081102， 081103、081104、 081115，广州倍绣生物技术有限公司制备提供。
2. 色谱条件
色谱柱Protein-PakTM300SW色谱柱，7.5X300咖；流动相为20mmol/L磷酸钠的水溶液；紫外光220nm及二极管阵列检测器检测器(l卯nm-400nm)检测；流速0.4ml / min;柱温25°C;理论塔板数以猪血白蛋白峰计算，应不低于1500。
3. 指纹图谱测定
3.1生物纤维蛋白胶主体胶指纹图谱制备
参照物溶液的制备选用猪血白蛋白为参照物，取猪血白蛋白对照品适量，用水或流
1.0001.449l.卿2,1242.237
0.210,140.330.310.87
48.9214.500.280.3936.01
1.78U70.951.241.75
1 2 3 4 5
峰条峰峰峰动相稀释，制成每lml中含猪血白蛋白0.98mg的溶液，作为参照物溶液。
生物纤维蛋白胶催化剂供试品溶液制备取生物纤维蛋白胶催化剂20.03mg，置10ml 量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为生物纤维蛋白胶催化剂供试 品溶液。
分别取参照物溶液及生物纤维蛋白胶催化剂供试品溶液各20进样，照高效液相色 谱法测定，记录60分钟的色谱图，见附图3-4。以猪血白蛋白的色谱峰(S峰)的相对保留 时间和相对峰面积为1计算其它色谱峰的相对保留时间和相对峰面积。 3.2共有峰确定
通过10批生物纤维蛋白胶催化剂指纹图谱测定，比较其色谱图，确定共有峰为7个，
其中超过总峰面积3%的指纹峰为4号峰(平均RT为0.867)， 5号峰(猪血白蛋白即参照
峰的RT为1.000); 7号峰(平均RT为1.501)。 10批生物纤维蛋白胶催化剂共有峰相对峰
面积及相对保留时间统计结果见表5、表6、表7。
表5 10批生物纤维蛋白胶催化剂相对保留时间统计
峰号样l样2样3样4样5样6样7样8样9样10均值RSD%
10.6710.6690.6700.6680.6670.6670.6680.6700.6710.6700.6690.23
20.7320.7290.7310.7330.7320.7280.7310.7300.7340.7300.7310.25
30.7980.8030細0.7960.7990.7930細0.8030.7980.8040.7990.43
40.8670細0.8670.8580.8560.8610.8630,8670.8690.8690.8650.55
5l扁l細l細l細l細l細l細l扁l細l細1.0000.00
61.4151.4151.4151.4091.3971.3931.3981.4151,4141.4151.4090.64
71,5011.5061.5011,4991.4971.4971.4991.5021.5031.5011.5010.18
表6 10批生物纤维蛋白胶催化剂样品的相对峰面积值(％ )
峰号样1样2样3样4样5样6样7样8样9样IO
11.741.840.860.820,900.971.231.640.771,52
22.521.791.251.221.261.311.462.121.061.64
32.582"401.100.660.320.660.321.720.761.80
411.0610.767.495.123.453.818,9310.436.1510.12
570.26783161.9487.8989.40歸380.1272.8361.3480.49
67.670,7924.301.650.630.362.887.0625.700.41
73,,843.643.013.073.823.745.064.144.033.73
表7生物纤维蛋白胶催化剂样品的特征峰相对保留时间及相对峰面积范围 特征峰 相对保留时间 相对峰面积范围(％)
峰1 0,669 0.77~1.84
峰2 0.731 1.06-2.52
峰3 0.799 0.32 2.583.3指纹图谱重现性试验
以生物纤维蛋白胶催化剂080901批为供试品(N-5)，按照指纹图谱重现性规定方法操
作，分别对共有峰相对保留时间及共有峰的相对峰面积(所有峰占总峰面积百分比％)迸行
统计，RSDX末超过3X。结果见表8
表8重现性实验结果 (n-5) 特征峰~相对保留时间OOSD(%) 相对峰面积 RSD(%)
3.4指纹图谱精密度试验
按照指纹图谱精密度规定方法操作，以生物纤维蛋白胶催化剂080901批为供试品， 取1份，连续进样5次，分别对共有峰相对保留时间及共有峰的相对峰面积进行统计，RSD %末超过3%。 3.5指纹图谱稳定性试验
按照指纹图谱稳定性测定方法操作，以生物纤维蛋白胶催化剂080901批为供试品， 考察24小时溶液稳定，分别对共有峰相对保留时间及共有峰的相对峰面积进行统计，12 小时RSDX不超过3%。供试品12小时稳定。
以上试验显示，该测定方法稳定可靠，指纹图谱相对稳定。
实施例3
取生物纤维蛋白胶主体胶081201，按实施例1生物纤维蛋白胶主体胶HPLC标准指纹 图谱的建立方法中的条件和方法，取生物纤维蛋白胶主体胶19.48mg，置10ml量瓶中，加 水溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为生物纤维蛋白胶主体胶供试品溶液；分 别取实施例1参照物溶液及上述供试品溶液各20ul进样，照高效液相色谱法测定，记录 60分钟的色谱图及DAD三维图谱，得指纹色谱图(见图5)及DAD三维图(见图7)。 以猪纤维蛋白原的色谱峰(S峰)的相对保留时间为1计算其它色谱峰的相对保留时间并计算相对峰面积，其3个主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面积分别为l号峰(猪纤维蛋 白原)RT为1.000，相对峰面积50.79%, 2号峰RT为1.458，相对峰面积13.47%; 5号 峰RT为2.257，相对峰面积35.97% 。
实施例4
取生物纤维蛋白胶催化剂081201，按实施例2生物纤维蛋白胶催化剂HPLC标准指纹 图谱的建立方法中的条件和方法，取生物纤维蛋白胶催化剂19.48mg，置10ml量瓶中，加 水溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为生物纤维蛋白胶催化剂供试品溶液；分 别取实施例2参照物溶液及上述供试品溶液各20iU进样，照高效液相色谱法测定，记录 60分钟的色谱图及DAD三维图谱，得指纹色谱图(见图6)及DAD三维图(见图8)。 以猪血白蛋白的色谱峰(S峰)的相对保留时间为1计算其它色谱峰的相对保留时间并计算 相对峰面积，其3个主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面积分别为4号峰RT为0.866， 相对峰面积7.32%; 5号峰(猪血白蛋白)RT为1.000,相对峰面积78.31%; 7号峰RT 为1.499，相对峰面积3.64%。
权利要求
1.一种生物纤维蛋白胶指纹图谱的建立方法，其特征在于包括以下步骤供试品溶液的制备A、主体胶供试品溶液的制备取主体胶适量，精密称重，置量瓶中，加水或流动相溶解并定容，摇匀，过滤，取续滤液作为主体胶供试品溶液；或B、催化剂供试品溶液的制备取生物纤维蛋白胶催化剂适量，精密称定，置量瓶中，加水或流动相溶解并定容，摇匀，过滤，取续滤液作为催化剂供试品溶液。主体胶参照物溶液的制备取猪血纤维蛋白原对照品适量，用水或流动相稀释，制成主体胶参照物溶液，理论塔板数以猪血纤维蛋白原峰计算并作为主体胶参照物；催化剂参照物溶液的制备取猪血白蛋白对照品适量，用水或流动相稀释，制成催化剂参照物溶液，理论塔板数以猪血白蛋白峰计算并作为催化剂参照物；测定精密吸取各供试品溶液及参照物溶液，分别注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，色谱条件色谱柱采用Protein-PakTM300SW分子排阻色谱柱，流动相为20mmol/L磷酸钠的水溶液，紫外光190-280nm带二极管阵列检测器检测；并以面积归一化法计算各峰的相对峰面积，分别得到生物纤维蛋白胶主体胶指纹图谱及生物纤维蛋白胶催化剂指纹图谱。
2. 根据权利要求1所述的生物纤维蛋白胶指纹图谱的建立方法，其特征在于所述生 物纤维蛋白胶主体胶指纹图谱中，共有峰有5个，其中超过总峰面积10%的指纹峰有3个， 以猪血纤维蛋白原的色谱峰的相对保留时间为1计算其它色谱峰的相对保留时间并计算相 对峰面积，上述3个指纹峰分别是1号峰猪血纤维蛋白原即参照峰的RT为1.000，相对 峰面积范围为38.86% 51.64%;2号峰的平均RT为1.456，相对峰面积范围为12.27%~15.49 %; 5号峰的平均RT为2.258,相对峰面积范围为34.51%~44.64% 。
3. 根据权利要求l所述的生物纤维蛋白胶指纹图谱的建立方法，其特征在于所述生 物纤维蛋白胶催化剂指纹图谱中，共有峰有7个，其中超过总峰面积3%的指纹峰有3个， 以猪血白蛋白的色谱峰的相对保留时间为1计算其它色谱峰的相对保留时间并计算相对峰 面积，上述3个指纹峰分别是4号峰的平均RT为0.865，相对峰面积范围为3.45%~11.06 %; 5号峰猪血白蛋白即参照峰的RTl.OOO,相对峰面积范围为61.34%~89.40%; 7号峰的 平均RT 1.501,相对峰面积范围为3.01%~5.06%。
4. 根据权利要求1所述的生物纤维蛋白胶指纹图谱的建立方法，其特征在于在制 备供试品溶液A时加水或流动相的量不少于10倍主体胶重量；在制备供试品溶液B时， 加水或流动相的加入量不少于IO倍催化剂重量。
5. 根据权利要求l所述的生物纤维蛋白胶指纹图谱的建立方法，其特征在于所述的色谱条件中，流动相为20mmol/L磷酸钠的水溶液，流动相的流速为0.3ml/min-0.8ml/min;参照物浓度为每lml含0.1 2.0mg。
6. 根据权利要求1所述的生物纤维蛋白胶指纹图谱的建立方法所得到标准指纹图谱，是通过比较10批生物纤维蛋白胶主体胶指纹图谱及生物纤维蛋白胶催化剂指纹图谱色谱图，由其共有特征峰构成的生物纤维蛋白胶主体胶标准指纹图谱及生物纤维蛋白胶催化剂标准指纹图谱。
7. 根据权利要求6所述的生物纤维蛋白胶主体胶标准指纹图谱，其特征在于5个共有峰的相对保留时间的相对标准偏差RSD均小于3%， 1号峰猪血纤维蛋白即参照峰的RT为1.000， RSD为O.OOX,相对峰面积范围为38.86%~51.64%; 2号峰的平均RT为1.456，RSD为0.62%，相对峰面积范围为12.27%~15.49%; 3号峰的平均RT为1.998， RSD为0.63%,相对峰面积范围为0.18% 0.48%; 4号峰的平均RT为2.135， RSD为0.61%,相对峰面积范围为0.22% 0.84%; 5号峰的平均RT为2.258， RSD为2.94%,相对峰面积范围为34.51% 44.64%。
8. 根据权利要求6所述的生物纤维蛋白胶催化剂标准指纹图谱，其特征在于7个共有峰的相对保留时间的相对标准偏差RSD均小于2%, 1号峰的平均RT为0.669， RSD为0.23%,相对峰面积范围为0.77% 1.84%; 2号峰的平均RT为0.731， RSD为0.25%,相对峰面积范围为1.06%~2.52% ; 3号峰的平均RT为0.799， RSD为0.43%,相对峰面积范围为0.32%~2.58%; 4号峰的平均RT为0.865， RSD为0.55%, 相对峰面积范围为3.45°/。~11.06%; 5号峰猪血白蛋白即参照峰的RT为1.000， RSD为0.00%,相对峰面积范围为61.34%~89.40%; 6号峰的平均RT为1.409, RSD为0.64%，相对峰面积范围为0.36%~25.70%; 7号峰的平均RT为1.501, RSD为0.18%,相对峰面积范围为3.01%~5.06%。
9. 权利要求l所述的生物纤维蛋白胶指纹图谱的建立方法，应用于生物纤维蛋白胶质量控制和真伪鉴别。
全文摘要
本发明公开了一种生物纤维蛋白胶指纹图谱的建立方法及标准指纹图谱。涉及生物纤维蛋白胶制品的质量控制方法。本发明通过对10批生物纤维蛋白胶的高效液相色谱HPLC指纹图谱进行比较，确定了其共有指纹特征，得到标准指纹图谱。本生物纤维蛋白胶除溶解液外分为主体胶与催化剂二个部分，主体胶指纹图谱中，共有峰有5个，其中超过总峰面积10％的指纹峰有3个，催化剂指纹图谱中，共有峰有7个，其中超过总峰面积3％的指纹峰有3个。本方法简便、稳定、精密度高、重现性好、易于掌握，能从色谱的整体特征面貌上把握物生物纤维蛋白胶的品种质量情况，为生物纤维蛋白胶质量控制和真伪鉴别提供了一种全新的方法。
文档编号G01N30/00GK101526507SQ20091003853
公开日2009年9月9日 申请日期2009年4月10日 优先权日2009年4月10日
发明者春 向, 李吉来, 江彩霞, 潘小宁, 肖尚志, 星 黄 申请人:广州倍绣生物技术有限公司