专利名称：一种增强免疫功能的兽药的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种免疫增强剂，具体的说是一种增强免疫功能的兽药。
背景技术：
目前，疾病对畜禽(尤其是猪与鸡)造成危害越来越大，新病不断出现，老 病发病率居高不下，发病情况日趋复杂，混合/继发感染普遍存在，且以病毒感 染为主，免疫了相应疫苗但还是时有发病，控制难度越来越大，给畜禽的生产带 来巨大的经济损失。
在集约化饲养的猪群中的感染现象日益为人们所关注，特别在从患有多系统 衰竭综合征的猪中发现致病性II型圆环病毒(PCV-2)后，许多研究报道了 PCV-2 能引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)。 PCV-2可引起猪的B和T淋巴细胞 的减少并造成免疫抑制。同时，PCV-2可以与其它病毒共同感染，如猪繁殖与呼 吸综合症病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(ADV)、猪细小病毒(PPV)，从而加重感 染猪群的临床症状和病变。
鸡群中，免疫抑制性疾病也越来越常见，由它造成的经济损失日趋严重，许 多病毒感染都可能造成鸡群不同程度的免疫抑制状态，如传染性法氏囊病病毒 (IBDV)、马立克病病毒(MDV)、网状内皮增生病病毒(REV)、鸡传染性贫血病 毒(CIAV)、呼肠孤病毒(ReoV，传染性关节炎病毒)、鸡白血病病毒(ALV)等。 在这类可引起鸡群免疫抑制的病毒感染中，网状内皮增生病病毒、鸡传染性贫血 病毒和鸡传染性关节炎病毒(呼肠孤ReoV)这三种病毒不仅能通过接触横向传 染，还能通过鸡胚垂直传染。鸡群的免疫抑制病毒感染不仅影响鸡群的生产性能， 更易导致多种其它细菌性和病毒性继发感染，且易造成对特定疫苗免疫反应抑制 作用，如导致对新城疫病毒(Newcastle Disease Virus ，NDV)疫苗抗体反应的 减弱并使有效抗体滴度持续时间短。
除了免疫抑制性疾病外，尚有霉菌毒素、各种应激因素以及营养、药物等等 引起畜禽免疫抑制。
中药可从整体上调理机体的各种功能，中药免疫增强剂可提高机体的非特异性免疫能力；且中草药资源丰富，价格低廉，长期使用对机体的毒副作用小， 低残留或无残留，因此，复方中草药免疫增强剂是近年来动物用免疫增强剂的发 展趋势之一。申请号为200510029787. 5的"中草药复方动物免疫增强剂"中公 布了一种动物免疫增强剂，由柴胡、黄芪、防风、党参、淫羊藿、大青叶、忍冬 藤、剌五加及腐植酸等中药组成。但是，这种复方制剂组分太多，复杂，产品质 量难于控制且药效不稳定。
发明内容
本发明针对当前畜禽疾病的现状，特别是针对免疫抑制性因素提供毒副作用 小、不易产生耐药性的增强免疫功能的兽药，而且安全、高效、质量可控。
为此，本发明所采用的技术方案是 一种增强免疫功能的兽药，其特征在于
其配方组分(按重量计)为黄芪9 18份，淫羊藿6 9份，女贞子6 9份。 本发明可制成颗粒、口服液、注射液、片剂、散剂等各种剂型。
与现有技术相比，本发明具有如下优点
1. 安全本发明选用黄芪、淫羊藿、女贞子为原料，这些原料为天然中药， 具有很长的临床应用历史，毒副作用小，无残留，而且这些天然中药原料及其产 物均可在自然环境中降解，不致造成环境污染。
2. 高效本发明根据中医基础理论，结合畜禽免疫抑制性因素的研究，进
行中医辩证论治组方，符合中医学特征，产品经试验，效果显著。
3. 质量可控本发明产品制定产品质量标准，以黄芪甲苷和淫羊藿苷作为
薄层色谱，以淫羊藿苷((:33仏。015)计，测成品总黄酮含量，质量稳定、可控。
具体实施例方式
实施例l: 一种增强免疫功能的兽药，按下述配比称取原料(kg):黄芪18、
淫羊藿9、女贞子9，经提取制成颗粒。
制备方法将以上三味中药共同加水煎煮三次，每次1.5小时，合并煎液，
过滤，过滤浓縮至1 : 1 (药材药液)，加3倍量95%乙醇，静置(4°C) 24小 时，过滤，滤液回收乙醇，并减压浓縮至相对密度为1.30 1.35 (80°C)的浸膏；取浸膏1份，加蔗糖粉3份，糊精1份，混匀，制成颗粒，干燥，即得。 本品含总黄酮以淫羊藿苷(C33H4。015)计，每lg不得少于0. 9mg。 每100g相当于原生药120g。
实施例2: —种增强免疫功能的兽药，按下述配比称取原料(kg):黄芪15、 淫羊藿8、女贞子8，经提取制成口服液。
制备方法将以上三味中药共同加水煎煮三次，每次1.5小时，合并煎液， 过滤，过滤浓縮至1 : 1 (药材药液)，加3倍量95%乙醇，静置(4'C) 24小 时，过滤，滤液回收乙醇，药液加纯化水稀释，调PH至5.0-7.0，加适量防腐 剂，加纯化水调整至每lml相当于原生药1.2g，灌装，灭菌，即得。
本品含总黄酮以淫羊藿苷(C33H4。015)计，每lml不得少于0. 9mg。
每100ml相当于原生药120g。
实施例3: —种增强免疫功能的兽药，按下述配比称取原料(kg):黄芪12、 淫羊藿7、女贞子7，经提取制成注射液。
制备方法将以上三味中药共同加水煎煮三次，每次1.5小时，合并煎液， 过滤，过滤浓縮至1 : 1 (药材药液)，加3倍量95%乙醇，静置(4°C) 24小 时，过滤，滤液回收乙醇，药液加5倍量95%乙醇，静置(4°C) 24小时，过滤， 滤液回收乙醇，加注射用水稀释，调PH至5.0-7.0，再加注射用水调整至每lml 相当于原生药1.2g，滤过，灌装，灭菌，即得。
本品含总黄酮以淫羊藿苷(C33H4。015)计，每lml不得少于0. 9mg。
每100ml相当于原生药120g。
实施例4: 一种增强免疫功能的兽药，按下述配比称取原料(kg):黄芪9、 淫羊藿6、女贞子6，按照实施例1的制备方法制成颗粒，成品中黄酮的含量与 实施例l相同。
现以实施例1的增强免疫功能的兽药颗粒为例，以鸡为动物模型通过实验来 证明其对动物免疫能力的增强作用，实施例2-4经类似的实验证明具有相近的效 果。(一)材料与方法
1.材料及来源
1. 1受试药物
1. 1. 1名称本发明提供的增强免疫功能的兽药颗粒 1.1.2研制单位浙江金大康动物保健品有限公司 1. 1. 3规格100g/包。 1.2对照药物
1.2.1名称黄芪多糖口服液
1.2.2生产单位广州白云宝神动物保健品有限公司
1.2.3批号050901
1. 2. 4规格100 ml含100 g原药材
2. 试验动物
2.1品种哈巴德雏肉鸡
2.2来源购自宁波正大农业有限公司种鸡场 2.3日龄1日龄饲养至6日龄
2.4每组动物数30只
2.5词养条件饲养在严格消毒的实验室内，饲喂731鸡颗粒料(广东恒兴
集团浙江恒兴饲料有限公司)，饮用洁净自来水。
3. 试验分组及给药途径
150只6日龄哈巴德白羽雏肉鸡逐只空腹称重编号，根据体重离散度随机分为 5组，每组30只。当日开始给药，次日(7日龄)5组试验鸡均按说明书滴眼接种 鸡新城疫(ND)IV系疫苗。
3.1药物试验组设受试药物高剂量组、中剂量组和低剂量组三个组。 低剂量组每羽每次O.l g， 一日2次，饮水给药，连用5天； 中剂量组每羽每次0.15 g， 一日2次，饮水给药，连用5天； 高剂量组每羽每次0.2 g， 一日2次，饮水给药，连用5天。 3.2黄芪多糖口服液药物对照组每羽每次0.1ml， 一日2次，饮水给药，连用5天。
3.3空白对照组不添加任何药物。 试验分组及给药途径具体情况见表1。
表5-1试验分组及处理
组试验鸡数用药
名称剂量及给药途径
别(只)天数
I空白对照组不给药30
II黄芪多糖口服液对照组0. lml/羽， 一日2次，饮水给药305
III低剂量组0. lg/羽， 一日2次，饮水给药305
IV中剂量组0. 15g/羽， 一日2次，饮水给药305
V高剂量组0.2g/羽， 一日2次，饮水给药305
4.观察指标及检测方法
4.1 ND-HI抗体(新城疫-血凝抑制抗体)检测分别于免疫后第7天和第21 天，随机挑选10羽，翅静脉采血lml，分离血清，采用"U"微量血凝板以鸡新 城疫血凝抑制(HI)试验检测M)-HI抗体效价。
抗体效价的测定方法"U"型反应板的每一孔内加入稀释液(0.01 mol/L PH7.2 PBS) 50 pl。取待检血清50 pl，从第一孔开始，依次作倍比稀释至最后 一孔，弃除混合液50pl。每孔分别加入l : 16鸡新城疫标准抗原稀释液50 nl; 同时，设鸡新城疫标准抗原、阳性血清(均购自浙江省畜禽防检站)、稀释液三 个对照，于微量振荡器上摇匀，置培养箱内37。C放置30min。每孔再加入1%鸡红 细胞悬液50pl， 混匀，置37。C放置30 min后观察。
4. 2免疫器官体重系数的计算于免疫后第7天，随机挑选鸡10羽，经颈 动脉放血致死后，采集脾脏和法氏囊二种免疫器官，称取湿重，按下列公式计算 免疫器官指数。
脾指数=脾湿重(mg) /鸡活体重(g)。
法氏囊指数:法氏囊湿重(mg)/鸡活体重(g)。5.数据统计与疗效评价
运用t检验比较各处理组与空白对照组，受试药物试验组与黄芪多糖对照 组，以及受试药物不同剂量组间的差异显著性。 (二)试验结果及分析
1.对鸡新城疫HI抗体效价的影响
各试验组鸡血清中ND-HI抗体效价测定结果见表2。
表2各试验组鸡血清中ND-HI抗体效价测定结果(log2, X土SD)组别名称14d28d
I空白对照组6. 40 ±0. 702. 30±0. 82
II黄芪多糖口服液对照组9. 60 ±1.58'*3. 70±2. 21
III低剂量组8. 78 ±1.25"6. 60±2. 27**aa
IV中剂量组9.00±1. 49**10. 50 ±0. 85**幼
V高剂量组8. 80±1.03**8. 30±1. 25**助
注与空白对照组比较，*代.05和**代.01;与黄芪多糖对照组比较，8代.05和 ，0.01。2.对免疫器官指数的影响 各试验组鸡免疫器官指数测定结果见表3。 表3各试验组鸡免疫器官指数测定结果(mg/g) (X土SD)
组别名称脾指数法氏囊指数
I空白对照组0. 596±0. 1432. 276 ±0. 379
II黄芪多糖口服液对照组0. 749 ±0. 176*2. 704 ±0. 380*
III低剂量组0. 676±0. 1342. 378 ±0. 484
IV中剂量组0. 771 ±0. 182*2. 825 ±0. 444"
V高剂量组0. 740 ±0. 145*2. 679 ±0. 365*
注与空白对照组比较，*代0.05和**代0.01。3. 结果分析
各试验组鸡血清中ND-HI抗体效价经t检验统计分析。结果表明免疫后第 7天，受试药物三个剂量组以及黄芪多糖药物对照组鸡血清中ND-HI抗体效价极 显著高于空白对照组(代0.01)。受试药物三个剂量组与黄芪多糖药物对照组之间 血清中ND-HI抗体效价均无显著性差异(AO. 05%)。受试药物三个试验组鸡血清 中ND-HI抗体效价之间差异不显著(》0. 05)。免疫后第21天，受试药物三个剂 量组鸡血清中ND-HI抗体效价极显著高于空白对照组和黄芪多糖药物对照组 (代O.Ol)。三个剂量试验组鸡血清中ND-HI抗体效价之间，以中剂量组最高，高 剂量组次之，低剂量组最低，各组间差异显著或极显著(代0.05或代0.01)。
采用t检验对各试验组鸡脾指数和法氏囊指数统计分析，免疫后第7天，受 试药物中剂量试验组、高剂量试验组以及黄芪多糖口服液药物对照组鸡的脾指数 和法氏囊指数均极显著大于空白对照组(代O. 01)，而受试药物低剂量试验组与空 白对照组之间差异不显著("0.05)。受试药物三个试验组与黄芪多糖药物对照 组之间均无显著性差异("0.05)。受试药物三个剂量组之间，以中剂量组鸡的 平均脾指数和法氏囊指数较大，但各组之间差异不显著(》0.05)。
4. 不良反应及对症处理
本试验过程中未发现不良反应。
(三)结论
1. 受试药物能增强鸡对新城疫(ND) IV系弱毒疫苗的免疫应答，具有显著 的免疫增强作用，且效果优于黄芪多糖。
2. 临床推荐使用剂量按每公斤体重0.15g使用，或按100g兑水IOOL， 自由饮水，连用3 5天。
最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干具体实施例。若本领 域普通技术人员从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是 本发明的保护范围。
权利要求
1.一种增强免疫功能的兽药，其特征在于其配方组分(按重量计)为黄芪9～18份，淫羊藿6～9份，女贞子6～9份。
2. 根据权利要求1所述的增强免疫功能的兽药，其特征在于其配 方组分(按重量计)为黄芪18份，淫羊藿9份，女贞子9份。
3. 根据权利要求1或2所述的增强免疫功能的兽药，其特征在于: 其剂型为颗粒、口服液、注射液、片剂或散剂。
全文摘要
本发明涉及一种增强免疫功能的兽药，针对当前畜禽疾病的现状，特别是针对免疫抑制性因素提供毒副作用小、不易产生耐药性的动物用中药免疫增强剂，而且安全、高效、质量可控。本发明提供的增强免疫功能的兽药，其特征在于其配方组分(按重量计)为黄芪9～18份，淫羊藿6～9份，女贞子6～9份。本发明可制成颗粒、口服液、注射液、片剂、散剂等各种剂型。
文档编号A61K36/481GK101647852SQ200910101869
公开日2010年2月17日 申请日期2009年8月28日 优先权日2009年8月28日
发明者兰新财, 缪雪荣 申请人:缪雪荣