专利名称：一种连续逆流超声提取结合膜技术提取三七总皂苷的方法
技术领域：
本发明属于植物有效成分提取分离技术领域，具体涉及一种连续逆流超声提取结 合膜技术提取三七总皂苷的方法。
背景技术：
三七为五加科人参属植物三七0 / ^ floiogiase/^· (Burk.) F. H. Chen)的干燥 根，是中国特有的名贵中药材。主产于云南文山，素有“理血圣药”之称，能散瘀止血，消肿 定痛。用于咯血，吐血，衄血，便血，崩漏，外伤出血，胸腹剌痛，跌打肿痛。三七总皂苷是其 主要活性成分，现代药理实验证明，三七总皂苷能增加动脉血流量，扩张血管、降低动脉血 压及心肌耗氧量，提高机体功能及对缺氧的耐受力，并能抑制血小板聚集、降低血粘度等。三七总皂苷现有提取工艺为乙醇热回流提取，提取液和纯化液的浓缩采用热减压 浓缩，三七总皂苷干燥采用减压干燥，这些方法有以下缺点(1)三七总皂苷受热容易水 解，尤其在水中受热水解剧烈，而由于三七总皂苷为皂苷类成分，在水中加热减压极易起 泡，故三七乙醇提取液和纯化液在减压浓至无醇味后产生大量泡沫，几乎无法减压浓缩，只 能改成常压浓缩，还会经常出现冲料，导致重复浓缩，此外，常压浓缩温度也大大升高，浓缩 效率低，故浓缩时间大大延长，由于在水中三七总皂苷受热水解剧烈，故三七总皂苷在整个 生产过程中，水解严重，影响产品质量。(2)在生产过程中需要大量的蒸汽，如果使用煤锅炉 产生蒸汽，对环境污染很大，如果采用油锅炉产生蒸汽，成本高昂。(3)在生产过程中消耗大 量的冷凝水，浪费水资源。(4)溶剂损耗大，一方面在于提取溶剂用量较大，另一方面是溶 剂回收过程损耗也较大，尤其在冷凝水系统冷却效果差的情况下，造成环境污染，同时增加 生产成本。(5)热回流提取周期长，耗时，效率低。(6)三七总皂苷减压干燥受热时间较长， 三七总皂苷水解较快，影响产品质量。为了解决长期以来三七提取三七总皂苷生产过程中提取液和纯化液浓缩过 程中三七总皂苷水解剧烈的问题，中国专利申请，公开号为CN1704111，
公开日为 2005. 12. 07，申请号为200410045204. 3，的专利申请公开了“免加热提取工艺提取鲜三七”， 其所提出的提取工艺采用了冷浸提取，克服了三七总皂苷中人参皂苷成分受热不稳定的问 题，但其存在提取率低，生产周期长，生产成本高，整个过程成本高，产业化可行性差的缺 点。并且该工艺提出的浓缩方法为高真空低温浓缩，高真空低温浓缩对设备要求高，且在低 温高真空情况，当浓至无醇味时，三七总皂苷起泡剧烈，易冲料，导致重复浓缩，整个过程成 本高，操作麻烦。此外，文献《中成药》2006年第8卷第5期642-645页公开了 “超声酶法提取三七 总皂苷的研究”，实验采用的新工艺将超声提取法与复合酶解法有效的结合起来，整个工艺 在较低的温度下进行提取，酶解后采用超声提取既缩短了提取时间，又较大的提高了总皂 苷含量，但该方法超声提取必须以水为溶剂，由于酶解必须在水中进行，因此提取杂质较 多，三七总皂苷进一步纯化效果较差，且工艺可控性差。文献《昆明师范高等专科学校学报》 2005第27卷第4期1-2页公开了 “正交实验法研究三七皂甙的超声提取”，按照正交实验设计9组实验，分别称取三七粗粉100. 0g9份，至于锥形瓶中，放于超声提取仪中提取。文 献《广东药学院学报》2009第25卷第3期249-252页公开了“探头式超声提取三七有效成 分的工艺研究”，其把发射超声波的“探头”直接浸入被处理溶液中进行超声提取。以上超 声提取方法均是在实验室仪器规模进行研究，均为静态超声提取，存在着超声波衰减问题， 实验室仪器的腔体很小，药材粉碎很细，传播距离就是几厘米，超声传播距离短，所以衰减 也小，工业化很难实现，由于工业化提取罐腔体大，传播距离要几米，超声波难以有效传导， 出现罐体中心几乎无超声作用，故无法有效利用超声进行提取，所以产业化提取率低，且工 艺不能连续生产，操作麻烦，生产率低，此外，以上超声提取方法均为静态提取，难以形成较 大浓度差，故提取效率也不高。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术中三七总皂苷的超声提取工艺的超声 波的衰减，超声波难以有效传导的缺陷，导致难以实现工业化和难以形成较大浓度差，提取 效率不高，以及高真空低温浓缩对设备要求高，三七总皂苷起泡剧烈，易冲料，导致重复浓 缩等不足，其目的是提供一种连续逆流超声提取结合膜技术提取三七总皂苷的方法。为解决上述技术问题和达到本发明目的，本发明是通过以下技术方案实现的 一种连续逆流超声提取结合膜技术提取三七总皂苷的方法，按下述顺序的步骤进行
(1)取三七粉碎成三七粗粉，加入三七粗粉重量6 15倍的以质量分数计为40 90% 乙醇在20 50°C的温度下进行连续逆流超声提取20 120min，超声频率为20 80KHz ；
(2)乙醇超声提取液过滤，滤液用截留相对分子量为1000 2500
的超滤膜在20 50°C，操作压力0. 4 4. 1 MPa下进行膜浓缩，或用截留相对分子量 为100-800的纳滤膜在20 50°C，操作压力0. 4 4. 1 MPa下进行膜浓缩；
(3)膜浓缩液减压浓缩至无醇味后加水稀释至三七粗粉投料重量的4 8倍或直接加 水稀释至以质量分数计含乙醇量达10 20%，过滤，上于聚苯乙烯型大孔吸附树脂吸附，用 水洗脱，水洗液弃去，再用以质量分数计为50 90%乙醇洗脱；
(4)乙醇洗脱液过碱性阴离子树脂；
(5)阴离子树脂透过液用截留相对分子量为100-800的纳滤膜，操作压力0.4 4. 1 MPa下进行膜浓缩；
(6)膜浓缩液加入为膜浓缩液重量的1 5%的活性炭搅拌脱色；
(7)活性炭脱色液过滤后减压浓缩至无醇味后喷雾干燥。所述的超声提取结合膜技术提取三七总皂苷的方法，其步骤(1)
中所述的超声提取是在三七粗粉中加入三七粗粉重量8 12倍的以质量分数计为 70 80%乙醇，在30 45°C超声提取50 90min，超声频率为40 KHz。所述的超声提取结合膜技术提取三七总皂苷的方法，其步骤(1)
中所述的取三七粉碎成三七粗粉是取三七的三七剪口部位直接粉碎成三七粗粉或取 三七的三七头子部位直接粉碎成三七粗粉。所述的超声提取结合膜技术提取三七总皂苷的方法，其步骤(1)
中所述的取三七粉碎成三七粗粉是取三七的三七剪口部位用以质量分数计为20 60%乙醇浸泡润湿后再粉碎成三七粗粉或取三七的三七头子部位用以质量分数计为20 60%乙醇浸泡润湿后再粉碎成三七粗粉。所述的超声提取结合膜技术提取三七总皂苷的方法，其步骤(2) 中所述的超滤膜浓缩过程的温度为30 45°C，操作压力为0. 7 2. 9MPa。所述的超声提取结合膜技术提取三七总皂苷的方法，其步骤(2) 中所述的纳滤膜浓缩过程的温度为30°C 45°C，操作压力，0. 7 2. 9MPa。所述的超声提取结合膜技术提取三七总皂苷的方法，其步骤(3)
中所述的聚苯乙烯型大孔吸附树脂的型号为D101，AB 8，HPD 100或DM130。所述的超声提取结合膜技术提取三七总皂苷的方法，其步骤(3) 中所述的乙醇洗脱，以质量分数计，其乙醇洗脱浓度为70 85%。所述的超声提取结合膜技术提取三七总皂苷的方法，其步骤(4)
中所述的碱性阴离子树脂的型号为D311，D314，D390, D396，D900, D941,201X4, 201X7中任一种或任意两种。所述的超声提取结合膜技术提取三七总皂苷的方法，其步骤(5) 中所述的纳滤膜浓缩过程的操作压力为0. 7 2. 9MPa。与现有技术相比，本发明的有益效果是
1、本发明所述连续逆流超声提取工艺是三七原料和乙醇在提取管内保持连续不间断 逆流运行状态，同时超声波发生器对提取管进行超声发射，实现超声提取和连续逆流提取 同时进行，每一段提取管实现最大浓度梯度，使用最少的溶剂得到最大的溶解度，提高了提 取效果，显著减少了溶剂用量、降低了浓缩过程溶剂回收的能耗，同时连续化作业，提高生 产效率，既克服了传统热回流提取，温度高，三七总皂苷水解影响产品质量，又由于超声管 直径较小，为0. 5-1米，克服了现有超声提取过程中超声衰减严重以及浓度梯度低导致的 提取率低和不能连续作业的缺陷，同时螺旋推动物料时搅动物料使物料超声更均勻，克服 了超声不均勻的不足。2、本发明方法的整个提取过程温度不高于50°C，缩短提取周期，防止了三七总皂 苷水解，且环保节能。3、本发明方法的三七总皂苷超声提取液和阴离子树脂透过液直接用膜浓缩，利用 了截留相对分子量为100-800的纳滤膜或截留相对分子量为1000-2500的超滤膜能让乙 醇和水分子透过的特性，虽然三七总皂苷中的主要皂苷成分分子量只801-1109，但由于分 子形状，基团影响、分子大小等的原因，截留相对分子量为1000-2500的超滤膜几乎能完全 截留三七总皂苷，从而使三七总皂苷无法透过纳滤膜或截留相对分子量1000-2500的超滤 膜，实现了低温浓缩，克服了传统减压浓缩至无醇味后起泡沫，常压浓缩受热时间长，水解 剧烈，溶剂损耗大，能耗大的缺点。4、本发明方法把超声提取与膜浓缩技术有机结合，克服了膜浓缩过程料液不宜温 度过高的工艺问题，实现边低温提取边低温浓缩，同时实现了快速提取快速浓缩，连续生 产，缩短了生产周期，同时把膜浓缩技术与大孔吸附树脂技术，阴离子树脂技术和活性炭脱 色相结合，从而进一步纯化了三七总皂苷。5、本发明方法连续逆流提取液流出后直接进行超滤和纳滤膜浓缩，整个工艺提取 浓缩实现连续作业。6、本发明方法整个过程只有膜浓缩液用减压回收至无醇味，由于量少，回收速度很快，且均只浓至无醇味，不存在起泡后的常压浓缩，干燥方式为喷雾干燥，受热短，故整个 工艺过程有效防止了三七总皂苷的热水解，保证了产品质量。7、由于本发明方法从连续逆流提取与超声提取，超声提取与膜浓缩技术，膜浓缩 技术与大孔吸附树脂技术，阴离子树脂技术和活性炭脱色形成了一个有机的整体工艺，一 次性有效地克服了如上所述的现有的三七总皂苷提取工艺的一系列缺陷和不足，使得三七 总皂苷的提取实现了低温提取、高提取率和连续生产，纯化率高，既保证了产品质量又制备 方法简单。8、本发明方法减少了锅炉和溶剂损耗对环境的影响，革除了三七总皂苷提取精制 需要大量蒸汽的方法，降低了成本。易于工业化生产。
图1是实施例1所提取的三七总皂苷的高效液相图谱。图2是实施例2所提取的三七总皂苷的高效液相图谱。图3是实施例3所提取的三七总皂苷的高效液相图谱。图4是实施例4所提取的三七总皂苷的高效液相图谱。图5是实施例5所提取的三七总皂苷的高效液相图谱。图6是实施例6所提取的三七总皂苷的高效液相图谱。图7是实施例7所提取的三七总皂苷的高效液相图谱。图8是实施例8所提取的三七总皂苷的高效液相图谱。图9是实施例9所提取的三七总皂苷的高效液相图谱。图10是实施例10所提取的三七总皂苷的高效液相图谱。
具体实施例方式通过下面的具体实施例，可以进一步清楚的了解本发明，但它们不是对本发明的限定。以下各实施例三七总皂苷的含量测定方法，按2010版《中华人民共和国药典》一 部369-370页的三七总皂苷含量测定方法测定。以下实施例所述的三七剪口粗粉是取三七 的三七剪口部位粉碎成的粗粉，所述的三七头子粗粉是取三七的三七头子部位粉碎成的粗 粉。乙醇的浓度均是以质量分数计。实施例1
取三七剪口粗粉30 kg，从连续逆流超声提取管头部进料口进料，从连续逆流超声提取 管尾部溶剂加入口加入8倍量75%乙醇(240kg)，进行连续逆流超声提取，设定超声波频率 为40KHz，设置超声温度20°C，连续逆流超声提取20min，收集乙醇超声波提取液，过滤，滤 液温度20°C，滤液用截留相对分子量为100-400的纳滤膜浓缩，操作压力达0. 时，有透 过液流出，流速很慢，提高操作压力达2. 9MPa,流速稳定，至无透过液流出，把膜浓缩液加水 至含醇量达15%，静置，过滤，滤液上于DlOl型大孔吸附树脂吸附，用水洗脱至水洗液无甜 味，水洗液弃去，再用80%乙醇洗脱，乙醇洗脱液过D311碱性阴离子树脂，阴离子树脂透过 液用纳滤膜浓缩，滤液用截留相对分子量为100-400的纳滤膜浓缩，操作压力达0. IMI^a时， 有透过液流出，流速很慢，提高操作压力达0. 4MPa,流速稳定，至无透过液流出，得膜浓缩液 52kg，加入0.52kg (即为膜浓缩液重量的1%)活性炭，搅拌脱色30min，过滤，滤液减压浓缩至无醇味，喷雾干燥，即得三七总皂苷3. 3kg，收率11%，三七总皂苷含三七皂苷队8. 0%，人 参皂苷Rg1 31. 2%，人参皂苷Re 6. 4%，人参皂苷Rb1 32. 1%,人参皂苷Rd 8. 2%，三七总皂苷 高效液相图谱见图1。实施例2
取三七头子粗粉30 kg，从连续逆流超声提取管头部进料口进料，从连续逆流超声提取 管尾部溶剂加入口加入15倍量40%乙醇(450kg)，进行连续逆流超声提取，设定超声波频率 为20KHz，设置超声温度50°C，连续逆流超声提取60min，收集超声波提取液，过滤，滤液温 度50°C，滤液用截留相对分子量为1000的超滤膜浓缩，操作压力达0. IMPa时，有透过液流 出，流速很慢，提高操作压力达0. 4MPa,流速稳定，至膜浓缩无透过液流出，把膜浓缩液减压 浓至无醇味，补水至总量为120kg，静置，过滤，滤液上于HPD-100型大孔吸附树脂吸附，用 水洗脱至水洗液无甜味，水洗液弃去，再用50%乙醇洗脱，乙醇洗脱液过D314碱性阴离子树 脂，阴离子透过液用纳滤膜浓缩，滤液用截留相对分子量为300-800的纳滤膜浓缩，操作压 力达0. IMPa时，有透过液流出，流速很慢，提高操作压力达2. OMPa,流速稳定，至无透过液 流出，得膜浓缩液44kg，加入0. 88kg (即为膜浓缩液重量的2%)活性炭，搅拌脱色lOmin， 过滤，滤液减压浓缩至无醇味，喷雾干燥，即得三七总皂苷2. 2kg,收率7. 3%，三七总皂苷含 三七皂苷R1 7. 5%，人参皂苷Rg1 31. 2%，人参皂苷Re 6. 4%，人参皂苷Rb1 30. 2%,人参皂苷 Rd:6. 9%，三七总皂苷高效液相图谱见图2。实施例3
取经20%乙醇浸泡润湿后粉碎三七剪口粗粉30 kg,从连续逆流超声提取管头部进料 口进料，从连续逆流超声提取管尾部溶剂加入口加入6倍量90%乙醇(180kg)，进行连续 逆流超声提取，设定超声波频率为80KHz，设置超声温度30°C，连续逆流超声提取40min， 收集超声波提取液，过滤，滤液温度30°C，滤液用截留相对分子量为25000的超滤膜浓缩， 操作压力达0. IMPa时，有透过液流出，流速很慢，提高操作压力达0. 7MPa,流速稳定，至膜 浓缩无透过液流出，把膜浓缩液减压浓至无醇味，补水至总量为180kg，静置，过滤，滤液上 于AB-8型大孔吸附树脂吸附，用水洗脱至水洗液无甜味，水洗液弃去，再用90%乙醇洗脱， 乙醇洗脱液过D390碱性阴离子树脂，阴离子透过液用纳滤膜浓缩，滤液用截留相对分子量 为300-800的纳滤膜浓缩，操作压力达0. IMPa时，有透过液流出，流速很慢，提高操作压 力达2.9MPa，流速稳定，至无透过液流出，得膜浓缩液40kg，加入IJkg (即为膜浓缩液 重量的3%)活性炭，搅拌脱色60min，过滤，滤液减压浓缩至无醇味，喷雾干燥，即得三七总 皂苷4. 2kg,收率14. 0%，三七总皂苷含三七皂苷R1 7. 9%，人参皂苷Rg1 30. 9%，人参皂苷 Re :5. 8%，人参皂苷Md1 :32. 6%,人参皂苷Rd :8. 5%，三七总皂苷高效液相图谱见图3。实施例4
取经20%乙醇浸泡润湿后粉碎三七头子粗粉30 kg,从连续逆流超声提取管头部进料 口进料，从连续逆流超声提取管尾部溶剂加入口加入10倍量60%乙醇(300kg)，进行连续 逆流超声提取，设定超声波频率为30KHz，设置超声温度20°C，连续逆流超声提取120min， 收集超声波提取液，过滤，滤液温度20°C，滤液用截留相对分子量为1000的超滤膜浓缩，操 作压力达0. IMPa时，有透过液流出，流速很慢，提高操作压力达2. OMPa,流速稳定，至膜浓 缩无透过液流出，把膜浓缩液减压浓至无醇味，补水至总量为MOkg，静置，过滤，滤液上于 DM-130型大孔吸附树脂吸附，用水洗脱至水洗液无甜味，水洗液弃去，再用60%乙醇洗脱，乙醇洗脱液过D396碱性阴离子树脂，阴离子透过液用纳滤膜浓缩，滤液用截留相对分子量 为300-800的纳滤膜浓缩，操作压力达0. IMPa时，有透过液流出，流速很慢，提高操作压力 达0. 7MPa,流速稳定，浓缩至无透过液流出，得膜浓缩液64kg，加入2. 56kg (即为膜浓缩 液重量的4%)活性炭，搅拌脱色30min，过滤，滤液减压浓缩至无醇味，喷雾干燥，即得三七 总皂苷2. 3kg，收率7. 7%，三七总皂苷含三七皂苷札7. 2%，人参皂苷Rg1:31. 0%，人参皂苷 Re:6. 1%，人参皂苷Md1 :30. 4%,人参皂苷Rd:6. 9%，三七总皂苷高效液相图谱见图4。实施例5
取经40%乙醇浸泡润湿后粉碎三七剪口粗粉30 kg,从连续逆流超声提取管头部进料 口进料，从连续逆流超声提取管尾部溶剂加入口加入10倍量80%乙醇(300kg)，进行连续 逆流超声提取，设定超声波频率为50KHz，设置超声温度50°C，连续逆流超声提取120min， 收集超声波提取液，过滤，滤液温度50°C，用截留相对分子量为300-800的纳滤膜浓缩，操 作压力达0. 2MPa时，有透过液流出，流速很慢，提高操作压力达4. IMPa,流速稳定，至无透 过液流出，把膜浓缩液加水至含醇量达20%，静置，过滤，滤液上于HPD-100型大孔吸附树脂 吸附，用水洗脱至水洗液无甜味，水洗液弃去，再用70%乙醇洗脱，乙醇洗脱液过D900碱性 阴离子树脂，阴离子透过液用纳滤膜浓缩，滤液用截留相对分子量为100-400的纳滤膜浓 缩，操作压力达0. IMPa时，有透过液流出，流速很慢，提高操作压力达0. 7MPa，流速稳定，浓 缩至无透过液流出，得膜浓缩液45kg，加入1. 8kg (即为膜浓缩液重量的4%)活性炭，热回 流搅拌脱色30min，过滤，滤液减压浓缩至无醇味，喷雾干燥，即得三七总皂苷4. 3kg，收率 14. 3%，三七总皂苷含三七皂苷R1 8. 4%，人参皂苷Rg1 30. 5%，人参皂苷Re 5. 6%，人参皂苷 Rb1:32. 8%,人参皂苷Rd:8. 7%，三七总皂苷高效液相图谱见图5。实施例6
取经60%乙醇浸泡润湿后粉碎三七头子粗粉30 kg,从连续逆流超声提取管头部进料 口进料，从连续逆流超声提取管尾部溶剂加入口加入15倍量60%乙醇(450kg)，进行连续逆 流超声提取，设定超声波频率为60KHz，设置超声温度25°C，连续逆流超声提取90min，收 集超声波提取液，过滤，滤液温度30°C，滤液用截留相对分子量为100-400的纳滤膜浓缩， 操作压力达0. 2MPa时，有透过液流出，流速很慢，提高操作压力达0. 4MPa，流速稳定，至无 透过液流出，把膜浓缩液加水至含醇量达10%，静置，过滤，滤液上于AB-8型大孔吸附树脂 吸附，用水洗脱至水洗液无甜味，水洗液弃去，再用90%乙醇洗脱，乙醇洗脱液过D941碱性 阴离子树脂，阴离子透过液用纳滤膜浓缩，滤液用截留相对分子量为300-800的纳滤膜浓 缩，操作压力达0. IMPa时，有透过液流出，流速很慢，提高操作压力达0. 4MPa，流速稳定，浓 缩至无透过液流出，得膜浓缩液62kg，加入3. Ikg (即为膜浓缩液重量的5%)活性炭，热回 流搅拌脱色60min，过滤，滤液减压浓缩至无醇味，喷雾干燥，即得三七总皂苷2. Ikg,收率 7. 0%，三七总皂苷含三七皂苷R1 6. 9%，人参皂苷Rg1:31. 5%，人参皂苷Re :6. 0%，人参皂苷 Rb1:30. 7%,人参皂苷Rd:6. 5%，三七总皂苷高效液相图谱见图6。实施例7
取干燥三七剪口粗粉30 kg,从连续逆流超声提取管头部进料口进料，从连续逆流超 声提取管尾部溶剂加入口加入6倍量50%乙醇(180kg),进行连续逆流超声提取，设定超 声波频率为70KHz，设置超声温度35°C，连续逆流超声提取60min，收集超声波提取液，过 滤，滤液温度32°C，滤液用截留相对分子量为2500的超滤膜浓缩，操作压力达0. IMPa时，
9有透过液流出，流速很慢，提高操作压力达2. 9MPa,流速稳定，至无透过液流出，把膜浓缩液 减压浓至无醇味，补水至总量为120kg，，静置，过滤，滤液上于DlOl型大孔吸附树脂吸附， 用水洗脱至水洗液无甜味，水洗液弃去，再用75%乙醇洗脱，乙醇洗脱液过201X4碱性阴 离子树脂，阴离子透过液用纳滤膜浓缩，滤液用截留相对分子量为100-400的纳滤膜浓缩， 操作压力达0. IMPa时，有透过液流出，流速很慢，提高操作压力达2. OMPa,流速稳定，浓缩 至无透过液流出，得膜浓缩液41kg，加入0.82kg (即为膜浓缩液重量的2%)活性炭，热回 流搅拌脱色20min，过滤，滤液减压浓缩至无醇味，喷雾干燥，即得三七总皂苷4. 2kg,收率 14. 0%，三七总皂苷含三七皂苷R1 8. 7%，人参皂苷Rg1 30. 4%，人参皂苷Re 6. 1%，人参皂苷 Rb1:33. 1%,人参皂苷Rd:8. 6%，三七总皂苷高效液相图谱见图7。实施例8
取干燥三七头子粗粉30 kg，从连续逆流超声提取管头部进料口进料，从连续逆流超声 提取管尾部溶剂加入口加入12倍量50%乙醇(360kg)，进行连续逆流超声提取，设定超声 波频率为40KHz，设置超声温度40°C，连续逆流超声提取50min，收集超声波提取液，过滤， 滤液45°C滤液用截留相对分子量为1000的超滤膜浓缩，操作压力达0. IMPa时，有透过液 流出，流速很慢，提高操作压力达4. IMPa,流速稳定，至无透过液流出，把膜浓缩液减压浓至 无醇味，补水至总量为MOkg，静置，过滤，滤液上于DlOl型大孔吸附树脂吸附，用水洗脱 至水洗液无甜味，水洗液弃去，再用75%乙醇洗脱，乙醇洗脱液过201X7碱性阴离子树脂， 阴离子透过液用纳滤膜浓缩，滤液用截留相对分子量为300-800的纳滤膜浓缩，操作压力 达0. IMPa时，有透过液流出，流速很慢，提高操作压力达2. 9MPa,流速稳定，浓缩至无透过 液流出，得膜浓缩液31kg，加入0. 93kg (即为膜浓缩液重量的3%)活性炭，热回流搅拌脱色 40min,过滤，滤液减压浓缩至无醇味，喷雾干燥，即得三七总皂苷2. Okg,收率6. 7%，三七总 皂苷含三七皂苷R1 6. 7%，人参皂苷Rg1 31. 6%，人参皂苷Re 6. 9%，人参皂苷Rb1 30. 0%,人 参皂苷Rd:6. 2%，三七总皂苷高效液相图谱见图8。实施例9
取干燥三七剪口粗粉30 kg，从连续逆流超声提取管头部进料口进料，从连续逆流超声 提取管尾部溶剂加入口加入15倍量60%乙醇(450kg)，进行连续逆流超声提取，设定超声波 频率为40KHz，设置超声温度40°C，连续逆流超声提取lOOmin，收集超声波提取液，过滤， 滤液温度43°C，滤液用截留相对分子量为100-400的纳滤膜浓缩，操作压力达0. IMI^a时，有 透过液流出，流速很慢，提高操作压力达2. OMPa,流速稳定，至无透过液流出，把膜浓缩液减 压浓至无醇味，补水至总量为180kg，静置，过滤，滤液上于DM-130型大孔吸附树脂吸附，用 水洗脱至水洗液无甜味，水洗液弃去，再用85%乙醇洗脱，乙醇洗脱液过D941和201X7碱 性阴离子树脂，阴离子透过液用纳滤膜浓缩，滤液用截留相对分子量为300-800的纳滤膜 浓缩，操作压力达0. IMPa时，有透过液流出，流速很慢，提高操作压力达4. IMPa，流速稳定， 浓缩至无透过液流出，得膜浓缩液44kg，加入0. 88kg (即为膜浓缩液重量的2%)活性炭，热 回流搅拌脱色30min，过滤，滤液减压浓缩至无醇味，喷雾干燥，即得三七总皂苷4. 3kg，收 率14. 3%，三七总皂苷含三七皂苷R1 8. 4%，人参皂苷Rg1:31. 7%，人参皂苷Re :6. 2%，人参皂 苷Rb1:33. 2%,人参皂苷Rd:8. 8%，三七总皂苷高效液相图谱见图9。实施例10
取干燥三七剪口粗粉30 kg,从连续逆流超声提取管头部进料口进料，从连续逆流超声提取管尾部溶剂加入口加入15倍量质量分数为60%乙醇(450kg)，进行连续逆流超声提 取，设定超声波频率为40KHz，设置超声温度40°C，连续逆流超声提取80min，收集超声波 提取液，过滤，滤液温度45°C，滤液用截留相对分子量为300-800的纳滤膜浓缩，操作压力 达0. IMPa时，有透过液流出，流速很慢，提高操作压力达0. 7MPa,流速稳定，至无透过液流 出，把膜浓缩液减压浓至无醇味，补水至总量为180kg，静置，过滤，滤液上于DM-130型大孔 吸附树脂吸附，用水洗脱至水洗液无甜味，水洗液弃去，再用80%乙醇洗脱，乙醇洗脱液过 D396和201X4碱性阴离子树脂，阴离子透过液用纳滤膜浓缩，滤液用截留相对分子量为 100-400的纳滤膜浓缩，操作压力达0. IMI^a时，有透过液流出，流速很慢，提高操作压力达 4. IMPa，流速稳定，浓缩至无透过液流出，得膜浓缩液39kg，加入0. 78kg(即为膜浓缩液重量 的2%)活性炭，热回流搅拌脱色20min，过滤，滤液减压浓缩至无醇味，喷雾干燥，即得三七 总皂苷4. 1kg，收率13. 7%，三七总皂苷含三七皂苷R1 8. 0%，人参皂苷Rg1:31. 4%，人参皂苷 Re :5. 8%，人参皂苷Md1 :33. 0%,人参皂苷Rd :8. 9%，三七总皂苷高效液相图谱见图10。
权利要求
1.一种连续逆流超声提取结合膜技术提取三七总皂苷的方法，其特征在于按下述顺序 的步骤进行(1)取三七粉碎成三七粗粉，加入三七粗粉重量6 15倍的以质量分数计为40 90% 乙醇在20 50°C的温度下进行连续逆流超声提取20 120min，超声频率为20 80KHz ；(2)乙醇超声提取液过滤，滤液用截留相对分子量为1000 2500的超滤膜在20 50°C，操作压力0. 4 4. 1 MI^a下进行膜浓缩，或用截留相对分子量为100-800的纳滤膜在 20 50°C，操作压力0. 4 4. 1 MPa下进行膜浓缩；(3)膜浓缩液减压浓缩至无醇味后加水稀释至三七粗粉投料重量的4 8倍或直接加 水稀释至以质量分数计含乙醇量达10 20%，过滤，上于聚苯乙烯型大孔吸附树脂吸附，用 水洗脱，水洗液弃去，再用以质量分数计为50 90%乙醇洗脱；(4)乙醇洗脱液过碱性阴离子树脂；(5)阴离子树脂透过液用截留相对分子量为100-800的纳滤膜，操作压力0.4 4. 1 MPa下进行膜浓缩；(6)膜浓缩液加入为膜浓缩液重量的1 5%的活性炭搅拌脱色；(7)活性炭脱色液过滤后减压浓缩至无醇味后喷雾干燥。
2.根据权利要求1所述的一种连续逆流超声提取结合膜技术提取三七总皂苷的方法， 其特征在于，步骤(1)中所述的超声提取是在三七粗粉中加入三七粗粉重量8 12倍的以 质量分数计为70 80%乙醇，在30 45°C超声提取50 90min，超声频率为40 KHz。
3.根据权利要求1所述的一种连续逆流超声提取结合膜技术提取三七总皂苷的方法， 其特征在于，步骤(1)中所述的取三七粉碎成三七粗粉是取三七的三七剪口部位直接粉碎 成三七粗粉或取三七的三七头子部位直接粉碎成三七粗粉。
4.根据权利要求1所述的一种连续逆流超声提取结合膜技术提取三七总皂苷的方法， 其特征在于，步骤(1)中所述的取三七粉碎成三七粗粉是取三七的三七剪口部位用以质量 分数计为20 60%乙醇浸泡润湿后再粉碎成三七粗粉或取三七的三七头子部位用以质量 分数计为20 60%乙醇浸泡润湿后再粉碎成三七粗粉。
5.根据权利要求1至4中任一权利要求所述的超声提取结合膜技术提取三七总皂苷 的方法，其特征在于步骤(2)中所述的超滤膜浓缩过程的温度为30 45°C，操作压力为 0. 7 2. 9MPa0
6.根据权利要求1至4中任一权利要求所述的超声提取结合膜技术提取三七总皂苷 的方法，其特征在于步骤(2)中所述的纳滤膜浓缩过程的温度为30°C 45°C，操作压力为 0. 7 2. 9MPa0
7.根据权利要求1至4中任一权利要求所述的超声提取结合膜技术提取三七总皂苷 的方法，其特征在于步骤(3)中所述的聚苯乙烯型大孔吸附树脂的型号为D101，AB 8， HPD 100 或 DM130。
8.根据权利要求1至4中任一权利要求所述的超声提取结合膜技术提取三七总皂苷 的方法，其特征在于步骤(3)中所述的乙醇洗脱，以质量分数计，其乙醇洗脱浓度为70 85%。
9.根据权利要求1至4中任一权利要求所述的超声提取结合膜技术提取三七总皂苷的 方法，其特征在于步骤(4)中所述的碱性阴离子树脂的型号为D311，D314，D390, D396，D900, D941,201X4,201X7中任一种或任意两种。
10.根据权利要求1至4中任一权利要求所述的超声提取结合膜技术提取三七总皂苷 的方法，其特征在于步骤(5)中所述的纳滤膜浓缩过程的操作压力为0. 7 2. 9MPa。
全文摘要
本发明是一种连续逆流超声提取结合膜技术提取三七总皂苷的方法，属于植物有效成分提取分离技术领域。该方法主要是加三七粗粉重量6～15倍的40～90%乙醇在20～50℃的温度下连续逆流超声提取20～120min，超声频率为20～80KHz；滤液用1000～2500的超滤膜或100-800纳滤膜在20～50℃，0.4～4.1MPa下膜浓缩；减压浓缩至无醇味后加水稀释或直接加水稀释，过滤上大孔吸附树脂，水洗脱再用50～90%乙醇洗脱；过碱性阴离子树脂后用100-800纳滤膜，0.4～4.1MPa下膜浓缩，脱色后减压浓缩，喷雾干燥。既低温提取且提取率高和连续生产，纯化率高，既保证了产品质量又方法简便。
文档编号A61P29/00GK102100712SQ201110039788
公开日2011年6月22日 申请日期2011年2月17日 优先权日2011年2月17日
发明者李文, 李明杰, 武正才, 赵锋宁, 黄春球 申请人:云南植物药业有限公司