专利名称：免疫原性组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种疫苗佐剂组合物，并且涉及所述组合物在增强特异性免疫反应中 的应用，特别是但不仅限于该组合物在提高由树突状细胞调节的人类T细胞增殖。
背景技术：
开发具有显著细胞反应诱导性的疫苗是一项重大的挑战。T细胞是细胞免疫反应 的主要的效应细胞。这些细胞可识别在受病原体感染的细胞中合成的抗原，因此，成功的疫 苗接种要求在接种疫苗的个体的细胞中合成出免疫原性抗原。一个方法是使用减毒活疫 苗，然而该方法有明显的局限性。例如，当被接种疫苗的个体受到免疫抑制时，或者当病原 体本身能够诱导免疫抑制(例如艾滋病毒，HIV)时，都会有感染的风险。另外，一些病原体难 以或者不可能在细胞培养中生长(例如丙型肝炎病毒，HCV)。其他现有的疫苗，比如灭活的 全细胞疫苗、或者明矾辅佐的重组蛋白亚基疫苗，都明显是较差的细胞免疫反应诱导剂。细 胞免疫反应的诱导与免疫反应中Thl偏移有关。相反，主要与抗体有关的反应被认为是Th2 偏移反应。包括明矾、油包水型佐剂和完全弗氏佐剂(complete Freund's adjuvant, CFA) 等在内的多种佐剂已经被试验性地使用，各种佐剂具有不同的作用方式(Guy B (2007)#ai Rev Microbiol 5:505-5171 和 khijns VE (2000)0/rr Opin Immunol 12:456-463)。这 一在人用疫苗中最为常用的佐剂一明矾所放大的免疫反应趋向于相对较弱，并且是可能不 能赋予抗许多病原体的保护作用的Th2型。相反地，尽管CFA在实验动物中会激发Thl型 免疫反应，但由于CFA会引起由过度炎症反应导致的毒性效应，因此不适用于人类。
发明内容
因此，人们非常需要有效的疫苗佐剂配方，尤其需要一种可提高由树突状细胞调 节的人类T细胞增殖的配方。根据本发明的第一个方面，提供了一种免疫原性组合物，其包含可引起抗病原体 或肿瘤的免疫反应的抗原；以及选自CCR4拮抗剂的佐剂。优选免疫原性组合物是疫苗组合物。在一种实施方式中，该免疫原性组合物或疫苗组合物被用于人或动物。这样的组 合物将有利于在人类疫苗接种和兽医和/或实验动物疫苗接种程序中使用。因此，根据本 发明的另一个方面，提供了一种人类免疫原性或疫苗佐剂性组合物，其包含可引起抗人类 病原体或肿瘤的免疫反应的抗原；以及选自CCR4拮抗剂的佐剂。在本发明的组合物内存在CCR4拮抗剂令人吃惊地导致增强了特异性免疫反应， 特别是受树突状细胞调节的人类T细胞增殖。这样的组合物很可能会提供显著的益处，有 利于在抗肿瘤疫苗接种中使用，比如用于基于树突状细胞的疫苗接种程序(例如，用于癌症 比如黑素瘤)和传染性疾病(例如，病毒性的、寄生虫性的和细胞内细菌性的病原体)。因此，根据本发明的再一个方面，提供了一种免疫原性组合物、优选疫苗(佐剂)组 合物，其包含可引起抗人类病原体或肿瘤的免疫反应的抗原；以及选自CCR4拮抗剂的、受树突状细胞调节的人类T细胞增殖的佐剂。根据本发明的又一个方面，提供了 CCR4拮抗剂作为佐剂的用途，优选该佐剂可增 强受树突状细胞调节的人类T细胞增殖。CCR4 (亦称趋化因子(C-C基元)受体4)是异鸟嘌呤核苷酸结合蛋白 (heterotrimeric guanine nucleotide-binding protein, G 蛋白)偶联受体(GPCR)的视 紫红质(rhodopsin)家族中的一个成员。GPCR共用一个保守结构由六个不同长度的环连 接的七个横跨膜 α-螺旋(Baldwin JM et al. (1997)/ Mol Biol 272:144-164)。和所 有的GPCR情况一样，CCR4的结构包含形成扁平的双层结构的七个α-螺旋，这七个α-螺 旋被三个胞内环和胞外环连接。跨膜区域由七个含20-30个连续残基的总体具有高疏水性 的片段构成。(0 4已知在0)4+0)25+调节性11细胞(1^688)上被表达(16116111八，et al. (2001) J Exp Med 194:847-853)。Tregs在下调性免疫反应中扮演着关键角色，这既有助于维持自 体耐受性，又有助于抑制对抗感染的过度反应(Miyara M, Sakaguchi S {2QQ1) Trends Mol Med 13:108-116)。CCR4是两种趋化因子CCL17和CCL22的受体。这些趋化因子是树突状 细胞(DC)产生的，对于Tregs有趋向性，并且在促进DC与CCR4+ T细胞之间的接触中很关键 (Iellem A, et al. (2001)，参见前述；Tang HL, Cyster JG( 1999)5bie/ ce 284:819-822 ； Katou F, et al. (2001 Μ J Pathol 158 1263-1270 ；以及Wu M, et al. (2001)/ Immunol 167:4791-4795)。已经有报告表明Tregs能够通过抑制DC熟化和共同刺激性分子(co-stimulatory molecule)的表达以及它们由此活化T细胞的能力(Houot R，et al. (2006)/ Immunol 176:5293-5298 ；和 Bayry J, et al. (2007)/ Immunol 1784184-4193)从而抑制 DC 调 节的免疫反应(Tang Q, et al. (2006)Nat Immunol 7:83-92)。无需结合理论，能够知道 拮抗CCR4的功能以及由此抑制在接种疫苗时Tregs与DCs的相互作用，可增强疫苗诱导的 免疫反应。本文提到的“CCR4拮抗剂”指的是一种分子，其能够通过抑制或拮抗趋化因子与 CCR4受体之间的结合从而调节CCR4受体。在一种实施方式中，CCR4拮抗剂的分子量大于 500。在另一种实施方式中，CCR4拮抗剂具有至少2个以上(例如至少3个、4个或5个)单 环的芳香环和/或双环的芳香环。在另一种实施方式中，至少一个单环芳香环和/或双环芳 香环含有氮原子。含氮的单环芳香环的例子包括可被任意取代的噻唑基、吡咯啉基、噻二唑 基、三唑基、吡唑啉基和噁唑基。含氮的双环芳香环的例子包括可被任意取代的喹唑啉基、 苯并噻唑基和喹喔啉基。在一种实施方式中，CCR4拮抗剂是化学式(A)所示的化合物或者其药学可接受的Trrt.
权利要求
1.一种免疫原性组合物，其包含可引起抗病原体或肿瘤的免疫反应的抗原；以及选 自CCR4拮抗剂的佐剂。
2.一种用作疫苗的如权利要求1所述的组合物。
3.一种用于人类的如权利要求1或权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述抗原可 引起抗人类病原体或肿瘤的免疫反应。
4.如前述权利要求中任何一项所述的组合物，其特征在于，所述佐剂是受树突状细胞 调节的人类T细胞增殖佐剂。
5.CCR4拮抗剂作为佐剂的用途。
6.如前述权利要求中任何一项所述的组合物或用途，其特征在于，所述CCR4拮抗剂是 化学式(A)所示的化合物或其药学可接受的盐
7.如前述权利要求中任何一项所述的组合物或用途，其特征在于，所述CCR4拮抗剂选 自化学式(I) - (XV)所示的化合物。
8.如前述权利要求中任何一项所述的组合物或用途，其特征在于，所述CCR4拮抗剂选 自化学式(III)、(V)、(VI)、(VIII)、(XI)和(XV)所示的化合物。
9.如前述权利要求中任何一项所述的组合物，其特征在于，所述可引起抗人类病原体 免疫反应的抗原源自于肝炎病毒比如乙型肝炎病毒(例如乙型肝炎病毒表面抗原或其衍生 物)、或者源自于甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒和戊型肝炎病毒的抗原。
10.如权利要求1至8中任一项所述的组合物，其特征在于，所述可引起抗人类病原体 免疫反应的抗原源自于细菌性病原体比如分枝杆菌属，包括结核分枝杆菌(例如ESAT6、抗 原85Α、抗原85Β或抗原85C)、牛分枝杆菌、麻风分枝杆菌、鸟分枝杆菌、副结核分枝杆菌、耻 垢分枝杆菌。
11.如前述权利要求中任何一项所述的组合物，其特征在于，每剂量所述组合物含有 500 pg·、更优选0. 1 - 100 ■■、最优选0. 1 - 50 pg·的抗原。
12.如前述权利要求中任何一项所述的组合物，其特征在于，所述CCR4拮抗剂在所述 组合物内是以0. 1 - 5 % (w/w)的含量存在的。
13.如权利要求12所述的组合物，其特征在于，所述CCR4拮抗剂在所述组合物内是以 0. 2 - 1 % (w/w)的含量存在的。
14.如前述权利要求中任何一项所述的组合物，其特征在于，还另外包含一种或一种以 上药学可接受的赋形剂。
15.如权利要求14所述的组合物，其特征在于，所述药学可接受的赋形剂包括载体、 稀释剂、粘合剂、润滑剂、防腐剂、稳定剂、着色剂、抗氧化剂、悬浮剂、涂层剂、增溶剂和增香 剂。
16.如前述权利要求中任何一项所述的组合物，其特征在于，还另外包含一种或一种以 上除所述CCR4拮抗剂之外的佐剂。
17.如权利要求16所述的组合物，其特征在于，所述一种或一种以上另外的佐剂选自 下组金属盐、水包油乳化液、Toll样受体配体(尤其是Toll样受体2配体、Toll样受体3 配体、Toll样受体4配体(比如单磷酸脂质A- —种烷基氨基葡糖苷磷酸盐、或3脱乙酰化 单磷酸脂质A (3 D- MPL)), Toll样受体7配体、Toll样受体8配体和"Toll样受体9配 体)、皂角苷(例如Qs21)、聚乙烯亚胺(PEI)或它们的组合。
18.一种用于治疗用途的如前述权利要求中任何一项所述的组合物。
19.一种通过给药如权利要求1至17中任一项所述的组合物来治疗或预防人或动物个 体遭受疾病的方法。
20.如权利要求19所述的治疗方法，其特征在于，所述疾病选自下组传染性的细菌性 疾病和病毒性疾病；寄生虫性疾病，特别是细胞内病原性疾病；增殖性疾病比如前列腺癌、 乳腺癌、结肠直肠癌、肺癌、胰腺癌、肾癌、卵巢癌或黑素瘤癌；非癌症慢性紊乱，包括过敏 症、哮喘及其他与高敏感性相关的紊乱。
21.如权利要求20所述的治疗方法，其特征在于，所述疾病是病毒性疾病比如HIVJT 炎或流感，或者细菌性疾病比如肺结核或脑膜炎。
22.如权利要求1至17中任一项所述的组合物在药物制造中的应用，其特征在于，所述 药物用于治疗病毒性疾病比如HIV、肝炎或流感，或者细菌性疾病比如肺结核或脑膜炎。
23.如权利要求1至17中任一项所述的组合物，其用于治疗病毒性疾病比如HIV、肝炎 或流感，或者细菌性疾病比如肺结核或脑膜炎。
24.如权利要求1至17中任一项所述的药物组合物，用于治疗病毒性疾病比如HIVJf 炎或流感，或者细菌性疾病比如肺结核或脑膜炎。
25.一种在人体内诱导受树突状细胞调节的人类T细胞增殖的方法，其包括将如权利 要求1至17中任一项所述的组合物给药于所述人。
26.一种用于制备如权利要求1至17中任一项所述组合物的方法，其包括将可引起 抗病原体或肿瘤的免疫反应的抗原与选自CCR4拮抗剂的佐剂相混合。
全文摘要
本发明涉及CCR4拮抗剂作为佐剂的用途，尤其是在免疫原性的组合物中，该组合物包含可引起抗病原体或肿瘤的免疫反应的抗原。
文档编号A61K39/39GK102056623SQ200980121582
公开日2011年5月11日 申请日期2009年6月12日 优先权日2008年6月13日
发明者埃尔玛·Z·切尔连, 大卫·F·图赫, 杰格蒂施·贝瑞, 达伦·劳费尔, 马修·N·戴维斯 申请人:Isis创新有限公司