针对ErbB3的胞外结构域的抗体及其用途的制作方法

专利名称：：针对ErbB3的胞外结构域的抗体及其用途的制作方法针对ErbB3的胞外结构域的抗体及其用途
背景技术：
：多肽生长因子受体的ErbB/HER亚族包括表皮生长因子(EGF)受体(EGFR、ErbBl/HER1)、neu致癌基因产物(ErbB2/HER2)及最近确认的ErbB3/HER3和ErbB4/HER4受体蛋白质(参见，例如Hynes等人(1994)Biochim.Biophys.Acta.Rev.Cancer1198,165-184)。据推测，这些受体中的各种都由胞外结构域(细胞外配体结合结构域)、跨膜结构域、胞质蛋白酪氨酸激酶(PTK)结构域和C末端磷酸化结构域组成(参见，例如Kim等人，(1998)Biochem.J.334，189-195)。ErbB受体的胞外结构域的特征还在于被分为四个结构域(1-1V)。ErbB胞外结构域的I和III结构域参与配体结合(参见，例如Hynes等人(2005)NatureRev.Cancer5,341-354)这些受体的配体包括神经调节素(HRG)和P细胞素(BTC)。体外实验表明，与其它ErbB/HER家族成员相比，ErbB3受体(ErbB3)蛋白质的蛋白酪氨酸激酶活性显著降低，且这种降低部分地由于在ErbB3的预计细胞内催化结构域中发生的非保守氨基酸置换(参见，例如Guy等人(1994)Proc.Natl.AcadSc1.USA.91,8132-8136；Sierke等人(1997)Biochem.J.322,757-763)。但是，ErbB3蛋白质表现出在多种细胞环境中被磷酸化。例如，在过量表达该蛋白质的人乳腺癌细胞系的亚群中，ErbB3在酪氨酸残基上被组成型磷酸化(参见，例如Kraus等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sc1.USA.90，2900-2904;和Kim等人，同上；还参见Schaefer等人(2006)Neoplasia8(7)613-22和Schaefer等人CancerRes(2004)64(10):3395-405)。尽管人们一直在研究ErbB3在癌症中的作用(参见，例如Horst等人(2005)115，519-527；Xue等人(2006)CancerRes.66，1418-1426)，但是在很大程度上ErbB3作为临床干预的靶点仍未受到重视。目前的免疫治疗主要集中于抑制ErbB2的作用，且特别是ErbB2/ErbB3复合物的异二聚化(参见，例如Sliwkowski等人(1994)J.Biol.Chem.269(20)14661-14665(1994))。因此，本发明的目的在于提供有效抑制ErbB3信号传导的改进的免疫治疗并可用于治疗和诊断多种癌症。
发明内容在某些方面，本发明提供了一类与ErbB3受体相结合并抑制各种ErbB3功能的新型抗体(例如，单克隆抗体)。例如，此处所描述的抗体能够与ErbB3结合并抑制EGF样配体介导的受体磷酸化。如此处所描述的，EGF样配体包括EGF、TGF-a、^细胞素(betacellulin)、肝素结合性表皮生长因子、biregulin和双神经调节素,其与EGFR结合并诱导EGFR和ErbB3的二聚化。这种二聚化随之引起ErbB3的磷酸化，并通过该受体激活信号传导。因此，本发明的抗体可用于治疗和诊断与ErbB3介导的细胞信号传导相关的多种癌症。因此，在一个实施方案中，本发明提供了与ErbB3相结合并抑制EGF样配体介导的ErbB3磷酸化的抗体(包括其抗原结合部分)。在另一个实施方案中，抗体及其片段进一步具有下述一种或多种特性(i)抑制ErbB3配体介导的信号传导,包括通过ErbB3配体(例如神经调节素、表皮调节素、epigen和biregulin)与ErbB3的结合介导的信号传导；(ii)抑制表达ErbB3的细胞的增殖；(iii)降低细胞表面上的ErbB3水平(例如通过诱导ErbB3的内在化)的能力；(iv)抑制表达ErbB3的细胞的VEGF(血管内皮生长因子)分泌；(v)抑制表达ErbB3的细胞的迁移；(vi)抑制表达ErbB3的细胞的球状体生长；和(vii)与位于胞外结构域(细胞外结构域)结构域I(对应于成熟ErbB3(SEQIDNO:73)的氨基酸残基I至约190)上的表位相结合，例如与包含或跨过SEQIDNO73的残基1-183的任何部分的表位相结合，更具体地与包含或跨过SEQIDNO:73的残基93-104或92-129的表位相结合，甚至更具体地与包含SEQIDNO:73的残基92、93、99、101、102、104和129或SEQIDNO73的残基93、101、102和104的表位相结合。在优选实施方案中，抗体与包含或跨过SEQIDNO73的残基93-104或92-129的表位相结合，甚至更优选地与包含或跨过SEQID勵73的残基92、93、99、101、102、104和129或SEQIDNO:73残基93、101、102和104的表位相结合，其中附带条件为抗体不是(i)此处公开的Ab#6;(ii)包含分别如SEQIDNO:1和2所示的V1^P'序列的抗体;或(iii)包含分别如SEQIDNO:7、8和9所示的VHCDR1、CDR2和CDR3序列以及分别如SEQIDNO10、11和12所示的VlCDR1、CDR2和CDR3序列的抗体。在另一优选实施方案中，抗体与包含或跨过SEQIDNO:73的残基93-104或92-129的表位相结合，甚至更具体地与包含SEQIDNO:73的残基92、93、99、101、102、104和129或SEQIDNO:73的残基93、101、102和104的表位相结合，其中附带条件为抗体不是⑴此处公开的Ab#6；(ii)包含分别如SEQIDNO:1和2所示的Vh和Vl序列的抗体；(iii)包含分别如SEQIDNO:7、8和9所示的VfDRlXDR2和⑶R3序列以及分别如SEQIDNO10,11和12所示的VlCDR1、CDR2和CDR3序列的抗体；(iv)此处公开的Ab#3；(v)包含分别如SEQIDNO3和4所示的Vh和Vl序列的抗体；(vi)包含分别如SEQIDNO:13、14和15所示的VhCDRl、CDR2和CDR3序列以及分别如SEQIDNO:16、17和18所示的VlCDRl、CDR2和CDR3序列的抗体；(vii)此处公开的Ab#17；(viii)包含分别如SEQIDNO35和36所示的Vh和Vl序列的抗体；(ix)包含分别如SEQIDNO:39、40和41所示的VhCDRl、CDR2和CDR3序列以及分别如SEQIDNO:42、43和44所示的VlCDRUCDR2和CDR3序列的抗体；(X)此处公开的Ab#19；(xi)包含分别如SEQIDNO37和38所示的Vh和Vl序列的抗体；(xii)包含分别如SEQIDNO45,46和47所示的VhCDR1、CDR2和CDR3序列以及分别如SEQIDNO48,49和50所示的VLCDR1、CDR2和CDR3序列的抗体。通过表面等离子共振分析或细胞结合分析进行测量此处公开的优选的抗体及其抗原结合部分的Kd为50nM或更低。在进一步的实施方案中，本发明的特定的抗体及其抗原结合部分包含重链可变区(Vh)，该重链可变区包含与SEQIDNOUSEQIDNO:3、SEQIDNO:5、SEQIDNO:35或SEQIDNO:37所示的重链可变区氨基酸序列至少80%(例如85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)相同的氨基酸序列。本发明其它特定的抗体及其抗原结合部分包含轻链可变区(\),该轻链可变区包含与SEQIDN0:2、SEQIDNO:4、SEQIDNO:6、SEQIDNO:36或SEQIDNO:38所示的轻链可变区氨基酸序列至少80%(例如85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)相同的氨基酸序列。抗体还可以包含上述重链和轻链可变区两者。抗体或其抗原结合部分的重链和轻链可变区通常包含一个或多个互补性决定区(OTR)。它们包含一个或多个⑶R1、⑶R2和⑶R3区域。因此，本公开的其它特定的抗体及其抗原结合部分包含一个或多个选自包含SEQIDNO:7的重链可变区⑶R1、包含SEQIDNO8的重链可变区CDR2、包含SEQIDNO9的重链可变区CDR3、包含SEQIDNO10的轻链可变区⑶R1、包含SEQIDNO11的轻链可变区⑶R2、包含SEQIDNO12的轻链可变区⑶R3及其组合的⑶R序列。本公开的再其它的特定抗体及其抗原结合部分包含一个或多个选自包含SEQIDNO13的重链可变区CDR1、包含SEQIDNO14的重链可变区CDR2、包含SEQIDNO15的·重链可变区⑶R3、包含SEQIDNO16的轻链可变区⑶R1、包含SEQIDNO17的轻链可变区⑶R2、包含SEQIDNO18的轻链可变区⑶R3及其组合的⑶R序列。本公开的再其它的特定抗体及其抗原结合部分包含一个或多个选自包含SEQIDNO19的重链可变区CDR1、包含SEQIDNO20的重链可变区CDR2、包含SEQIDNO21的重链可变区CDR3、包含SEQIDNO22的轻链可变区CDR1、包含SEQIDNO23的轻链可变区⑶R2、包含SEQIDNO24的轻链可变区⑶R3及其组合的⑶R序列。本公开的再其它的特定抗体及其抗原结合部分包含一个或多个选自包含SEQIDNO39的重链可变区CDR1、包含SEQIDNO40的重链可变区CDR2、包含SEQIDNO41的重链可变区CDR3、包含SEQIDNO42的轻链可变区CDR1、包含SEQIDNO43的轻链可变区⑶R2、包含SEQIDNO44的轻链可变区CDR3及其组合的⑶R序列。本公开的再其它的特定抗体及其抗原结合部分包含一个或多个选自包含SEQIDNO45的重链可变区CDR1、包含SEQIDNO46的重链可变区CDR2、包含SEQIDNO47的重链可变区CDR3、包含SEQIDNO48的轻链可变区CDR1、包含SEQIDNO49的轻链可变区⑶R2、包含SEQIDNO50的轻链可变区⑶R3及其组合的⑶R序列。抗体及其抗原结合部分还可以包含一个或多个与上述任何⑶R或⑶R的组合至少80%(例如85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)相同的CDR。在一个实施方案中，抗体及其抗体部分完全来自人体(即包括人⑶R和框架序列)。本公开的特定的人抗体包括具有源自人VH3种系基因的重链可变区和/或源自人VL2种系基因的轻链可变区的抗体。本发明还包括与此处所描述的任何抗体或其部分所结合的表位相同或重叠的表位(例如位于ErbB3的胞外结构域的结构域I的表位)结合的抗体及其抗原结合部分，例如所述表位包含或跨过成熟ErbB3ErbB3(SEQIDNO:73)的氨基酸序列的任何残基1-183的表位，更优选地包含或跨过SEQIDNO73的残基93-104或92-129的表位，甚至更优选地包含SEQIDNO:73的残基92、93、99、101、102、104和129或SEQIDNO:73的残基93、101、102和104的表位)。本发明还包括与此处所描述的抗体具有相同表位结合活性的抗体(例如具有与Ab#6相同的序列或包含SEQIDNO73的残基93-104的结合抗原的抗体)。本发明还包含与人ErbB3的胞外结构域结合的抗体及其抗原结合部分，且其包含包含⑶R1、⑶R2和⑶R3序列的重链可变区；及包含⑶R1、⑶R2和⑶R3序列的轻链可变区，其中重链可变区CDRUCDR2和CDR3序列包含分别如SEQIDNO60或75(CDRl)、61(⑶R2)和62(⑶R3)所示的共有重链⑶R1、⑶R2和⑶R3序列，和轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3序列包含分别如SEQIDNO:66或77(CDRl)、67(⑶R2)和68或79(⑶R3)所示的共有轻链⑶R1、⑶R2和⑶R3序列，其中附带条件为抗体不是(i)此处公开的Ab#6；(ii)包含分别如SEQIDNO:1和2所示的Vh和\序列的抗体；或(iii)包含分别如SEQIDNO:7、8和9所示的VhCDRl、CDR2和CDR3序列以及分别如SEQIDNO10,11和12所示的VlCDR1、CDR2和CDR3序列的抗体。在优选实施方案中，分离的抗体或其抗原结合部分与包含SEQIDN0:73的残基92-129或93-104的人ErbB3的胞外结构域的结构域I内的表位结合。甚至更优选地,分离的抗体或其抗原结合部分与包含SEQIDNO73的残基92-129或93-104的人ErbB3的胞外结构域的结构域I内的表位结合且抑制表达ErbB3的癌细胞的增殖。优选地，癌细胞是MALME-3M黑素瘤细胞、AdrR(ADRr)卵巢腺癌细胞或ACHN肾癌细胞且相对于对照(匹配的未经处理的细胞)增殖降低了至少10%。在与人ErbB3的胞外结构域的结构域I结合的分离的抗体或其抗原结合部分的另一实施方案中，当选自SEQIDN0:73的残基93(天冬酰胺)、残基99(苯丙氨酸)、残基101(甲硫氨酸)、残基102(亮氨酸)和残基104(酪氨酸)的人ErbB3的胞外结构域的结构域I的任何一个氨基酸残基被丙氨酸置换，或SEQIDNO:73的残基92(酪氨酸)或129(酪氨酸)被苯丙氨酸置换以产生具有单个氨基酸置换的成熟ErbB3时，相较于抗体或其抗原结合部分与包含SEQIDNO:73(或其对应片段)的未改变的氨基酸序列的人ErbB3的结合，抗体或其抗原结合部分与成熟ErbB3(或其片段)的结合显著下降。优选地，结合的显著下降是结合的Kd值至少10倍的变化。本发明还包括与人ErbB3的胞外结构域的结构域I结合的抗体或其抗原结合部分，且其包含包含⑶R1、⑶R2和⑶R3序列的重链可变区；及包含⑶R1、⑶R2和⑶R3序列的轻链可变区，其中重链可变区互补位包含分别如SEQIDNO63或76(CDRl)、64(CDR2)和65(CDR3)所示的⑶R1、⑶R2和⑶R3序列，和轻链可变区互补位包含分别如SEQIDNO:69或78(CDR1)、70(CDR2)和71或80(⑶R3)所示的⑶RlXDR2和⑶R3序列，其中附带条件为抗体不是(i)此处公开的Ab#6；(ii)包含分别如SEQIDNO:1和2所示的Vh和Vl序列的抗体;或(iii)包含分别如SEQIDNO:7、8和9所示的VhCDRl、CDR2和CDR3序列以及分别如SEQIDNO:10、11和12所示的\⑶R1、⑶R2和⑶R3序列的抗体。本发明还包括与人ErbB3的胞外结构域的结构域I特异性结合的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分包含包含SEQIDNO:7或其保守氨基酸置换的重链可变区⑶Rl；包含SEQIDNO8或其保守氨基酸置换的重链可变区⑶R2；包含SEQIDNO9或其保守氨基酸置换的重链可变区⑶R3；包含SEQIDNO10或其保守氨基酸置换的轻链可变区⑶Rl；包含SEQIDNO11或其保守氨基酸置换的轻链可变区⑶R2;及包含SEQIDNO12或其保守氨基酸置换的轻链可变区⑶R3，其中抗体或其抗原结合部分与ErbB3的结合显示出通过表面等离子共振分析或细胞结合分析所测量的50nM或更高的Kd。本发明的抗体包括抗体以及其它具有抗体样性质的蛋白质支架(scaffold)的所有已知形式。例如，抗体可以是人抗体、人源化抗体、双特异性抗体、嵌合抗体或具有抗体样性质的蛋白质支架，例如，纤连蛋白或锚蛋白重复序列。抗体还可以是FatuFab'2、ScFv、SMIP、亲和体(affibody)、纳米抗体(nanobody)或域抗体(domainantibody)。抗体还可以具有下述任何的同种型IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgAl、IgA2、IgAsec、IgD和IgE。在又另一个实施方案中，本发明还提供了包含此处所描述的抗体或抗原结合部分的组合、并与可接受的载体和/或辅料一起配制的组合物。在特定的实施方案中，组合物包含两种或更多种与ErbB3上不同的表位结合的抗体或与不结合ErbB3的抗癌抗体组合的此处所描述的抗体。在再另一个实施方案中，本发明提供了编码此处所描述的抗体及其抗原结合部分的分离的核酸。在特定的实施方案中，该核酸编码重链可变区，其包含与SEQIDNO25,SEQIDNO27,SEQIDNO:29、SEQIDNO:35或SEQIDN0:37至少80%(例如85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)相同或在高严格条件下与SEQIDNO:25、SEQIDNO:27、SEQIDNO29,SEQIDNO:35或SEQIDNO:37杂交的核苷酸序列；或编码轻链可变区，其包含与SEQIDNO:26、SEQIDNO:28、SEQIDNO:30、SEQIDNO36或SEQIDNO38至少80%(例如85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%)相同或在高严格条件下与SEQIDNO26,SEQIDNO:28、SEQIDNO:30、SEQIDN0:36或SEQIDNO:38杂交的核苷酸序列；或这些重链和轻链可变区的组合。本发明进一步提供了表达和/或产生此处所描述的抗体及抗原结合部分的非人类转基因哺乳动物、杂交瘤和转基因植物。本发明还提供了包含一种或多种此处所描述的分离的抗体或其抗原结合部分及任选的用于治疗或诊断与ErbB3依赖性信号传导相关的疾病(例如癌症)的说明的试剂盒。此处公开的抗体及其抗原结合部分可被用于广泛的治疗和诊断应用中，特别是用于癌症应用中。因此，本发明的另一方面提供了通过施用足以抑制EGF样介导的ErbB3磷酸化的量的一种或多种此处所描述的抗体或其抗原结合部分来抑制受试者中EGF样配体介导的ErbB3磷酸化的方法。本发明进一步提供了通过施用足以治疗癌症的量的一种或多种此处所描述的抗体或其抗原结合部分来治疗受试者中多种癌症的方法，癌症包括但不局限于黑素瘤、乳腺癌、卵巢癌、肾癌、胃肠癌/结肠癌、肺癌、透明细胞肉瘤和前列腺癌。在一个实施方案中，癌症包括包含KRAS突变的细胞。示例性的KRAS突变是人KRAS基因的密码子12和密码子13中的任一个或两者。通常各自编码甘氨酸的密码子12和密码子13的突变(包括将野生型甘氨酸12或甘氨酸13变为甘氨酸、精氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸或缬氨酸)为促进肿瘤生成的活化KRAS突变，如在人KRAS基因的密码子15、20、61和146中的突变。在另一实施方案中，癌症包括包含PI3K(磷脂酰肌醇3-激酶)突变的细胞。示例性的PI3K突变为人PIK3CA基因中外显子9或外显子20中的任一个或两者中的活化突变。抗体或其抗原结合部分可以单独施用，也可以与其它治疗剂(例如抗癌剂，比如其它抗体、化学治疗剂和/或辐射)联合施用。媒介物在一个实施方案中，抗体或其抗原结合部分与第二试剂组合施用，第二试剂选自蛋白质合成抑制剂、生长抑素类似物、免疫治疗剂和酶抑制剂。在其它实施方案中，第二试剂选自靶向IGFlR的小分子、靶向EGFR的小分子、靶向ErbB2的小分子、靶向cMET的小分子、抗代谢物、烷化剂、拓扑异构酶抑制剂、微管靶向剂、激酶抑制剂、激素疗法、糖皮质激素、芳香酶抑制剂、mTOR抑制剂、化学治疗剂、蛋白激酶B抑制剂、磷脂酰肌醇3-激酶、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂和MEK抑制剂。组合疗法中用作第二试剂的示例性抗体包括抗-Her2抗体,例如曲妥珠单抗和抗-EGFR抗体,例如帕尼单抗(panitumumab)或西妥昔单抗(cetuximab)。组合疗法中用作第二试剂的某些优选的抗癌剂包括埃罗替尼、拉帕替尼、紫杉醇和顺钼。在又其它实施方案中，本发明提供了用于诊断和预测ErbB3相关疾病(例如癌症)的方法。在一个实施方案中，这是通过将本公开的抗体或抗原结合部分与来自受试者的细胞相接触(例如体外或体内)、并测量与细胞上ErbB3结合的水平实现的，其中异常高的ErbB3结合水平显示受试者患有与ErbB3相关的癌症。本发明的其它特征和优势将会在下述的具体说明和权利要求书中体现出来。附图简述图1A和IB为柱状图，描述了使用山羊抗人Alexa647第二抗体(GAHu-Alexa674)的各种抗ErbB3候选抗体与MALME-3M黑素瘤细胞上表达的ErbB3的结合。在这些实验中表示为“AM”的抗体以Fab片段的形式使用且“GAHu-Alexa674”表示单独用作对照的荧光染料偶联的第二抗体，而“未染色”表示在不存在第二抗体的情况下的对照。图2A-2D为曲线图，描述了抗体与ErbB3的结合，如各种抗ErbB3候选抗体的Kd值所示。图2A和2B为曲线图，分别描述了使用表面等离子共振(SPR)技术测量和式KD=kd/ka得到的Ab#6和Ab#3的Kd值。图2C和2D为曲线图，分别描述了通过细胞结合分析使用MALME-3M黑素瘤细胞测量和式Y=Bmax*X/KD+X得到的Ab#6和Ab#3的Kd值。图3为曲线图，描述了使用ELISA得到的抗ErbB3抗体(Ab#6)与ErbB3的结合特异性。EGFR细胞外结构域、牛血清白蛋白(BSA)和TGFa用作对照。图4为曲线图，描述了使用ELISA测量得到的抗ErbB3抗体(Ab#6)在体外降低MALME-3M黑素瘤细胞中的总ErbB3水平的能力。图5A和5B为曲线图，描述了使用FACS分析测量得到的抗ErbB3抗体(Ab#6)下调MALME-3M细胞上的ErbB3受体的能力，如以下实施例5所述。图5A显示了使用抗体的IgGl同种型的结果。图5B显示了使用抗体的IgG2同种型的结果。图6A-6D为曲线图，描述了使用FACS分析测量得到的抗体介导的ErbB3下调(Ab#6)的时间过程。图7显示了药效学研究的结果。柱状图描述了注射后24小时的结果，显示针对体内异种移植物中MALME3M黑素瘤细胞中的总ErbB3水平的抗ErbB3抗体。可以看出，数据显示Ab#6下调ErbB3的能力。图8为柱状图，描述了抗ErbB3抗体(Ab#6)在体内下调AdrR异种移植物中的ErbB3的能力。显示了AdrR异种移植物中的总ErbB3水平。图9为曲线图，描述了抗ErbB3抗体(Ab#6)在CellTiter-Glo分析中抑制MALME-3M细胞增殖的能力。图10为曲线图，描述了抗ErbB3抗体(Ab#6)抑制AdrR细胞的细胞增殖的能力。图11为曲线图，描述了抗ErbB3抗体(Ab#6)抑制ACHN细胞增殖的能力。图12为柱状图，描述了抗ErbB3抗体(Ab#6)在体内抑制AdrR异种移植物中ErbB3磷酸化的能力。图13A-13C为曲线图，描述了抗ErbB3抗体(Ab#6)抑制AdrR细胞中@细胞素、神经调节素和TGFa介导的ErbB3磷酸化的能力。图14A-14B为曲线图，描述了抗ErbB3抗体(Ab#6IgG2同种型)抑制卵巢肿瘤细胞系OVCAR5和OVCAR8中ErbB3磷酸化的能力。图15A-15C为曲线图，描述了3细胞素(BTC)结合ErbBl的能力。如图所示，3细胞素与ErbBl阴性MALME-3M细胞不结合(图15A)，而分别在IOnM(图15B)和200nM(图15C)的浓度下与ErbBl阳性AdrR细胞结合。曲线图还描述了西妥昔单抗对该结合的抑制。图16A-16D为曲线图，描述了抗ErbB3抗体(Ab#6IgG2同种型)抑制MALME-3M细胞(图16A和16B)及0VCAR8细胞(16C和16D)中神经调节素介导的信号传导的能力。图16A描述了Ab#6抑制MALME-3M细胞中神经调节素介导的ErbB3磷酸化的能力(IC5tl=1.5e-8)。图16B描述了Ab#6抑制MALME-3M细胞中AKT磷酸化的能力(IC50=1.le_8)。图16C描述了Ab#6抑制0VCAR8细胞中神经调节素介导的ErbB3磷酸化的能力(IC5tl=2.4e-8)。图16B描述了Ab#6抑制0VCAR8细胞中AKT磷酸化的能力(IC50=6.7e_8)。图17A-D为曲线图，描述了通过异种移植物的研究得到的抗ErbB3抗体(Ab#6)抑制(图17A)卵巢(AdrR细胞)、(图17B)前列腺(Dul45细胞)、(图17C)卵巢(0VCAR8细胞)和(图17D)胰腺(Colo-357细胞)肿瘤生长的能力。图18A和18B为曲线图，描述了使用FACS分析测量得到的Ab#6(图18A)和Ab#3的Fab(图18B)抑制神经调节素与MALME-3M细胞上的ErbB3结合的能力。图19A描述了表皮调节素与AdrR细胞的结合，且图19B描述了Ab#6而不是ERBITUX(西妥昔单抗)抑制表皮调节素与AdrR细胞结合的能力。图20为曲线图，描述了肝素结合性表皮生长因子(HB-EGF)与AdrR细胞结合的能力。图21A-21C显示了抗体(Ab#6,Ab#3,Ab#14、Ab#17和Ab#19)的重链和轻链可变区的氨基酸序列。图22A-22B显示了抗体(Ab#6、Ab#3和Ab#14)的重链和轻链可变区的核苷酸序列。图23显示了抗体(Ab#6、Ab#17和Ab#19)轻链可变区的氨基酸序列,其回复为相应的种系氨基酸序列。实现这种回复的氨基酸残基的改变处(与图21比较)添加了下划线。图24A和图24B为曲线图，显示了Ab#6抑制肿瘤细胞VEGF分泌的能力(参见实施例11)。图24C显示了Ab#6抑制VEGF分泌与抑制肿瘤细胞中pErbB3之间的关联。图25为曲线图，显示了Ab#6对细胞迁移的作用(参见实施例12)。对照OyM=单独的RPMI培养基，对照8iiM=RPMI培养基+8uMAb#6,FBSOmM=RPMI培养基+10%FBS,FBS8uM=RPMI培养基+10%FBS+8uMAb#6。图26A-图26C为曲线图，显示了(图26A)AdrR细胞中球状体生长的抑制、(图26B)AdrR中HRG诱导的球状体生长的抑制，和(图26C)Dul45细胞中HRG诱导的球状体生长的抑制。图27A和图27B为曲线图，显示了Ab#6对HRG(图27A)和BTC(图27B)与AdrR细胞的结合的作用。图28为曲线图，显示了Ab#6对AdrR细胞中HGF(肝细胞生长因子)诱导的ErbB3磷酸化的作用。确定HGF的IC5tl为2.439e-10。图29A和图29B显示了Ab#6对(图29A)pErbBl和pErbB3的磷酸化以及(图29B)HRG诱导的ErbB2/3复合体形成的作用。图30为曲线图，显示了单独的Ab#6、单独的埃罗替尼或Ab#6和埃罗替尼对裸鼠中ACHN移植瘤生长的作用。数据显示300Ug剂量Ab#6(单独施用时亚适量)和埃罗替尼的组合在27天后在统计学显著程度上协同地抑制肿瘤生长。图31为曲线图，显示了单独的Ab#6、单独的紫杉醇或Ab#6和紫杉醇对裸鼠中DU145移植瘤生长的作用。数据显示27天后300ug剂量Ab#6(单独施用时亚适量)和紫杉醇的组合在统计学显著程度上协同地抑制肿瘤生长。图32A为曲线图，显示了Ab#6单独治疗对KRAS突变A549肺癌细胞的多细胞肿瘤球状体生长的作用。用0、0.001、0.01、0.1或lilMAb#6处理细胞7天。X轴上的“_4”对应于“0”剂量。结果显示Ab#6剂量反应对KRAS突变肿瘤球状体生长的作用。图32B是在治疗的第I天和第7天一组未经IiiMAb#6治疗或经IiiMAb#6治疗的代表性A549球状体的照片。图32C是曲线图，显示了Ab#6单独治疗对裸鼠中KRAS突变A549皮下异种移植瘤生长的作用。在第22天停止给予Ab#6(600iig,每3天I次)剂量。图33A是曲线图，显示了Ab#6单独治疗、埃罗替尼单独治疗或用Ab#6与埃罗替尼组合治疗对裸鼠中KRAS突变A549皮下异种移植瘤生长的作用。图33B是曲线图，显示了Ab#6单独治疗、紫杉醇单独治疗或用Ab#6与紫杉醇组合治疗对裸鼠中KRAS突变A549皮下异种移植瘤生长的作用。图34A-34E显示了Ab#6和对照抗ErbB3抗体(SGPl)与表达野生型ErbB3的CHO细胞(图34A)或表达具有以下点突变D93A(图34B)、MlOlA(图34C)、L102A(图34D)或Y104A(图34E)之一的ErbB3的CHO细胞结合的FACS分析的结果。图35A为曲线图，显示了Ab#6单独治疗对小鼠中PI3K突变SK0V3移植瘤生长的作用。图35B为曲线图，显示了Ab#6单独治疗或与顺钼(⑶DP)组合治疗对小鼠中PI3K突变SK0V3移植瘤生长的作用。图36呈现了来自互补位映射实验的数据。显示了相较于Ab#6的相同突变体与蛋白A的结合，单个氨基酸突变(关于指定的突变的特征，参见实施例20、表2)对Ab#6突变体与ErbB3结合的作用。平分曲线图的对角线表示对ErbB3和蛋白A结合的作用的1:1对应。通过将对角线向I轴下移了0.33和0.66来定位创建另外的平行线以便于将突变分组成三个类别(对结合作用大、对结合作用小及对结合无作用)。该图显示了对标准化为野生型Ab#6的突变的结合的作用。Y轴上的值是野生型Ab#6与ErbB3的结合与Ab#6突变体与ErbB3结合的比率。<I的比率意味着与野生型Ab#6相比突变体丧失了与ErbB3的结合，而>I意味着突变体比野生型Ab#6显示出与ErbB3更强的结合。图37A和图37B为以下序列的示意图Ab#6野生型重链可变区(VH)OTR1XDR2和CDR3序列(分别为SEQIDNO:7、8和9)，共有VhCDR1、CDR2和CDR3序列(分别为图37A的SEQIDNO:60、61和62，及分别为图37B的SEQIDNO:75、61和62)，VhCDRl、CDR2和CDR3互补位序列(分别为图37A的SEQIDNO:63、64和65及图37B的SEQIDNO:76、64、65)，Ab#6野生型轻链可变区(Vl)CDRUCDR2和CDR3序列(分别为SEQIDNO:10、11和12)，共有VlCDR1、CDR2和CDR3序列(分别为图37A的SEQIDNO:66、67和68及图37B的SEQIDNO77,67和79)以及VlCDR1、CDR2和CDR3互补位序列(分别为图37A的SEQIDNO:69、70和71及图37B的SEQIDNO:78、70和80)。在这些图中，使用标准单字母氨基酸缩写并且通过破折号分隔表示氨基酸的单字母来表示序列中的连续残基，而通过一个或多个破折号分隔的两个或更多个邻近的表示氨基酸的单字母的任何组表示，这样分隔的分组的邻近氨基酸中的任一个可被置换为序列中该位置处的其它氨基酸中的任一个。例如，标记法“(Xaa)7-W-T/A/G/S-L-(Xaa)/’表示如下从氨基端到羧基端连接的序列7个非特异性氨基酸，接着是色氨酸，接着是(苏氨酸或丙氨酸或甘氨酸或丝氨酸)，接着是亮氨酸，接着是7个非特异性氨基酸。此处使用的“非特异性氨基酸”表示任何氨基酸可在命名为Xaa的每个位置处、甚至在若干这种位置处独立地出现。Xaa或命名为Xaa#(例如“(Xaa)/’)的任何组的重复不表示这些序列中一个位置处非特异性氨基酸的指定组与任何其它位置处非特异性氨基酸的指定组之间的任何对应。因此在序列“(Xaa),-W-T/A/G/S-L-(Xaa)7"的开头和结尾处的(Xaa)7的重复不表示每个(Xaa)7的序列之间的任何对应而是每个含有7个非特异性氨基酸。图38A-D显示了Ab#6(如所示，沿着X轴浓度降低)对AdrR细胞中配体诱导的ErbB3磷酸化(pErbB3水平；如所示，沿着Y轴浓度升高)的作用。在图38A中，配体是HRG，在图38B中，配体是BTC，在图38C中，配体是HGF，且在图38D中，配体是EGF。图39为FACS曲线图，显示了Ab#6与ErbB3的胞外结构域的结构域I结合。具体实施方案为了使本发明更容易理解，首先对一些术语进行了定义。其它定义在通篇详细描述中给出。1.定义术语1吐83”、“冊13”、1吐83受体”和“HER3受体”在此处可互换使用，是指人ErbB3蛋白质，如美国专利No.5480968和Plowman等人,Proc.Natl.AcadSc1.USA,874905-4909(1990)中所述;还参见Kani等人，Biochemistry44:15842-857(2005)，Cho和Leahy,Science297:1330-1333(2002)。SEQIDNO:73中显示了全长、成熟人ErbB3蛋白序列(无前导序列)。此序列对应于图4和美国专利No.5，480,968的SEQIDNO:4中显示的序列，所述序列减去由成熟蛋白裂解的19个氨基酸的前导序列。此处所使用的术语“EGF样配体”是指表皮生长因子受体(EGFR)的配体，包括表皮生长因子(EGF)和密切相关的蛋白质，例如转化生长因子-a(TGFa),^细胞素(BTC)Jf素结合性表皮生长因子(HB-EGF)、biregulin(BIR)和双神经调节素(AR)，它们与细胞表面的EGRF结合并刺激受体的内在蛋白质-酪氨酸激酶活性。通常，EGF样配体诱导形成EGFR与ErbB3的蛋白质复合体(例如参见Kim等人，(1998)BiochemJ.，334:189-195)，因此导致复合体中酪氨酸残基的磷酸化。此处公开的优选抗体及其抗原结合部分抑制EGF样配体介导的ErbB3磷酸化，并在某些实施方案中，显示出一种或多种下述附加性质(i)抑制神经调节素、表皮调节素、epigen和biregulin中的一种或多种介导的通过ErbB3的信号传导；(ii)抑制表达ErbB3的细胞的增殖；(iii)降低细胞表面ErbB3水平的能力；(iv)抑制表达ErbB3的细胞的VEGF分泌；(V)抑制表达ErbB3的细胞的迁移；(vi)抑制表达ErbB3的细胞的球状体生长；和/或(vii)与位于ErbB3的胞外结构域的结构域I上的表位特异性结合，例如与包含或跨过成熟ErbB3(SEQIDNO:73)氨基酸序列的残基1_183的表位结合，更优选地与包含或跨过或含有或含或包括SEQIDNO73的残基92-129或93-104的表位结合，甚至更优选地与包含或跨过或含有或含或包括SEQIDNO:73的残基92、93、101、102和104和129或残基93、101、102和104的表位结合。一种这样的抗体Ab#6作为MM-121目前正在进行I期临床试验。此处所使用的术语“抑制”是指生物活性的任何统计学显著的降低，包括活性的完全阻断。例如，“抑制”可以指生物活性降低大约10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%。因此，此处所使用的短语“EGF样配体介导的ErbB3磷酸化的抑制”是指相对于未处理(对照)细胞中的磷酸化而言，抗体或抗原结合部分统计学显著地降低EGF样配体诱导的ErbB3磷酸化的能力。表达ErbB3的细胞可以为天然发生的细胞或细胞系，或者可以通过向宿主细胞引入编码ErbB3的核苷酸进行重组制造。在一个实施方案中，抗体或其抗原结合部分抑制EGF样配体介导的ErbB3磷酸化至少为10%、或至少为20%、或至少为30%、或至少为40%、或至少为50%、或至少为60%、或至少为70%、或至少为80%、或至少为90%或约100%，这是通过例如Kim等人，(1998)BiochemJ.，334:189-195以及下文的实施例中描述的蛋白质印迹法及随后使用抗磷酸酪氨酸抗体进行探测而确定的。此处所使用的短语“神经调节素、表皮调节素、epigen和biregulin介导的通过ErbB3的信号传导的抑制”是指相对于不存在抗体(对照)的信号传导而言，抗体或其抗原结合部分统计学显著地降低由ErbB3配体(例如神经调节素、表皮调节素、epigen和biregulin)介导的通过ErbB3的信号传导的能力。此处的ErbB3_配体也称作“神经调节素样配体”。这意味着在抗体或其抗原结合部分存在的情况下，相对于对照(没有抗体)而言，在表达ErbB3的细胞中由神经调节素、表皮调节素、epigen和biregulin中的一种或多种介导的信号统计学显著地降低。可以通过分析ErbB3底物和/或存在于涉及ErbB3的细胞级联(cascade)中的蛋白质的水平或活性来测量ErbB3_配体介导的信号。在一个实施方案中，相对于不存在抗体或其抗原结合部分时(对照)的水平或活性而言，抗体或其抗原结合部分降低ErbB3底物和/或在涉及ErbB3的细胞级联中的蛋白质的水平或活性至少为10%、或至少为20%、或至少为30%、或至少为40%、或至少为50%、或至少为60%、或至少为70%、或至少为80%、或至少为90%或100%。这样的ErbB3-配体介导的信号传导可以使用本领域公认的技术进行测量，这些技术使用用于这些蛋白质的激酶分析(参见，例如Horst等人，同上;Sudo等人(2000)MethodsEnzymol,322:388-92;和Morgan等人(1990)Eur.J.Biochem.，191:761-767)测量ErbB3的底物(例如SHC或PI3K)或在涉及ErbB3的细胞级联中的蛋白质(例如AKT途径-AKT是指一组丝氨酸/苏氨酸激酶，也称为蛋白激酶B或PKB)的水平或活性。在特定的实施方案中，抗体或其抗原结合部分通过抑制ErbB3_配体(例如神经调节素、表皮调节素、epigen或biregulin中的一种或多种)与ErbB3的结合抑制ErbB3-配体(例如神经调节素、表皮调节素、epigen或biregulin)介导的通过ErbB3的信号传导。一些配体(例如biregulin,—种人工嵌合配体Barbacci等人，JBiolChem1995270(16)9585-9)既作为EGF样配体(即与EGFR/ErbBl结合)也作为ErbB3样配体(即与ErbB3结合)起作用。此处所使用的短语“神经调节素、表皮调节素、epigen和biregulin与ErbB3结合的抑制”是指相对于不存在抗体(对照)的结合而言，抗体或抗原结合部分统计学显著地降低ErbB3配体(例如神经调节素、表皮调节素、epigen或biregulin中的一种或多种)与ErbB3结合的能力。这意味着在不存在抗体或其抗原结合部分的情况下，相对于对照(没有抗体)而言，与ErbB3结合的ErbB3-配体(例如神经调节素、表皮调节素、印igen或biregulin)的量统计学显著地降低。在存在本公开的抗体或其抗原结合部分的情况下，相对于不存在抗体或其抗原结合部分(对照)时的量而言，与ErbB3相结合的ErbB3配体的量可以降低至少10%、或至少20%、或至少30%、或至少40%、或至少50%、或至少60%、或至少70%、或至少80%、或至少90%或100%。ErbB3-配体结合的降低可以使用本领域公认的技术进行测量，这些技术测量存在或不存在(对照)抗体或其抗原结合部分的情况下标记的ErbB3-配体(例如放射性标记的神经调节素、表皮调节素、epigen或biregulin)与表达ErbB3的细胞结合的水平。此处所使用的短语“抑制表达ErbB3的细胞的增殖”是指相对于不存在抗体时的增殖而言，抗体或其抗原结合部分统计学显著地降低表达ErbB3的细胞的增殖的能力。在一个实施方案中，相对于不存在抗体或其抗原结合部分时(对照)所测量到的增殖而言，当细胞与本公开的抗体或其抗原结合部分接触时，表达ErbB3的细胞(例如癌细胞)的增殖可以降低至少10%、或至少20%、或至少30%、或至少40%、或至少50%、或至少60%、或至少70%、或至少80%、或至少90%或100%。细胞增殖可以使用本领域公认的技术进行分析，这些技术测量细胞分裂的速率、细胞群体中发生细胞分裂的比例和/或在细胞群体中由于终末分化或细胞死亡而造成的细胞损失率(例如使用CellTiter-Glo分析或胸苷掺入法)。此处所使用的短语“降低细胞表面ErbB3水平的能力”是指相对于未处理(对照)细胞而言，抗体或其抗原结合部分统计学显著地降低在与抗体接触的细胞的表面上发现的ErbB3量的能力。例如，细胞表面ErbB3水平的降低有可能是由于ErbB3内在化的增加(或ErbB3内吞作用的提高)。在一个实施方案中，相对于不存在抗体或其抗原结合部分时(对照)的细胞表面表达或内在化而言，抗体或其抗原结合部分降低细胞表面ErbB3的表达至少10%、或至少20%、或至少30%、或至少40%、或至少50%、或至少60%、或至少70%、或至少80%、或至少90%或100%，和/或增加ErbB3受体的内在化至少10%、或至少20%、或至少30%、或至少40%、或至少50%、或至少60%、或至少70%、或至少80%、或至少90%或100%。在存在或不存在抗体或其抗原结合部分时细胞表面的ErbB3水平和/或ErbB3受体的内在化可以使用本领域公认的技术(例如Horst等人(同上)和此处的实施例中描述的技术)很容易地进行测量。此处所使用的短语“表达ErbB3的细胞的VEGF分泌的抑制”是指相对于不存在抗体时的VEGF分泌而言，抗体或其抗原结合部分统计学显著地降低表达ErbB3的细胞的VEGF分泌的能力。在一个实施方案中，相对于在不存在抗体或其抗原结合部分时(对照)测量得到的VEGF分泌而言，当表达ErbB3的细胞(例如癌细胞)与本公开的抗体或其抗原结合部分接触时细胞的VEGF分泌可以降低至少10%、或至少20%、或至少30%、或至少40%、或至少50%、或至少60%、或至少70%、或至少80%、或至少90%或100%。VEGF分泌可以使用本领域公认的技术(例如此处所描述的那些技术)进行分析。此处所使用的短语“表达ErbB3的细胞的迁移的抑制”是指相对于不存在抗体时的细胞迁移而言，抗体或其抗原结合部分统计学显著地降低表达ErbB3的细胞的迁移的能力。在一个实施方案中，相对于不存在抗体或其抗原结合部分时(对照)所测量得到的细胞迁移而言，当表达ErbB3的细胞(例如癌细胞)与本公开的抗体或其抗原结合部分接触时细胞的迁移可以降低至少10%、或至少20%、或至少30%、或至少40%、或至少50%、或至少60%、或至少70%、或至少80%、或至少90%或100%。细胞迁移可以使用本领域公认的技术(例如此处所描述的技术)进行分析。此处所使用的短语“表达ErbB3的细胞的球状体(spheroid)生长的抑制”是指相对于不存在抗体时的细胞迁移而言，抗体或其抗原结合部分统计学显著地降低表达ErbB3的细胞的迁移的能力。在一个实施方案中，相对于不存在抗体或其抗原结合部分时(对照)所测量得到的细胞迁移，当表达ErbB3的细胞(例如癌细胞)与本公开的抗体或其抗原结合部分相接触时细胞的迁移可以降低至少10%、或至少20%、或至少30%、或至少40%、或至少50%、或至少60%、或至少70%、或至少80%、或至少90%或100%。细胞迁移可以使用本领域公认的技术(例如此处所描述的技术)进行分析。此处可互换使用的术语“抗体”或“免疫球蛋白”包括完整的抗体及其任何抗原结合片段(即“抗原结合部分”)或单链。“典型的抗体”包含由二硫键相互连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链。各重链由重链可变区(此处简称为Vh)和重链恒定区组成。重链恒定区由三个结构域CH1、CH2和CH3组成。各轻链由轻链可变区(此处简称为\)和轻链恒定区组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。V1^P'区可以进一步细分为高变区(称为互补性决定区(CDR))，夹杂着更加保守区域的区域(称为框架区(FR))。各Vh和'由三个CDR和四个FR构成，其从氨基端至羧基端的排列顺序为FR1、CDRl、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区包含与抗原相互作用的结合域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子(包括各种免疫系统细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一成分(Clq))的结合。本公开的示例性的抗体包括抗体#1、3、6和14及其抗原结合部分。此处所使用的术语抗体的“抗原结合部分”(或简称为“抗体部分”)是指保持与抗原(例如ErbB3)特异性结合的能力的一个或多个抗体片段。已经显示抗体的抗原结合功能可以由全长抗体的片段完成。术语抗体的“抗原结合部分”涵盖的结合片段的例子包括⑴Fab片段，一种由\、Vh、CL和CHl结构域构成的单价片段；(ii)F(ab’)2片段，一种包含在铰链区由二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由V1^PCHl结构域构成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的\和Vh结构域构成的Fv片段；(V)包含Vh和\结构域的dAb；(vi)由Vh结构域构成的dAb片段(Ward等人(1989)Nature341,544-546)；(vii)由Vh或Vl结构域构成的dAb;和(viii)分离的互补性决定区(CDR)或(ix)两个或更多个分离的CDR的组合，其任选地由合成的连接体接合。此外，尽管Fv片段的两个结构域('和Vh)由独立的基因编码，它们可使用重组方法通过合成的连接体接合，该合成连接体使它们能够成为单个蛋白链，其中'和VHg配对以形成单价分子(也被称为单链Fv(ScFv);参见，例如Bird等人(1988)Science242，423-426;和Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sc1.USA85，5879-5883。这样的单链抗体还意图包含在术语抗体的“抗原结合部分”之内。使用本
技术领域：
技术人员已知的常规方法来获得这些抗体片段，并且以筛选完整抗体的相同方式来对片段的效用进行筛选。可以通过重组DNA技术或完整免疫球蛋白的酶或化学切割来产生抗原结合部分。此处所使用的术语“单克隆抗体”是指从基本同源的抗体群获得的抗体或制备成基本同源的抗体群，即组成该抗体群的各个抗体除了少量存在的可能的天然发生的突变以外都是相同的。单克隆抗体是高度特异性的，针对单个抗原位点。此外，与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的常规(多克隆)抗体制剂相反，各单克隆抗体通常针对抗原上的单一决定簇。可以使用任何本领域公认的技术和那些在此描述的技术(例如，如Kohler等人(1975)Nature,256:495中描述的杂交瘤方法、如Lonberg等人(1994)Nature368(6474):856-859中描述的转基因动物、重组DNA方法(参见，例如U.S.Pat.No.4，816，567)制备单克隆抗体或者使用例如Clackson等人，Nature，352:624-628(1991)和Marks等人J.Mol.Biol，222:581-597(1991)中描述的技术利用噬菌体抗体库制备单克隆抗体。单克隆抗体包括嵌合抗体、人抗体和人源化抗体，且可以是天然发生的或重组产生的。术语“重组抗体”是指通过重组方式制备、表达、创建或分离的抗体，例如(a)从免疫球蛋白基因(例如人免疫球蛋白基因)的转基因或转染色体的动物(例如小鼠)中或从由该动物制备的杂交瘤中分离的抗体、(b)从进行转化以表达所述抗体的宿主细胞(例如从转染瘤)分离的抗体、(C)使用噬菌体展示从重组、组合抗体库(例如包含人抗体序列)分离的抗体，和⑷使用涉及将免疫球蛋白基因序列(例如人免疫球蛋白基因)与其它DNA序列进行剪接的任何其它方式制备、表达、创建或分离的抗体。这样的重组抗体可以具有源自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区。但是，在特定实施方案中，可以对这样的重组人抗体进行体外诱变，并因此重组抗体的％和'区的氨基酸序列是可能并非天然存在于体内的人抗体种系集合(repertoire)中的序列，尽管它们源自人种系Vh和'序列并与其相关。术语“嵌合免疫球蛋白”或“嵌合抗体”是指其可变区源自第一物种而其恒定区源自第二物种的免疫球蛋白或抗体。可以例如通过基因工程由属于不同物种的免疫球蛋白基因片段构建嵌合免疫球蛋白或抗体。此处所使用的术语“人抗体”意图包括具有可变区的抗体，其中框架和CDR区均源自人种系的免疫球蛋白序列，例如如Kabat等人(参见Kabat等人(1991)SequencesofproteinsofImmunologicalInterest，FifthEdition,U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIHPublicationNo.91-3242)所描述的。此外，如果抗体包含恒定区，该恒定区也源自人种系免疫球蛋白序列。人抗体可以包含非由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)。但是，此处所使用的术语“人抗体”并不意图包括其中源自另一哺乳动物物种(例如小鼠)的CDR序列嫁接到人框架序列上的抗体。人抗体可以包含至少一个或多个由氨基酸残基(例如非由人种系免疫球蛋白序列编码的活性增强氨基酸残基)置换的氨基酸。通常，人抗体可以包含最多达20个由不属于人种系免疫球蛋白序列的部分的氨基酸残基置换的位置。在特定的实施方案中，这些置换在CDR区域中，如下面所详细描述的。术语“人源化免疫球蛋白”或“人源化抗体”是指包含至少一个人源化免疫球蛋白或抗体链(即至少一条人源化轻链或重链)的免疫球蛋白或抗体。术语“人源化免疫球蛋白链”或“人源化抗体链”(即“人源化免疫球蛋白轻链”或“人源化免疫球蛋白重链”)是指具有包含基本上来自人免疫球蛋白或抗体的可变框架区和基本上源自非人免疫球蛋白或抗体的互补性决定区(⑶幻(例如，至少一个⑶R、优选两个⑶R，更优选三个⑶幻)和进一步包含恒定区(例如在轻链的情况下，包含至少一个恒定区或其部分，和在重链的情况下，优选包含三个恒定区)的可变区的免疫球蛋白或抗体链(即，分别为轻或重链)。术语“人源化可变区”(例如，“人源化轻链可变区”或“人源化重链可变区”)是指包括基本源自人免疫球蛋白或抗体的可变框架区和基本源自非人免疫球蛋白或抗体的互补性决定区(CDR)的可变区。“双特异性”或“双功能性抗体”是具有两种不同的重/轻链对和两种不同的结合位点的人工杂交抗体。可以通过多种方法(包括杂交瘤的融合或Fab’片段的连接)来制备双特异性抗体。参见，例如Songsivilai&Lachmann,(1990)Clin.Exp.1mmunol.79,315-321；Kostelny等人(1992)J.1mmunol.148，1547-1553。在特定的实施方案中，本发明的双特异性抗体包含ErbB3和IGF1-R(即胰岛素样生长因子1-受体)的结合位点。在另一个实施方案中，本发明的双特异性抗体包含ErbB3和C-MET的结合位点。在其它实施方案中，双特异性抗体包含ErbB3的结合位点及ErbB2、ERbB3、ErbB4、EGFR、LewisY、MUC-l、EpCAM、CA125、前列腺特异性膜抗原、PDGFR-a、PDGFR-B,C-KIT或任何FGF受体的结合位点。此处所使用的“异种抗体”相对于产生这种抗体的转基因非人生物体或植物进行定义。此处所使用的“分离的抗体”是指基本上不含具有不同的抗原特异性的其它抗体的抗体(例如，特异性地与ErbB3相结合的分离的抗体基本上不含与ErbB3以外的其它抗原特异性地结合的抗体)。此外，分离的抗体通常基本上不含其它的细胞物质和/或蛋白质。在本发明的一个实施方案中，具有不同的ErbB3结合特异性的“分离的”抗体的组合是在良好定义的组合物中进行组合。此处所使用的“同种型”是指由重链恒定区基因编码的抗体类(例如IgM或IgGl)。在一个实施方案中，抗体或其抗原结合部分是选自IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgAl、IgA2、IgAsec、IgD或IgE抗体同种型的同种型。在某些实施方案中，抗体为IgGl同种型。在其它实施方案中，抗体为IgG2同种型。此处所使用的“同种型转换”是指抗体的类型或同种型从一个Ig类变为其它Ig类中的一个的现象。此处所使用的“非转换同种型”是指当未发生同种型转换时产生的重链同种型类型；编码非转换同种型的CH基因通常为紧挨着功能性重排的VDJ基因下游的第一个CH基因。同种型转换被分为典型的或非典型的同种型转换。典型的同种型转换通过编码抗体的基因中涉及至少一个转换序列区的重组事件而发生。非典型的同种型转换可以通过例如人Ou和人Eu同源重组(S-相关缺失)发生。替代的非典型转换机制(例如，特别是转基因间的和/或染色体间的重组)可以发生并完成同种型转换。此处所使用的术语“转换序列”是指负责转换重组的那些DNA序列。“转换供体”序列(典型地为U转换区)为在转换重组过程中被删除的构建体(construct)区的5‘端(即上游)。“转换受体”区是在将删除的构建区和置换恒定区(例如，Y、e等)之间。由于没有总是发生重组的特定位点，因此最终的基因序列通常不能从构建体进行预测。“抗原”为抗体或其抗原结合部分结合的实体(例如，蛋白质的实体或肽)。在此处公开的各种不同的实施方案中，抗原为ErbB3或ErbB3样分子。在本发明的特定的实施方案中，抗原为人ErbB3。术语“表位”或“抗原决定簇”是指抗原上被免疫球蛋白或抗体特异性结合的位点。表位可以由相邻氨基酸形成或通过蛋白质的三级折叠而并置的不相邻氨基酸形成。由相邻的氨基酸形成的表位在接触变性溶剂时通常仍会保留，而由三级折叠形成的表位通常在经变性溶剂处理时会丧失。表位通常包括处于独特的空间构型的至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸。确定表位空间构型的方法包括本领域的技术和此处所描述的技术，例如，X射线晶体学和二维核磁共振。参见,例如EpitopesMappingProtocolsinMethodsinMolecularBiology,Vol.66,G.E.Morris,Ed.(1996)。本发明还包括结合与针对本公开的氨基酸序列的抗体具有相同或重叠的表位的抗体(即竞争结合ErbB3的抗体)或结合与此处所描述的抗体所结合的表位重叠的表位(即位于ErbB3的胞外结构域,优选地位于ErbB3的胞外结构域的结构域I)的抗体。可以使用常规技术(例如免疫分析，比如表明一种抗体阻断另一种抗体与靶抗原结合的能力，即竞争结合分析)来确认识别相同的表位的抗体。竞争结合在其中所测试的免疫球蛋白抑制基准抗体对共同抗原(例如ErbB3)的特异性结合的分析中确定。已知存在许多种竞争结合分析，例如固相直接或间接放射免疫分析(RIA)、固相直接或间接酶免疫分析(EIA)、夹心竞争分析(参见Stahli等人，(1983)MethodsinEnzymology9:242)、固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(参见Kirkland等人(1986)J.1mmunol.137:3614)、固相直接标记分析、固相直接标记夹心分析(参见Harlow和Lane,(1988)AntibodiesALaboratoryManual,ColdSpringHarborPress)、使用1-125标记物的固相直接标记RIA(参见Morel等人(1988)Mol.1mmunol.25(1):7)、固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(Cheung等人(1990)Virology176:546)和直接标记RIA(Moldenhauer等人,(1990)Scand.J.Tmmuno1.3277)。通常，这样的分析涉及使用与携带未标记的测试免疫球蛋白和标记的基准免疫球蛋白中的任一种的固相表面或细胞相结合的纯化抗原(例如ErbB3)。通过确定在存在测试免疫球蛋白的情况下与固相表面或细胞相结合的标记物的量来测量竞争抑制。通常测试免疫球蛋白过量存在。通常，当竞争抗体过量存在时，其会抑制基准抗体与共同抗原的特异性结合至少50-55%、55-60%、60-65%、65-70%、70-75%或更多。术语“互补位”是指抗体的一部分或氨基酸残基，所述抗体似乎直接参与识别和接触与抗体特异性结合的抗原上的表位。互补位通常包含一些但不是所有的重链和轻链互补决定区(CDR)中的氨基酸残基。互补位可包含所有Vh和'CDR或仅一些CDR(例如，某些CDR可不参与结合抗原)中的氨基酸残基。例如可通过抗体(具体地CDR)中氨基酸残基的扫描诱变(例如丙氨酸扫描诱变)来定义特定抗原的互补位，认为所述互补位表面暴露(例如，通过晶体学建模确定)且可能参与抗原结合。然后评估突变体与抗原的结合可确定是否突变的氨基酸位置参与抗原结合且因而形成抗体的互补位的一部分。在实施例20中进一步详细描述了确定抗体互补位的方法。在优选实施方案中，抗ErbB3抗体包含重链互补位，所述重链互补位包含分别如SEQIDNO63或76(CDRl)、64(CDR2)和65(CDR3)所示的CDR1、CDR2和CDR3序列，其中附带条件为抗体不是(i)此处公开的Ab#6；(ii)包含分别如SEQIDNO:1和2所示的Vl序列的抗体;或Qii)包含分别如SEQIDNO:7、8和9所示的VhCDR1、CDR2和CDR3序列以及分别如SEQIDNO10,11和12所示的VlCDR1、CDR2和CDR3序列的抗体。在另一优选实施方案中，抗ErbB3抗体包含轻链互补位，所述轻链互补位包含分别如SEQIDNO69或78(CDRl)、70(CDR2)和71或80(CDR3)所示的CDR1、CDR2和CDR3序列，其中附带条件为抗体不是⑴此处公开的Ab#6；(ii)包含分别如SEQIDNO:1和2所示的％和'序列的抗体;或(iii)包含分别如SEQIDNO:7、8和9所示的VhCDR1、CDR2和CDR3序列以及分别如SEQIDNO:10、11和12所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的抗体。在另一实施方案中，抗ErbB3抗体包含重链互补位和轻链互补位，所述重链互补位包含分别如SEQIDNO63,64和65所示的CDR1、CDR2和CDR3序列，所述轻链互补位包含分别如SEQIDNO69,70和71所示的CDR1、CDR2和CDR3序列，其中附带条件为抗体不是⑴此处公开的Ab#6；(ii)包含分别如SEQIDNO:1和2所示的Vh和'序列的抗体；或(iii)包含分别如SEQIDNO:7、8和9所示的VhCDRUCDR2和CDR3序列以及分别如SEQIDNO10,11和12所示的VlCDR1、CDR2和CDR3序列的抗体。在另一实施方案中，抗ErbB3抗体包含重链互补位和轻链互补位，所述重链互补位包含分别如SEQIDNO76,64和65所示的CDR1、CDR2和CDR3序列，所述轻链互补位包含分别如SEQIDNO78,70和80所示的CDR1、CDR2和CDR3序列，其中附带条件为抗体不是⑴此处公开的Ab#6；(ii)包含分别如SEQIDNO:1和2所示的Vh和'序列的抗体；或(iii)包含分别如SEQIDNO:7、8和9所示的VhCDRUCDR2和CDR3序列以及分别如SEQIDNO10,11和12所示的VlCDRUCDR2和CDR3序列的抗体。此处关于互补决定区(CDR)使用的术语“共有序列”是指基于对于CDR中的氨基酸残基可适当修饰而不会损害抗原结合的信息所定义的CDR的复合或通用的序列。因此，在CDR的“共有序列”中，某些氨基酸的位置被该位置的一种或多种可能的氨基酸残基占用。例如，CDR中，如果发现抗原结合不受在特定位置出现酪氨酸或苯丙氨酸的影响，那么共有序列中的特定位置可以是酪氨酸或苯丙氨酸(T/F)。例如可通过抗体⑶R中氨基酸残基的扫描诱变(丙氨酸扫描诱变)定义CDR的共有序列，接着通过评估突变体与抗原的结合来确定是否突变的氨基酸位置影响抗原结合。实施例20中进一步详细描述了确定抗体CDR共有序列的方法。在优选实施方案中，抗ErbB3抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含分别如SEQIDNO60或75(CDRl)、61(CDR2)和62(CDR3)所示的共有重链CDRl、CDR2和CDR3序列，其中附带条件为抗体不是⑴此处公开的Ab#6；(ii)包含分别如SEQIDNO:1和2所示的Vh和Vl序列的抗体；或(iii)包含分别如SEQIDNO:7、8和9所示的VhCDRUCDR2和CDR3序列以及分别如SEQIDNO:10、11和12所示的CDR1、CDR2和CDR3序列的抗体。在另一优选实施方案中，抗ErbB3抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含分别如SEQIDNO66或77(CDRl)、67(CDR2)和68或79(CDR3)所示的共有轻链CDRl、CDR2和⑶R3序列，其中附带条件为抗体不是(i)此处公开的Ab#6；(ii)包含分别如SEQIDNO:1和2所示的Vh和Vl序列的抗体;或(iii)包含分别如SEQIDNO:7、8和9所示的VhCDRl、CDR2和CDR3序列以及分别如SEQIDNO:10、11和12所示的VlCDRl、CDR2和CDR3序列的抗体。在另一实施方案中，抗ErbB3抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含分别如SEQIDNO:60、61和62所示的共有重链CDR1、CDR2和CDR3序列，所述轻链可变区包含分别如SEQIDNO66,67和68所示的共有轻链CDR1、CDR2和CDR3序列，其中附带条件为抗体不是⑴此处公开的Ab#6；(ii)包含分别如SEQIDNO:1和2所示的Vh和Vl序列的抗体;或(iii)包含分别如SEQIDNO:7、8和9所示的VhCDRl、CDR2和CDR3序列以及分别如SEQIDNO10,11和12所示的VlCDR1、CDR2和CDR3序列的抗体。在另一实施方案中，抗ErbB3抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含分别如SEQIDNO:75、61和62所示的共有重链⑶R1、⑶R2和⑶R3序列，所述轻链可变区包含分别如SEQIDNO77,67和79所示的共有轻链⑶R1、⑶R2和⑶R3序列，其中附带条件为抗体不是(i)此处公开的Ab#6；(ii)包含分别如SEQIDNO:1和2所示的Vh和Vl序列的抗体;或(iii)包含分别如SEQIDNO:7、8和9所示的VhCDRl、CDR2和CDR3序列以及分别如SEQIDNO10,11和12所示的VlCDR1、CDR2和CDR3序列的抗体。此处所使用的术语“特异性的结合”、“特异性结合”、“选择性的结合”和“选择性结合”是指抗体或其抗原结合部分对特定的抗原或表位表现出可感知的亲和力，且通常不表现出与其它抗原或表位的显著的交叉反应性。“可感知的”或优选的结合包括亲和力为至少IO6UO7UO8UO9M-1或IOkT1的结合。大于IO7M'优选为104的亲和力为更优选的。本发明的范围还包括此处所列的这些值之间的值，优选的结合亲和力可以表示为亲和力的范围，例如IO6至IOkiM'优选为IO7至IOkiM'更优选为IO8至IOkiM'“不表现出显著的交叉反应性”的抗体为不会与不希望的实体(例如不希望的蛋白质实体)可感知地结合的抗体。例如，在一个实施方案中，与ErbB3特异性结合的抗体或其抗原结合部分可感知地与该ErbB3分子相结合,而不会显著地与其它ErbB分子及非ErbB蛋白质或肽反应。可根据任何本领域公认的确定特异性或选择性结合的方式来确定这样的结合，包括，例如根据斯卡查德分析和/或竞争结合分析确定特异性或选择性结合。此处所使用的术语“Kd”是指特定的抗体-抗原相互作用的解离平衡常数或抗体对于抗原的亲和力，优选地使用表面等离子共振分析(使用重组ErbB3作为分析物且抗体作为配体在BIAC0RE3000仪器(GEHealthcare)中测定)或细胞结合分析。以下实施例3中详述了这两种分析。在一个实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合部分与抗原(例如ErbB3)相结合的亲和力(Kd)为50nM或更好(即，更小)(例如40nM或30nM或20nM或IOnM或更小)。在特定的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合部分与ErbB3相结合的亲和力(Kd)为8nM或更好(例如7nM、6nM、5nM、4nM、2nM、l.5nM、l.4nM、l.3nM、lnM或更小)。在其它实施方案中，抗体或其抗原结合部分与抗原(例如ErbB3)相结合的亲和力(Kd)大约小于KT7M'例如大约小于10_8M，10_9M或KTkiM或甚至更小；并且，抗体或其抗原结合部分以至少为与非特异性的抗原(例如BSA、酪蛋白)(预先确定的抗原或其密切相关的抗原以外的抗原)结合的亲和力的两倍的亲和力与预先确定的抗原相结合。此处所使用的术语是指抗体从抗体/抗原复合物解离的解离速率常数。此处所使用的术语“EC50”是指在体外或体内分析中，诱导出最大响应的50%响应(即最大响应与基线的中间值)的抗体或其抗原结合部分的浓度。如此处所使用的，“糖基化模式”定义为与蛋白质(更具体地，与免疫球蛋白蛋白质)共价结合的糖单元模式。·此处所使用的用于某一物体的术语“天然发生的”是指某一物体可以在自然界中发现的事实。例如，存在于可以从自然界的来源中分离出来且没有在实验室中经过人类进行有意改变的生物体(包括病毒)中的多肽或多核苷酸序列为天然发生的。此处所使用的术语“重排的”是指重链或轻链免疫球蛋白基因座的构型，其中，在实质上编码完整的Vh或\结构域的构型中，V片段分别紧挨着D-J或J片段。重排的免疫球蛋白基因座可以通过与种系DNA相比较进行识别；重排的基因座将具有至少一个重组的七聚体/九聚体同源元件。此处所使用的涉及V片段的术语“未重排的”或“种系构型”是指其中V片段未经重组以至于紧挨着D或J片段的构型。此处所使用的术语“核酸分子”意图包括DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是单链或双链的，但是优选为双链DNA。此处所使用的涉及编码与ErbB3相结合的抗体或抗体部分(例如VH、\、⑶R3)的核酸的术语“分离的核酸分子”是指其中编码抗体或抗体部分的核苷酸序列不含编码与ErbB3之外的抗原相结合的抗体的其它核苷酸序列的核酸分子，该其它序列在人基因组DNA中可能天然侧邻该核酸。此处所使用的术语“修饰的”或“修饰”是指在抗体或其抗原结合部分中改变一个或更多个氨基酸。改变可以通过在一个或多个位点添加、置换或删除氨基酸实现。可以通过已知的技术来实现改变，例如PCR诱变。例如，在一些实施方案中，使用本公开的方法识别的抗体或其抗原结合部分可以进行修饰，从而改变抗体或其抗原结合部分对ErbB3的结合亲和力。本发明在本发明的抗体或其片段的序列中还包含“保守氨基酸置换”，即不会损害该核苷酸序列编码的抗体或包含该氨基酸序列的抗体对抗原(即ErbB3)的结合的核苷酸和氨基酸序列修饰。保守氨基酸置换包括一个类型的氨基酸被相同类型的氨基酸置换，其中所述类型由共同的氨基酸侧链物理化学性质以及自然界中发现的同源蛋白质中的高置换频率确定，例如通过标准Dayhoff频率交换矩阵(frequencyexchangematrix)或BLOSUM矩阵确定的。氨基酸侧链被分为六大类，并包括I类(Cys);11类(Ser,Thr，Pro,Ala,Gly);III类(Asn，Asp，Gln，Glu);IV类(His,Arg,Lys);丫类(Ile，Leu，Val，Met)和VI类(Phe，Tyr，Trp)。例如，Asp置换另一III类的残基(例如AsruGln或Glu)为保守置换。因此，在抗ErbB3抗体中预计的非关键氨基酸残基优选使用同一类中的另一氨基酸残基进行取代。识别不消除抗原结合的核苷酸和氨基酸保守置换的方法是本领域公知的(参见，例如Brummell等人Biochem.32:1180-1187(1993);Kobayashi等人ProteinEng.12(10)879-884(1999);和Burks等人Proc.Natl.Acad.Sc1.USA94:412-417(1997))。术语“非保守氨基酸置换”是指一类的氨基酸被另一类的氨基酸置换；例如，使用III类的残基(例如Asp、Asn、Glu或Gln)来置换II类的残基Ala。或者，在另一个实施方案中，可以沿着整个或部分抗_ErbB3抗体编码序列随机引入突变(保守或非保守)，例如通过饱和诱变，且得到的修饰的抗_ErbB3抗体可以针对其结合活性进行筛选。“共有序列”为相关序列的族中最常见的氨基酸(或核苷酸)形成的序列(参见，例如Winnaker,FromGenestoClones(Verlagsgesellschaft,ffeinheim,Germany1987)。在蛋白质家族中，共有序列中的各位置都由家族中在该位置中最常见的氨基酸占据。如果两个氨基酸出现的频率相同，在该共有序列中可以包含其中的任一个。免疫球蛋白的“共有框架”是指共有免疫球蛋白序列中的框架区。同样地，⑶R的共有序列可以通过本发明的ErbB3抗体的⑶R氨基酸序列的最优比对得到，所述ErbB3抗体的CDR氨基酸序列公开于此处。对于核酸而言，术语“基本同源性”是指当进行优化比对或对比时，两个核酸或其指定序列有至少大约80%的核苷酸是相同的,通常至少大约90%至95%、更优选为至少大约98%至99.5%的核苷酸是相同的，其具有适当的核苷酸插入或缺失。或者，片断在选择性杂交条件下与互补链杂交时存在基本同源性。两个核苷酸序列之间的百分同一性是该序列共有的相同位置数的函数(即，％同源性=相同的位置#/总位置#xl00)，同时考虑在对两个序列进行最优比对时需要引入的空位(gap)的数目和各空位的长度。序列的对比和两个序列间百分同一性的确定可以使用下述非限定性的实施例所描述的数学算法来完成。可以采用GCG软件的GAP程序，使用NWSgapdna.CMP矩阵和40、50、60、70或80的空位权重和1、2、3、4、5或6的长度权重,确定两个核苷酸序列间的百分同一丨丨生。两个核苷酸或氨基酸序列之间的百分同一性也可以使用已经引入ALIGN程序(版本2.0)中的E.Meyers和W.Miller的算法(CABIOS,4:11-17(1989))、使用PAM120残基权重表(weightresiduetable)、12的空位长度罚分和4的空位罚分来确定。此外,两个氨基酸序列之间的百分同一性可以使用已经引入到GCG软件包的GAP程序中的Needleman和Wunsch算法(J.Mol.Biol.(48):444-453(1970))、使用Blossum62矩阵或PAM250矩阵及16、14、12、10、8、6或4的空位权重和1、2、3、4、5或6的长度权重来确定。本公开的核酸和蛋白质序列还可以进一步用作“探询序列”对公众数据库进行检索，例如来识别相关序列。这样的检索可以使用Altschul等人(1990)J.Mol.Biol.215403-10的NBLAST和XBLAST程序(版本2.0)进行。BLAST核苷酸检索可以使用NBALST程序进行(分数=100，字长=12)以获得与本发明的核酸分子同源的核苷酸序列。BLAST蛋白质检索可以使用XBLAST程序进行(分数=50，字长=3)以获得与本发明的蛋白质分子同源的氨基酸序列。为了获得用于比较目的空位比对，可以使用如Altschul等人(1997)NucleicAcidsRes.25(17):3389-3402中描述的空位BLAST。当使用BLAST和空位BLAST程序时，可以使用各程序(例如XBLAST和NBLAST)的默认参数。核酸可以存在于完整细胞中、细胞溶解产物中或以部分纯化或完全纯化的形式存在。当使用标准技术(包括碱/SDS处理、CsCl显带、柱色谱法、琼脂糖凝胶电泳和其它本领域公知的技术)从其它细胞组分或其它污染物(例如其它细胞核酸或蛋白质)中纯化出来时，核酸为“分离的”或“基本上纯的”。参见，F.Ausubel等人，ed.CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenePublishingandWileyInterscience,NewYork(1987)。尽管本公开的核酸组合物通常为天然序列(除了修饰的限制性位点等)，但来自cDNA、基因组或其混合物的本发明的核酸组合物可以按照标准技术进行突变来提供基因序列。对于编码序列，这些突变可以按照需要来影响氨基酸序列。特别地，可以设想与天然的V、D、J、恒定序列、转换序列和其它此处所描述的这类序列同源的或源自它们的DNA序列(其中“源自”表示一个序列与另一序列相同或由另一序列修饰得到)。术语“可操作地连接的”是指核酸序列与另一核酸序列具有功能性的关系。例如，如果前序列或分泌性前导体的DNA表达为参与多肽分泌的前蛋白，则该前序列或分泌性前导体的DNA可操作地与该多肽的DNA相连接；如果启动子或增强子影响编码序列的转录，则该启动子或增强子可操作地与该编码序列相连接；或者如果核糖体结合位点的位置促进翻译，则该核糖体结合位点可操作地与编码序列相连接。通常，“可操作地连接”是指相连的DNA序列为相邻的，且在分泌性前导体的情况中，相连的DNA序列是相邻的并处于阅读相(readingphase)中。但是，增强子并非一定是相邻的。通过在方便的限制性位点的接合完成连接。如果不存在这样的位点的话，可根据常规操作使用合成的寡核苷酸接头或连接体。当核酸和另一核酸序列具有功能性的关系时，该核酸是“可操作地连接的”。例如，如果启动子或增强子影响编码序列的转录，该启动子或增强子可操作地与该编码序列连接。当涉及转录调控序列时，可操作地连接是指连接的DNA序列是相邻的，且在需要合并两个蛋白质编码区时，连接的DNA序列是相邻的并处于阅读框中。对于转换序列而言，可操作地连接是指该序列能够实现转换重组。此处所使用的术语“载体”是指能够转运与其连接的另一个核酸的核酸分子。载体的一种类型为“质粒”，其是指附加的DNA片断可接合到其中的环形双链DNA环。另一种载体类型是病毒载体，其中附加的DNA片断可以接合到病毒基因组中。特定的载体能够在其进入的宿主细胞内进行自主复制(例如具有细菌复制起点的细菌载体和游离型Gpisomal)哺乳动物载体)。其它的载体(例如，非游离型哺乳动物载体)可以在引入宿主细胞时整合到宿主细胞的基因组中，从而可以与宿主基因组一起进行复制。此外，特定的载体能够引导与它们可操作地连接的基因的表达。这样的载体被此处称为“重组表达载体”(或简称为“表达载体”)。一般而言，在重组DNA技术中应用的表达载体通常是质粒的形式。术语“质粒”和“载体”可互换使用。但是，本发明意图包括这类其它形式的表达载体，例如病毒载体(例如，复制缺陷型反转录病毒、腺病毒和腺相关病毒)，它们都具有等同的功能。此处所使用的术语“重组宿主细胞”(或简称“宿主细胞”)是指引入重组表达载体的细胞。需要明白的是，这些术语并不仅指特定的所述细胞，还指这些细胞的后代。由于突变或环境影响导致在后代中可能会出现某些改变，因而事实上，这些后代可能与母细胞不相同，但是它们仍然包括在此处所使用的术语“宿主细胞”的范围内。此处所使用的术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”和“治疗(treatment)是指此处所描述的治疗性或预防性措施。“治疗”方法包括对受试者(例如，患有与ErbB3依赖性信号传导相关的疾病或障碍或倾向患有这样的疾病或防碍的受试者)施用此处公开的抗体或其抗原结合部分，从而预防、治疗、延迟该疾病或障碍或该疾病或障碍的复发、或降低其严重性，或减轻该疾病或障碍或该疾病或障碍的一种或多种症状，或者从而延长受试者的存活时间超过不接受这种治疗时预期的时间。此处所使用的术语“与ErbB3依赖性信号传导相关的疾病”或“与ErbB3依赖性信号传导相关的障碍”包括如下疾病状态和/或与疾病状态相关的症状，其中发现ErbB3水平升高和/或涉及ErbB3的细胞级联的激活。已经知道当发现ErbB3水平升高时，ErbB3与其它ErbB蛋白质(例如EGFR和ErbB2)形成异二聚体。因此，术语“与ErbB3依赖性信号传导相关的疾病”还包括其中发现EGFR/ErbB3和/或ErbB2/ErbB3异二聚体的水平升高的疾病状态和/或与疾病状态相关的症状。一般而言，“与ErbB3依赖性信号传导相关的疾病”是指任何需要ErbB3参与的障碍、发作、发展或症状的持续。示例性的ErbB3介导的障碍包括，但不局限于例如癌症。术语“癌症”和“癌性”指的是或描述的是通常以失控的细胞生长为特征的哺乳动物的生理状况。癌症的例子包括，但不局限于癌、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病。这样的癌症的更特定的例子包括扁平细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、胃癌、胰腺癌、胶质细胞肿瘤(例如成胶质细胞瘤和神经纤维瘤)、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺·癌、结肠癌、黑素瘤、结肠直肠癌、子宫内膜癌、唾液腺癌、肾脏癌、肾癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌和各种类型的头部和颈部癌症。在特定的实施方案中，使用此处公开的方法治疗或诊断的癌症选自黑素瘤、乳腺癌、卵巢癌、肾癌、胃肠/结肠癌、肺癌和前列腺癌。此处使用的术语“KRAS突变”是指在某些癌症中在v-Ki_ras2Kirsten大鼠肉瘤病毒致癌基因人类同源物中的发现的突变。人KRAS基因mRNA序列的非限定性实例包括Genbank登记号NM_004985和NM_033360。据报道在73%胰腺肿瘤、35%结肠直肠肿瘤、16%卵巢肿瘤和17%肺肿瘤中发现KRAS突变。此处使用的术语“PI3K突变”是指在某些癌症中在磷脂酰肌醇-3-激酶基因中发现的突变，通常导致癌细胞中PI3K的活化。据报道在12%结肠直肠肿瘤、15%头颈部肿瘤和26%乳腺肿瘤中发现PI3K突变。此处所使用的术语“有效量”是指当施用于受试者时，如此处所描述的结合ErbB3的抗体或其抗原结合部分足以发挥治疗、预后或诊断与ErbB3依赖性信号传导相关的疾病的作用的量。治疗有效量根据接受治疗的受试者和疾病、受试者的体重和年龄、疾病状态的严重性、施用方式等的不同而变化，本领域的普通技术人员可以很容易确定治疗有效量。根据本发明，施用剂量的范围可以为大约Ing至大约lOOOOmg、大约5ng至大约9500mg、大约IOng至大约9000mg、大约20ng至大约8500mg、大约30ng至大约7500mg、大约40ng至大约7000mg、大约50ng至大约6500mg、大约IOOng至大约6000mg、大约200ng至大约5500mg、大约300ng至大约5000mg、大约400ng至大约4500mg、大约500ng至大约4000mg、大约IUg至大约3500mg、大约5iig至大约3000mg、大约10Ug至大约2600mg、大约20yg至大约2575mg、大约30iig至大约2550mg、大约40yg至大约2500mg、大约50yg至大约2475mg、大约100ug至大约2，450mg、大约200ug至大约2425mg、大约300ug至大约2000mg、大约400iig至大约1175mg、大约500iig至大约1，150mg、大约0.5mg至大约1125mg、大约Img至大约llOOmg、大约1.25mg至大约1075mg、大约1.5mg至大约1050mg、大约2.Omg至大约1025mg、大约2.5mg至大约lOOOrng、大约3.Omg至大约975mg、大约3.5mg至大约950mg、大约4.Omg至大约925mg、大约4.5mg至大约900mg、大约5mg至大约875mg、大约IOmg至大约850mg、大约20mg至大约825mg、大约30mg至大约800mg、大约40mg至大约775mg、大约50mg至大约750mg、大约IOOmg至大约725mg、大约200mg至大约700mg、大约300mg至大约675mg、大约400mg至大约650mg、大约500mg或大约525mg至大约625mg的抗体或其抗原结合部分。可以调整施用方案以提供最佳治疗反应。有效量也是抗体或其抗原结合部分的任何毒性或有害效应(即副作用)最小和/或被有益效果远远超过的量。在以下药物组合物相关的部分中进一步描述了附加的优选剂量方案。术语“患者”包括接受预防或治疗处理的人和其它哺乳动物受试者。此处所使用的术语“受试者”或“患者”包括任何人或非人类动物。例如，此处公开的方法和组合物可用于治疗患有癌症的受试者。在优选的实施方案中，受试者是人。术语“非人类动物”包括所有脊椎动物，例如哺乳动物或非哺乳动物，例如非人类灵长类、羊、狗、牛等。术语“样品”是指来自患者或受试者的组织、体液或细胞。通常组织或细胞会从患者身上取出，但是也可能进行体内诊断。在实体肿瘤的情况下，组织样品可以从通过手术取出的肿瘤取得并通过常规技术制备以进行测试。在淋巴瘤和白血病的情况下，可以获得淋巴细胞、白血病细胞或淋巴组织并适当地制备。其它的患者样品(包括尿、眼泪、血清、脑脊髓液、粪便、痰、细胞提取液等)也可用于特定的肿瘤。术语“抗癌剂”和“抗肿瘤剂”是指用于治疗恶性肿瘤(例如癌生长)的药物。药物治疗可以单独使用，也可以与其它治疗(例如手术或放射治疗)联合使用。取决于所涉及的器官的性质，可以在癌症治疗中使用几类药物。例如，乳腺癌通常受到雌激素的刺激，因此可以使用灭活性激素的药物来治疗。同样地，前列腺癌可以使用灭活雄激素(雄性的性激素)的药物治疗。本发明的某些方法中使用的抗癌剂特别包括下述物质抗癌剂注释例子抗体与IGF-1R(胰岛素样生长因A12(完全人源化mAb)(a)抗ErbB3子I型受体)结合的抗体，19D12(完全人源化mAb)抗体以外的其在大多数人癌细胞表面CP751-87I(完全人源化mAb)其它抗体；上表达H7C10(人源化mAb)和aIR3(小氣)(b)与不同表scFV/FC(小鼠/人嵌合体)位结合的抗EM/164(-J、鼠)ErbB3抗体AMG479(完全人源化的mAb;Amgen)IMCA12(完全人源化的mAb;Imclone)NSC-742460(Dyax)MR-0646，F50035(PierreFabreMedicament,Merck)权利要求1.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其与人ErbB3的胞外结构域的结构域I结合且包含包含重链⑶R1、⑶R2和⑶R3序列的重链可变区；及包含轻链⑶R1、⑶R2和⑶R3序列的轻链可变区，其中所述重链CDRl序列包含SEQIDNO60或75，所述重链CDR2序列包含SEQIDNO:61，所述重链CDR3序列包含SEQIDNO:62，所述轻链CDRl序列包含SEQIDNO66或77，所述轻链CDR2序列包含SEQIDNO:67，所述轻链CDR3序列包含SEQIDNO68或79，其中附带条件为所述抗体不是(i)此处公开的Ab#6；(ii)包含分别如SEQIDNO1和2所示的Vl序列的抗体；或(iii)包含分别如SEQIDNO:7、8和9所示的VhCDRUCDR2和CDR3序列以及分别如SEQIDNO:10、11和12所示的VlCDRl、CDR2和CDR3序列的抗体。2.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其结合包含SEQIDN0:73的残基92-104的人ErbB3的表位并且特征为抑制表达ErbB3的癌细胞的增殖，其中附带条件为所述抗体不是(i)此处公开的Ab#6；(ii)包含分别如SEQIDNO:1和2所示的Vh和\序列的抗体;或(iii)包含分别如SEQIDNO:7、8和9所示的VhCDRl、CDR2和CDR3序列以及分别如SEQIDNO10,11和12所示的VlCDR1、CDR2和CDR3序列的抗体。3.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其结合包含SEQIDNO:73的残基92-104的人ErbB3的表位并且特征为抑制表达ErbB3的癌细胞的增殖，其中附带条件为所述抗体不是⑴此处公开的Ab#6；(ii)包含分别如SEQIDNO:1和2所示的Vh和\序列的抗体;或(iii)包含分别如SEQIDNO:7、8和9所示的VhCDRl、CDR2和CDR3序列以及分别如SEQIDNO10,11和12所示的VlCDRl、CDR2和CDR3序列的抗体；(iv)此处公开的Ab#3;(v)包含分别如SEQIDNO:3和4所示的Vh和八序列的抗体；(vi)包含分别如SEQIDNO:13、14和15所示的VhCDR1、CDR2和CDR3序列以及分别如SEQIDNO:16、17和18所示的VlCDRl、CDR2和CDR3序列的抗体；(vii)此处公开的Ab#17;(viii)包含分别如SEQIDNO35和36所示的Vh和Vl序列的抗体；(ix)包含分别如SEQIDNO:39、40和41所示的VhCDR1、CDR2和CDR3序列以及分别如SEQIDNO:42、43和44所示的八CDR1、CDR2和CDR3序列的抗体；(X)此处公开的Ab#19；(xi)包含分别如SEQIDNO37和38所示的Vh和Vl序列的抗体；或(xii)包含分别如SEQIDNO:45、46和47所示的VhCDRUCDR2和CDR3序列以及分别如SEQIDNO:48、49和50所示的\，CDR1、CDR2和CDR3序列的抗体。4.根据权利要求2或3所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中所述表位进一步包含SEQIDNO73的残基129。5.根据权利要求2或3或4所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中所述癌细胞是MALME-3M细胞、AdrR细胞或ACHN细胞并且相对于对照所述增殖减少了至少10%。6.根据权利要求1或2或3或4所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其中，当选自SEQIDNO73的残基93(天冬酰胺)、残基101(甲硫氨酸)、残基102(亮氨酸)和残基104(酪氨酸)的人ErbB3的任何一个氨基酸残基被丙氨酸置换以产生具有单个氨基酸置换的突变ErbB3时，相较于所述抗体或其抗原结合部分与包含所述SEQIDN0:73的氨基酸序列的人ErbB3的结合，所述抗体或其抗原结合部分与所述突变ErbB3的结合显著下降。7.根据权利要求6所述的抗体或其抗原结合部分，其中所述结合的显著下降是结合的Kd值的至少10倍变化。8.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其与人ErbB3的胞外结构域的结构域I结合且包含包含重链⑶R1、⑶R2和⑶R3序列的重链可变区；及包含轻链⑶R1、⑶R2和⑶R3序列的轻链可变区，其中所述重链CDRl序列包含SEQIDNO63或76，所述重链CDR2序列包含SEQIDNO:64，所述重链CDR3序列包含SEQIDNO:65，所述轻链CDRl序列包含SEQIDNO69或78，所述轻链CDR2序列包含SEQIDNO:70，所述轻链CDR3序列包含SEQIDNO:71或80，其中附带条件为所述抗体不是(i)此处公开的Ab#6；(ii)包含分别如SEQIDNO:1和2所示的Vl序列的抗体；或(iii)包含分别如SEQIDNO:7、8和9所示的VhCDRUCDR2和CDR3序列以及分别如SEQIDNO:10、11和12所示的VlCDRl、CDR2和CDR3序列的抗体。9.根据权利要求1-8中任一项所述的抗体，其中所述抗体是人抗体、人源化抗体、双特异性抗体或嵌合抗体。10.根据权利要求1-8中任一项所述的抗原结合部分，其为人抗体、人源化抗体、双特异性抗体或嵌合抗体的部分。11.根据权利要求1-8中任一项所述的抗体或抗原结合部分，其中所述抗体或抗原结合部分选自Fab、Fab'2、scFv、SMIP、亲和体、avimer、纳米体和域抗体。12.根据权利要求1-8中任一项所述的抗体，其中所述抗体是选自IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgAUIgA2、IgAsec、IgD和IgE的同种型。13.—种组合物，其包含在药学上可接受的载体中的根据权利要求1-12中任一项所述的抗体或抗原结合部分。14.一种治疗受试者的癌症的方法，其包括给所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求13所述的组合物。15.根据权利要求14所述的方法，其中所述癌症包括包含KRAS突变或PI3K突变的任一种或两者的细胞。16.根据权利要求14所述的方法，其中所述受试者是人并且所述KRAS突变包括人KRAS基因的密码子12或密码子13的突变。17.根据权利要求14所述的方法，其中所述受试者是人并且所述PI3K突变包括人PIK3CA基因的外显子9或外显子20内的突变。18.一种治疗受试者的癌症的方法，其包括给所述受试者施用治疗有效量的第一试剂与治疗有效量的第二试剂的组合，所述第一试剂为根据权利要求1-12中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合部分，所述第二试剂为抗癌剂而不是所述第一试剂。19.根据权利要求18所述的方法，其中所述第二试剂包含抗体或其抗原结合部分。20.根据权利要求18所述的方法，其中所述第二试剂选自蛋白质合成抑制剂、生长抑素类似物、免疫治疗剂和酶抑制剂。21.根据权利要求18所述的方法，其中所述第二试剂选自靶向IGFlR的小分子、靶向EGFR的小分子、靶向ErbB2的小分子、靶向cMET的小分子、抗代谢物、烷化剂、拓扑异构酶抑制齐L1、微管祀向剂、激酶抑制剂、激素疗法、糖皮质激素、芳香酶抑制剂、mTOR抑制剂、化学治疗剂、蛋白激酶B抑制剂、磷脂酰肌醇3-激酶、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂和MEK抑制剂。22.根据权利要求19所述的方法，其中所述第二试剂为帕尼单抗、曲妥珠单抗或西妥昔单抗。23.根据权利要求21所述的方法，其中所述第二试剂为紫杉醇。24.根据权利要求21所述的方法，其中所述第二试剂为顺钼。25.根据权利要求21所述的方法，其中所述第二试剂为埃罗替尼或拉帕替尼。全文摘要本发明提供了一类新型的结合ErbB3受体的胞外结构域并抑制各种ErbB3功能的抗体及其抗原结合片段。例如，此处所述的抗体和抗原结合片段能够结合命名为ErbB3的受体并抑制EGF样配体介导的受体磷酸化。这些抗体及其抗原结合片段具有抑制表达ErbB3的癌细胞增殖的有用特征。文档编号A61K39/395GK103002912SQ201080047718公开日2013年3月27日申请日期2010年8月23日优先权日2009年8月21日发明者B·舍贝尔,U·尼尔森,M·菲尔德豪斯申请人:梅里麦克制药股份有限公司