专利名称：用于治疗神经变性疾病的组合物和方法
技术领域：
本发明涉及治疗神经变性疾病的组合物和方法。在一些实施方式中，本发明提供 了用于治疗和预防老年性耳聋的组合物。
背景技术：
年龄相关的听力损失或老年性耳聋对社会提出巨大的人道主义和经济的挑战。在 美国，据估计年龄在65和75之间的23%的人和年龄超过75的40%的人患有老年性耳聋， 且患有这一病症的人数预期随着老年人口的增长逐渐增长(Someya等，Neurobiol. Aging 20 1613 [2007])ο老年性耳聋是在大多数个体中随着它们变老而逐渐发生的听力损失。听力损失是 与老化关联的普遍病症。与老年性耳聋关联的损失由于高音调声音或高频率声音，通常很 大。存在许多老年性耳聋的原因。最普遍地，随着他或她年龄增长，其起因于人的内耳 中的病理变化，但是老年性耳聋也可能起因于中耳的病理变化或起因于沿着通往脑的神经 途径的复杂的病理变化。老年性耳聋最通常发生在双耳中，同样地感染它们。因为损失过 程是逐渐的，患有老年性耳聋的人可能不会认识到他们的听力在减退。患有老年性耳聋，声 音通常较不清楚且音量降低。这个引起听力和理解语言的困难。感觉神经性听力损失由内耳或听神经的病症引起。老年性耳聋通常是感觉神经听 力病症。其最通常由内耳中逐渐的变化引起。反复暴露于日常交通声音或建筑工作，吵闹 的办公室，产生噪音的设备和大声的音乐的蓄积作用可以引起感觉神经性听力损失。感觉 神经性听力损失最通常起因于毛细胞(内耳中的感觉感受器)和螺旋神经节细胞(螺状神 经元)的损失。这可以由于遗传因素以及老化，各种健康状况和一些药物(阿司匹林和某 些抗生素)的副作用而发生。老年性耳聋可以由心脏病、高血压、糖尿病引起的血管(关于血管)病况或其它循 环问题引起的向耳部的血液供应的变化引起。损失可以是轻度、中度或严重的。有时老年性耳聋是传导性听力损失，意味着声音敏感性的损失是由外耳和/或中 耳的异常引起。这些异常情况可能包括鼓膜(耳膜)的降低的功能或将音波从鼓膜递送到 内耳的中耳中的三块小骨的降低的功能。存在帮助患有老年性耳聋的人的许多策略。对于一些个人可以推荐助听器。助听 设备在一些情况中可以提供听力能力的进一步的提高。这种设备的一个实例是内装的电话 扩音器。另一实例是通过递送像广播的声波使声音更清楚的具有或没有助听器的FM系统。 读唇法训练(使用视觉信号确定说话的内容)可以帮助患有老年性耳聋的这些人更好地理 解交谈或陈述中说的内容。
然而，还没有开发出用于老年性耳聋的预防性或治疗性介入。发明概述本发明涉及治疗神经变性疾病的组合物和方法。在一些实施方式中，本发明提供 了用于治疗和预防老年性耳聋的组合物。在一些实施方式中，治疗了其它神经变性疾病。在 一些实施方式中，本发明提供了营养补剂、食品和药物组合物，和用于施用包含预防或减轻 神经变性疾病的化合物的这些产品的方法。在一些实施方式中，本发明提供用于治疗和/或预防神经变性疾病(例如，老年 性耳聋)的方法，包括在预防或减轻症状的条件下向具有神经变性疾病的症状或处于神经 变性疾病风险中的受治疗者施用包含珊瑚萃取物的组合物。在一些实施方式中，珊瑚萃取 物是含水液体(例如，MiIiQ水或蒸馏水)。在一些实施方式中，珊瑚萃取物具有约7.0至 9. 0(例如，8. 0)的pH。在一些实施方式中，珊瑚萃取物具有约1. 4mg/L至140mg/L(例如， 7mg/L 至 21mg/L、8. 5mg/L 至 19. 5mg/L、10mg/L 至 18mg/L、llmg/L 至 17mg/L、12. 8mg/L 至 15. 8mg/L、13. 6mg/L 至 15mg/L、13. 9mg/L 至 14. 7mg/L、14mg/L 至 14. 6mg/L、14. 2mg/L 至 14. 5mg/L，或约14. 30mg/L)的钙含量。在一些实施方式中，珊瑚萃取物具有约0. 54mg/L至 54. Omg/L (例如，2. 7mg/L 至 8. lmg/L、3. 2mg/L 至 7. 6mg/L、3. 8mg/L 至 7mg/L、4. 3mg/L 至 6. 5mg/L、4. 9mg/L 至 5. 9mg/L、5. lmg/L 至 5. 7mg/L、5. 2mg/L 至 5. 6mg/L、5. 3mg/L 至 5. 5mg/ !^力^日！^/！至日乂日！^/！，或约日乂!!^/!)的镁含量。在一些实施方式中，珊瑚萃取物具有 约 0. lmg/L 至 50. Omg/L(例如，0. 53mg/L 至 1. 59mg/L、0. 76mg/L 至 1. 46mg/L、0. 86mg/L 至 1. 26mg/L、0. 96mg/L 至 1. 16mg/L、l. Omg/L 至 1. lmg/L、1. 03mg/L 至 1. 09mg/L、l. 04mg/L 至 1. 08mg/L、1. 05mg/L 至 1. 07mg/L、1. 055mg/L 至 1. 065mg/L,或约 1. 06mg/L)的钠含量。在 一些实施方式中，珊瑚萃取物具有约0. 03mg/L至30. Omg/L (例如，0. 14mg/L至0. 42mg/L、 0. 17mg/L 至 0. 53mg/L、0. 2mg/L 至 0. 36mg/L、0. 22mg/L 至 0. 34mg/L、0. 25mg/L 至 0. 31mg/ L、0. 27mg/L 至 0. 29mg/L、0. 275mg/L 至 0. 285mg/L、0. 272mg/L 至 0. 288mg/L、0. 277mg/L 至 0. 283mg/L,或约0. 28mg/L)的钾含量。在一些实施方式中，液体具有约5. 8mg/L至580mg/ L (例如，29mg/L 至 87mg/L、35mg/L 至 81mg/L、41mg/L 至 75mg/L、47mg/L 至 69mg/L、52mg/L 至 64mg/L、55mg/L 至 61mg/L、56mg/L 至 60mg/L、57mg/L 至 59mg/L、57. 5mg/L 至 58. 5mg/L, 或约58mg/L)的硬度。在一些实施方式中，珊瑚萃取物的施用在受治疗对象中产生螺旋神 经节细胞的损失的预防或减少。在一些实施方式中，珊瑚液体通过以下方法制备将珊瑚颗粒浸渍在纯化的水中； 并调节水的PH至8. 0士0. 5。在一些实施方式中，珊瑚液体通过以下制备使水通过包括珊 瑚颗粒的水纯化柱(例如，家用水或工业水纯化系统)。本发明另外提供用于治疗神经变性疾病的方法，其包括向具有神经变性疾病症 状的受治疗者施用约7. 0至9. 0的pH的天然石的提取物，其包含约1. 4mg/L至140mg/L的 钙含量、约0. 54mg/L至54mg/L的镁含量、约0. lmg/L至50. Omg/L的钠含量、约0. 03mg/L 至30. 0mg/L的钾含量，和约5. 8mg/L至580mg/L的硬度。在一些实施方式中，天然石是石 灰石、碳酸钙、碳酸镁、碳酸钠、碳酸钾等。本发明另外提供用于治疗神经变性疾病的方法，其包括向具有神经变性疾病症 状的受治疗者施用约7. 0至9. 0的pH的化合物的提取物，其包含约1. 4mg/L至140mg/L的 钙含量、约0. 54mg/L至54mg/L的镁含量、约0. lmg/L至50. 0mg/L的钠含量、约0. 03mg/L至30. Omg/L的钾含量，和约5. 8mg/L至580mg/L的硬度。在一些实施方式中，化合物是碳 酸钙、碳酸镁、碳酸钠、碳酸钾或这些化合物的混合物。本发明进一步提供了包含足以预防或减轻神经变性疾病的剂量的珊瑚提取物的 食品、营养补剂或药物组合物。本发明的另外的实施方式在本文被描述。附图简述附
图1表示在本发明的实施方式的开发过程中进行的实验中使用的示例性研究 设计。附图2表示20个月鼠龄的对照和CW小鼠的体重。附图3表示由珊瑚钙水对老年性耳聋的预防。附图4表示来自对照(A C)和CW(D F)的耳蜗底层的显微照片。箭头指明螺 旋神经节和毛细胞。比例条=50μπι(左图)。比例条=IOOym(中图和右图)。附图5表示珊瑚处理的水预防螺旋神经节神经元细胞损失。误差柱表示S. Ε. M0附图6表示由珊瑚处理的水预防毛细胞损失。误差柱表示S. Ε. M0为了促进对本发明的理解，许多术语和短语在下面定义如本文所用，术语“受治疗者”指任何动物(例如，哺乳动物)，包括但不限于，人、 非人灵长类、啮齿类、伴侣动物(例如，狗、猫等)，以及类似物，其是具体治疗的接受者。通 常，提到人受治疗者时，术语“受治疗者”和“患者”在本文互换使用。如本文所用，术语“非人动物”指所有的非人动物，包括但不限于脊椎动物，诸如啮 齿类、非人灵长类、羊、牛、反刍类、兔类、猪、山羊、马、犬、猫、鸟类等。如本文所用，术语“体外”指人工环境和人工环境中发生的过程和反应。体外环境 可以包括，但不限于，试管和细胞培养物。术语“体内”指自然环境(例如，动物或细胞)和 在自然环境中发生的过程或反应。术语“测试化合物”和“候选化合物”指为用于治疗或预防疾病、疾病(illness)、 疾病(sickness)或身体功能的病症(例如听力损失)的候选物的任何化学实体、药剂、药 物以及类似物。测试化合物包括已知的潜在的治疗化合物。通过使用本发明的筛选方法筛 选可以确定测试化合物具有治疗性。如本文所用，术语“样品”以其最广义使用。在一种含义中，其意指包括从任何来 源获得的标本或培养物，以及生物和环境样品。生物样品可以获自动物(包括人)且涵盖 液体、固体、组织和气体。生物样品包括血液产品，诸如血浆、血清以及类似物。环境样品包 括环境物质，诸如表面物质、土壤、水和工业样品。然而这些实例并非被解释为限制适用于 本发明的样品类型。“制备的食品”指批准用于人类消耗的任何预包装食物。如本文所用，术语“生理学上可接受的载体”指通常与油性药物一起使用的任何载 体或赋形剂。这些载体或赋形剂包括，但不限于，油、淀粉、蔗糖和乳糖。如本文所用，术语“ 口服递送媒介物”指口服递送药物的任何方法，包括但不限于 胶囊、丸剂、片剂和糖浆。如本文所用，术语“食品”指适合被人、非反刍动物或反刍动物消耗的任何食物或饲料。“食品”可以是制备的食物和包装的食物(例如，蛋黄酱、色拉调味汁、面包或乳酪) 或动物饲料(例如，挤出的和压出的动物饲料或粗制混合饲料)。如本文所用，术语“营养补剂”指被配制成饮食补剂或营养补剂用作饮食的一部分 的食品。如本文所用，术语“模拟物”指模拟配体与其靶的结合或相互作用，或模拟化合物 的生理效应的小分子化合物。例如，本文描述的化合物的模拟物是具有与化合物相同的生 理学效应(例如预防或治疗神经变性疾病)的小分子。如本文所用，术语“珊瑚水”指暴露于液体或溶剂的珊瑚提取的产物。在一些实施 方式中，珊瑚是从海洋底部采集的化石化的珊瑚颗粒。在一些实施方式中，珊瑚在提取之前 被粉末化的或以其他方式干燥。在一些实施方式中，液体是含水的(例如水，诸如纯化水或 蒸馏水)。在一些实施方式中，提取物包括盐和矿物质。在一些实施方式中，珊瑚萃取物具 有约7.0至9. 0(例如，8.0)的pH。虽然不需要了解精确的组合物，但在一些实施方式中， 提取物包含约 1. 4mg/L 至 140mg/L (例如 7mg/L 至 21mg/L、8. 5mg/L 至 19. 5mg/L、10mg/L 至 18mg/L、1 lmg/L 至 17mg/L、12. 8mg/L 至 15. 8mg/L、13. 6mg/L 至 15mg/L、13. 9mg/L 至 14. 7mg/ L、14mg/L 至 14. 6mg/L、14. 2mg/L 至 14. 5mg/L,或约 14. 30mg/L)的钙含量，约 0. 54mg/L 至 54. Omg/L (例如 2. 7mg/L 至 8. lmg/L、3· 2mg/L 至 7. 6mg/L、3. 8mg/L 至 7mg/L、4. 3mg/L 至 6. 5mg/L、4. 9mg/L 至 5. 9mg/L、5. lmg/L 至 5. 7mg/L、5. 2mg/L 至 5. 6mg/L、5. 3mg/L 至 5. 5mg/ L、5. 35mg/L 至 5. 45mg/L,或约 5. 4mg/L)的镁含量，约 0. lmg/L 至 50. Omg/L (例如 0. 53mg/L 至 1. 59mg/L、0. 76mg/L 至 1. 46mg/L、0. 86mg/L 至 1. 26mg/L、0. 96mg/L 至 1. 16mg/L、l. Omg/L 至 1. lmg/L、1. 03mg/L 至 1. 09mg/L、1. 04mg/L 至 1. 08mg/L、1. 05mg/L 至 1. 07mg/L、1. 055mg/ L 至 1. 065mg/L,或约 1. 06mg/L)的钠含量，约 0. 03mg/L 至 30. Omg/L(例如 0. 14mg/L 至 0. 42mg/L、0. 17mg/L 至 0. 53mg/L、0. 2mg/L 至 0. 36mg/L、0. 22mg/L 至 0. 34mg/L、0. 25mg/L 至 0. 3lmg/L、0. 27mg/L 至 0. 29mg/L、0. 275mg/L 至 0. 285mg/L、0. 272mg/L 至 0. 288mg/L、 0. 277mg/L 至 0. 283mg/L,或约 0. 28mg/L 的钾含量和约 5. 8mg/L 至 580mg/L (例如 29mg/L 至 87mg/L、35mg/L 至 81mg/L、41mg/L 至 75mg/L、47mg/L 至 69mg/L、52mg/L 至 64mg/L、55mg/L 至 61mg/L、56mg/L 至 60mg/L、57mg/L 至 59mg/L、57. 5mg/L 至 58. 5mg/L,或约 58mg/L)的硬 度。发明详述本发明涉及治疗神经变性疾病的组合物和方法。本发明的一些实施方式提供组合 物、药物组合物、食品、营养补剂和施用用于预防和治疗神经变性疾病诸如老年性耳聋的组 合物的方法。例如，在老年性耳聋的可靠的动物模型中进行体内实验，该模型显示15个月鼠龄 的年龄相关的听力损失的迟发(Keithley等，Hear Res. 188 21[2004])和12个月鼠龄的 SGC和毛细胞的显著损失(Keithley等，[2004]，增刊)。在本发明的实施方式的发展过程中进行的实验中，评价珊瑚处理的饮用水在动物 模型中对老年性耳聋预防和治疗效果。听力功能测试显示对照动物在8，16，32kHz显示了 严重的听力损失，而珊瑚处理的(CW)小鼠在8，16，32kHz显示了正常的听力或轻度听力损 失ΓΡ< 0.05，η = 7)，表明珊瑚处理的水显著保护听力功能。组织学分析显示，对照动物 的耳蜗显示螺旋神经节神经元和毛细胞的严重损失而CW动物耳蜗显示螺旋神经节神经元和毛细胞的轻度或较少的损失，表明珊瑚处理的水预防耳蜗细胞损失。此外，CW动物的顶 层、中层和底层平均螺旋神经节细胞(SGC)密度显著地高于对照动物，表明了珊瑚处理的 水预防螺旋神经节神经元细胞损失ΓΡ<0. 05，η = 4 5)。CW小鼠的中层和底层的平均 外毛细胞存活率显著地高于对照小鼠，表明珊瑚处理的水预防外毛细胞损失ΓΡ < 0. 05， η = 4 5)。总体来说，实验显示珊瑚处理的水的消耗引起预防和治疗老年性耳聋，并预 防或治疗与多种神经变性疾病和病况关联的生理学损伤。因此，在一些实施方式中，本发明 提供了使用珊瑚提取物(例如，水提取物)治疗和/或预防神经变性疾病诸如老年性耳聋 的方法。I.珊瑚提取物如上面描述，在一些实施方式中，本发明提供包含珊瑚提取物的组合物。在一些实 施方式中，该提取物在水溶液中。例如，在一些实施方式中，珊瑚处理的水使用珊瑚颗粒或 粉末产生。一种示例非限制性方法如下将珊瑚颗粒或粉末浸在蒸馏水或纯水中持续几分 至几年的时间(例如，1小时至1年，1小时至1个月，1小时至1星期，2小时至2天，12小 时至36小时，或约24小时)，然后使用NaOH或HCl将水的ρΗ调至8. 0士0. 5。因为珊瑚颗 粒富含矿物，包括钙、镁、钾、铁、锌、硒、锰、铬等，所以珊瑚处理的水富含这些矿物且是碱性 的。许多珊瑚处理的提取物的制剂适合用于本发明的实施方式的组合物和方法。在 一些实施方式中，施用是口服施用。本发明的实施方式的组合物可以以水溶液、油溶液， 或以本文讨论的任一其它形式提供。组合物也可以通过许多其它途径的任一种提供，所 述途径包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、髓内、鞘内、心室内、经皮、皮下、腹膜内、鼻内、 肠、局部、舌下或直肠方式。用于制剂和施用的技术的进一步细节可以参见Remington' s Pharmaceutical Sciences (雷明顿药物科学)(Maack Publishing Co.，Easton, PA)的最 新版本。在一些实施方式中，组合物单独提供为营养补剂，或其与其它成分组合提供为营 养补剂。在一些实施方式中，营养补剂被包装在可以包括描述补剂施用的剂量和时机的说 明书的容器或瓶中。在一些实施方式中，本发明的珊瑚提取物提供为包含提取物的食品。例如，在一 些实施方式中，珊瑚水被提供为用于人或动物消耗的瓶装水。在其它实施方式中，珊瑚提 取物被添加到制备的饮料产品，包括但不限于橙汁、蔬菜汁和类似水果饮料和蔬菜汁、可 乐饮料、姜酒、苏打水和类似碳酸饮料，运动饮料和类似软饮料、咖啡、黑茶、抹茶和类似 基于茶的饮料、可可、乳酸菌饮料和类似牛奶饮料、siruko、红豆年糕汤(zenzai)(稠的 红豆汤(azuki bean soup))，坚果(例如，杏仁或花生)饮料、麦芽饮料、啤酒饮料(hop beverage)、由除了茶之外的植物制备的茶类饮料(大麦茶、药茶、中国滨黎叶枸杞茶、 tochu(杜仲茶)，豆乳和含豆乳的饮料，膳食替换饮料、能量饮品、节食饮品和其它普通饮 料中。在一些实施方式中，饮料包含其他成分，包括但不限于碳酸水，食物淀粉-例如， 改进的，高果糖玉米糖浆和/或蔗糖和/或糖、苯甲酸钠、咖啡因、树脂的甘油酯、调味剂、 色素、防腐剂、其他抗氧化剂、乳化剂、缓冲剂、着色剂、调味剂、维生素、矿物质、核苷酸和核 苷、药剂、增稠剂和稳定剂等。在一些实施方式中，组合物与合适的抗氧化剂诸如卵磷脂、生育酚、维生素C、维生素C棕榈酸酯，或香料提取物，诸如迷迭香提取物，一起被包装用于人 类用途。在一些实施方式中，饮料包含维生素。实例包括但不限于水溶性的或油溶性的，天 然的或合成的，包括用作维生素制品的各种底物。天然的水溶性维生素的实例包括维生素 B1、B2、B6、B12、烟酸、泛酸、生物素、叶酸、硫辛酸、肌醇、维生素C以及类似物。天然油溶性 的维生素的实例包括维生素A、维生素D、维生素E、维生素K以及类似物。通常用作合成维 生素的维生素制品的实例包括维生素A制品，诸如视黄醇；维生素D制品，诸如麦角骨化醇 和二氢速硫醇；维生素Bl制品，诸如盐酸硫胺和硝酸硫胺；维生素Bl衍生物制品，诸如奥 托硫胺、盐酸地赛硫胺、二硫硫胺、双苯硫胺、呋喃硫胺和苯磷硫胺；维生素B2制品，诸如黄 素腺嘌呤二核苷酸、丁酸核黄素、核黄素和磷酸核黄素钠盐；维生素B6制品，诸如盐酸吡哆 醇、磷酸吡哆醇和磷酸吡哆醛；维生素B12制品，诸如腺苷钴胺、氰钴维生素、醋酸羟钴胺、 甲钴胺；维生素E制品，诸如生育酚琥珀酸钙和乙酸生育酚；维生素K制品，诸如植物甲萘 醌和四烯甲萘醌。在一些实施方式中，通过将成分添加到液体中(例如，上面描述的珊瑚提取物组 合物)不使用珊瑚制备包含珊瑚提取物成分的组合物。在一些实施方式中，具有上面描述的组分的提取物由天然石或化合物(例如，石 灰石、碳酸钙、碳酸镁、碳酸钠、碳酸钾等)单独或结合其它矿物质来制备。在一些实施方式中，珊瑚提取物通过包括珊瑚或其它天然石的水纯化系统来提 供。例如，在一些实施方式中，家用水纯化系统(例如，水过滤器、水龙头过滤器或净水器 (under sink filters))包括珊瑚柱或纯化柱或过滤器的珊瑚组件。在其它实施方式中，工 业水过滤系统(例如，用于商业产品或纯化水或包含纯化水的饮料)。II.治疗方法在一些实施方式中，本发明提供用于预防和治疗老年性耳聋和其它神经变性疾病 和病况的方法。例如，在一些实施方式中，将珊瑚提取物(例如，珊瑚处理的水)施用到受 治疗者以预防老年性耳聋。在其它实施方式中，将珊瑚提取物作为治疗施用到诊断患有老 年性耳聋的受治疗者。在一些实施方式中，以每日(或近似频度)为基础，施用珊瑚提取物 持续延长的一段时间(例如，数星期、数月或数年)。在一些实施方式中，珊瑚处理的水被提 供为即饮的水瓶。在其它实施方式中，珊瑚提取物提供为浓缩的提取物以与其它饮料或食 品混合(例如，上面描述的那些)。在其它实施方式中，珊瑚处理的水被用于治疗和/或预防其它疾病或耳蜗中与神 经变性关联的体征或症状。例如，在一些实施方式中，珊瑚处理的水被用于治疗和/或预防 阿尔兹海默病、帕金森病、亨延顿病、肌萎缩性侧索硬化、亚历山大病、阿尔珀病、运动失调 性毛细血管扩张病、巴腾病(也称为Spielmeyer-Vogt-Sjogren-Batten病)、牛海绵样脑 病(BSE)、卡纳万病、科凯恩综合征、皮质延髓退化、克罗伊茨菲尔特雅各布病、HIV-关联的 痴呆、肯尼迪病、克拉伯病、路易体痴呆、马约病(脊髓小脑性共济失调3型)、多发性硬化、 多系统萎缩症、神经莱姆病(Neuroborreliosis)、佩-梅氏病、皮克病、原发性侧索硬化症、 朊病毒病、雷夫索姆病、桑德霍夫病、谢尔德病、继发于阿狄森贫血的亚急性脊髓混合变性、 精神分裂症、Spielmeyer-Vogt-S jogren-Batten病(也已知为巴腾病)、脊髓小脑性共济失 调(具有不同特征的多个类型)、脊髓性肌萎缩、司-里-奥三氏病和脊髓痨。
鐘为了说明和进一步解释本发明的某些优选的实施方式和方面，提供以下实施例， 并且它们不被解释为限制其范围。实施例1A.材料和方法1. 1.水的制备制备珊瑚处理的水和对照水的方法如下将IOOg的珊瑚颗粒浸渍在2L的蒸馏水 中持续24hr，然后使用NaOH或HCl将水的pH调为8.0 士 0.5。使用蒸馏水制备对照水。使 用NaOH或HCl将对照水的pH调节至3. 0士0. 5，因为用于实验室小鼠的标准饮用水是酸化 的水，其PH是约3.0。1. 2.水组合物使用电感偶合等离子体发射光谱仪(η = 3)测定钙含量和镁含量。使用原子吸收 光谱仪(η = 3)测定钠含量和钾含量。使用二尾标准t检验检测数据。将所有数据报道为 平均值士 S. E.M。1. 3.动物和饮食处理已经描述了用于贮存和饲养雄性同系繁殖C57BL/6(B6)小鼠的方法的细节。简要 地说，将小鼠分成两组对照水(对照)和珊瑚处理的水(CW)。喂食CW治疗的小鼠与对照 小鼠相同的食物和相同的热量摄取，但从2个月鼠龄到20个月鼠龄喂食CW治疗的小鼠珊 瑚处理的水(图1)。喂食对照小鼠蒸馏水和酸化(PH3)水。在20个月鼠龄进行听力测试。 相同的动物被用于组织学评价、螺旋神经节细胞计数和毛细胞计数。1.4.听力评价已经描述了 ABR测量的详细过程。(Yamasoba等，2005)。简要地说，使用ABR记录 系统(Intelligent Hearing System)用短纯音刺激(4、8禾口 16kHz)测量ABR。将小鼠用盐 酸甲苯噻嗪(10mg/kg，肌内注射)和盐酸氯胺酮(40mg/kg，肌内注射)的混合物麻醉。将 每组七只小鼠用于这一研究，且将相同的小鼠用于以下的组织病理学分析。使用二尾标准 t检验检测数据。将所有数据报告为平均值士S. E.M。1. 5.组织病理学分析已经描述了用于组织处理的详细过程(Someya等，2007)。简要地说，将4%多聚甲 醛固定的和石蜡包埋的样品切成4μπι切片，装在甲硅烷涂覆的载玻片上，用苏木素和曙红 (HE)染色，并在光学显微镜(Leica Microsystems,Bannockburn, IL)下观察。将罗林塔尔 管分成三个区域顶部、中部和底部(Keithley等，2004)，并将三个区域用于耳蜗组织病理 学的评价。使用各组四至五只小鼠，小鼠与在ABR测试中使用的那些相同。评价每只小鼠 的来自一个单侧耳蜗的每五个切片中获得的五个模块切片。使用相同的动物用于螺旋神经 节细胞计数和毛细胞计数。使用20X物镜在耳蜗个体切片的顶层、中层和底层的各横截面中对螺旋神经节 细胞(SGC)计数。通过细胞核的存在鉴定细胞。在各管轮廓的数字显微照片上测量罗林 塔尔管的相应的面积。使用ImageJ软件，用光标描绘管的周边(Rasband，W. S.，Image J， U. S. NationalInstitutes of Health,Bethesda,Maryland,USA, 1997—2007.)。然后计算机 计算轮廓内的面积。将SGC密度计算为每Imm2的SGC数目。评价每只小鼠的一个耳蜗中的单侧顶层的五个切片。使用二尾标准t检验分析数据。将所有数据报告为平均值士S. E.M。使用40X物镜在耳蜗个体切片的顶层、中层和底层的各横截面中对外毛细胞 (OHC)和内毛细胞(IHC)计数。通过细胞核的存在鉴定细胞。如下计算外毛细胞存活率 (% ) :(0HC/3的#)X 100。如下计算内毛细胞存活率(％ ) :(0HC/1的#)X 100。评价每只 小鼠的一个耳蜗中的单侧顶层的五个切片。使用二尾标准t检验分析数据。将所有数据报 告为平均值士 S. E.M。B.结果2. 1.珊瑚处理的水的评价Cff的钙含量和钾含量显著高于对照的那些(表1) Γ P < 0. 05，η = 5)。CW的硬 度和ρΗ显著高于对照的那些Γ P < 0. 05，η = 3)。在对照水中未检测到镁和钠。2.2.听力功能和耳蜗组织病理学的评价为了检测珊瑚处理的水的长期消耗对老年性耳聋预防和治疗的效果，随后检测该 水是否在Β6小鼠中延迟老年性耳聋的迟发。从这些小鼠中测定的ABR阈值显示对照小鼠 在8，16，32kHz显示了严重的听力损失，而CW小鼠在8，16，32kHz显示了正常的听力或轻度 听力损失ΓΡ < 0. 05，η = 7)，显示珊瑚处理的水显著保持了听力功能(图3)。2. 3.耳蜗组织病理学评价接下来检测水对年龄相关的耳蜗退化的作用。对照小鼠(A)的耳蜗显示螺旋神经 节神经元(B)和毛细胞(C)的严重损失，而CW小鼠(D)的耳蜗显示螺旋神经节神经元和毛 细胞的轻度或仅较少的损失，表明珊瑚处理的水预防耳蜗细胞损失(图4)。CW小鼠的顶层、 中层和底层的平均螺旋神经节细胞(SGC)密度显著地高于对照动物的那些，显示了处理的 水预防螺旋神经节神经元细胞损失(图5)ΓΡ<0.05，η = 4 5)。CW小鼠的中层和底 层的平均外毛细胞存活率显著地高于对照小鼠，显示珊瑚处理的水预防外毛细胞损失(图 6) (*Ρ < 0. 05，η = 4 5)。表1.水组合物。CW的钙含量和钾含量显著高于对照的那些。此外，CW的硬度和 PH显著高于对照的那些。在对照中未检测到镁和钠。
权利要求
一种用于治疗神经变性疾病的方法，包括向具有神经变性疾病的症状的受治疗者施用包含珊瑚提取物的组合物。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述珊瑚提取物是含水液体。
3 如权利要求1所述的方法，其中所述珊瑚提取物具有约8.0的pH。
4.如权利要求1所述的方法，其中所述珊瑚提取物具有约14.30mg/L的钙含量。
5.如权利要求1所述的方法，其中所述珊瑚提取物具有约5.4mg/L的镁含量。
6.如权利要求1所述的方法，其中所述珊瑚提取物具有约1.06mg/L的钠含量。
7.如权利要求1所述的方法，其中所述珊瑚提取物具有约0.28mg/L的钾含量。
8.如权利要求2所述的方法，其中所述液体选自由过滤水和蒸馏水组成的组。
9.如权利要求8所述的方法，其中所述液体具有约58mg/L的硬度。
10.如权利要求1所述的方法，其中所述神经变性疾病是老年性耳聋。
11.如权利要求1所述的方法，其中所述珊瑚提取物的所述施用在所述受治疗者中产 生螺旋神经节细胞或神经元的损失的预防或减轻。
12.如权利要求8所述的方法，其中所述珊瑚液体由以下方法制备a)将珊瑚颗粒浸渍在纯化的水中；b)将水的pH调节至8.0± 0.5。
13.如权利要求8所述的方法，其中所述液体通过将水通过包含珊瑚颗粒的纯化柱来 制备。
14.一种预防神经变性疾病的方法，其包括在预防所述受治疗者的神经变性疾病的 条件下向受治疗者施用包含珊瑚提取物的组合物。
15.如权利要求14所述的方法，其中所述神经变性疾病是老年性耳聋。
16.一种治疗神经变性疾病的方法，其包括向具有神经变性疾病的症状的受治疗者 施用包含约7. 0至9. 0的pH的含水液体的组合物，所述液体包含约1. 4mg/L至140mg/L的 钙含量、约0. 54mg/L至54mg/L的镁含量、约0. lmg/L至50. Omg/L的钠含量、约0. 03mg/L 至30. Omg/L的钾含量，和约5. 8mg/L至580mg/L的硬度。
17.如权利要求16所述的方法，其中所述液体具有约14.3mg/L的钙含量、约5. 4mg/L 的镁含量、约1. 06mg/L的钠含量、约0. 28mg/L的钾含量和约58mg/L的硬度。
18.一种食品，其包括足以预防或减轻神经变性疾病的剂量的珊瑚提取物，其中所述珊 瑚提取物包括约7. 0至9. 0的pH的液体，所述液体包含约1. 4mg/L至140mg/L的钙含量、约 0. 54mg/L 至 54mg/L 的镁含量、约 0. lmg/L 至 50. Omg/L 的钠含量、约 0. 03mg/L 至 30. Omg/L 的钾含量和约5. 8mg/L至580mg/L的硬度。
19.一种药物组合物，其包括足以预防或减轻神经变性疾病的剂量的珊瑚提取物，其中 所述珊瑚提取物包括约7. 0至9. 0的pH的液体，所述液体包含约1. 4mg/L至140mg/L的钙 含量、约0. 54mg/L至54mg/L的镁含量、约0. lmg/L至50. Omg/L的钠含量、约0. 03mg/L至 30. 0mg/L的钾含量和约5. 8mg/L至580mg/L的硬度。
20.如权利要求19所述的组合物，其中所述液体具有约14.3mg/L的钙含量、约5. 4mg/ L的镁含量、约1. 06mg/L的钠含量、约0. 28mg/L的钾含量和约58mg/L的硬度。
全文摘要
本发明涉及治疗神经变性疾病的组合物和方法。在一些实施方式中，本发明提供了用于治疗和预防老年性耳聋的组合物。
文档编号A61K33/06GK101990436SQ200980112617
公开日2011年3月23日 申请日期2009年4月9日 优先权日2008年4月9日
发明者梁谷慎一 申请人:海洋生物有限公司