专利名称：：野黄芩素的制作方法
技术领域：
：本发明涉及医药
技术领域：
，具体涉及一种野黄茶素
背景技术：
：野黄芩素，又名灯盏花乙素皂苷苷元，其化学结构是5，6,7，4-四羟基黄酮，与灯盏花乙素的区别在7位游离幾基，灯盏花乙素是灯盏花素注射液的主要成分，具有治疗心脑血管疾病的作用，在临床上具有很好的治疗作用，而灯盏花素口服制剂的因为生物利用度低，临床药效作用不是很理想，大量文献报道，灯盏花素在体内的代谢产物为野黄芩素，而野黄芩素的生物利用度比灯盏花素高几倍(《灯盏花乙素普元不同给药剂量的大鼠药动学比较》，车庆明等，中国新药杂志2006年第15巻第18期)，因此，医药科研工作者认为野黄茶素可以开发成新药，但野黄茶素在灯盏花中含量很低，所以，需要科研工作者解决野黄茶素原料的问题。
发明内容基于上述原因，我们科研人员通过长期研究发现，将灯盏花素水溶液，调节适当的pH值，在适当的温度下加入消化酶反应，调节pH值后，聚酰胺纯化，得到含量大于98%的野黄芩素，本发明提取纯化方法，以灯盏花素计得率更高，可以很好的解决提取率低难点。本发明通过下述技术方案实现的。一种野黄茶素，通过下述方法制备得到灯盏花素加水溶解完全，加热至35。C-45。C，恒温35。C-45。C，调节pH值8.0-12.0,加入消化酶，恒温35。C-45。C放置2-12小时，调节pH值2.Q-6.5，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20%-90%乙其中灯盏花素中灯盏花乙素含量大于等于50%小于100%。一种野黄茶素优选下述方法制备得到灯盏花素加水溶解完全，加热至37°C-40°C,恒温37°C-40°C,调节pH值8.0-12.0,力口入消化酶，恒温37°C-40。C放置2-12小时，调节pH值2.0-6.5,浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20°/。-90%乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄茶素。一种野黄茶素优选下述方法制备得到灯盏花素加水溶解完全，加热至35°C-45°C，恒温35°C-45。C，调节pH值8.0-10.0,加入消化酶，恒温35。C-45。C放置2-12小时，调节pH值2.0-6.5，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20°/。-90%乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄芩素。一种野黄荅素优选下述方法制备得到灯盏花素加水溶解完全，加热至35°C-45。C,恒温35°C-45。C，调节pH值8.0-12.0，加入消化酶，恒温35。C-45。C放置2-6小时，调节pH值2.0-6.5，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20°/。-90%乙醇洗,保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄茶素。一种野黄茶素优选下述方法制备得到灯盏花素加水溶解完全，加热至35°C-45°C，恒温35°C-45°C,调节pH值8.0-12.0，加入消化酶，恒温35。C-45。C放置2-12小时，调节pH值3.0-5.0,浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20°/。-90%乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥,得到野黄芩素。一种野黄茶素优选下述方法制备得到灯盏花素加水溶解完全，加热至37°C-40°C,恒温37°C-40。C,调节pH值8.0-10.0，加入消化酶，恒温37。C-40。C放置2-6小时，调节pH值2.0-5.0，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用40%-80%乙醇洗,保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥,得到野黄芩素。野黄茶素为活性成分制备的药物制剂。野黄茶素在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用。其中制剂为片剂、胶嚢剂或颗粒剂。检测分析方法高效液相色i普法色谱柱Cu反相色谱柱。色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0-10分钟时，甲醇的比例由5%升至100°/。，0.1-0.5%乙酸水溶液的比例由95%降至0%;10-20分钟时，甲醇的比例由100%降至95%,0.1-0.5%乙酸水溶液的比例由0齡至5°/。；对照品溶液的配制精密称取野黄茶素对照品到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；供试品溶液的配制精密称取样品，经过处理后，放到容量瓶中，加曱醇溶解摇匀，并稀释至刻度；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积或峰高计算含量即得。制备方法提取率比较试验试验方法取灯盏花素，等分，分别按照本发明工艺方法和发明专利(申请号200410033687.5)工艺方法制备，得到野黄茶素，按照上述检测方法，检测其纯度，计算得率。试验结果见表l:表l不同制备方法工艺比较<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>药理试-睑例试验例1对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用实验动物健康SD大鼠，体重200-300g。实验方法将大鼠随机分组正常对照组，模型组，灯盏花乙素组、野黄茶素组组。正常对照组给予含氧洛氏液，模型组给予氮饱和洛氏液，实验药物组给予含氮饱和药物(实验药物用洛氏液配置)。取大鼠，尾静脉注射肝素钠(1000U/kg)，15分钟后击暈，开胸，将心脏迅速取出，移至贝i有4'C洛氏液的培养皿中，清洗心脏残留血液，在液面下迅速把主动脉接于灌流的套管上，并以线结扎固定。立即以含氧洛氏液进行灌流。灌注压70cm水柱，灌流温度(38±5)。C,流速(11.5±0.5)mL/min。用蛙心夹夹住心尖部并与换能器相连，二道生理记录仪描记心率变化。心脏复跳并心率显示正常后，稳定30min,再进行实验。正常对照组，以含氧洛氏液持续灌流110min;模型组，以含氧洛氏液灌流30min后，改用氮饱和洛氏液灌注40min(此为缺氧灌注)，再恢复含氧洛氏液灌流40min;给药组实验方法基本同模型组，仅在缺氧灌注时改用不同浓度的氮饱和受试药物灌注。实验结果结果见表2。表2表对缺氧再给氧灌注损伤大鼠离体心脏冠脉流量的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注与才莫型纟且比4交，*P<0.05，**P<0.01。试验例2对大鼠急性心肌缺血的影响实-睑动物Wistar大鼠，雌;维兼用，体重180—220g。实验方法将大鼠随机组即空白对照组、阳性药物组、本发明药物组。给药量2mg/kg。每日灌胃给药l次，连续7d,空白对照组给予等体积的蒸馏水。于末次给药lh后用2.5%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，仰卧固定。用针电极刺入四肢皮下，记录标准II导联心电图，作为基础心电图对照，然后尾静脉注射垂体后叶素0.5U/kg，于10s内注射完毕，立即记录注射垂体后叶素后5s、10s、15s、30s、lmin、2min、3min的心电图，观察T波、ST4爻和心率的变化。以心电图出现下列指标一项者即为阳性心肌缺血J点升高1.5mV以上，T波低平(降低原T波高度50°/。以上)、双向、倒置，ST^:水平下移0.5mV，心律不齐。实验结果结果见表2。表2对大鼠急性心肌缺血的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>制备实施例实施例1灯盏花素加水溶解完全，加热至35。C,恒温35。C,调节pH值8.0，加入消化酶，恒温35。C放置2小时，调节pH值2.0，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20°/。乙醇洗,保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄茶素。实施例2灯盏花素加水溶解完全，加热至45°C,恒温45°C，调节pH值12.0，加入消化酶，恒温45。C放置12小时，调节pH值6.5，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗,再用90%乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄茶素。实施例3灯盏花素加水溶解完全，加热至4(TC,恒温40'C,调节pH值10.0,加入消化酶，恒温4(TC放置6小时，调节pH值4.0,浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用60°/。乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄茶素。实施例4灯盏花素加水溶解完全，加热至37°C,恒温37°C,调节pH值8.O,加入消化酶，恒温37。C放置2小时，调节pH值2.0，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20%乙醇洗,保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥,得到野黄茶素。实施例5灯盏花素加水溶解完全，加热至40°C,恒温40°C,调节pH值12.0，加入消化酶，恒温4(TC放置12小时，调节pH值6.5，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用90%乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓縮，干燥，得到野黄芩素。实施例6灯盏花素加水溶解完全，加热至38°C,恒温38。C,调节pH值9.5，加入消化酶，恒温38'C放置5小时，调节pH值4.0，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用35°/。乙醇洗,保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄茶素。实施例7灯盏花素加水溶解完全，加热至35°C，恒温35°C，调节pH值8.O，加入消化酶，恒温35。C放置2小时，调节pH值2.0，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用25%乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥,得到野黄茶素。实施例8灯盏花素加水溶解完全，加热至45°C，恒温45°C,调节pH值10.0，加入消化酶，恒温45'C放置12小时，调节pH值6.5，浓缩，浓縮液上聚酰胺柱，先用水洗，再用90%乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄茶素。实施例9灯盏花素加水溶解完全，加热至42。C，恒温42。C,调节pH值9.O,加入消化酶，恒温42。C放置11小时，调节pH值5.5,浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用85%乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄茶素。实施例10灯盏花素加水溶解完全，加热至35°C，恒温35。C,调节pH值8.O，加入消化酶，恒温35T放置2小时，调节pH值2.0,浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20°/。乙醇洗,保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄芩素。实施例11灯盏花素加水溶解完全，加热至45°C，恒温45。C,调节pH值12.0，加入消化酶，恒温45。C放置6小时，调节pH值6.5，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用90%乙醇洗,保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥,得到野黄茶素。实施例12灯盏花素加水溶解完全，加热至36°C，恒温36°C，调节pH值8.5,加入消化酶，恒温36。C放置3小时，调节pH值2.5，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用30%乙醇洗,保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥,得到野黄芩素。实施例13灯盏花素加水溶解完全，加热至35°C，恒温35°C，调节pH值8.O,加入消化酶，恒温35t:放置2小时，调节pH值3.0,浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20°/。乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄芩素。实施例14灯盏花素加水溶解完全，加热至45。C，恒温45。C，调节pH值12.0，加入消化酶，恒温45。C放置12小时，调节pH值5.0,浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用90%乙醇洗,保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄茶素。实施例15灯盏花素加水溶解完全，加热至39°C，恒温39。C,调节pH值10.5，加入消化酶，恒温39。C^:置2-12小时，调节pH值4.0，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用50%乙醇洗,保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥,得到野黄芩素。实施例16灯盏花素加水溶解完全，加热至37°C,恒温37°C，调节pH值8.O，加入消化酶，恒温37。C放置2小时，调节pH值2.0，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用40%乙醇洗,保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄茶素。实施例17灯盏花素加水溶解完全，加热至40°C,恒温40°C，调节pH值10.0,加入消化酶，恒温4(TC放置6小时，调节pH值5.0，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用80°/。乙醇洗,保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄芩素。实施例18灯盏花素加水溶解完全，加热至37.5°C，恒温37.5'C，调节pH值9.0，加入消化酶，恒温37.5'C放置3小时，调节pH值3.0，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用60%乙醇洗,保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥,得到野黄芩素。上述试验例中灯盏花素中灯盏花乙素含量大于等于50%小于100%。上述试验例制备的野黄茶素为活性成分制备的药物制剂。其中制剂为片剂、胶嚢剂或颗粒剂。上述试验例制备的野黄茶素在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用。本发明所述消化酶可以由市场购买所得，也可以通过现有4支术进^f亍制备。权利要求1、一种野黄芩素，其特征在于灯盏花素加水溶解完全，加热至35℃-45℃，恒温35℃-45℃，调节pH值8.0-12.0，加入消化酶，恒温35℃-45℃放置2-12小时，调节pH值2.0-6.5，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20％-90％乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄芩素。2、根据权利要求1所述的一种野黄茶素，其中灯盏花素中灯盞花乙素含量大于等于50%小于100%。3、根据权利要求1所述的一种野黄茶素，其中灯盏花素加水溶解完全，加热至37。C-40。C，恒温37。C-40。C,调节pH值8.0-12.0,加入消化酶，恒温37°C-40。C放置2-12小时，调节pH值2.0-6.5,浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗,再用20%-90%乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥,得到野黄茶素。4、根据权利要求1所述的一种野黄茶素，其中灯盞花素加水溶解完全，加热至35°C-45°C,恒温35°C-45。C,调节pH值8.0-10.0,加入消化酶，恒温35°C-45。C放置2-12小时，调节pH值2.0-6.5，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20°/。-90%乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄茶素。5、根据权利要求1所述的一种野黄茶素，其中灯盞花素加水溶解完全，加热至35°C-45°C,恒温35。C-45。C，调节pH值8.0-12.0,加入消化酶，恒温35°C-45。C放置2-6小时，调节pH值2.0-6.5，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20%-90%乙醇洗,保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄茶素。6、根据权利要求1所述的一种野黄茶素，其中灯盏花素加水溶解完全，加热至35°C-45°C,恒温35。C-45。C，调节pH值8.0-12.0,加入消化酶，恒温35。C-45。C放置2-12小时，调节pH值3.0-5.0，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗,再用20%-90%乙醇洗,保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄茶素。7、根据权利要求l所述的一种野黄茶素，其中灯盞花素加水溶解完全，加热至37。C-40。C，恒温37°C-40。C,调节pH值8.0-10.0，力口入消4匕酶，恒温37°C-40。C放置2-6小时，调节pH值2.0-5.0，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用40%-80%乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄茶素。8、根据权利要求1-7任一项所述的一种野黄茶素为活性成分制备的药物制剂。9、根据权利要求1-7任一项所述的一种野黄芩素在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用。10、根据权利要求8所述的药物制剂，其中制剂为片剂、胶嚢剂或颗粒剂。全文摘要本申请公开一种野黄芩素，其特征在于灯盏花素加水溶解完全，调节pH值8-12，加热至50℃-80℃，恒温50℃-80℃3-24小时，调节pH值2-6.5，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20％-90％乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄芩素。本发明工艺方法提取率高，野黄芩素纯度高，可以作为药物制剂活性成分使用。文档编号C12P17/06GK101586132SQ20091008767公开日2009年11月25日申请日期2009年7月2日优先权日2009年7月2日发明者周小亮,周美吟,安晓雪申请人:周玲