专利名称：用于检测发育异常的方法
技术领域：
本发明提供可用于在患Barrett食管的患者中测定发育异常部位的成像方法。该 方法包括使用含载体的光学成像剂，所述载体靶向EGFR的胞外区，该载体对EGFR的选择性 也超过Her2。将载体用适合用绿色至近红外波长500-1200nm的光体内成像的光学报道分 子标记。还提供适合用于该方法的新的光学成像剂。
背景技术：
食管癌在所有报道的癌症病例中少于5%，但在美国每年诊断约30，000新的此 类病例，生存率低(见下文)。可将食管癌分为两种主要类型，鳞状细胞癌和腺癌，取决于 恶性细胞的类型。Barrett食管是恶变前状态，伴随食管癌特别是腺癌发病的危险增加 [Kiesslich et al, Clin. Gastroenterol. Hepatol. ,4,979-987 (2006) ] 慢性反流增力口 Barrett食管的危险，因此已提出胃食管反流(GERD)是食管癌的危险因素。在美国和西欧食管的腺癌比鳞状细胞癌更普遍。食管癌可以是可治疗的疾病，但 很少能治愈。总的5年生存率在5%-30%之间。早期诊断食管癌改善患者的生存率。主要 治疗包括单独手术或化疗结合放疗。用于治疗食管癌的化疗包括5-氟尿嘧啶和顺钼。缺 乏精确的手术前分期是主要的临床问题。在Barrett食管中低度发育异常(即异常组织生长)的存在是食管癌发病的 危险因素，但目前监测依赖组织病理学[Lim et al, Endoscopy, 39, 581-7 (2007) ] 0目前 在Barrett食管诊断发育异常是通过每l-2cm进行随机四象限活检(Seattle方案)，这 耗费时间且价格昂贵[DaCosta et al, Best Pract. Res. Clin. Gastroenterol. , 20 (1), 41-57 (2006)]。在常规内窥镜检查过程中通常看不到Barrett食管的发育异常[Endlicher et al, Gut,48,314-319(2001)]οUS 6，035，229 (Washington研究基金)描述在导管末端利用照明和成像探针检测 Barrett食管的系统。该文件未公开光学造影剂。已经在检测高度发育异常或恶性组织时用染料亚甲蓝，比较在体内Barrett食管 组织的染色与在体外活检样品的染色[Canto et al, Endoscopy, 33, 391-400 (2001) ] Kiesslich et al [Clin. Gastroenterol. H印atol.，4，979-987 U006)]报道用共 聚焦激光显微内窥镜，用荧光素帮助检测Barrett上皮和相关肿瘤。WO 2005/058371公开使食管癌和Barrett食管体内成像的光学成像造影剂。造影 剂对异常表达于Barrett食管的生物靶标具有亲和力。WO 2005/058371的造影剂优选具有 式V-L-R其中V是一种或多种对食管癌或Barrett食管中异常表达的靶标具有亲和力的载体部 分；L是连接部分或键；和R是一种或多种在光学成像时可检测的报道分子部分。
描述在Barrett食管、鳞状细胞癌或腺癌中过度表达或下调的多种靶标。靶标优 选选自-E-钙粘蛋白、CD44、P62/c-myc (HGF受体)、p53和EGFR/erB_2 (权利要求5)。载 体(V)声称优选选自肽、拟肽部分、寡核苷酸、低聚糖、脂肪相关化合物和传统的有机药物 样小分子。报道分子(R)优选与电磁波谱的紫外线至近红外部分波长区的光相互作用的染 料。表皮生长因子(EGF)和EGR受体(EGFR)是配体-受体对。人表皮生长因子受体 (HER)家族包括4种密切相关的ErbB受体酪氨酸激酶EGFR (也称为 ErbB-I 或 HER-1)；ErbB-2 (也称为 HER-2 或 Neu)；ErbB-3 (也称为 HER-3)；禾口ErbB-4 (也称为 HER-4)。EGFR是位于细胞表面的170kDa蛋白质，由氨基端胞外配体结合区、单个疏水跨 膜螺旋和胞内区组成，胞内区包含酪氨酸激酶区和含有关键性酪氨酸残基和受体调节基序 的羧基端区。配体如EGF与胞外区的结合导致几种C-端酪氨酸残基的受体二聚体化、激 活和受体自磷酸化。这些磷酸化酪氨酸充当多种胞质信号转导分子的结合位点。在EGFR 下游这些途径的激活引起细胞增殖、分化、移行/活动、粘附、防止凋亡、提高存活和基因转 录。已知EGFR在许多上皮性肿瘤中异常激活[Mendolsohn et al, Semin. Oncol. ,33(4), 369-385(2006)]οCai et al [Eur. J. Nucl. Med. Mol. Lnaging，；35，186-208 Q008)]已回顾根据 PET、 SPECT、光学和MRI使人EGF受体(EGFR，HER2，HER3和HER4)多模式成像的方法。Barrett食管是以鳞状食管上皮代替柱状上皮(化生)为特征的疾病。一部分 Barrett食管患者将发展为食管腺癌，在此过程中的关键步骤是发育异常的形成。因此诊断 发育异常的患者接受可包括抗反流药物、内窥镜粘膜消融和手术切除的疗法，取决于疾病 的严重禾呈度(图 1 ；摘自"Guidelines for the Diagnosis and Management of Barrett's Columnar-lined Oesophagus (诊断和管理 Barrett 柱状线食管的指南)”，UK Society of Gastroenterology,2005 年 8 月；www, bsg. org.uk)
图1 :提出管理Barrett患者的指南
权利要求
1.一种体内成像的方法，用于在患Barrett食管的患者中测定潜在发育异常的部位， 所述方法包括(i)提供含有靶向EGFR胞外区的载体的成像剂，所述载体用光学报道分子成像部分标 记，该光学报道分子成像部分适合用波长500-1200nm的光使哺乳动物体体内成像； ( )用步骤(i)的成像剂在所述患者至少一段食管中实施光学成像；(iii)从步骤(ii)的成像中测定在患者食管的一个或多个位置上与背景相比成像剂 的吸收是否增加；(iv)当步骤(iii)的测定显示至少一个此类位置吸收增加，则将该位置鉴定为潜在发 育异常的部位。
2.权利要求1的方法，其中所述载体具有最高达20kDa的分子量。
3.权利要求1或权利要求2的方法，其中所述载体包含EGFR胞外区的内源性配体，选自(i)人EGF(hEGF)或其片段；(ii)TGF-a或其片段；(iii)双调蛋白。
4.权利要求1或权利要求2的方法，其中所述载体包含EGFR胞外区的外源性配体，选自(i)包含肽序列CKSPEPQHC 的 9-20_mer 肽(GE9)；(ii)包含肽序列LHLWVPEPWTQT 的 2_20-mer 肽(GElO)；(iii)包含肽序列YHWYGYTPQNVI 的 12-20-mer 肽(GEll)；(iv)包含肽序列MLYNPTTYQMDVNPEGK 的 17-20-mer 肽(Inherbin 1)； (ν)包含肽序列 LVYNKLTFQLEPNPHTK 的 17-20-mer 肽(Inherbin 3)；(vi)Affibody ；(vii)Nanobody ；(viii)包含肽序列LARLLT 的 6-15-mer 肽(D4)。
5.权利要求1-4中任一项的方法，其中所述光学报道分子是荧光染料。
6.权利要求5的方法，其中所述染料是菁染料。
7.权利要求6的方法，其中所述菁染料具有式Ia
8.权利要求5的方法，其中所述染料是苯并吡喃锅t染料。
9.权利要求1-8中任一项的方法，其中权利要求1步骤(i)的成像剂作为药用组合物提供。
10.权利要求1-9中任一项的方法，其中所述成像用于区分(a)无发育异常的Barrett食管；(b)发育异常；(c)癌。
11.权利要求1-10中任一项的方法，其中权利要求1的方法还包括步骤 (ν)在步骤(iv)的一个或多个潜在发育异常部位上进行活检。
12.权利要求1-11中任一项的方法，其中所述成像用于指导递送局部治疗的部位。
13.权利要求1-12中任一项的方法，其中所述成像用于监测治疗的功效。
14.可用于权利要求1-13中任一项方法的成像剂，其中所述成像剂选自 (i)用权利要求7或权利要求8定义的光学报道分子标记的hEGF或其片段； ( )用权利要求7或权利要求8定义的光学报道分子标记的TGF- α或其片段；(iii)用权利要求1或5-8中任一项定义的光学报道分子标记的双调蛋白；(iv)包含氨基酸序列CKSPEPQHC的9-20-mer肽(GE9)，所述肽用权利要求6_8中任一 项定义的光学报道分子标记；(ν)包含氨基酸序列 LHLWVPEPWTQT (GElO)或 YHWYGYTPQNVI (GEll)的 12-20_mer 肽，所 述肽用权利要求6-8中任一项定义的光学报道分子标记；(vi)包含氨基酸序列MLYNPTTYQMDVNPEGK的12-20-mer肽(Inherbin1)，所述肽用权 利要求1或5-8中任一项定义的光学报道分子标记；(vii)包含氨基酸序列LVYNKLTFQLEPNPHTK 的 12-20-mer 肽 Qnherbin 3)，所述肽用 权利要求1或5-8中任一项定义的光学报道分子标记；(viii)用权利要求7或权利要求8定义的光学报道分子标记的权利要求4定义的 Affibody ；(ix)用权利要求6-8中任一项定义的光学报道分子标记的权利要求4定义的 Nanobody 。
15.权利要求14的成像剂，其中所述光学报道分子如权利要求7或权利要求8定义。
16.一种药用组合物，所述药用组合物包含权利要求14或权利要求15的成像剂。
17.—种药剂盒，所述药剂盒用于制备权利要求16的药用组合物。
18.权利要求1-8、14或15中任一项定义的成像剂在权利要求1-13任一项方法中的用途。
19.药剂盒在权利要求1-13任一项方法中，用于制备权利要求1-8、14或15中任一项 定义的成像剂中的用途。
20.权利要求1-4中任一项步骤(i)定义的载体在制备成像剂中的用途，所述成像剂用 于权利要求1-13中任一项的方法。
全文摘要
本发明提供可用于在患Barrett食管的患者中测定发育异常部位的成像方法。该方法包括使用含载体的光学成像剂，所述载体靶向EGFR的胞外区，该载体对EGFR的选择性也超过Her2。将载体用适合用绿色至近红外波长500-1200nm的光体内成像的光学报道分子标记。还提供适合用于该方法的新的光学成像剂。
文档编号A61K49/00GK102123738SQ200980132466
公开日2011年7月13日 申请日期2009年8月14日 优先权日2008年8月15日
发明者A·丹尼卡斯, B·吉尔贝尔 申请人:通用电气医疗集团股份有限公司