专利名称：：一种野黄芩素的制作方法
技术领域：
：本发明涉及医药
技术领域：
，具体涉及一种野黄芩素
背景技术：
：野黄苍素，又名灯盏花乙素皂苷苷元，其化学结构是5，6，7，4-四羟基黄酮，与灯盏花乙素的区别在7位游离羟基，灯盏花乙素是灯盏花素注射液的主要成分，具有治疗心脑血管疾病的作用，在临床上具有很好的治疗作用，而灯盏花素口服制剂的因为生物利用度低，临床药效作用不是很理想，大量文献报道，灯盏花素在体内的代^t产物为野黄芩素，而野黄芩素的生物利用度比灯盏花素高几倍(《灯盏花乙素普元不同给药剂量的大鼠药动学比较》，车庆明等，中国新药杂志2006年第15巻第18期)，因此，医药科研工作者认为野黄茶素可以开发成靳药，但野黄茶素在灯盏花中含量很低，所以，需要科研工作者解决野黄芩素原料的问题。
发明内容基于上述原因，我们科研人员通过长期研究发现，将灯盏花素水溶液，调节适当的碱性pH值，在适当的温度下反应，调节pH值后，聚酰胺纯化，得到含量大于98%的野黄茶素，本发明提取纯化方法，以灯盏花素计得率更高，可以很^的解决提取率低难点。本发明通过下述技术方案实现的。一种野黄茶素，按照下述方法制备得到灯盏花素加水溶解完全，调节pH值8-12，加热至50°C-8(TC,恒温50°C-80°C3-24小时，调节pH值2-6.5，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20°/。-90%乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄茶素。其中灯盏花素中灯盏花乙素含量大于等于50%小于100%。其中优选的野黄茶素，按照下述方法制备得到灯盏花素加水溶解完全，调节pH值8-10，加热至5(TC-80。C，恒温50°C-80°C3-24小时，调节pH值2-6.5，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20%-90°/乙醇洗，卩呆留乙醇洗脱液，浓缩，干燥,得到野黄芩素。其中优选的野黄茶素，按照下述方法制备得到灯盏花素加水溶解完全,调节pH值8-12,加热至60°C-75°C,恒温60°C-75°C3-24小时，调节pH值2-6.5,浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20%-90°/。乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，^燥,得到野黄芩素。其中优选的野黄茶素，按照下述方法制备得到灯盏花素加水溶解完全，调节pH值8-12，加热至50°C-80°C，恒温50°C-80°C8-15小时，调节pH值2-6.5,浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20%-90%乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄芩素。其中优选的野黄茶素，按照下述方法制备得到灯盏花素加水溶解完全,调节pH值8-12，加热至50。C-8(TC，恒温5(TC-8(TC3-24小时，调节pH值2-6.5,界缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用50%-80%乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，燥,得到野黄芩素。其中优选的野黄茶素，按照下述方法制备得到灯盏花素加水溶解完全，调节pH值8-10,加热至60°C-75°C，恒温60°C-75°C8-15小时，调节pH值2-6.5，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用50°/-80%乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥,得到野黄芩素。上述所述的方法制备得到野黄茶素为活性成分制备的药物制剂。上述所述的方法制备得到野黄茶素在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用。上述所述的药物制剂，其中制剂为片剂、胶囊剂或颗粒剂。检测分析方法高效液相色谱法色谱柱ds反相色谱柱。色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；O-IO分钟时，甲醇的比例由5%升至100%，0.1-0.5%乙酸水溶液的比例由95%降至0%;10-20分钟时，曱醇的比例由100°/。降至95%,0.1-0.5%乙酸水溶液的比例由0%降至5%;对照品溶液的配制精密称取野黄茶素对照品到容量瓶中，加曱醇溶解摇匀，并稀释至刻度；供试品溶液的配制精密称取样品，经过处理后，放到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积或峰高计算含量即得。制备方法提取率比较试验试验方法取灯盏花素，等分，分别按照本发明工艺方法和发明专利(申请号200410033687.5)工艺方法制备，得到野黄茶素，按照上述检测方法，检测其纯度，计算得率。试验结果见表l:表l不同制备方法工艺比较<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>公开专利工艺30.723.398.01I药理试验例试验例1对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用实验动物健康SD大鼠，体重200-300g。实验方法将大鼠随机分组正常对照组，模型组，灯盏花乙素组、野黄茶素组组。正常对照组给予含氧洛氏液，模型组给予氮饱和洛氏液，实验药物组给予含氮饱和药物(实验药物用洛氏液配置)。取大鼠，尾静脉注射肝素钠(1000U/kg),15分钟后击暈，开胸，将心脏迅速取出，移至贮有4。C洛氏液的培养皿中，清洗心脏残留血液，在液面下迅速把主动脉接于灌流的套管上，并以线结扎固定。立即以含氧洛氏液进行灌流。灌注压70cm水柱，灌流温度(38士5)。C，流速(11.5±0.5)mL/min。用蛙心夹夹住心尖部并与换能器相连，二道生理记录仪描记心率变化。心脏复跳并心率显示正常后，稳定30min，再进行实验。正常对照组，以含氧洛氏液持续灌流110min;才莫型组，以含氧洛氏液灌流30min后，改用氮饱和洛氏液灌注40min(此为缺氧灌注)，再恢复含氧洛氏液灌流40min;给药组实验方法基本同模型组，仅在缺氧灌注时改用不同浓度的氮饱和受试药物灌注。实验结果结果见表2。表2表对缺氧再给氧灌注损伤大鼠离体心脏冠脉流量的影响纟耳别剂量Mg/kg停灌前mLVmin复灌后2Q分钟mL/min复灌后4G分钟mlVmin正常组—7.2±0.36.3±0.8**5，7±L1*承模型组画画7.4±0.44.1±0.13.3±0.5灯盏花乙素组27.2±0.55.2±0.4*4.6±0.7*野黄荅素组27.4±0.55.8±0.3**5.0±0.6**注与冲莫型组比l交，*P<0.05,**P<0.01。试验例2对大鼠急性心肌缺血的影响实验动物Wistar大鼠，雌雄兼用，体重180—220g。实验方法将大鼠随机组即空白对照组、阳性药物组、本发明药物组。给药量2mg/kg。每日灌胃给药l次，连续7d，空白对照组给予等体积的蒸馏水。于末次给药lh后用2.5%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，仰卧固定。用针电极刺入四肢皮下，记录标准II导联心电图，作为基础心电图对照，然后尾静脉注射垂体后叶素0.5U/kg，于10s内注射完毕，立即记录注射垂体后叶素后5s、10s、15s、30s、lmin、2min、3min的心电图，，见察T波、ST^殳和心率的变化。以心电图出现下列指标一项者即为阳性心肌缺血J点升高1.5mV以上，T波低平(降低原T波高度50%以上)、双向、倒置，ST段水平下移0.5mV，心律不齐。实验结果结果见表2。表2对大鼠急性心肌缺血的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>制备实施例实施例1灯盏花素加水溶解完全，调节pH值8，加热至5(TC,恒温50°C3-小时，调节pH值2,浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20°/4乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥,得到野黄茶素。实施例2灯盏花素加水溶解完全,调节pH值12，加热至8(TC,恒温80°C24小时，调节j)H值6.5，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用90%乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥,得到野黄芩素。实施例3灯盏花素加水溶解完全，调节pH值IO,加热至65°C,恒温65°C15小时，调节pH值4.5，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用55%乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥,得到野黄芩素。实施例4灯盏花素加水溶解完全，调节pH值8，加热至5(TC，恒温5(TC3小时，调节pH值2,浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用201乙醇洗,保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄茶素。实施例5灯盏花素加水溶解完全，调节pH值IO，加热至8(TC，恒温80°C24小时，调节pH值6.5,浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用90%乙醇洗,保留乙醇洗脱液，浓缩，千燥，得到野黄芩素。实施例6灯盏花素加水溶解完全，调节pH值8,5，加热至55°C，恒温55°C4小时，调节pH值3.5,浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗,再用25%乙醇洗,保留乙醇洗脱液，浓缩，千燥,得到野黄茶素。实施例7灯盏花素加水溶解完全，调节pH值8，加热至6(TC，恒温6(TC3小时，调节pH值2,浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20%乙醇洗,保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄茶素。实施例8灯盏花素加水溶解完全，调节pH值12,加热至75°C，恒温75°C24小时，调节pH值6.5,浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用90%乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄茶素。实施例9灯盏花素加水溶解完全，调节pH值9.5，加热至7(TC,恒温7(TC8小时，调节pH值5，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用50%乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄茶素。实施例10灯盏花素加水溶解完全，调节pH值8,加热至5(TC，恒温50°C8小时，调节pH值2，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗,再用2oy。乙醇洗,保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥,得到野黄芩素。实施例11灯盏花素加水溶解完全，调节pH值12,加热至8(TC,恒温80°C15小时，调节pH值6.5，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用90%乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄芩素。实施例12灯盏花素加水溶解完全,调节PH值ll，加热至65。C,恒温65°C14小时，调节pH值4.5,浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗,再用85%乙醇洗,保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥,得到野黄芩素。实施例13灯盏花素加水溶解完全,调节pH值8,加热至5(TC,恒温5(TC3小时，调节pH值2，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用50°/。乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄芩素。实施例14灯盏花素加水溶解完全，调节pH值12,加热至80°C，恒温80°C24小时，调节pH值6.5，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用80%乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄芩素。实施例15灯盏花素加水溶解完全，调节pH值11.5，加热至55°C，恒温55。C22小时，调节pH值5.0,浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用70%乙醇洗,保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥,得到野黄茶素。实施例16灯盏花素加水溶解完全，调节pH值8，加热至6(TC，恒温60°C8小时，调节pH值2，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用50%乙醇洗,保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄芩素。实施例17灯盏花素加水溶解完全，调节pH值IO,加热至75°C，恒温75°C15小时，调节pH值6.5，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用80%乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥,得到野黄茶素。实施例18灯盏花素加水溶解完全，调节pH值9，加热至70。C,恒温70°C12小时，调节pH值4，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用65%乙醇洗,保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥,得到野黄茶素。上述试验例中灯盏花素中灯盏花乙素含量大于等于50%小于100%。上述试验例制备的野黄茶素为活性成分制备的药物制剂。其中制剂为片剂、胶囊剂或颗粒剂。上述试验例制备的野黄茶素在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用。权利要求1、一种野黄芩素，其特征在于灯盏花素加水溶解完全，调节pH值8-12，加热至50℃-80℃，恒温50℃-80℃3-24小时，调节pH值2-6.5，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20％-90％乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄芩素。2、根据权利要求l所述的一种野黄茶素，其中灯盏花素中灯盏花乙素含量大于等于50%小于100%。3、根据权利要求1所述的一种野黄茶素，其中灯盏花素加水溶解完全，调节pH值8-10,加热至50。C-80。C，恒温5(TC-80。C3-24小时，调节pH值2-6.5,浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20%-90%乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，千燥，得到野黄芩素。4、根据权利要求1所述的一种野黄茶素，其中灯盏花素加水溶解完全，调节pH值8-12,加热至6(TC-75。C，恒温6(TC-75。C3-24小时，调节pH值2-6.5，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20°/-90%乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，千燥,得到野黄芩素。5、根据权利要求1所述的一种野黄茶素，其中灯盏花素加水溶解完全，调节pH值8-12，加热至50。C-8(TC,恒温50°C-80°C8-15小时，调节pH值2-6.5，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20°/广90°/。乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，千燥,得到野黄芩素。6、根据权利要求1所述的一种野黄茶素，其中灯盏花素加水溶解完全,调节pH值8-12,加热至50。C-8(TC，恒温50°C-80°C3-24小时,调节pH值2-6.5，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用50%-80%乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄芩素。7、根据权利要求1所述的一种野黄茶素，其中灯盏花素加水溶解完全，调节pH值8-IO,加热至60°C-75。C，恒温60°C-75°C8-15小时，调节pH值2-6.5,浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用50%-80%乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥,得到野黄芩素。.8、根据权利要求1-7任一项所述的一种野黄芩素为活性成分制备的药物制剂。9、根据权利要求1-7任一项所述的一种野黄芩素在制备治疗心脑血管疾病药物中的应用。10、根据权利要求8所述的药物制剂，其中制剂为片剂、胶嚢剂或颗粒剂。全文摘要本申请公开一种野黄芩素，其特征在于灯盏花素加水溶解完全，加热至35℃-45℃，恒温35℃-45℃，调节pH值8.0-12.0，加入消化酶，恒温35℃-45℃放置2-12小时，调节pH值2.0-6.5，浓缩，浓缩液上聚酰胺柱，先用水洗，再用20％-90％乙醇洗，保留乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到野黄芩素。本发明工艺方法提取率高，野黄芩素纯度高，可以作为药物制剂活性成分使用。文档编号C07D311/00GK101591320SQ20091008767公开日2009年12月2日申请日期2009年7月2日优先权日2009年7月2日发明者周小亮,周美吟,安晓雪申请人:周玲