专利名称：一种用于提高缺氧耐受力药物组合物软胶囊及其制备方法
技术领域：
本发明涉及保健品技术领域，具体地说是涉及能提高缺氧耐受力的用红景天有效物质和蜂胶组合物制成的软胶囊及其制备方法。
背景技术：
近年来，国家加强对西藏的建设，一批批为了开发高原资源，保卫和建设祖国高原、边疆的内地援藏人员和由内地到高原的中国人民卫士进入西藏，他们需要长期工作和生活在高原缺氧的环境下，高原反应对他们带来的困扰以影响他们正常的工作和生活。此外西藏列车的开通，打开了西藏旅游的便捷之门，人们为一睹西藏的原始风情及自然风光蜂拥而至，但高原反应使大部分人痛苦烦恼，高原反应所带来的头痛，无力疲惫，使人们失去了游玩的兴致，不得不但在宾馆里休息，甚至有的人没有欣赏高原风光就马上回去了。使一些未到高原的人一提到高原反应就对去高原旅游望而却步。
海拔3000米以上的地区，称为高原地区。高原地区大气压力低，仅为平原的一半， 空气中含氧量仅为平原的60%，因而形成了以低气压、缺氧、低温、太阳辐射强、温差大、大风、干燥等位显著特点的高原气候。低海拔地区的人，进入高原后，由于气候等方面的急剧变化，超过了正常人机体自动调节的限度，在海拔4000米以上地段，约有60% -100%的人会发生急性缺氧反应或者疾病，起症状常见的有头痛、头昏、心慌、气短、食欲不振、恶心呕吐、腹胀、胸闷、胸痛、疲乏无力、面部轻度浮肿、口唇干裂等。严重时血压增高、心跳加快，甚至出现昏迷状态。有的人则会出现异常异常兴奋、多言多语、步态不稳、幻觉、失眠等。
目前用于治疗高原反应的药品见效快，但副反应较为严重。如醋氮酰胺、利尿磺胺常用于防治因高原不适引起的水肿性疾病。而使用醋氮酰胺常见不良反应有困倦、面部和四肢麻木感，可引起肾脏病发症等。过多使用利尿磺胺可能出现轻微的恶心、腹泻、药疹、瘙痒、视力模糊等不良反应。而常用的抑制剂、肌苷片、葡萄糖等常受个体技能条件影响，服用量较大，效果不太明显。因此开发生产高效的提高缺氧耐受力的且副作用小的制品是迫不及待的。
2010版药典收载的红景天为景天科植物大花红景天Rhodiola crenulata(Hook, f. et Thorns.) H. OtAa的干燥根和根茎。秋季花茎凋枯后采挖，除去粗皮，洗净，晒干。
红景天是我国传统药用植物，一般生长在海拔3500-5100米的多石及粗砂山地。 由于红景天适应了缺氧、高寒、干燥、强紫外线照射、昼夜温度悬殊等极其恶劣多变的自然环境，因此具备了抗缺氧、抗狂风、抗幅射、抗低温干燥的特殊药效。红景天含有独特的红景天苷元酪醇以及18种氨基酸(其中8种为人体所必需的)、34中微量元素和7种维生素， 具有滋补和药用功效。其中红景天所特有的红景天苷(Mlidroside)具有抗高原缺氧、抗疲劳、抗辐射、抗衰老、增强机体免疫力，双向调节机体机体功能等作用。医学专家经动物实验证明，红景天苷在对于小鼠抗疲劳作用的研究中，表明红景天具有增强血清LPH活力的作用，加速分解乳酸，血乳酸浓度下降，降低耗氧速率，增加供养作用，明显延长负重小鼠游泳时间，运动耐力得到显著延长和持续，增强肝糖原、肌糖原的储备，具有明显的抗疲劳作用，动物实验结果提示该药能改善心脑等重要脏器组织中的有氧代谢过程，能显著提高动物肝、心肌糖原的含量及提高动物心肺组织中中心钠素的水平，从而减轻因缺氧导致的动物脏器损害，进而能有效提高动物在低氧条件下的生存时间，减轻因缺氧、强紫外线辐射等引起的高原反应。
当前对红景天中的红景天素、红景天苷等活性成分的主要提取方法是水提法和醇提法，水法提取成本低，方法简单；醇法提取成本较前者高，但提取液中可溶性固形物的含量(得率)相对于水提法较高，故传统红景天有效成分提取以醇提更为常用(余华何志礼红景天有效成分的提取和加工适应性研究食品工业科技.2002. 23 (8). -47-49).但传统提取方法存在提取时间长、工艺繁复、效率低、工业污染大和对目标化合物提取无选择性等缺陷。
2010版药典收载的蜂胶为蜜蜂科昆虫意大利蜂Apis mellifera L.的干燥分泌物。多于夏季从蜂箱中收集，除去杂质。
蜂胶是蜜蜂从植物芽孢和树干处采集的树脂，混入蜜蜂上颚腺分泌物和蜂蜡等形成的一种具有芳香味的粘性胶状固形物。蜂胶含有约55%树脂、30%的蜂蜡、10%的挥发性油和5%的花粉等，其化学成分复杂，含有酚、酸、醇、酯、酚、醚、萜、烯、留醇及多种微量元素。蜂胶具有补虚弱、化浊脂的功效，还可用于体虚早衰、高脂血症。近年来国内外学者所做的大量研究表明，蜂胶具有治疗心血管、糖尿病、皮肤病、胃肠疾病、抗癌、增强免疫、抗菌消炎等重要的生理功效，已经成为保健食品研究领域的热点，对蜂胶中发挥功效作用的成分分离和分析也越来越深入。
超临界萃取(Supercritica fluid extraction，SFE)技术是利用所选择的超临界流体，在温度、压力均高于其临界温度和临界压力条件下，该流体密度接近液体状态，而扩散系数和粘度接近气体状态，不仅具有与液体溶剂相当的物质萃取能力，而且具有与气态溶剂相当的传质效果。另外，通过向超临界流体中加入不同种类和数量的夹带剂，可以大大提高超临界流体对目标化合物提取的选择性和效率。
苏子是卫生部第一批规定的既是药品又是食品的60种物品之一。苏籽中含有丰富的脂肪和蛋白质，可用于生产食用油和蛋白质。近来.苏子油中富含的多不饱和脂肪酸引起国内外的广泛重视。经研究证明，苏子油具有降血压，降血脂，抗癌以及抑制血小板的聚集，减少血栓的形成.保护视力.提高智力的作用。
已有专利报道红景天具有提高缺氧耐受力的作用。中国专利(CN200510068041. 5) 中公开一种提取红景天方法加4-10倍水煮沸，1-4小时过滤，收集滤液浓缩，加 70%-100%的乙醇，静置，过滤，浓缩，得红景天提取物，和蜂胶制成了一种能提高缺氧耐受力的组合物。中国专利(CN200710017501. 0)公开了一种抗高原反应的食物组合物及制备方法，其中也提到红景天苷具有提高缺氧耐受力的作用，其提取方法是用60% -65%酒精回流提取温度为40-55°C，减压回收酒精。故红景天在提高缺氧耐受力方面功效明确。但上述两篇专利中均是使用不同浓度的乙醇进行提取。
此外，中国专利(CN200510129948. 8)中使用了以乙醇为夹带剂使用CO2-超临界萃取方法提取红景天中的苷元酪醇红景天干燥根，粉碎，过筛为材料。装入萃取釜中，萃取温度为40°C，0)2流体压力400Par，夹带剂乙醇流速0. 3ml/min时，萃取时间池。苷元酪醇的提取率为1. 637%，比通过传统的回流法(0. 25% )提取率提高6. M倍。此外，还有使用微生物酶液对红景天根茎进行酶解处理后，再使用乙醇进行回流提取，进而提取红景天提取率。
中国专利(CN200510068041. 5)中是用蜂胶和红景天分别用乙醇提取和水提取， 将两者的提取物混合加入辅料。其中蜂胶和红景天的配比是2. 5 3。
综上所述，现有专利报道的提取工艺均复杂，并且成本高，不宜于应用。迄今为止， 国内外尚未见任何关于采用CO2-超临界方法直接提取红景天和蜂胶中提高缺氧耐受力的有效成分的文献和专利报道。发明内容
本发明提供一种用于提高缺氧耐受力的组合物软胶囊及其制备方法，以解决现有技术提取工艺复杂，并且成本高，不宜于应用的问题。本专利是将蜂胶和红景天混合后，采用CO2-超临界方法直接提取，参考2010版药典的服用量及预实验结果，确定蜂胶和红景天的比例为1 10-20。与上述专利相比在提取方法和两者的比例上有较大的差异。本产品采用CO2-超临界萃取技术提取长白红景天中的红景天苷和蜂胶中的白杨素和高良姜素，使其有效成分的含量较传统提取方法有显著提高，保证和提高了天然物产品的质量，产品质量稳定，无有害溶剂的残留。
本发明采取的技术方案是
(一)取粉碎后的红景天根茎和蜂胶，放入超临界釜中，萃取温度20°C-80°C，萃取压力为20MPa-80MPa，提取时间为lh_6h，得组合物提取物。
(二)将超临界萃取组合物提取物溶于食物油中，将3g组合物提取物定容至 0. 5-1. 5倍的食用油中，再加入防腐剂、抗氧剂混合均勻；
(三)将上述混合均勻的药物上软胶囊机制得组合物软胶囊，即将明胶、甘油和水溶解后制成胶带，并将上述混合均勻的药物置于两块胶板之间，用钢模压制而成，经检验合格后，得组合物软胶囊。
本发明中所述的提取用食物油是苏子油、橄榄油、大豆油、芝麻油、玉米油、麻油、 棉籽油、蓖麻油、茶油、红花油、中长链脂肪酸酯中的一种，两种，或两种以上的混合物，其中优先选择苏子油、橄榄油。
本发明中所述的防腐剂选自尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、苯甲酸、山梨酸中一种或两种或两种以上的混合物。
本发明中所述的防腐剂的用量为尼泊金甲酯0.015-0. 2% (W/V)、尼泊金乙酯 0. 015-0. 2% (W/V)、苯甲酸 0.01-0. (W/V)、山梨酸 0. 05-0. 2% (W/V)。
本发明中所述的抗氧剂选自VC、VE、安息香酸、枸橼酸及其盐、山梨醇、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠中一种或两种或两种以上的混合物。
本发明中所述的抗氧剂的用量为=Vc0. 01-0. 1% (ff/V)、VeO. 001-0· 05% (V/V)。
本发明中所述的软胶囊囊壳，配方比例为明胶甘油水= 1 0. 2-0. 6 0. 5-1. 5。
本产品采用CO2-超临界萃取方法具有提取效率高，溶剂用量小，快速和准确的特点。与传统方法相比具有如下有益效果
(I)CO2-超临界萃取为环境无害工艺。超临界萃取比溶解萃取的步骤相对少，流程短，操作参数也易于控制。
(2)由于CO2-超临界萃取能力取决于流体密度，因而很容易通过调节压力和温度使二氧化碳与萃取物迅速分为两相(气、液)，达到迅速地、选择性的提取中药中有效成分的目的。不仅萃取效率高、耗能低，而且萃取物杂质减少、有效成分高度富集。
C3)超临界萃取所用溶剂0)2具有无毒、无味、不燃不腐蚀、价格便宜、易于精制、易于回收等优点。与传统溶剂提取法相比，无溶剂残留。同时不仅避免大量有机溶剂的使用， 也防止了提取过程对人体健康的危害和对环境的污染。
(4)超临界萃取CO2-超临界萃取还具有抗氧化灭菌作用，有利于保证和提高天然物产品的质量。
具体实施方式
以下通过具体实施例，对本发明的具体实施方式
再作进一步的详细说明
实施例
(一)超临界萃取取粉碎后的红景天根茎和蜂胶，放入超临界釜中，萃取温度 200C _80°C，萃取压力为20MPa-80MPa，提取时间为lh_6h，得组合物提取物。
( 二 )将超临界萃取得到的组合物提取物溶于提取用食物油中，将3g组合物提取物定容至0. 5-1. 5倍的食用油中，再加入防腐剂、抗氧剂混合均勻；
(三)将(二)中混合均勻的药物上软胶囊机制得红景天软胶囊，即将明胶、甘油和水溶解后制成胶带，并将(二)中混合均勻的药物置于两块胶板之间，上软胶囊机用钢模压制，经检验合格后，得组合物软胶囊。
本发明中所述的提取用食物油是苏子油、橄榄油、大豆油、芝麻油、玉米油、麻油、 棉籽油、蓖麻油、茶油、红花油、中长链脂肪酸酯中的一种，或两种，或两种以上的混合物，其中优选苏子油、橄榄油，尤以苏子油最佳。
红景天中红景天苷的含量测定
以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂，以甲醇-水=15 85为流动相；检测波长为 275nm。分别取红景天苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，作为红景天苷的对照品溶液。取超临界萃取提取油，精密称量IOml于分液漏斗中，用乙腈萃取2 次，每次10ml，合并上清液，蒸干，用5ml甲醇溶解，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10ul，注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法(中国药典2010版一部附录VID)进行含量测定，即得。
蜂胶中白杨素和高良姜素的含量测定
以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂，以甲醇-0. 15%磷酸溶液(64 36)为流动相；检测波长为268nm。取白杨素对照品、高良姜素对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每Iml含白杨素30ug、高良姜素20ug的溶液，作为蜂胶的对照品溶液。取超临界萃取提取油，精密称量IOml于分液漏斗中，用乙腈萃取2次，每次10ml，合并上清液，蒸干，用5ml甲醇溶解，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10ul， 注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法(中国药典2010版一部附录VID)进行含量测定， 即得。
药效学实验
一、小鼠常压耐缺氧实验
40只小鼠随机分成4组，每组10只。生理盐水组经小鼠尾静脉注射生理盐水 10ml/kg ；阳性药对照组经小鼠腹腔注射盐酸普萘洛尔20mg/kg ；实验组分别经尾静脉给予本发明组合物lg/kg、ang/kg。给药后20min，将小鼠分别置于放有钠石灰的250ml磨口广口瓶内密封，观察小鼠存活时间(每瓶变性硅胶10g，广口瓶用前均盛水校正容量，每瓶放1 只小鼠，以呼吸停止为指标)。
实验结果表明，与生理盐水组比较，本发明组合物高低剂量组、盐酸普萘洛尔组均能显著延长小鼠存活时间(P < 0.05)，表明本发明组合物与盐酸普萘洛尔均具有提高小鼠耐缺氧能力的作用；本发明物高低剂量作用稍弱于盐酸普萘洛尔，但没有统计学差异(P<0. 05)。
二、小鼠特异性心肌缺氧实验
40只小鼠被随机分成4组，每组10只。生理盐水组小鼠和异丙肾上腺素组小鼠均经尾静脉注射生理盐水10ml/kg ；阳性药对照组小鼠经尾静脉注射盐酸普萘洛尔20mg/ kg ；实验组小鼠分别经尾静脉给予本发明组合物lg/kg、2g/kg。给药后40min，除生理盐水组外，其余各组小鼠均皮下注射异丙肾上腺素15ml/kg，IOmin后，将小鼠分别放入装有变性硅胶的250ml磨口广口瓶中密封，记录小鼠存活时间。
实验结果表明，异丙肾上腺素组小鼠存活时间较生理盐水组明显缩短(P<0. 05)，表明异丙肾上腺素能增加小鼠耗氧量，缩短小鼠缺氧状态下存活时间。与生理盐水组比较，本发明物高低剂量组、盐酸普萘洛尔组均能显著延长小鼠存活时间(P < 0. 05)， 表明本发明组合物与盐酸普萘洛尔均能对抗异丙肾上腺素引起的心肌耗氧量增加，具有明显的抗缺氧作用；且本发明物高剂量作用稍与盐酸普萘洛尔相当。
三、小鼠低压耐缺氧实验
取小鼠40只，体重18_22g，雌雄兼用，随机分成5组。分别为生理盐水对照组，腹腔给予等容积生理盐水；本发明物高、中、低剂量组，分别腹腔注射0. 5，l，ang/kg ；阳性药对照组小鼠经腹腔注射盐酸普萘洛尔20mg/kg。灌胃给药IOmin后，将小鼠分别置于真空干燥箱内，用真空泵减压至21. 3^kpa，并维持相对恒定，记录小鼠死亡时间。
结果表明，本发明组合物可明显延长减压条件下小鼠的存活时间，具有明显量效关系，与生理盐水对照组比较差异显著(P < 0. 05，P < 0. 01，P < 0. 001)。本发明组合物中剂量药理作用与盐酸普萘洛尔相当，高剂量作用稍强于盐酸普萘洛尔。
权利要求
1.一种用于提高缺氧耐受力药物组合物软胶囊及其制备方法，制备方法其特征在于(一)取粉碎后的红景天根茎和蜂胶，放入超临界釜中，萃取温度20°c-80°c，萃取压力为20MPa-80MPa，提取时间为lh_6h，得组合物提取物；(二)将超临界萃取得到的组合物提取物溶于提取用食物油中，将3g组合物提取物定容至0. 5-1. 5倍的食用油中，再加入防腐剂、抗氧剂混合均勻；(三)将明胶、甘油和水溶解后制成胶带，并将(二)中混合均勻的药物置于两块胶板之间，上软胶囊机用钢模压制，经检验合格后，得组合物软胶囊。
2.根据权利要求1所述的一种用于提高缺氧耐受力的药物组合物软胶囊及其制备方法，其特征在于蜂胶和红景天的比例为1 10-20。
3.根据权利要求2所述的一种用于提高缺氧耐受力药物组合物软胶囊及其制备方法， 其特征在于提取用食物油优选苏子油、橄榄油。
4.根据权利要求3所述的一种用于提高缺氧耐受力药物组合物软胶囊及其制备方法， 其特征在于提取用食物油以苏子油为最佳。
5.根据权利要求1所述的一种用于提高缺氧耐受力药物组合物软胶囊及其制备方法， 其特征在于防腐剂选自尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、苯甲酸、山梨酸中一种，或两种，或两种以上的混合物；防腐剂的用量为尼泊金甲酯0. 015-0. 2% (W/V)、尼泊金乙酯0. 015-0. 2% (W/V)、苯甲酸 0.01-0. (W/V)、山梨酸 0.05-0. 2% (W/V)。
6.根据权利要求1所述的一种用于提高缺氧耐受力药物组合物软胶囊及其制备方法，其特征在于抗氧剂选自V。、Ve、安息香酸、枸橼酸及其盐、山梨醇、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠中一种，或两种，或两种以上的混合物；抗氧剂的用量为 VcO. 01-0. 1% (ff/V), Ve 0. 001-0. 05% (V/V)。
7.根据权利要求1所述的一种用于提高缺氧耐受力药物组合物软胶囊及其制备方法， 其特征在于软胶囊囊壳的配方比例为明胶甘油水=1 0. 2-0. 6 0. 5-1. 5。
8.一种用于提高缺氧耐受力药物组合物软胶囊及其制备方法，红景天中红景天苷的含量测定，其特征在于以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂，以甲醇-水=15 85为流动相； 检测波长为275nm。分别取红景天苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，作为红景天苷的对照品溶液。取超临界萃取提取油，精密称量IOml于分液漏斗中，用乙腈萃取2次，每次IOml，合并上清液，蒸干，用5ml甲醇溶解，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10ul，注入高效液相色谱仪，照中国药典 2010版一部附录VID高效液相色谱法进行含量测定。
9.一种用于提高缺氧耐受力药物组合物软胶囊及其制备方法，蜂胶中白杨素和高良姜素的含量测定，其特征在于以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂，以甲醇-0. 15 %磷酸溶液 (64 36)为流动相；检测波长为268nm;取白杨素对照品、高良姜素对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每Iml含白杨素30ug、高良姜素20ug的溶液，作为蜂胶的对照品溶液； 取超临界萃取提取油，精密称量IOml于分液漏斗中，用乙腈萃取2次，每次10ml，合并上清液，蒸干，用5ml甲醇溶解，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10ul，注入高效液相色谱仪，照中国药典2010版一部附录VID高效液相色谱法进行含量测定。
全文摘要
本发明提供一种用于提高缺氧耐受力的药物组合物软胶囊及其制备方法；本发明涉及保健品技术领域。属于医药、食品、保健品领域。取粉碎后的红景天根茎和蜂胶，放入超临界釜中，萃取温度20℃-80℃，萃取压力为20MPa-80MPa，提取时间为1h-6h，得组合物提取物。将超临界萃取得到的组合物提取物溶于食物油中，将3g组合物提取物定容至0.5-1.5倍的食用油中，再加入防腐剂、抗氧剂混合均匀；将上述混合均匀的药物上软胶囊机制得软胶囊。本发明具有提取工艺简单，质量可控，提取物有效成分含量高，成本低，适用于工业化生产；而且服用方便，具有改善睡眠的作用。
文档编号A61K35/64GK102512483SQ201210004890
公开日2012年6月27日 申请日期2012年1月10日 优先权日2012年1月10日
发明者孙巍, 张薇, 毛丽超, 邵岩, 金向群 申请人:吉林大学