专利名称：注射用门冬氨酸鸟氨酸的制备的制作方法
技术领域：
本发明涉及注射用门冬氨酸鸟氨酸的制备方法，具体涉及一种采用纳滤方法进行一步浓缩除盐的步骤制备门冬氨酸鸟氨酸注射剂的方法，属于药物制剂工艺领域。
背景技术：
门冬氨酸鸟氨酸为L-门冬氨酸与L-鸟氨酸经过化学反应而形成的盐，化学名为 (S) -2，5- 二氨基戊酸-( -2"氨基丁二酸盐，分子量为265道尔顿。门冬氨酸鸟氨酸可提供尿素和谷氨酰胺合成的底物，而谷氨酰胺是氨的解毒产物，同时也是氨的储存及运输形式；在生理和病理条件下，尿素的合成机谷氨酰胺的合成会受到鸟氨酸、门冬氨酸和其它二羧基化合物的影响。鸟氨酸几乎涉及尿素循环的活化和氨的解毒的全过程，在此过程中形成精氨酸，继而分裂出尿素形成鸟氨酸。门冬氨酸参与肝细胞内核酸的合成，以及修复被损伤的肝细胞，另外，由于门冬氨酸对肝细胞内三羧酸循环代谢过程的促进作用，促进了肝细胞内的能量生成，使得被损伤的肝细胞的各项功能得以迅速恢复。L-鸟氨酸-L-门冬氨酸盐时一个治疗肝性脑病及其他慢性肝病的药物，主要用于因急、慢性肝病，如各型肝炎、肝硬化、脂肪肝、肝炎后综合症引起的血氨升高级治疗肝性脑病，如伴发货继发育肝脏解毒功能受损或发作期肝性脑病，尤其适用于治疗肝昏迷早期或肝昏迷期的意识模糊状态。L-鸟氨酸-L-门冬氨酸的化学合成文献报道有以下几种方法德国Degussa公司的专利DE4020980采用精氨酸使精氨酸转化为鸟氨酸，再与 L-门冬氨酸反应而得。由于精氨酸酶价格昂贵，工业化供应困难，该工艺成本极高，尚不具有工业化价值。日本TANABE SEIYAKU公司于60年代申请了英国专利GB965637，方法一是将L-鸟氨酸盐酸盐溶解于水，通过“Amberlite”IR-120阳离子交换树脂(铵盐型)吸附洗脱，再用水解离，蒸馏出去氨，得到有力鸟氨酸，与L-门冬氨酸在谁容易中，通过加入甲醇析出结晶；方法二是梯度结晶法，采用消旋的游离DL-鸟氨酸与L-门冬氨酸现在水肿溶解，加入甲醇析出D-鸟氨酸-门冬氨酸盐，过滤后的母液继续加入甲醇，析出了 L-鸟氨酸-L-门冬氨酸盐。方法一采用了离子交换树脂，操作复杂，方法二梯度结晶法不容易控制，得到的产品品质较差，且成盐拆分收率低。日本的KYOWA公司与1967年申请了英国专利GB1067742，是采用强酸性(H-型) 离子交换树脂来使L-鸟氨酸盐酸盐游离，再与L-门冬氨酸成盐，经过结晶处理，最后得到收率52%的L-鸟氨酸-L-门冬氨酸盐一水合物。该工艺同样采用树脂脱盐，且收率较低，
三废产生量较大。1992年，日本KYOWA公司申请了欧洲专利EP477991，也是先将L-鸟氨酸盐酸盐水溶液通过Diaion SKIB树脂吸附，氨水解吸附，脱氨后与L-门冬氨酸成盐，加入甲醇回流处理，结晶而得，该法仍然具有三废产生量大、需要过树脂柱，成本偏高等缺点。上海依福瑞公司2006年申请的中国专利CN101100435A，采用的方法是将L-鸟氨酸硫酸盐溶于蒸馏水中，加入L-门冬氨酸，加热溶解后，用氢氧化钡中和硫酸，过滤，再用D403树脂螯合残余的钡离子，过滤除去螯合树脂，溶液减压浓缩，活性炭脱色，加入无水乙醇搅拌、加热、回流状态下结晶，该方法用到了剧毒的钡离子，且仍需要树脂柱来去除种金属离子以及除去钡离子后的溶液采用真空减压浓缩，耗时长，操作工艺复杂。中国专利CN101798275A公开了一种鸟氨酸门冬氨酸盐的制备方法，该方法将 L-鸟氨酸醋酸盐溶于水后，加入L-门冬氨酸，然后用氨调pH至6-9，活性炭脱色，极性有机溶剂重结晶，该方法由于直接在反应后的反应液中加极性有机溶剂结晶，在工业化生产中， 这样需要耗费大量的有机溶剂来进行，成本也相对较高，且由于其反应后的盐为脱去，重结晶时这些盐难免会带入到结晶中。中国专利CN101843587A公开了一种注射用门冬氨酸鸟氨酸粉针制剂的制备方法，该方法以精氨酸为原料，加入氢氧化钡溶解后使精氨酸转化为鸟氨酸，再加入门冬氨酸，搅拌反应，反应液中加入钡离子沉淀剂以除去钡离子，再用有机溶剂进行重结晶，得到门冬氨酸鸟氨酸，分装即得。该方法也引入了钡离子，且其反应液未经除去其它引入的过量酸根离子(如硫酸根离子)，并反应液直接加醇进行结晶，消耗醇的量大，成本较高。现有技术中，在制备门冬氨酸鸟氨酸时，或者引入离子交换法除去反应中的一些无机盐杂质，然后再进行结晶步骤，这中工艺耗时长，且在后续进行结晶时，所得洗脱液体积大，直接加醇进行结晶时需要耗费大量的醇，成本高；或者不进行除去反应液中的无机盐离子，反应液中直接加入极性有机溶剂进行结晶步骤，容易在结晶产品中带入其它一些杂质，且由于未经浓缩处理，需耗费大量的醇去进行结晶，成本也较高；或者反应液进行初步旋转减压浓缩后，浓缩液再进行结晶处理，这种浓缩方法需要的时间长，耗能也大。
发明内容
为了克服现有技术上的一些不足，本发明的目的在于提供一种注射用门冬氨酸鸟氨酸的制备方法，本发明中，门冬氨酸鸟氨酸经反应后，以纳滤技术处理原料反应液，从而达到对原料反应液除盐、浓缩一步实现的目的，大大缩短了脱盐、浓缩所需的时间，所得浓缩液再用极性有机溶剂进行重结晶，加入的溶剂量大大减少，生产成本更低，耗能更低，非常适合工业化生产制备。纳滤膜是一种新型分离膜，是介于超滤膜和反渗透膜之间的压力驱动膜，截留相对分子量约为200-2000道尔顿。具体地，本发明制备注射用门冬氨酸鸟氨酸的方法包括如下步骤(1)将L-鸟氨酸盐酸盐加入到注射用水中，其重量比为1 2 5，混合，室温搅拌使溶解；(2)向步骤(1)溶液中加入NaOH，L-鸟氨酸盐酸盐与NaOH的重量比为1 0. 2 0. 3，搅拌使完全溶解，加热至60-80°C，继续搅拌；(3)向步骤(2)溶液中加入天门冬氨酸，L-鸟氨酸盐酸盐与天门冬氨酸的重量比为1 0.8-1.2，搅拌反应，控制反应温度为60-801，反应时间1-511，调节反应液？!1为 7. 0-7. 6 ；(4)向步骤(3)所得反应液中加入原料反应液重量比为0. 1^-1%的活性炭，继续加热搅拌30分钟，趁热用孔径为0. 22 μ m的为孔滤膜过滤；
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(5)在生产控制区无菌环境下，将步骤(4)所得的反应液，采用纳滤膜浓缩过滤， 滤膜孔径为50-100道尔顿，使料液浓缩至原体积的1/3，加注射用水至原体积，继续浓缩至原体积的1/3，重复两次；(6)在生产控制无菌环境下，在步骤(5)中所得浓缩液，加入经0.22 μ m的为孔滤膜过滤的无水乙醇，使药液乙醇浓度为60% -80%，不断搅拌使其析出结晶，减压过滤，抽干，无水乙醇洗涤2-3次，再抽干，减压干燥，得门冬氨酸鸟氨酸无菌粉末，将无菌粉末分装于灭菌西林瓶中，加盖丁基胶塞，轧铝盖，即得注射用门冬氨酸鸟氨酸无菌粉针剂；或者，将步骤(6)所得的无菌粉末用注射用水溶解，配制成浓度为2. 5g/10ml或浓度为5g/10ml的药液，罐装至安瓿瓶中，每瓶装10ml，灭菌，即得门冬氨酸鸟氨酸注射液。本发明中，术语“纳滤”是指一种用纳滤膜(即一种半透膜)，该膜能够允许溶剂分子或某些低分子量溶质或低价离子透过的一种功能性半透膜而达到脱盐浓缩的作用，在选用具体膜孔大小时，可根据溶液中不同溶质或溶剂分子量大小而选择，本发明中，所用的膜为一种孔径为50-150、优选为60-100道尔顿的膜。术语“极性有机溶剂”是指可以以水互溶的低级有机溶剂，这种溶剂优选为C1-C3 的极性有机溶剂，如可以是甲醇、乙醇、丙醇、丙酮等。本发明中，原料L-鸟氨酸盐酸盐也可以用L-鸟氨酸硫酸盐或醋酸盐代替，或者从精氨酸原料为起始原料，经制备将精氨酸转换成为鸟氨酸。调节反应液的pH所用的溶液可以是碱或酸，按照反应介素后的PH及所要调到的 PH范围，所用的溶液时本领域技术领域人员所熟知的。罐装时，可根据日用量的不同，装成装量不同的不同规格，通过调节浓缩液的浓度，然后罐装合适的体积，这些，都是本领域普通技术人员通过简单的计算都可以得知的。
具体实施例方式本发明通过下述实施例进一步阐明，但任何实施例或其组合不应当理解为对本发明的范围或实施方式的限制。本发明的范围由所附权利要求书限定，结合本说明书和本领域一般常识，本领域普通技术人员可以清楚地明白权利要求书所限定的范围。在不偏离本发明的精神和范围的前提下，本领域技术人员可以对本发明的技术方案进行任何修改或改变，这种修改和改变也包含在本发明的范围内。实施例1取L-鸟氨酸盐酸盐20kg，加50L注射用水，边加边搅拌，再加入^g NaOH,搅拌使完全溶解，加热至60°C，继续搅拌约Ih ；称取L-门冬氨酸Wkg，分次加入到上述溶液中，边加边搅拌，使完全溶解，条PH至 7. 0-7. 5，继续在60°C左右，搅拌反应汕；在生产控制区无菌环境下，称取活性炭粉末90g，加入到上述原料反应液中，继续加热搅拌(60°C )30min，趁热用孔径为0. 22 μ m的微孔滤膜过滤，滤液备用；在生产控制区无菌环境下，准备纳滤机，纳滤膜孔径100道尔顿；开机，调节泵流速，保持膜进口压力1. 2Mpa，膜出口压力1. OMpa。。将上述料液滤液浓缩至原体积的1/3，加纯化水至原体积，继续浓缩至原体积的1/3，重复两次；在生产区无菌环境下，在上述浓缩液中，60°C左右的水浴环境中加入经0.22 μ m微孔滤膜过滤处理的无水甲醇，不断搅拌，调节药液使药液甲醇体积百分含量为约75%，室温冷却，使其析出结晶，减压过滤，抽干，甲醇洗涤2-3次，再抽干，减压干燥，得门冬氨酸鸟氨酸无菌粉末。实施例2取L-鸟氨酸盐酸盐20kg，加50L注射用水，边加边搅拌，再加入3kg NaOH,搅拌使完全溶解，加热至60°C，继续搅拌约Ih ；称取L-门冬氨酸Mkg，分次加入到上述溶液中，边加边搅拌，使完全溶解，条PH至 7. 0-7. 5，继续在60°C左右，搅拌反应；在生产控制区无菌环境下，称取活性炭粉末450g，加入到上述原料反应液中，继续加热搅拌(60°C )30min，趁热用孔径为0. 22 μ m的微孔滤膜过滤，滤液备用；在生产控制区无菌环境下，准备纳滤机，纳滤膜孔径200道尔顿；开机，调节泵流速，保持膜进口压力1. 2Mpa，膜出口压力1. OMpa。。将上述料液滤液浓缩至原体积的1/3，加纯化水至原体积，继续浓缩至原体积的1/3，重复两次；在生产区无菌环境下，在上述浓缩液中，60°C左右的水浴环境中加入经0. 22 μ m 微孔滤膜过滤处理的无水乙醇，不断搅拌，调节药液使药液乙醇体积百分含量为约60%，室温冷却，使其析出结晶，减压过滤，抽干，无水乙醇洗涤2-3次，再抽干，减压干燥，得门冬氨酸鸟氨酸无菌粉末，无菌粉末以注射用水溶解，配置成每毫升溶解0. 25g或0. 5g的药液，罐装至安瓿或西林瓶中，即得门冬氨酸鸟氨酸注射液。实施例3取L-鸟氨酸盐酸盐20kg，加50L注射用水，边加边搅拌，再加入^g NaOH,搅拌使完全溶解，加热至60°C，继续搅拌约Ih ；称取L-门冬氨酸Mkg，分次加入到上述溶液中，边加边搅拌，使完全溶解，条PH至 7. 0-7. 5，继续在60°C左右，搅拌反应；在生产控制区无菌环境下，称取活性炭粉末800g，加入到上述原料反应液中，继续加热搅拌(60°C )30min，趁热用孔径为0. 22 μ m的微孔滤膜过滤，滤液备用；在生产控制区无菌环境下，准备纳滤机，纳滤膜孔径150道尔顿；开机，调节泵流速，保持膜进口压力1. 2Mpa，膜出口压力1. OMpa。。将上述料液滤液浓缩至原体积的1/3，加纯化水至原体积，继续浓缩至原体积的1/3 ；在生产区无菌环境下，在上述浓缩液中，60°C左右的水浴环境中加入经0. 22 μ m 微孔滤膜过滤处理的无水乙醇，不断搅拌，调节药液使药液乙醇体积百分含量为约60%，室温冷却，使其析出结晶，减压过滤，抽干，无水乙醇洗涤2-3次，再抽干，减压干燥，得门冬氨酸鸟氨酸无菌粉末，将无菌粉末分装于灭菌西林瓶中，加盖丁基胶塞，轧铝盖，即得注射用门冬氨酸鸟氨酸无菌粉针剂。实施例4不同纳滤膜对门冬氨酸鸟氨酸截留效果对比对合成制备得到的门冬氨酸鸟氨酸原料反应液，采用GE公司的HL系列纳滤膜元件，分别选取截留相对分子量(NWCO)为100、150、200道尔顿的纳滤膜，实验三种纳滤膜浓缩门冬氨酸鸟氨酸的效果，从表1可以看出，截留200道尔顿的膜，门冬氨酸鸟氨酸的损失率高达78. 67%，而当用截留100道尔顿的膜时，透过液中的门冬氨酸鸟氨酸量极少，其截留率可达到94. 34%
表1不同纳滤膜对门冬氨酸鸟氨酸截留率效果对比
权利要求
1.注射用门冬氨酸鸟氨酸的制备方法，其包括如下步骤(1)将L-鸟氨酸盐酸盐加入到注射用水中，其重量比为1 2 5，混合，室温搅拌使溶解；(2)向步骤⑴溶液中加入NaOH，L-鸟氨酸盐酸盐与NaOH的重量比为1 0.2 0.3， 搅拌使完全溶解，加热至60-80°C，继续搅拌；(3)向步骤( 溶液中加入天门冬氨酸，L-鸟氨酸盐酸盐与天门冬氨酸的重量比为1 0.8-1.2，搅拌反应，控制反应温度为60-801，反应时间1-511，调节反应液？!1为 7. 0-7. 6 ；(4)向步骤(3)所得反应液中加入原料反应液重量比为0.1^-1%的活性炭，继续加热搅拌30分钟，趁热用孔径为0. 22 μ m的微孔滤膜过滤；(5)在生产控制区无菌环境下，将步骤(4)所得的反应液，采用纳滤膜浓缩过滤，滤膜孔径为50-100道尔顿，使料液浓缩至原体积的1/3，加注射用水至原体积，继续浓缩至原体积的1/3 ；(6)在生产控制无菌环境下，在步骤(5)中所得浓缩液，加入经0.22μ m的微孔滤膜过滤的极性有机溶剂，使药液有机溶剂体积百分浓度为60% -80%，不断搅拌使其析出结晶， 减压过滤，抽干，洗涤2-3次，再抽干，减压干燥，得门冬氨酸鸟氨酸无菌粉末，将无菌粉末分装于灭菌西林瓶中，加盖丁基胶塞，轧铝盖，即得注射用门冬氨酸鸟氨酸无菌粉针剂；或者，将步骤(6)所得的无菌粉末用注射用水溶解，配制成浓度为2. 5g/10ml或浓度为 5g/10ml的药液，灌装至安瓿瓶中，每瓶装10ml，灭菌，即得门冬氨酸鸟氨酸注射液。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的极性有机溶剂为甲醇、乙醇或丙酮。
全文摘要
本发明涉及一种注射用门冬氨酸鸟氨酸的制备工艺，具体是对反应后的原料液经一步浓缩、脱盐和纯化的工序，本发明所用的方法简单，生产周期短，耗能低，非常适合工业化生产门冬氨酸鸟氨酸注射剂。
文档编号A61P25/28GK102475697SQ20101056662
公开日2012年5月30日 申请日期2010年11月25日 优先权日2010年11月25日
发明者熊国裕 申请人:北京凯因生物技术有限公司, 北京凯因科技股份有限公司