专利名称：一种黄芩中黄芩素与汉黄芩素同时定量测定方法
技术领域：
本发明涉及一种黄芩质量控制方法，具体地，涉及一种黄芩中黄芩素与汉黄芩素 同时定量测定方法，属中药质量控制领域。
背景技术：
黄芩是一种常用中药，为中国药典历版所收载品种，具清热燥湿、泻火解毒、止血 安胎之功效。用于湿温，暑温，胸闷呕恶，湿热痞满，泻痢，黄疸，肺热，咳嗽，高热，烦咳，血 热吐衄，痈肿疮毒，胎动不安。黄芩中的有效成分主要有黄芩苷、汉黄芩苷及其苷元等黄酮 类化合物。其中黄芩苷含量最高，可达18%，中国药典一部黄芩项下规定黄芩苷不得少于 9. 0%，所以不论是药材还是制剂都是以黄芩苷为指标进行质量控制。但近年来，有不少文 献报道，黄芩中的苷元类，如黄芩素、汉黄芩素、千层纸素A等具有非常强的抗菌、消炎、解 热、镇痛等生物活性，远较其苷类的生物活性强，在人体内的吸收是苷类的数倍至数十倍， 且毒副作用更低。因为在黄芩药材中苷元类含量低微，无直接提取价值，所以引发了不少酶 解或水解黄芩中的黄芩苷类来提取其苷元类的提取专利与文章问世。但有关黄芩药材中 具体含多少可水解黄芩素等苷元类，却未查阅到一篇有关其含量测定的报道，黄芩药材中 的黄芩素含量都是由黄芩苷的含量按分子量推算出来的，推算的理论值是否与真实含量一 致，是不得而知的。鉴于上述历史背景情况，为给黄芩中黄芩素和汉黄芩素的充分提取、分离，提供真 实的基础含量数据，探讨简便、快捷的黄芩中黄芩素与汉黄芩素同时定量测定方法，成为当 务之急。
发明内容
经多途径多因素探讨研究，发明人在适宜温度下，利用黄芩本身所含的酶，在水溶 液中酶解黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素-7-0- β -吡喃葡萄糖苷、木蝴蝶苷B等化合物，酶解完 成后，加酸性甲醇杀灭黄芩酶的同时保持黄芩素的稳定性，并使酶解的黄芩苷元类充分溶 解，滤过，续滤液作为供试品溶液。以甲醇-0. 1 %磷酸溶液，体积比为51 M 49 46 为流动相，275nm为检测波长，同时测定黄芩中的黄芩素与汉黄芩素，方法简便、快捷、待测 成分酶解完全、波峰分离良好。首次为黄芩中黄芩素和汉黄芩素的充分提取、分离，提供了 真实的基础含量数据。黄芩素的实测数值远大于以黄芩苷推算出的黄芩素理论含量数值。 以此，进一步证实最终测定的黄芩素是由多种黄芩苷类酶解，以及原药材中存在的微量游 离体相加而得到的总和，以单一的黄芩苷含量推算出的黄芩素理论含量仅为实际含量的约 85%左右。通过方法学考察，黄芩素的进样量在0. 0992-1. 984 μ g/ml范围内呈良好线 性关系，见
图1，回归方程为Y = 5354. 6Χ-96. 788，r = 0. 99988 ；汉黄芩素进样量在 0. 037488-3. 124 μ g/ml范围内呈良好线性关系，见图2，回归方程为=Y = 5854. 6x_29，r = 0.99997。采用加样回收实验，结果表明黄芩素的平均回收率为96. 45% (n = 9)，RSD为1. 34%，见表1 ；汉黄芩素的平均回收率为97. 86% (η = 9)，RSD为1. 89%，见表2。表1黄芩素回收率测定结果
权利要求
1.一种黄芩中黄芩素与汉黄芩素定量测定方法，其特征在于(1)色谱条件与系统适用性试验色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动 相甲醇-0. 1 %磷酸溶液，体积比为51 M 49 46 ；检测波长275nm ；柱温室温；流 速1. Oml/min ；理论板数按黄芩素峰计算应不低于3000。(2)对照品溶液的制备精密称取黄芩素和汉黄芩素对照品适量于棕色量瓶中，分别 加甲醇制成每Iml含黄芩素30 35 μ g、汉黄芩素10 8 μ g的溶液，即得。(3)供试品溶液的制备取黄芩药材中粉0.02g，精密称定，置于50ml量瓶中，加入 35 55°C水5 8ml，并在相同温度的水浴中酶解2 2. 5小时后，取出，加入体积比为 200 1的甲醇-盐酸的混合液37 35ml，超声处理20分钟，取出，放冷，加体积比为 200 1的甲醇-盐酸的混合液至刻度，摇勻，滤过，即得。(4)测定法分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪， 测定，按外标一点法计算黄芩中黄芩素与汉黄芩素含量。
2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于(1)色谱条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相甲醇-0.磷酸 溶液，体积比为51 49;检测波长275nm;柱温室温；流速1. Oml/min;理论板数按黄 芩素峰计算应不低于3000。(2)对照品溶液的制备精密称取黄芩素和汉黄芩素对照品适量于棕色量瓶中，分别加 甲醇制成每Iml含黄芩素30 μ g、汉黄芩素8 μ g的溶液，即得。(3)供试品溶液的制备取黄芩药材中粉0.02g，精密称定，置于50ml量瓶中，加入35°C 水8ml，并在相同温度的水浴中酶解2小时后，取出，加入体积比为200 1的甲醇-盐酸的 混合液35ml，超声处理20分钟，取出，放冷，加体积比为200 1的甲醇-盐酸的混合液至 刻度，摇勻，滤过，即得。(4)测定方法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各ΙΟμΙ，注入液相色谱仪，测 定黄芩素和汉黄芩素以及供试品溶液的峰面积，并计算含量。
3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于(1)色谱条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相甲醇-0.磷 酸溶液，体积比为52 48 ；检测波长275nm ；柱温室温；流速1. Oml/min ；理论板数按 黄芩素峰计算应不低于3000。(2)对照品溶液的制备精密称取黄芩素和汉黄芩素对照品适量于棕色量瓶中，分别加 甲醇制成每Iml含黄芩素33g、汉黄芩素9 μ g的溶液，即得。(3)供试品溶液的制备取黄芩药材中粉0.02g，精密称定，置于50ml量瓶中，加入45°C 水5ml，并在相同温度的水浴中酶解2小时后，取出，加入体积比为200 1的甲醇-盐酸的 混合液37ml，超声处理20分钟，取出，放冷，加体积比为200 1的甲醇-盐酸的混合液至 刻度，摇勻，滤过，即得。(4)测定方法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各ΙΟμΙ，注入液相色谱仪，测 定黄芩素和汉黄芩素以及供试品溶液的峰面积，并计算含量。
4.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于(1)色谱条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相甲醇-0. 磷 酸溶液，体积比为53 47 ；检测波长275nm ；柱温室温；流速1. Oml/min ；理论板数按黄芩素峰计算应不低于3000。(2)对照品溶液的制备精密称取黄芩素和汉黄芩素对照品适量于棕色量瓶中，分别 加甲醇制成每Iml含黄芩素35 μ g、汉黄芩素10 μ g的溶液，即得。(3)供试品溶液的制备取黄芩药材中粉0.02g，精密称定，置于50ml量瓶中，加入50°C 水6ml，并在相同温度的水浴中酶解2. 5小时后，取出，加入体积比为200 1的甲醇-盐酸 的混合液36ml，超声处理20分钟，取出，放冷，加体积比为200 1的甲醇-盐酸的混合液 至刻度，摇勻，滤过，即得。(4)测定方法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测 定黄芩素和汉黄芩素以及供试品溶液的峰面积，并计算含量。
5.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于(1)色谱条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相甲醇-0.磷酸 溶液，体积比为M 46 ；检测波长275nm ；柱温室温；流速1. Oml/min ；理论板数按黄 芩素峰计算应不低于3000。(2)对照品溶液的制备精密称取黄芩素和汉黄芩素对照品适量于棕色量瓶中，分别加 甲醇制成每Iml含黄芩素30 μ g、汉黄芩素10 μ g的溶液，即得。(3)供试品溶液的制备取黄芩药材中粉0.02g，精密称定，置于50ml量瓶中，加入55°C 水7ml，并在相同温度的水浴中酶解2.5小时后，取出，加入体积比为200 1的甲醇-盐酸 的混合液36ml，超声处理20分钟，取出，放冷，加体积比为200 1的甲醇-盐酸的混合液 至刻度，摇勻，滤过，即得。(4)测定方法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各ΙΟμΙ，注入液相色谱仪，测 定黄芩素和汉黄芩素以及供试品溶液的峰面积，并计算含量。
6.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于(1)色谱条件色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相甲醇-0.磷 酸溶液，体积比为讨46 ；检测波长275nm ；柱温室温；流速1. Oml/min ；理论板数按 黄芩素峰计算应不低于3000。(2)对照品溶液的制备精密称取黄芩素和汉黄芩素对照品适量于棕色量瓶中，分别 加甲醇制成每Iml含黄芩素35 μ g、汉黄芩素8 μ g的溶液，即得。(3)供试品溶液的制备取黄芩药材中粉0.02g，精密称定，置于50ml量瓶中，加入 40°C水8ml，并在相同温度的水浴中酶解2. 5小时后，取出，加入体积比为200 1的甲 醇-盐酸的混合液35ml，超声处理20分钟，取出，放冷，加体积比为200 1的甲醇-盐酸 的混合液至刻度，摇勻，滤过，即得。(4)测定方法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测 定黄芩素和汉黄芩素以及供试品溶液的峰面积，并计算含量。
7.根据权利要求1-6所述的测定方法，其特征在于供试品溶液的滤过系指先用快速定 量滤纸滤过，再用0. 45 μ m微孔滤膜滤过。
全文摘要
本发明公开了一种黄芩中黄芩素与汉黄芩素同时定量测定方法。本发明测定方法在适宜温度下，利用黄芩本身所含的酶，在水溶液中酶解黄芩苷、汉黄芩苷等苷类化合物，酶解完成后，加酸性甲醇，杀灭黄芩酶的同时保持黄芩素的稳定性，并使酶解的黄芩苷元类充分溶解，滤过，续滤液作为样品溶液。用HPLC法，以甲醇-0.1％磷酸溶液，体积比为51～54∶49～46为流动相，275nm为检测波长，同时测定黄芩中的黄芩素与汉黄芩素，方法简便、快捷、待测成分酶解完全、波峰分离良好。黄芩中黄芩素与汉黄芩素同时定量测定方法为首次报道，为该成分的充分提取、分离，提供了真实的基础含量数据。黄芩素的含量实测值大于以黄芩苷和黄芩素分子量推算的理论值。
文档编号A61K36/539GK102128889SQ201010588509
公开日2011年7月20日 申请日期2010年12月15日 优先权日2010年12月15日
发明者李晓燕, 赵韶华, 韩桂茹 申请人:李晓燕