专利名称：一种5-氟尿嘧啶/plga载药微球的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种包封抗癌药物的方法，尤其是涉及一种5-氟尿嘧啶/PLGA载药微球的制备方法。
背景技术：
5-氟尿嘧啶(5-Fu)是广泛应用于临床的广谱抗癌药物，它在体内经代谢转化为氟尿嘧啶核苷和氟尿嘧啶脱氧核苷，后者能够抑制胸腺嘧啶脱氧核苷酸合成酶发挥作用， 从而阻断了尿嘧啶脱氧核苷酸转变为胸腺嘧啶脱氧核苷酸，影响了 DNA的合成过程起到抗癌的作用。5-Fu在治疗消化道恶性肿瘤时为首选药物，但是由于其对肿瘤细胞的选择性差，对正常细胞的毒性也较大，尤其在浓度较大的情况下，其对正常细胞的毒副作用更加明显。在临床时多采取反复注射或者持续滴注的方式，但是经常伴随着骨髓抑制和一系列的毒副反应。并且5-氟尿嘧啶又有代谢较快的特点，在体内的半衰期为5-10分钟。不能够长时间持续稳定的血药浓度以发挥其抗癌作用。为了延长5-氟尿嘧啶的药效，降低其毒副作用，近年来有学者不断寻找其他更安全有效的给药方式，例如利用各种交联剂将壳聚糖和 5-氟尿嘧啶交联，如 Akbuga(J. Akbuga, N. Bergisadi, J. Microencapsul. 13， 161，1996)利用戊二酸作为交联剂，Aryca(B. Aryca, S. C. alys, H. S. Kas, M. F. Sargon, Journal of Pharmaceutics242, 267, 2002)等通过钙离子交联法制备了海藻酸钠-壳聚糖载药颗粒。Ciftci KK(Ciftci KK，Kas HS, Hincal AA, et al. International Journal of Pharmaceutics, 73,82,1996)等利用PLGA作为载体制备5-氟尿嘧啶微球。上述现有技术存在如下缺陷以壳聚糖为载体材料制备的5-Fu微球的制备过程复杂，常用到有毒的交联剂或表面活性剂，包封率较低。PLGA为载体材料制备的5-Fu缓释微球，选择的PLGA种类比较单一，5-Fu的持续释药时长单一没有选择性，包封率比较低。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种微球颗粒粒径均勻，载药量高，包封率较好，缓释性能良好的5-氟尿嘧啶/PLGA载药微球的制备方法。本发明的目的可以通过以下技术方案来实现一种5-氟尿嘧啶/PLGA载药微球的制备方法，包括以下步骤(1)将聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)溶解在二氯甲烷中，通过涡旋溶解形成 PLGA 二氯甲烷溶液；(2)将5-氟尿嘧啶固体加入到PLGA 二氯甲烷溶液中，搅拌或涡旋形成5_氟尿嘧啶的PLGA 二氯甲烷混悬液；(3)将上述混悬液加入到PVA氯化钠溶液中，置于磁力搅拌器上搅拌，控制转速为 4000-5000rpm,时间为 20_30s ；(4)将上述经过搅拌后的溶液加入到氯化钠溶液中，并加以冰浴，继续搅拌池；(5)将上述溶液停止搅拌，经过沉降，收集沉降的微球，以超纯水洗涤数遍，置于_20°C冰箱中过夜后在低于0. 05mbar的压力下真空冷冻干燥后得到5-氟尿嘧啶/PLGA 载药微球。步骤(1)中所述的聚乳酸-羟基乙酸共聚物为Lakershore公司生产的不同分子量的具有不同降解周期的PLGA，包括PLGAQA DLG 50/50)或PLGA(3A DLG50/50)。步骤(1)中所述的PLGA 二氯甲烷溶液的质量浓度为12. 5%。步骤O)中所述的5-氟尿嘧啶的PLGA 二氯甲烷混悬液中5_氟尿嘧啶的质量浓度为1. 25%。步骤(3)中所述的PVA氯化钠溶液中的PVA的质量浓度为1_2%，氯化钠浓度为5%。步骤中所述的氯化钠溶液的质量浓度为5%。步骤(5)中所述的5-氟尿嘧啶/PLGA载药微球的粒径在50_70歷之间。现有的技术中，以壳聚糖为载体材料制备的5-Fu微球的制备过程复杂，包封率较低，在制备过程中引入的交联剂大多具有一定的毒性。而以PLGA为载体材料制备的5-Fu缓释微球，选择的PLGA种类比较单一，所以5-Fu的持续释药时长没有选择性。与现有技术相比，本发明以水包油包固复乳法将5-氟尿嘧啶装载于PLGA中形成微球，制备得到的微球颗粒粒径均勻(如图1，图2所示)载药量高，包封率较好(如实例一的包封率为91. 4%，实例二的包封率为94. 8% )，缓释性能良好(如实例一和实例二所得到的释放曲线可以看出， 实例一中药物在24h之内的累积释放率低于20%，实例二中药物在Mh内的累积释放率低于10%，并且从2d开始，5-Fu的释放呈零级释放的特性，这表明5-Fu能够在比较长的时间内维持一定稳定的浓度，这对于增加5-Fu的治疗效果，减少其对正常细胞的毒性是非常重要的)。并且本发明可以通过选择具有不同降解速度的不同分子量的PLGA，制备出释放时长有选择性的微球载药体系，在应用时，可根据实际情况的的需要，选择不同的出发，达到不同时长的释药目的。
图1为实施例1制备得到产品的SEM照片；图2为实施例2制备得到产品的SEM照片；图3为实施例1制备得到产品的释放曲线；图4为实施例2制备得到产品的释放曲线；
具体实施例方式下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。实施例1一种5-氟尿嘧啶/PLGA载药微球的制备方法，包括以下步骤(1)称取IOOmg PLGA(DLG 50/50 2A)加入700mg的二氯甲烷里，涡旋溶解，待用；(2)再准确称取IOmg 5_氟尿嘧啶加入其中，涡旋后形成混悬液；(3)然后将混悬液转到PVA氯化钠溶液中，以5000rpm的转速置于磁力搅拌器上搅拌25S ；(4)将搅拌后的溶液加入IL氯化钠溶液中，并加以冰浴，搅拌，池后停止搅拌，沉降后收集微球；(5)用干净的西林瓶收集完成步骤的微球，并用蒸馏水洗5次，置于_20°C冰箱过夜，然后取出在低于0. 05mbar的压力下真空冷冻干燥M小时。实施例2一种5-氟尿嘧啶/PLGA载药微球的制备方法，包括以下步骤(1)称取IOOmg PLGA(DLG 50/50 3A)加入700mg的二氯甲烷里，涡旋溶解，待用；(2)再准确称取IOmg 5_氟尿嘧啶加入其中，涡旋后形成混悬液；(3)然后将混悬液转到PVA氯化钠溶液中，以4500rpm的转速置于磁力搅拌器上搅拌30S ；(4)将搅拌后的溶液加入IL氯化钠溶液中，并加以冰浴，搅拌，池后停止搅拌，沉降后收集微球；(5)用干净的西林瓶收集完成步骤④的微球，并用蒸馏水洗5次，置于_20°C冰箱过夜，然后取出在低于0. 05mbar的压力下真空冷冻干燥M小时。实施例1和实施例2制备出的5-氟尿嘧啶/PLGA载药微球的粒度在50_70um之间，粒度分布较为均勻，载药颗粒呈规则的圆形，表面光滑，SEM照片如图1和图2所示。实施例1制备的微球的包封率为91. 4%，载药量为8. 31%。实例二制备的微球的包封率为 94. 8%，载药量为8. 62%。载药微球在pH值为7. 4的PBS缓冲溶液中具有良好的缓释性能，实例一的微球在开始的24h之内5-氟尿嘧啶释放了 15. 78%，在之后的时间内缓慢释放，在长达8天的时间内，5-Fu的累积释放量为86. 63%。释放曲线如图3所示。实施例2 的微球在开始的24h之内5-氟尿嘧啶释放了 12. 08%，在之后的时间内缓慢释放，在长达 23天的时间内，5-Fu的累积释放量为93. 07%。释放曲线如图4所示。实施例1和实施例 2的微球在释放的过程没有明显的突释现象，并且都具有较高的包封率，都在一个较长的时间段内能够释放出大部分的5-氟尿嘧啶。实施例3一种5-氟尿嘧啶/PLGA载药微球的制备方法，包括以下步骤(1)将聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGAQA DLG 50/50)溶解在二氯甲烷中，通过涡旋溶解形成质量浓度为12. 5%的PLGA 二氯甲烷溶液；(2)将5-氟尿嘧啶固体加入到PLGA 二氯甲烷溶液中，搅拌或涡旋形成质量浓度为 1. 25%的5-氟尿嘧啶的PLGA 二氯甲烷混悬液；(3)将上述混悬液加入到质量浓度为5%的PVA氯化钠溶液中，PVA氯化钠溶液中的PVA的质量浓度为1%，置于磁力搅拌器上搅拌，控制转速为4000rpm，时间为30s ；(4)将上述经过搅拌后的溶液加入到质量浓度为5%的氯化钠溶液中，并加以冰浴，继续搅拌池；(5)将上述溶液停止搅拌，经过沉降，收集沉降的微球，以超纯水洗涤数遍，置于-20°C冰箱中过夜后在低于0. 05mbar的压力下真空冷冻干燥后得到粒径在50-70nm之间的5-氟尿嘧啶/PLGA载药微球。实施例4一种5-氟尿嘧啶/PLGA载药微球的制备方法，包括以下步骤(1)将聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA(3A DLG 50/50)溶解在二氯甲烷中，通过涡旋溶解形成质量浓度为12. 5%的PLGA 二氯甲烷溶液；(2)将5-氟尿嘧啶固体加入到PLGA 二氯甲烷溶液中，搅拌或涡旋形成质量浓度为 1. 25%的5-氟尿嘧啶的PLGA 二氯甲烷混悬液；(3)将上述混悬液加入到质量浓度为5%的PVA氯化钠溶液中，PVA氯化钠溶液中的PVA的质量浓度为2%，置于磁力搅拌器上搅拌，控制转速为5000rpm，时间为20s ；(4)将上述经过搅拌后的溶液加入到质量浓度为5%的氯化钠溶液中，并加以冰浴，继续搅拌池；(5)将上述溶液停止搅拌，经过沉降，收集沉降的微球，以超纯水洗涤数遍，置于-20°C冰箱中过夜后在低于0. 05mbar的压力下真空冷冻干燥后得到粒径在50-70nm之间的5-氟尿嘧啶/PLGA载药微球。
权利要求
1.一种5-氟尿嘧啶/PLGA载药微球的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤(1)将聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)溶解在二氯甲烷中，通过涡旋溶解形成PLGA二氯甲烷溶液；(2)将5-氟尿嘧啶固体加入到PLGA二氯甲烷溶液中，搅拌或涡旋形成5-氟尿嘧啶的 PLGA 二氯甲烷混悬液；(3)将上述混悬液加入到PVA氯化钠溶液中，置于磁力搅拌器上搅拌，控制转速为 4000-5000rpm,时间为 20_30s ；(4)将上述经过搅拌后的溶液加入到氯化钠溶液中，并加以冰浴，继续搅拌池；(5)将上述溶液停止搅拌，经过沉降，收集沉降的微球，以超纯水洗涤数遍，置于-20°c 冰箱中过夜后在低于0. 05mbar的压力下真空冷冻干燥后得到5-氟尿嘧啶/PLGA载药微球。
2.根据权利要求1所述的一种5-氟尿嘧啶/PLGA载药微球的制备方法，其特征在于， 步骤(1)中所述的聚乳酸-羟基乙酸共聚物为Lakershore公司生产的不同分子量的具有不同降解周期的 PLGA，包括 PLGAQA DLG 50/50)或 PLGA(3ADLG 50/50)。
3.根据权利要求1所述的一种5-氟尿嘧啶/PLGA载药微球的制备方法，其特征在于， 步骤(1)中所述的PLGA 二氯甲烷溶液的质量浓度为12.5%。
4.根据权利要求1所述的一种5-氟尿嘧啶/PLGA载药微球的制备方法，其特征在于，步骤O)中所述的5-氟尿嘧啶的PLGA 二氯甲烷混悬液中5-氟尿嘧啶的质量浓度为 1. 25%。
5.根据权利要求1所述的一种5-氟尿嘧啶/PLGA载药微球的制备方法，其特征在于， 步骤(3)中所述的PVA氯化钠溶液中的PVA的质量浓度为1_2%，氯化钠浓度为5%。
6.根据权利要求1所述的一种5-氟尿嘧啶/PLGA载药微球的制备方法，其特征在于， 步骤中所述的氯化钠溶液的质量浓度为5%。
7.根据权利要求1所述的一种5-氟尿嘧啶/PLGA载药微球的制备方法，其特征在于， 步骤(5)中所述的5-氟尿嘧啶/PLGA载药微球的粒径在50-70nm之间。
全文摘要
本发明涉及一种5-氟尿嘧啶/PLGA载药微球的制备方法，其制备步骤包括(1)将PLGA溶解于二氯甲烷中形成PLGA二氯甲烷溶液；(2)将5-氟尿嘧啶固体加入到PLGA二氯甲烷溶液中，搅拌或涡旋形成混悬液；(3)将(2)所述混悬液加入到PVA氯化钠溶液中，搅拌并控制搅拌时间和速度；(4)将(3)所述搅拌后的液体加入到氯化钠溶液中并加以冰浴，搅拌；(5)搅拌一段时间之后，停止搅拌，收集沉降微球并洗涤，冷冻干燥后得到5-氟尿嘧啶/PLGA载药微球；制备得到的微球颗粒粒径较均匀，载药量和包封率高，释药性能良好，并根据PLGA分子量不同可以达到不同时长的释药效果。
文档编号A61P35/00GK102342919SQ20111031263
公开日2012年2月8日 申请日期2011年10月14日 优先权日2011年10月14日
发明者吴飞, 林清, 王薪懿, 苏靖, 袁伟恩, 赵仲, 金拓, 陈思源 申请人:上海交通大学