专利名称：用于骨关节炎造模的药物组合物及其制备方法与造模方法
技术领域：
本发明涉及一种造模药物组合物及其制备方法与造模方法，尤其是一种用于骨关 节炎造模的药物组合物及其制备方法与造模方法。
背景技术：
目前常用的骨关节炎的造模方法均不理想，大多为手术造模，主要缺点是该方法 操作复杂且创伤大，手术造成的治病因素(切断韧带、半月板)始终存在，不易观察出药物 的疗效；关节腔内注射化合物的方法主要缺点，其一是需要反复3次注射才能成模，成模时 间长且不确定。其二是用生理盐水配制后，药液具有流动性，进入关节后不能黏附于关节面 只破坏软骨组织，而易于扩散到关节囊壁，造成对关节周围软组织的严重损伤，引起急性炎 症及明显肿胀，给再次注射造成找位困难，影响剂量的准确性和病理损伤的一致性，同时死 亡率高。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种用于骨关节炎造模的药物组合物。本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述用于骨关节炎造模的药物组合物 的制备方法。本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述用于骨关节炎造模的药物组合物 的造模方法。为解决上述技术问题，本发明的技术方案是—种用于骨关节炎造模的药物组合物，由木瓜蛋白酶、泊洛沙姆和PH5. 7磷酸缓 冲液组成，按其重量体积比计浓度(g/100ml)为木瓜蛋白酶3-5%、泊洛沙姆30-35%、其余 为磷酸缓冲液。优选的，上述用于骨关节炎造模的药物组合物，其中按其重量体积比计浓度 (g/100ml)为木瓜蛋白酶4%、泊洛沙姆35%、其余为磷酸缓冲液。上述用于骨关节炎造模的药物组合物的制备方法，具体步骤为(1)按照每100mlPH5. 7的磷酸缓冲液中加入30_35g泊洛沙姆混勻；(2)继续加入3_5g木瓜蛋白酶，搅拌均勻。上述用于骨关节炎造模的药物组合物的造模方法，具体步骤为(1)取上述药物组合物置3_5°C冰箱中预冷20-40分钟，取出；(2)注射器吸取步骤(1)中药物组合物0. 05-0. 1ml，将其注入造模动物膝关节 腔；(3)将造模动物置于50_55°C温度环境下2小时。优选的，上述用于骨关节炎造模的药物组合物的造模方法，具体步骤为(1)取上述药物组合物置4°C冰箱中预冷30分钟，取出；(2)注射器吸取步骤(1)中药物组合物0. 1ml，将其注入造模动物膝关节腔；
(3)将造模动物置于50°C温度环境下2小时。优选的，上述用于骨关节炎造模的药物组合物的造模方法，所述造模动物为大鼠 或兔。本发明优点是上述用于骨关节炎造模的药物组合物，利用了泊洛沙姆控释与凝胶的双重特性， 使注入关节的木瓜蛋白酶不具有流动性，随凝胶态的泊洛沙姆黏贴于软骨表面，并向软骨 释放，直接致软骨损伤，获得骨关节炎模型；该方法简单易行，成模快，成功率高，适宜于治 疗骨关节炎药物的药效学研究。
图1为实施例1所述药物组合物造模结果图，其中图IA为注射部位、图IB为造模 前软骨结构、图IC为造模后软骨结构；图2为实施例2所述药物组合物造模结果图，其中图2A为注射部位、图2B为造模 前软骨结构、图2C为造模后软骨结构；图3为实施例3所述药物组合物造模结果图，其中图3A为注射部位、图;3B为造模 前软骨结构、图3C为造模后软骨结构；图4为实施例4所述药物组合物造模结果图，其中图4A为注射部位、图4B为造模 前软骨结构、图4C为造模后软骨结构；图5为实施例5所述药物组合物造模结果图，其中图5A为注射部位、图5B为造模 前软骨结构、图5C为造模后软骨结构；图6为实施例6所述药物组合物造模结果图，其中图6A为注射部位、图6B为造模 前软骨结构、图6C为造模后软骨结构；图7为实施例7所述药物组合物造模结果图，其中图7A为注射部位、图7B为造模 前软骨结构、图7C为造模后软骨结构。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明所述技术方案作进一步的说明。实施例1一种用于骨关节炎造模的药物组合物，由木瓜蛋白酶、泊洛沙姆和PH 5. 7磷酸缓 冲液组成，按其重量体积比计浓度(g/100ml)为木瓜蛋白酶4%、泊洛沙姆35%、其余为磷 酸缓冲液。上述用于骨关节炎造模的药物组合物的制备方法，具体步骤为(1)按照每100mlPH5. 7的磷酸缓冲液中加入35g泊洛沙姆混勻；(2)继续加入4g木瓜蛋白酶泊洛沙姆，搅拌均勻。上述用于骨关节炎造模的药物组合物的造模方法，具体步骤为(1)取上述药物组合物置4°C冰箱中预冷30分钟，取出；(2)注射器吸取步骤(1)中药物组合物0. 1ml，将其注入造模大鼠膝关节腔；(3)将注射后大鼠置于50°C温度环境下2小时。造模结果如图1所示，A为注射部位，B为正常膝关节软骨，结构完整，软骨表面光滑，切线层软骨细胞呈梭形、平行排列于表面，移行层和深层软骨细胞呈圆形或卵圆形，柱 状排列，基质呈红色，钙化层可见少量细胞和蓝染的钙化基质，C为造模2小时后受损关节， 关节局部软骨均出现明显的病理改变，主要表现为软骨表面受损部呈暗灰白色，粗糙、失去 原有光泽；切线层细胞肿大、变性、呈卵园形平行排列于表面，有少量坏死；移行层和深层 部分软骨细胞溶解坏死，基质纹理消失，呈着色不一的淡粉色，显示模型成功。实施例2一种用于骨关节炎造模的药物组合物，由木瓜蛋白酶、泊洛沙姆和PH 5. 7磷酸缓 冲液组成，按其重量体积比计浓度(g/100ml)为木瓜蛋白酶3.5%、泊洛沙姆35%、其余为 磷酸缓冲液。上述用于骨关节炎造模的药物组合物的制备方法，具体步骤为(1)按照每100mlPH5. 7的磷酸缓冲液中加入35g泊洛沙姆混勻；(2)继续加入3. 5g木瓜蛋白酶，搅拌均勻。上述用于骨关节炎造模的药物组合物的造模方法，具体步骤为(1)取上述药物组合物置5°C冰箱中预冷20分钟，取出；(2)注射器吸取步骤(1)中药物组合物0. 05ml，将其注入兔膝关节腔；(3)将注射后兔置于55°C温度环境下2小时。造模结果如图2所示，A为注射部位，B为正常膝关节软骨，结构完整，软骨表面光 滑，切线层软骨细胞呈梭形、平行排列于表面，移行层和深层软骨细胞呈圆形或卵圆形，柱 状排列，基质呈红色，钙化层可见少量细胞和蓝染的钙化基质，C为造模2小时后受损关节， 关节局部软骨均出现明显的病理改变，主要表现为软骨表面受损部呈暗灰白色，粗糙、失去 原有光泽；切线层细胞肿大、变性、呈卵园形平行排列于表面，有少量坏死；移行层和深层 部分软骨细胞溶解坏死，基质纹理消失，呈着色不一的淡粉色，显示模型成功。实施例3一种用于骨关节炎造模的药物组合物，由木瓜蛋白酶、泊洛沙姆和PH 5. 7磷酸缓 冲液组成，按其重量体积比计浓度(g/100ml)为木瓜蛋白酶3%、泊洛沙姆30%、其余为磷 酸缓冲液。上述用于骨关节炎造模的药物组合物的制备方法，具体步骤为(1)按照每100mlPH5. 7的磷酸缓冲液中加入3g木瓜蛋白酶混勻；(2)继续加入30g泊洛沙姆，搅拌均勻。上述用于骨关节炎造模的药物组合物的造模方法，具体步骤为(1)取上述药物组合物置3°C冰箱中预冷40分钟，取出；(2)注射器吸取步骤(1)中药物组合物0. 07ml，将其注入大鼠的膝关节腔(3)将注射后大鼠置于55°C温度环境下2小时。造模结果如图3所示，A为注射部位，B为正常膝关节软骨，结构完整，软骨表面光 滑，切线层软骨细胞呈梭形、平行排列于表面，移行层和深层软骨细胞呈圆形或卵圆形，柱 状排列，基质呈红色，钙化层可见少量细胞和蓝染的钙化基质，C为造模2小时后受损关节， 关节局部软骨均出现明显的病理改变，主要表现为软骨表面受损部呈暗灰白色，粗糙、失去 原有光泽；切线层细胞肿大、变性、呈卵园形平行排列于表面，有少量坏死；移行层和深层 部分软骨细胞溶解坏死，基质纹理消失，呈着色不一的淡粉色，显示模型成功。
实施例4一种用于骨关节炎造模的药物组合物，由木瓜蛋白酶、泊洛沙姆和PH 5. 7磷酸缓 冲液组成，按其重量体积比计浓度(g/100ml)为木瓜蛋白酶4%、泊洛沙姆33%、其余为磷 酸缓冲液。上述用于骨关节炎造模的药物组合物的制备方法，具体步骤为(1)按照每100mlPH5. 7的磷酸缓冲液中加入33g泊洛沙姆混勻；(2)继续加入4g木瓜蛋白酶，搅拌均勻。上述用于骨关节炎造模的药物组合物的造模方法，具体步骤为(1)取上述药物组合物置3°C冰箱中预冷20分钟，取出；(2)注射器吸取步骤(1)中药物组合物0. 1ml，将其注入大鼠的膝关节腔；(3)将注射后大鼠置于52°C温度环境下2小时。造模结果如图4所示，A为注射部位，B为正常膝关节软骨，结构完整，软骨表面光 滑，切线层软骨细胞呈梭形、平行排列于表面，移行层和深层软骨细胞呈圆形或卵圆形，柱 状排列，基质呈红色，钙化层可见少量细胞和蓝染的钙化基质，C为造模2小时后受损关节， 关节局部软骨均出现明显的病理改变，主要表现为软骨表面受损部呈暗灰白色，粗糙、失去 原有光泽；切线层细胞肿大、变性、呈卵园形平行排列于表面，有少量坏死；移行层和深层 部分软骨细胞溶解坏死，基质纹理消失，呈着色不一的淡粉色，显示模型成功。实施例5—种用于骨关节炎造模的药物组合物，由木瓜蛋白酶、泊洛沙姆和PH 5. 7磷酸缓 冲液组成，按其重量体积比计浓度(g/100ml)为木瓜蛋白酶5%、泊洛沙姆35%、其余为磷 酸缓冲液。上述用于骨关节炎造模的药物组合物的制备方法，具体步骤为(1)按照每100mlPH5. 7的磷酸缓冲液中加入35g泊洛沙姆混勻；(2)继续加入5g木瓜蛋白酶，搅拌均勻。上述用于骨关节炎造模的药物组合物的造模方法，具体步骤为(1)取上述药物组合物置5°C冰箱中预冷35分钟，取出；(2)注射器吸取步骤(1)中药物组合物0. 08ml，将其注入兔膝关节腔；(3)将注射后兔置于55°C温度环境下2小时；造模结果如图5所示，A为注射部位，B为正常膝关节软骨，结构完整，软骨表面光 滑，切线层软骨细胞呈梭形、平行排列于表面，移行层和深层软骨细胞呈圆形或卵圆形，柱 状排列，基质呈红色，钙化层可见少量细胞和蓝染的钙化基质，C为造模2小时后受损关节， 关节局部软骨均出现明显的病理改变，主要表现为软骨表面受损部呈暗灰白色，粗糙、失去 原有光泽；切线层细胞肿大、变性、呈卵园形平行排列于表面，有少量坏死；移行层和深层 部分软骨细胞溶解坏死，基质纹理消失，呈着色不一的淡粉色，显示模型成功。实施例6一种用于骨关节炎造模的药物组合物，由木瓜蛋白酶、泊洛沙姆和PH 5. 7磷酸缓 冲液组成，按其重量体积比计浓度(g/100ml)为木瓜蛋白酶3.8%、泊洛沙姆32%、其余为 磷酸缓冲液。上述用于骨关节炎造模的药物组合物的制备方法，具体步骤为
(1)按照每100mlPH5. 7的磷酸缓冲液中加入32g泊洛沙姆混勻；(2)继续加入3. 8g木瓜蛋白酶，搅拌均勻。上述用于骨关节炎造模的药物组合物的造模方法，具体步骤为(1)取上述药物组合物置3°C冰箱中预冷30分钟，取出；(2)注射器吸取步骤(1)中药物组合物0. 1ml，将其注入兔膝关节腔；(3)将注射后兔置于50°C温度环境下2小时。造模结果如图6所示，A为注射部位，B为正常膝关节软骨，结构完整，软骨表面光 滑，切线层软骨细胞呈梭形、平行排列于表面，移行层和深层软骨细胞呈圆形或卵圆形，柱 状排列，基质呈红色，钙化层可见少量细胞和蓝染的钙化基质，C为造模2小时后受损关节， 关节局部软骨均出现明显的病理改变，主要表现为软骨表面受损部呈暗灰白色，粗糙、失去 原有光泽；切线层细胞肿大、变性、呈卵园形平行排列于表面，有少量坏死；移行层和深层 部分软骨细胞溶解坏死，基质纹理消失，呈着色不一的淡粉色，显示模型成功。实施例7一种用于骨关节炎造模的药物组合物，由木瓜蛋白酶、泊洛沙姆和PH 5. 7磷酸缓 冲液组成，按其重量体积比计浓度(g/100ml)为木瓜蛋白酶4.5%、泊洛沙姆30%、其余为 磷酸缓冲液。上述用于骨关节炎造模的药物组合物的制备方法，具体步骤为(1)按照每100mlPH5. 7的磷酸缓冲液中加入30g泊洛沙姆混勻；(2)继续加入4. 5g木瓜蛋白酶，搅拌均勻。上述用于骨关节炎造模的药物组合物的造模方法，具体步骤为(1)取上述药物组合物置4°C冰箱中预冷30分钟，取出；(2)注射器吸取步骤(1)中药物组合物0. 1ml，将其注入大鼠膝关节腔；(3)将注射后大鼠置于50°C温度环境下2小时。造模结果如图7所示，A为注射部位，B为正常膝关节软骨，结构完整，软骨表面光 滑，切线层软骨细胞呈梭形、平行排列于表面，移行层和深层软骨细胞呈圆形或卵圆形，柱 状排列，基质呈红色，钙化层可见少量细胞和蓝染的钙化基质，C为造模2小时后受损关节， 关节局部软骨均出现明显的病理改变，主要表现为软骨表面受损部呈暗灰白色，粗糙、失去 原有光泽；切线层细胞肿大、变性、呈卵园形平行排列于表面，有少量坏死；移行层和深层 部分软骨细胞溶解坏死，基质纹理消失，呈着色不一的淡粉色，显示模型成功。此外，参照实施例1所述继续对150只大鼠进行造模，成功率达到100%，且病理损 伤一致。上述参照实施例对该一种用于骨关节炎造模的药物组合物及其制备方法与造模 方法进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施 例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。
权利要求
1.一种用于骨关节炎造模的药物组合物，其特征在于由木瓜蛋白酶、泊洛沙姆和 PH5. 7磷酸缓冲液组成，按其重量体积比计浓度(g/100ml)为木瓜蛋白酶3_5%、泊洛沙姆 30-35%、其余为磷酸缓冲液。
2.根据权利要求1所述的用于骨关节炎造模的药物组合物，其特征在于其中按其重 量体积比计浓度(g/100ml)为木瓜蛋白酶4%、泊洛沙姆35%、其余为磷酸缓冲液。
3.权利要求1所述的用于骨关节炎造模的药物组合物的制备方法，其特征在于具体 步骤为(1)按照每100mlPH5.7的磷酸缓冲液中加入30_35g泊洛沙姆混勻；(2)继续加入3-5g木瓜蛋白酶，搅拌均勻。
4.权利要求1或2所述的用于骨关节炎造模的药物组合物的造模方法，其特征在于 具体步骤为(1)取上述药物组合物置3-5°C冰箱中预冷20-40分钟，取出；(2)注射器吸取步骤(1)中药物组合物0.05-0. 1ml，将其注入造模动物膝关节腔；(3)将造模动物置于50-55°C温度环境下2小时。
5.根据权利要求4所述的用于骨关节炎造模的药物组合物的造模方法，其特征在于 具体步骤为(1)取上述药物组合物置4°C冰箱中预冷30分钟，取出；(2)注射器吸取步骤(1)中药物组合物0.1ml，将其注入造模动物膝关节腔；(3)将待造模动物置于50°C温度环境下2小时。
6.根据权利要求4或5所述的用于骨关节炎造模的药物组合物的造模方法，其特征在 于所述造模动物为大鼠或兔。
全文摘要
本发明提供了一种用于骨关节炎造模的药物组合物及其制备方法与造模方法，所述药物组合物，由木瓜蛋白酶、泊洛沙姆和pH5.7磷酸缓冲液组成，按其重量体积比计浓度(g/100ml)为木瓜蛋白酶3-5％、泊洛沙姆30-35％、其余为磷酸缓冲液；所述用于骨关节炎造模的药物组合物，利用了泊洛沙姆控释与凝胶的双重特性，使注入关节的木瓜蛋白酶不具有流动性，随凝胶态的泊洛沙姆黏贴于软骨表面，并向软骨释放，直接致软骨损伤，获得骨关节炎模型；该方法简单易行，成模快，成功率高，适宜于治疗骨关节炎药物的药效学研究。
文档编号A61K9/06GK102058877SQ20101059015
公开日2011年5月18日 申请日期2010年12月16日 优先权日2010年12月16日
发明者崔元璐, 师咏梅, 柳占彪, 胡利民, 高秀梅 申请人:天津中医药大学